氧化低密度脂蛋白诱导人肾小球系膜细胞凋亡机制的研究

肾小球硬化的重要病理特征是进行性肾小球细胞外基质积聚和细胞的丧失。在肾小球炎症过程中 ,细胞过度凋亡导致细胞减少是肾小球硬化的重要原因[1] 。氧化低密度脂蛋白(Ｏｘ -ＬＤＬ)是引起肾小球硬化的重要因素[2 ,3] ,低浓度的Ｏｘ-ＬＤＬ(<10 0 μｇ/ｍｌ)抑制系膜细胞增殖 ,促进系膜细胞凋亡[4 ] ,但Ｏｘ -ＬＤＬ诱导系膜细胞过度凋亡的机制尚不清楚。我们利用体外培养的人肾小球系膜细胞进行实验 ,以探讨Ｏｘ-ＬＤＬ诱导系膜细胞凋亡的可能机制 ,为寻找延缓肾小球硬化的有效方法提供新思路。1　材料与方法1.1　实验材料　Ｂａｘ及Ｂｃ…     

氧化低密度脂蛋白对体外培养的肾小球系膜细胞的影响

我们观察了经氯化铜氧化修饰所形成的氧化低密度脂蛋白（Ｏｘ－ＬＤＬ）对体外培养的人肾小球系膜细胞生长、释放肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的作用。结果发现，Ｏｘ－ＬＤＬ刺激肾小球系膜细胞４８ｈ、７２ｈ以及１０６ｈ，均有抑制该细胞生长的作用。刺激４８ｈ时，细胞对ＭＴＴ的摄入量（以Ａ５７０表示），与Ｏｘ－ＬＤＬ的浓度成反比（ｒ＝－０．９９５，Ｐ＜０．０１）。刺激１８ｈ的细胞上清对Ｌ９２９细胞（ＴＮＦ敏感株）的杀伤能力有所增强，上清中的ＬＤＨ含量明显升高。与未修饰的低密度脂蛋白相比，Ｏｘ－ＬＤＬ对系膜细胞表现出明显的毒性，在高脂血症肾损伤时具有重要意义     

氧化低密度脂蛋白对人肾小球系膜细胞A型清道夫受体表达的调节作用

目的研究氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)对人肾小球系膜细胞(HMC)A型清道夫受体(SR-A)表达的调节作用,探讨在慢性肾脏疾病中Ox-LDL加重肾病进展的作用机制.方法脂质体转染含SR-A cDNA的表达质粒,建立稳定高表达SR-A的人肾小球系膜细胞株(HMCL),油红"O"染色检测HMCL对Ox-LDL的摄取;RT-PCR法检测Ox-LDL和LDL对HMC SR-A mRNA表达的作用.结果稳定高水平表达SR-A的HMCL对Ox-LDL的摄取明显强于未转染细胞;Ox-LDL上调HMC SR-A mRNA的表达,作用于24 h达到高峰;Ox-LDL(10～100μg/ml)作用24 h对HMC SR-A mRNA的上调作用呈剂量依赖性;天然LDL对SR-A的表达无明显影响.结论在HMC,SR-A是Ox-LDL进入细胞内的主要受体之一,Ox-LDL具有上调HMC SR-A mRNA表达的作用,推测在慢性肾脏疾病进展中,局部沉积的LDL经氧化修饰后可能通过刺激SR-A的表达进入细胞内增强其对HMC的毒性作用,进而加重肾小球硬化的进展.     

低密度脂蛋白对体外肾小球系膜细胞生长的影响

低密度脂蛋白对体外肾小球系膜细胞生长的影响王晓燕潘晓勤姜新猷低密度脂蛋白（ＬＤＬ）血症是肾脏疾病最常见的表现之一。为此，我们观察了人血浆ＬＤＬ对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）生长的影响。一、资料和方法１．ＬＤＬ分离：以依地酸抗凝的人血浆经超速离...     

姜黄素及氧化低密度脂蛋白对系膜细胞增殖和凋亡的影响

系膜细胞(MCs)及系膜基质增生是肾小球肾炎及肾小球硬化过程中常见的病理变化,多数肾小球肾炎呈慢性进行性发展,最终进入终末期肾病阶段,依靠肾替代治疗维持生命。肾小球硬化过程中,MCs不仅是受害者,也是主动参与者,分泌多种细胞炎性因子及细胞外基质,促进肾小球硬化过程。氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)在肾病的     

冬虫夏草对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：观察冬虫夏草菌丝对体外培养的大鼠系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法：应用血清药理学,使用氚标胸腺嘧啶([^3H]-TdR)掺入法检测大鼠肾小球MsC增殖。结果：含虫草菌丝血清可抑制MsC的增殖。结论：虫草菌丝可用于肾小球硬化的防治。     

低密度脂蛋白对体外培养的人肾小球系膜细胞产生活性氧的影响

观察了人低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的人行小球系膜细胞（ＧＭＣ）Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－产生的影响，并与经ＬＤＬ刺激后ＧＭＣ的增殖水平及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平相比较，结果发现：经ＬＤＬ刺激３０ｍｉｎ，浓度≤１００ｍｇ／Ｌ时，ＬＤＬ能明显促进ＧＭＣ释放Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－，＞１００ｍｇ／Ｌ时，ＧＭＣ上清中该类物质的浓度并不随之增加。ＬＤＬ刺激ＧＭＣ释放Ｈ２Ｏ２和Ｏ２－的浓度曲线与经ＬＤＬ刺激４８ｈ后ＧＭＣ的增殖曲线以及ＬＤＨ释放曲线相符合。说明ＬＤＬ除可直接影响ＧＭＣ增殖外，尚可通过对ＧＭＣ释放或产生活性氧和ＬＤＨ等炎性介质来间接损伤肾小球。     

肝素对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞增殖及细胞分泌物影响

为了解肝素对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞增殖和细胞因子分泌的影响。作者采用四甲基偶氮唑蓝比色分析法及生物活性法,分别测定了人肾小球ＭＣ增殖和细胞因子的分泌情况。结果显示;在正常培养条件下,人肾上球ＭＣ分泌一定理的白细胞介素６（ＩＬ－６０和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）。脂多糖诱导ＭＣ增殖及分泌ＩＬ－６,ＴＮＦ－α。高浓度的肝素（５００Ｕ／ｍｌ）促进ＭＣ增殖及分泌细胞因子,低浓度的肝素（５Ｕ／ｍｌ）抑制     

氧化苦参碱对脂多糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖P-STAT1/PIAS1信号分子的影响

JAK/STAT信号转导通路.     

极低密度脂蛋白对大鼠系膜细胞增殖的作用

目的:研究极低密度脂蛋白(VLDL)对SD大鼠系膜细胞(MCs)的促增殖作用.方法:采用MTT法测定不同浓度VLDL在不同时间对MCs的促增殖作用,采用流式细胞术观察VLDL诱发MCs凋亡的情况.结果:不同浓度VLDL(10～500 μg/ml)在不同时间(6～48 h)与MTT光密度值呈线性关系,r分别为0.911(P<0.01)、0.651(P<0.05).当VLDL浓度达1 000 μg/ml时,MCs出现凋亡.结论:在一定浓度内VLDL可以时间剂量依赖性地促进MCs的增殖,但高浓度则可促进细胞凋亡.     

低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素的影响

目的探讨低密度及氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌肾上腺髓质素(ADM)的影响.方法利用培养的内皮细胞株ECV-304细胞,分别与不同浓度的低密度(50 100mg/L)、氧化低密度脂蛋白(50 100mg/L)及低密度脂蛋白(50 mg/L) 氧化低密度脂蛋白(50 mg/L)进行孵育,24 h后分别收集培养上清及细胞,用放免分析检测上清及细胞内肾上腺髓质素的含量.结果低密度脂蛋白对肾上腺髓质素的分泌无影响,而氧化型低密度脂蛋白能明显刺激ADM的分泌,二者合用的作用接近于100mg/L的OX-LDL.结论OX-LDL可能具有氧化LDL使其成为OX-LDL的作用,ADM的分泌可能是对细胞损伤的一种反应.     

植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体介导氧化型低密度脂蛋白对内皮祖细胞存活和功能的影响

目的 研究植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体（LOX—1）是否介导氧化型低密度脂蛋白（oxLDL）对内皮祖细胞（EPC）的存活及功能产生影响。方法 分选脐血CD34^＋细胞,培养于内皮细胞生长培养基（EGM-2）中。培养14d后,部分EPC与10、25、50μg/ml的oxLDL孵育48h;部分EPC先与LOX-1单克隆抗体（LOX—1mAb）预处理24h,再与50μg／ml oxLDL孵育48h;对照组不作处理。检测EPC存活率及EPC迁移、黏附和管状结构形成能力,并检测LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果oxLDL浓度为25和50μg／ml时,凋亡率分别为（15．8±1．0）％和（18．8±2．0）％,显著高于对照组的（9．0±1．2）％（P〈0．05）;迁移率分别为（5．7±1．0）％和（5．1±0．8）％,显著低于对照组的（9．5±0．8）％,（P〈0．05）;黏附细胞数分别为（33±2）和（30±3）个,显著少于对照组的（37±5）个（P〈0．05）;形成的管状结构分别为（2．9±0．5）和（1．8±0．5）mm,显著短于对照组的（5．0±0．6）mm（P〈0．05）。OxLDL可增加LOX—1mRNA及蛋白的表达,oxLDL浓度为50μg／ml时,LOX—1mRNA表达由100％增加为（174±39）％,蛋白表达由100％增加为（172±8）％。OxLDL的上述作用能被LOX1mAb所阻断。结论OxLDL可降低EPC存活,抑制EPC功能,其作用是由LOX—1介导的。     

Effects of oxidized low density lipoprotein on the growth of human artery smooth muscle cells

Atherosclerosis(AS)isacommonandbasicpathologicalchangeofmanycardiovasculardiseases.1Amongtheriskfactorscontributingtohuman AS,oxidizedlowdensitylipoprotein(ox LDL)is consideredtostimulateASdirectlyandplaysanovelrole inthepathogenesisanddevelopmentofAS.2,3Despite proliferation,migrationandphenotypealterationof vascularsmoothmusclecells(vSMCs)arecritical changesinAS,4,5itisstillpoorlyunderstoodwhether ox LDLparticipatesinthepathologicalprocessof vSMCs.6WeisolatedandpurifiedhumanLDL,pro…     

Influence of Oxidized Low Density Lipoprotein on the Proliferation of Human Artery Smooth Muscle Cells in vitro

The effects of oxidized low density lipoprotein (ox-LDL) on the proliferation of cultured human vascular smooth muscle cells (vSMC) were investigated in vitro. By using NaBr density gra-dient centrifugation, LDL was isolated and purified from human plasma. Ox-LDL was produced from LDL by being incubated with CuSO4. ox-LDL was then added to the culture medium at different concentrations (35, 60, 85, 110, 135 and 160 μg/mL) for 7 days. The influence of ox-LDL on vSMC proliferation was observed in growth curve, mitosis index, and in situ determination of apoptosis. The data were analyzed with SPSS 10.0 software. The results showed that the ox-LDL produced in vitro had a good purity and optimal oxidative degree, which was similar to the intrinsic ox-LDL in athero-sclerotic plaque. ox-LDL at a concentration of 35 μg/mL demonstrated the strongest proliferation in-ducement, and at a concentration of 135 μg/mL, ox-LDL could inhibit the growth of vSMC. ox-LDL at concentrations of 35 and 50 μg/mL presented powerful mitotic trigger, and with the increase of ox-LDL concentration, the mitotic index of vSMC was decreased gradually. ox-LDL at higher con-centrations promoted more apoptotic vSMCs. ox-LDL at lower concentrations triggered proliferation of vSMCs, and at higher concentrations induced apoptosis in vSMCs. ox-LDL played a promotional role in the pathogenesis and development of atherosclerosis by affecting vSMC proliferation and apoptosis.     

G蛋白偶联受体激酶4对氧化低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的研究G蛋白偶联受体激酶4(GRK4)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)为靶细胞,检测在不同浓度的ox-LDL(10、20、30、40、60、80 mg/L)刺激下A10细胞的增殖情况;观察ox-LDL(40 mg/L)刺激下A10细胞GRK4表达变化;用siRNA干扰A10细胞GRK4表达后,检测ox-LDL对A10细胞增殖的影响。Western blot检测GRK4蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖活力。结果用不同浓度ox-LDL刺激A10细胞,发现ox-LDL(40 mg/L)刺激下细胞增殖幅度可达78.3%(P<0.05),且细胞GRK4蛋白表达增加[实验组(0.367 9±0.049 1),对照组(0.193 0±0.038 5),P<0.05];与对照组相比,用siRNA干扰A10细胞GRK4表达后ox-LDL对A10细胞增殖的影响明显减弱[对照组(1.050 1±0.302 9),ox-LDL刺激组(1.929 1±0.390 0),siRNA组(1.403 2±0.164 4),P<0.05]。结论 ox-LDL可增强GRK4表达,干扰细胞GRK4表达后可减弱ox-LDL诱导的大鼠平滑肌细胞的增殖。     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的 探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对THP-1源性巨噬细胞转化的影响.方法 体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组(n=6):对照组、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、ox-LDL组(100μg/mLox-LDL)和高糖/ox-LDL(G-ox-LDL)组(30 mmol/L葡萄糖+100 μg/mL ox-LDL).应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质.结果 ox-LDL组和G-ox-LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50%.对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义(P>0.05);两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50%.结论 ox-LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞.提示ox-LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件.     

高糖和氧化型低密度脂蛋白对THP-1源性巨噬细胞转化的影响

目的探讨高糖和氧化型低密度脂蛋白（ox—LDL）对THP-1源性巨噬细胞转化的影响。方法体外培养人THP-1单核细胞系,由佛波酯作用使其转化为巨噬细胞,并随机分为四组（n=6）：对照组、高糖组（30mmol／L葡萄糖）、ox—LDL组（100μg／mL ox—LDL）和高糖／ox—LDL（G—ox—LDL）组（30mmol／L葡萄糖＋100μg／mL ox—LDL）。应用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯含量;透射电镜和油红O染色光镜观察细胞内脂质。结果ox—LDL组和G—ox—LDL组细胞胞质内出现大量的红染颗粒或脂质空泡,总胆固醇和胆固醇酯均较对照组增加,差异有统计学意义（P〈0．05）;且两组胆固醇酯含量均大于总胆固醇含量的50％。对照组和高糖组细胞胞质内可见少量红染颗粒或脂质空泡,两组细胞内总胆固醇和胆固醇酯比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组胆固醇酯含量均小于总胆固醇含量的50％。结论ox—LDL能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞,而高糖不能使THP-1源性巨噬细胞转化泡沫细胞。提示ox—LDL可能是THP-1源性巨噬细胞转化为泡沫细胞的必要条件。     

氧化低密度脂蛋白对大鼠心肌成纤维细胞胶原的影响

目的 探讨氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)对大鼠心肌成纤维细胞胶原合成的影响.方法 体外培养乳鼠心肌成纤维细胞,加入ox-LDL(10、20、50、100μg/ml)干预24 h,3H-胸腺嘧啶核苷掺人法观察细胞DNA合成,3H-脯氨酸掺入法观察胶原的合成,酶谱法测定基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性,Western blot检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平,RT-PCR检测MMP-2、MMP-9的mRNA表达.结果 和对照组比较,ox-LDL作用于心肌成纤维细胞24 h后,呈浓度依赖性促进细胞DNA合成,同时抑制细胞胶原合成.ox-LDL显著增加MMP-2和MMP-9活性,但各组间作用无明显区别;同时MMP-2和MMP-9蛋白表达也显著性增加,以100μg/ml组作用最强.50μg/ml ox-LDL能显著增加MMP-2和MMP-9的mRNA表达,100μg/ml组作用更强.结论 ox-LDL作用于心肌成纤维细胞能减少胶原的合成并增加胶原的降解,提示其在心肌重构过程巾起一定的作用.