olomoucine对星形胶质细胞增殖的影响及机制研究

目的:观察细胞周期抑制剂olomoucine对培养星形胶质细胞(AS)机械损伤后增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠纯化的AS物理损伤模型(划痕损伤模型),随机分为对照组、划痕组和干预组,划痕组和干预组均继续培养,干预组给予olomoucine干预。利用免疫荧光细胞化学方法观察损伤后BrdU表达;利用Westernblot印迹分析损伤后PCNA、p27的表达。结果:划痕损伤刺激12h开始出现损伤边缘区AS胞体肥大、数目增加,BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较对照组增高(P<0.05),p27表达水平较对照组下降(P<0.05);干预组的BrdU阳性细胞比率和PCNA表达水平较划痕组明显减少(P<0.05),p27表达上调(P<0.05)。结论:损伤刺激可促使AS发生反应性胶质增生,CDK选择性细胞周期抑制剂olomoucine可以通过调控细胞周期抑制其反应性增生。     

兔血管平滑肌细胞在低剂量电离辐射后的分子生物学变化

目的：观察体外培养的兔动脉平滑肌细胞(smooth muscle cells，SMCs)对γ射线照射的分子生物学机制。方法：取新西兰白兔(n=2)SMCs培养至第5～7代，对静止期SMCs分别给予γ射线2．5，5．0，10．0，20．0及30．0Gy一次性照射后继续培养4，24或72h。通过原位杂交方法观察γ射线对SMCs的c-fos与p53基因表达的影响。结果：低剂量γ射线照射后早期(4h左右)SMCsc-fos mRNA表达减少，p53mRNA表达增加，而高剂量γ射线照射及低剂量γ射线照射24h及72h时c-fos与p53基因表达无明显变化。结论：SMCs在低剂量电离辐射后，早期发生了c-fos与p53基因改变，c-fos与p53基因的改变可能参与了γ射线抑制SMCs的增殖过程。     

电离辐射对肺腺癌A549细胞血管内皮生长因子C基因表达的影响

目的:探讨不同剂量电离辐射对人肺腺癌A549细胞表达血管内皮生长因子C(VEGF-C)的影响.方法:肺腺癌A549细胞接受不同剂量60Coγ射线照射后,培养12、48 h后提取细胞总RNA,RT-PCR测定VEGF-C基因表达变化,熔解曲线及琼脂糖凝胶电泳分析产物特异性,采用2(-△△CT)法及SPSS 13.0软件进行相关分析.结果:肺腺癌A549细胞射线照射后12 h和48 h,与对照组比较,除0.5、2 Gy照射剂量外VEGF-C表达明显增高;48 h与12 h相比,0.5、1、5 Gy照射剂量组VEGF-C表达明显升高.结论:电离辐射可诱导A549细胞高表达VEGF-C,在放疗早期阶段联合应用抑制VEGF-C基因表达技术既可杀伤癌细胞又可抑制癌细胞远处转移,是一种值得深入研究的新模式.     

兔血管平滑肌细胞在低剂量电离辐射后的分子生物学变化

目的:观察体外培养的兔动脉平滑肌细胞(smoothmusclecells,SMCs)对γ射线照射的分子生物学机制。方法:取新西兰白兔(n=2)SMCs培养至第5～7代,对静止期SMCs分别给予γ射线2.5,5.0,10.0,20.0及30.0Gy一次性照射后继续培养4,24或72h。通过原位杂交方法观察γ射线对SMCs的c-fos与p53基因表达的影响。结果:低剂量γ射线照射后早期(4h左右)SMCsc-fosmRNA表达减少,p53mRNA表达增加,而高剂量γ射线照射及低剂量γ射线照射24h及72h时c-fos与p53基因表达无明显变化。结论:SMCs在低剂量电离辐射后,早期发生了c-fos与p53基因改变,c-fos与p53基因的改变可能参与了γ射线抑制SMCs的增殖过程。     

DNA-PK基因沉默对卵巢癌细胞细胞凋亡的影响

目的 探讨DNA-PK基因对沉默卵巢癌细胞凋亡的影响及机制.方法 DNA-PK shRNA以脂质体介导转染卵巢癌细胞株Skov3,24h后接受2Gy X射线照射,继续培养48 h.收集细胞,标记Annexin Ⅴ/PI,流式细胞术分析细胞凋亡情况,同时,RT-PCR检测p53和p21 mRNA的表达量.结果 2Gy辐射引起2.40％±1.53％ Skov3细胞凋亡,高于对照组（t=2.618,P=0.026）,而转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,凋亡细胞为18.74％±4.15％,明显高于单纯2Gy照射组（t=9.052,P＜0.001）及DNA-PK shRNA转染组（2.77％±1.73％）（t=8.869,P＜0.001）.RT-PCR检测结果显示,2Gy照射组,Skov3细胞p53 mRNA表达量高于对照组,而DNA-PKshRNA转染的Skov3细胞接受2Gy照射,其p53 mRNA表达量降低,接近正常水平,单独转染DNA-PK shRNA组p53 mRNA表达量无明显变化.转染DNA-PK shRNA的Skov3细胞经2Gy照射,其p21 mRNA表达量低于2Gy照射组接近正常组水平,单独转染DNA-PK shRNA组Skov3细胞p21 mRNA表达水平与正常对照组相当.结论 DNA-PK shRNA可增加辐射后巢癌细胞株的细胞凋亡,其可能机制是通过下调p53和p21 mRNA表达,而启动细胞凋亡.     

实时定量PCR检测低剂量X射线对小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的影响

目的通过检测低剂量X射线照射后小鼠睾丸中CHOP和caspase-12 mRNA表达的变化,在mRNA水平探讨内质网通路参与凋亡调控的可能。方法健康雄性昆明小鼠经过低剂量（0、0.050、0.075、0.100和0.200 Gy）照射后12 h和0.075 Gy照射后不同时间（0、3、6、12和24 h）,应用实时定量PCR（real time quantitative PCR）检测小鼠睾丸中C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein,CHOP）和胱天蛋白酶-12（caspase-12）mRNA表达剂量与时程效应关系。结果 0-0.200 Gy X射线照射后12 h,小鼠睾丸中CHOP mRNA表达随剂量逐渐增高并一直维持较高水平,其中0.050和0.100 Gy组较0 Gy显著增高（P〈0.05）;caspase-12 mRNA表达随剂量逐渐增高,0.075和0.100 Gy组较0 Gy组显著增高（P〈0.05,P〈0.01）。0.075 Gy照射后0-24 h CHOP mRNA表达随时间延长逐渐增高,在24 h到达峰值,较0 h显著增高（P〈0.05）;caspase-12 mRNA表达在3和6 h稍有降低后,12 h到达峰值,较0 h显著增高（P〈0.05）,24 h时回降。结论低剂量X线照射诱导小鼠睾丸CHOP和caspase-12 mRNA表达具有剂量-时程-效应规律性,二者可能参与低剂量X线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡的调控。     

低剂量照射对小鼠S180肉瘤组织CyclinE和PCNA表达影响

目的探讨低剂量照射对小鼠S180肉瘤组织细胞周期蛋白E（CyclinE）和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法昆明种雄性小鼠右后肢腹股沟皮下接种S180肉瘤细胞,随机分成对照组（假照组）、照射组。接种后1周以75mGy的γ射线全身照射照射组小鼠,于照射后12、24、48及72h处死两组小鼠,直接测量肿瘤直径,取瘤组织用PV二步法半定量检测CyclinE、PCNA表达情况。结果与假照组相比,75mGy的7射线全身照射后小鼠肿瘤生长缓慢（t=2．19,P〈0．05）。低剂量照射后各组小鼠CyctinE表达与假照组比较差异无显著性（P〉0．05）;照射后48h小鼠瘤组织PCNA表达较假照组明显下降（u=2．34,P〈0．05）。结论低剂量照射可降低CyclinE、PCNA的表达,从而抑制肿瘤生长,对低剂量照射抗肿瘤机制的研究有一定的指导意义。     

重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp63,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3．1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEg-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒坶hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞053基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEg-hp63构建正确。与0Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0．5-5Gy照射后,p53mRNA水平增高;A549．hp53在2-5Gy后,p53蛋白表达显著增高（P〈0．01）,SKOV-3-hp63其蛋白表达随剂量（0．5-5Gy）增加而明显增加（P〈0．05-P〈0．01）。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0．5Gy照射后明显下降（P〈0．05）,2-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）;SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0Gy时增高,0.5-5Gy照射后明显增高（P〈0．01）。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。     

电离辐射对人脑胶质瘤细胞中Ataxin-1基因表达的影响

目的探讨电离辐射对人脑胶质瘤细胞株U251、U87中Ataxin-1基因表达的影响。方法采用Western blot实验检测脑胶质瘤细胞株中A172、U251、U373、U87中Ataxin-1表达水平的差异,选取U251、U87为研究对象,采用RT-PCR和Western blot法检测各组Ataxin-1m RNA及蛋白表达水平的变化。结果 4种脑胶质瘤细胞中Ataxin-1的表达水平存在明显差异;U251、U87在不同剂量的X射线照射后24 h,其Ataxin-1蛋白及m RNA表达量与对照组相比均明显增加(P<0.05);不同时间检测提示,在X射线照射后4 h,Ataxin-1蛋白及m RNA的表达量即开始上升,并持续到照射后48 h(P<0.05)。结论Ataxin-1在不同脑胶质瘤细胞中表达水平存在明显差异;Ataxin-1基因有可能作为临床脑胶质瘤放疗靶基因,对临床放疗疗效的判断具有一定的应用潜力。     

电离辐射诱导HepG2细胞中Nucleolin和p53变化时程研究

目的检测电离辐射照射HepG2细胞后,其Nucleolin和p53蛋白的变化情况,结果将为进一步揭示电离辐射对p53信号传导通路的影响提供重要的细胞学基础,并为辐射生物效应研究提供新的生物学依据。方法电离辐射照射HepG2细胞后,分别提取总蛋白、胞浆蛋白和胞核蛋白,然后采用流式和WesternBlot的方法进行蛋白检测。结果HepG2细胞接受4Gy电离辐射照射后,其总蛋白中的Nucleolin和p53表达水平增高,且与照射时间呈正相关;HepG2细胞接受电离辐射照射后的2h、4h和8h胞核蛋白中的Nucleolin和p53表达水平下降,而胞浆蛋白中的Nucleoiin和p53表达水平对应增多。结论HepG2细胞受到一定剂量的电离辐射刺激后,Nucleolin和p53在肿瘤细胞内有明显的由胞核至胞浆的穿梭作用,二者的穿梭具有一定的协同性。     

地塞米松干预大鼠星形胶质细胞周期素的表达及细胞周期进程

背景：有研究表明地塞米松可引起星形胶质细胞凋亡,但其机制不清,有关地塞米松干扰星形胶质细胞的周期素表达的作用未见报道。目的：观察地塞米松引起大鼠星形胶质细胞凋亡与周期素表达的关系。方法：将不同浓度的地塞米松（0,10-5,10-4,10-3mol/L）与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24h后,经流式细胞仪检测细胞周期,并用免疫细胞化学方法检测周期素A和E在星形胶质细胞内的表达。结果与结论：地塞米松10-5,10-4mol/L浓度组G1期细胞指数较对照组增加（P〈0.05,P〈0.01）,10-3mol/L组的S期细胞指数较对照组明显升高（P〈0.01）;周期素A的表达随着地塞米松浓度的升高而减弱（P〈0.05）。周期素E的表达在地塞米松0,10-5,10-4mol/L组随着地塞米松浓度的升高而减弱（P〈0.05）,但在10-3mol/L浓度组反而表达增强（P〈0.01）。说明地塞米松10-5,10-4mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于G1期且与周期素A和E表达降低有关,地塞米松10-3mol/L干预的星形胶质细胞周期进程受阻于S期主要与周期素A表达降低有关。     

参麦注射液对人气道平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨参麦注射液（SMI）对人气道平滑肌细胞（HASMCs）细胞外信号调节激酶（ERK）表达的影响及SMI与ERK、细胞增殖的关系。方法：将体外培养的HASMCs随机分为对照组和参麦干预组,采用Western-blot检测磷酸化的细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白的表达,采用流式细胞术观察细胞的周期,四甲基偶氮唑盐（MTT）微量比色分析法检测细胞的增殖,免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,以观察参麦注射液对培养的HAMSCsERK表达及增殖的影响。结果：参麦干预组p-ERK蛋白的表达下降,参麦可显著降低HASMCs吸光度值及PCNA的表达,并使增殖期（S＋G2M期）细胞数显著减少（均P〈0.05）。结论：SMI通过剂量依赖效应抑制HAMSCs的ERK信号传导途径,从而阻止气道平滑肌细胞增生和气道重塑。     

原代骨髓基质细胞共培养对K562细胞伊马替尼敏感性及细胞周期的影响

背景：与骨髓基质细胞黏附可介导白血病细胞耐药,而对于黏附功能缺陷的慢性髓细胞白血病而言,骨髓基质细胞在伊马替尼耐药形成中的作用及其机制尚不清楚。目的：构建慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型,探讨慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞共培养对K562细胞伊马替尼敏感性及细胞周期的影响。方法：自慢性髓细胞白血病患者骨髓分离、培养骨髓基质细胞,与K562细胞共培养构建骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型。MTT法检测伊马替尼IC50,Annexin V-FITC/PI标记暴露于0.5μmol/L伊马替尼72 h的K562细胞,流式细胞仪检测K562细胞凋亡率。收集与骨髓基质细胞共培养72 h的K562细胞,流式细胞仪检测细胞周期及细胞周期蛋白（Cyclin A、Cyclin D1及cyclin E）的表达。结果与结论：基质细胞共培养组及悬浮培养组 K562细胞伊马替尼 IC50分别为（0.52±0.02）μmol/L 和（1.27±0.05）μmol/L,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。0.5μmol/L伊马替尼处理72 h,共培养组及悬浮培养组凋亡率分别为（15.48±4.17）%和（32.01±6.83）%,两者比较差异有显著性意义（P＜0.01）。与骨髓基质细胞共培养72 h的K562细胞G0-G1期细胞的比例为（48.81±8.27）%,明显高于悬浮培养组（25.78±3.26）%（P＜0.01）。慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞共培养能介导 K562细胞对伊马替尼耐药,其机制可能与基质细胞共培养使K562细胞发生G0/G1细胞周期阻滞有关。     

胃癌与淋巴结转移组织Mina53和PCNA的表达临床意义分析

目的：观察Mina53和PCNA在胃癌组织及淋巴结转移灶中的表达情况,分析二者与临床病理指标之间的关系,探讨其在胃癌发生、发展中的作用及临床意义。方法采用免疫组化方法检测59例患者胃癌组织及淋巴结转移灶中 Mina53、PCNA的表达情况,并分析二者表达与临床病理特征的关系。结果胃癌组织和淋巴结转移灶中Mina53表达率分别为79.7%和96.2%,明显高于正常胃黏膜组织的表达（P＜0.05）。Mina53在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的胃癌组织中的阳性表达率分别为69.7%和75.8%。Mina53和PCNA表达在患者性别、年龄和肿瘤部位之间无显著性差异（P＞0.05）,与TNM分期和分化程度有关,P＜0.05。与 PCNA 表达存在正相关（r＝0.598,P＝0.000）。结论 Mina53和 PCNA 与胃癌的TNM分期、分化程度等临床病理特征相关。对判断胃癌的浸润能力、淋巴结转移及预后方面有指导意义。     

p27和cyclin D1在甲状腺乳头状癌中的表达及其与淋巴结转移的关系

目的:研究p27、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在甲状腺乳头状癌中的表达及其与甲状腺乳头状癌淋巴结转移的关系。方法:采用免疫组织化学EnVision法检测60例甲状腺良性病变(其中结节性甲状腺肿30例,甲状腺腺瘤30例)和92例甲状腺乳头状癌(其中无淋巴结转移者50例,淋巴结转移者42例)组织中p27、cyclin D1的表达情况。结果:p27在甲状腺良性病变和甲状腺乳头状癌中的阳性表达率分别为91.7%、62.0%,而cyclin D1的阳性表达率分别为28.3%、63.0%,差异均有统计学意义(P0.01)。p27在无淋巴结转移和有淋巴结转移的甲状腺乳头状癌中的阳性表达率分别为76.0%、45.2%,而cyclin D1的阳性表达率分别为50.0%、78.6%,差异均有统计学意义(P0.01)。有淋巴结转移的甲状腺乳头状癌中p27和cyclin D1的表达呈负相关(r=-0.46,P0.01)。结论:甲状腺乳头状癌中p27低表达、cyclin D1高表达,且二者与甲状腺乳头状癌的淋巴结转移相关,并对预后判断有指导意义。     

STAT3反义寡核苷酸对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的研究

目的：探讨STAT3反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynucleotide,ASODN）对肺腺癌裸鼠移植瘤辐射增敏的影响,为提高恶性肿瘤的辐射敏感性提供新的思路和方法。方法建立裸鼠体内肺腺癌移植瘤动物模型,待瘤体直径＞0.5 cm后,瘤内多点注射STAT3 ASODN,给药剂量：15 mg/kg,1次/d,连续2周,给药后2 h联合γ射线局部照射总剂量20 Gy,每次2 Gy,每周5次,连续2周,照射剂量率0.75 Gy/min,定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线;测量肿瘤质量,计算抑瘤率;记录存活情况,估算生存率,绘制生存曲线,计算总生存期;免疫组化检测肿瘤组织细胞内STAT3蛋白表达变化情况;Western Blot 检测肿瘤组织内 P-STAT3、Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达情况。结果反义（antisense,AS）＋照射（irradiation,IR）组肿瘤体积治疗第8天开始明显小于其余各组肿瘤体积（P＜0.05）;AS＋IR组的抑瘤率为68.4%,高于IR组与AS组的之和;AS＋IR组的平均总生存期为（28.38±0.96）d,明显高于IR组及无义（nonsense,NS）＋IR组（P＜0.005）;STAT3蛋白及其下游Bcl-xL、CyclinD1蛋白表达变化明显下降, STAT3蛋白磷酸化水平也降低。结论 STAT3反义寡核酸能够增强肺腺癌裸鼠移植瘤的辐射敏感性,具有良好的放疗增敏剂临床应用开发前景。     

反复快速皮肤扩张可促进皮瓣表皮生长因子及增殖细胞核抗原的表达

背景：针对目前临床常用的常规扩张法与快速扩张法的不足,提出了反复快速皮肤扩张法。目的：观察反复快速皮肤扩张对皮瓣表皮生长因子、增殖细胞核抗原表达的影响。方法：雄性新西兰大白兔随机分为3组：反复快速扩张组、快速扩张组、常规扩张组。结果与结论：扩张维持第2,3周,反复快速扩张组皮瓣表皮生长因子表达显著高于快速扩张组、常规扩张组（P〈0.05）。除扩张维持第3周外,其余各时间段,反复快速扩张组成纤维细胞增殖细胞核抗原染色阳性率均显著高于其他两组（P〈0.05）。扩张维持第4周,反复快速扩张组表皮细胞增殖细胞核抗原染色阳性率显著高于其他组（P〈0.05）。提示反复快速皮肤扩张可能通过促进组织细胞合成与分泌皮瓣表皮生长因子,促进了扩张皮肤中成纤维细胞及表皮细胞的增殖。