磷脂酰肌醇激酶的非同位素酶解测定法

用磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C水解磷脂酰肌醇激酶催化产生的磷脂酰肌醇-4-磷酸,产物1,4-二磷酸肌醇再经碱性磷酸酶水解后,测定磷的含量,建立了磷脂酰肌醇激酶的非同位素酶解测定法。该法回收率可达91％,CV=6.5％。     

磷脂酰肌醇3激酶在卵巢癌组织中的表达

目的:探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)在卵巢癌组织中的表达。方法:选取20例卵巢癌组织和20例正常卵巢组织,通过Western blot法检测PI3K的亚单位p85蛋白表达,并通过逆转录-聚合酶链式反应检测PI3K mRNA的表达。结果:卵巢癌组织p85蛋白及PI3K mRNA的表达高于正常卵巢组织,差异具有统计学意义。结论:PI3K/Akt信号转导通路可能参与了卵巢癌的发生和发展。     

心肌细胞磷脂酰肌醇3-激酶作用的研究进展

随着肥胖人口比例的不断上升,心血管系统疾病成为威胁人类健康的一大因素。如今,心血管疾病的研究已趋向于分子水平,已发现有许多种细胞因子在心血管疾病的发生、发展与恢复过程中起重要作用。磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide 3-ki-nase,PI3K)是十几年前发现的一种与细胞内信号传导有关的脂类第二信使。近来,越来越多的研究表明PI3K是心肌细胞内一个重要分子,能抑制多种急性细胞应答,它与多种生物学事件有关,如囊泡运输、细胞骨架重组、细胞存活、细胞凋亡等。在心肌中,PI3K通过信号转导间接调节钙通道、心肌收缩力以及心肌肥大等方…     

整合素连接激酶及磷脂酰肌醇3-激酶在子痫前期胎盘中的表达

目的 研究整合素连接激酶(ILK)与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)在子痫前期患者胎盘中的表达,探讨其与子痫前期病因的关系.方法 用免疫组化S P法检测15例正常晚期妊娠及轻度子痫前期15例、重度子痫前期10例胎盘中ILK与PI3-K 的表达;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测正常妊娠及子痫前期患者胎盘滋养细胞中ILK mRNA表达水平.结果 ①胎盘中ILK、PI3-K的表达在正常足月妊娠和轻度子痫前期均呈强阳性表达,而在重度子痫前期中略有表达,两者具有显著性差异(P<0.05).②重度子痫前期组mRNA的表达明显低于正常组和轻度子痫前期组(P<0.05),但正常组和轻度子痫前期组差异无显著性(P>0.05 ).结论 ILK、PI3-K可能参与了重度子痫前期的发病.     

微RNA-126介导磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号与肿瘤关系的新进展

磷脂酰肌醇3-激酶调节亚基2(PIK3R2)是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的家庭成员之一,通过PI3K/蛋白激酶B(Akt)信号通路参与血管的形成、维护以及改造的调控,是组织器官正常发育、损伤以及肿瘤发生的一个重要的基因调控靶目标。不同类型的肿瘤,微RNA(miRNA)126介导的PIK3R2调控水平及趋势存在差异,可能与肿瘤的发生存在联系,是肿瘤研究中有前景的调控靶目标之一。     

磷脂酰肌醇-3激酶与胰腺疾病的关系

磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-ki-nase,PI3K)家族是一类特异性地催化磷脂酰肌醇3-位羟基磷酸化,产生具有第二信使作用的肌醇脂物质的激酶.研究表明,PI3K家族与细胞增殖、抗凋亡、细胞迁移、膜泡转运、细胞癌性转化等众多过程相关.它与胰腺炎、胰腺癌亦密切相关.本文就PI3K与以上两种疾病的关系作一综述,揭示其在疾病发生发展过程中的重要作用,并提出利用PI3K抑制剂来治疗上述疾病的可能性.     

磷脂酰肌醇3激酶在支气管哮喘中的研究进展

支气管哮喘（简称哮喘）是一种常见的呼吸系统疾病,它是由多种细胞（嗜酸粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞、气道上皮细胞等）和细胞组分参与的气道慢性炎症性疾病。既往认为哮喘是一种可逆性疾病,临床表现为反复发作的呼气性呼吸困难和可逆的气流受限。近年来发现一些哮喘患者在接受抗炎、舒张支气管治疗后,症状仍不能缓解,     

不同年龄大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶表达水平的研究

目的:探讨大鼠胰腺组织中胰岛素受体与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的表达随增龄的变化。方法:35只健康SD大鼠按月龄分为五组,分别为1月龄组7只,6月龄组7只,12月龄组7只,18月龄组7只,24月龄组7只。提取胰腺组织蛋白后用Western-Blot方法检测胰岛素受体和PI3K的蛋白水平,应用免疫组化方法检测胰岛素受体的分布。结果:(1)胰腺组织内胰岛素受体集中分布在胰岛细胞表面,腺泡细胞也有表达。(2)1月龄组及18月龄组大鼠胰腺组织中的胰岛素受体蛋白表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。1月龄组PI3K蛋白质表达量与6月龄组比较差异有统计学意义。结论:进入老年期,大鼠胰腺组织中胰岛素受体及PI3K的表达升高。     

磷脂酰肌醇激酶-3小干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定

目的：构建和鉴定靶向磷脂酰肌醇激酶-3（PI3K） 亚单位编码基因PI3Kcb （catalytic,beta polypeptide）基因的小干扰RNA真核表达载体.方法：根据siRNA设计原则,在PI3Kcb mRNA序列中选择1个特异性靶序列,体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体pDC316-EGFP-U6,重组后获得siRNA载体质粒pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,采用PCR检测和DNA测序以保证siRNA的方向和序列正确.结果：得到阳性重组克隆pDC316-PI3Kcb siRNA,经过PCR鉴定和测序,结果正确.结论：成功构建靶向PI3Kcb基因的siRNA载体pDC316-PI3Kcb siRNA-EGFP,为PI3Kcb的基因沉默研究奠定了可靠的基础.     

黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠靶组织磷脂酰肌醇3激酶的影响

目的:观察黄连解毒汤对2型糖尿病大鼠骨骼肌和脂肪组织磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3- kinase,PI-3K)p85亚基mRNA及蛋白表达的影响,探讨该方治疗2型糖尿病的分子机制。方法:Wistar雄性大鼠以尾静脉注射30 mg/kg链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)配合高脂高热量饮食喂养的方法建立2型糖尿病模型。然后将动物随机分为模型组、阿司匹林组和黄连解毒汤组,分别用药治疗。另设12只正常对照组,不做任何处理。10周后,检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)及空腹血清胰岛素(fasting serum insulin,FINS),并进行葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT);采用RT- PCR检测骨骼肌和脂肪组织中胰岛素刺激前后PI-3K p85亚基的mRNA表达;用Western blotting方法检测其蛋白表达水平。结果:黄连解毒汤组FBG和OGTT各时点血糖水平明显低于模型组(P<0.05);其FINS值明显低于正常组(P<0.05),而与模型组相比,差异无统计学意义。黄连解毒汤组骨骼肌和脂肪组织中PI-3K mRNA表达水平和蛋白表达水平较模型组明显增加。结论:黄连解毒汤治疗2型糖尿病的作用可能与其提高2型糖尿病大鼠肌肉和脂肪组织中PI-3K p85亚基mRNA和蛋白表达有关。     

Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的探讨Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法将小鼠胚胎成纤维前脂肪细胞3T3-L1诱导分化为成熟脂肪细胞,随机分为对照组、Adropin组、自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组。对照组细胞不予特殊处理,Adropin组细胞加入Adropin (终浓度为1 000 nmol·L-1),自噬激动剂组加入西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),Adropin+自噬激动剂组细胞加入Adropin(终浓度为1 000 nmol·L-1)和西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),继续培养2 h;采用单丹磺酰尸胺染色检测各组细胞中自噬空泡情况,细胞免疫荧光染色法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)表达,采用Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62及PI3K/AKT通路蛋白PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)的表达。结果与对照组比较,Adropin组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。与对照组比较,自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。Adropin+自噬激动剂组与对照组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与Adropin组比较,自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。与自噬激动剂组比较,Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。4组细胞中PI3K、AKT蛋白相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Adropin可抑制脂肪细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT通路而实现。     

对比分析化学发光免疫法与免疫放射测量法

目的 比较化学发光免疫分析（CLI）与免疫放射测量分析（IRMA）检测血清促甲状腺激素（TSH）在临床应用中的作用。方法 分别用CLI和IRMA对83例临床初诊怀疑甲状腺机能亢进（甲亢）患者的血清TSH进行检测和对比分析。结果 这两种方法的测定值具有高度相关性（r=0.9081,P<0.001）, CLI诊断甲亢的灵敏度和特异性为70.6%和84.4%;IRMA的灵敏度和特异性为93.2%和51.1%,没有优劣之分,但存在系统偏差,CLI特异性较好,IRMA灵敏性较高。结论 对于甲亢与甲状腺功能正常的鉴别,化学发光免疫分析与免疫放射测量分析具有相似的能力。     

A modified assay for phospholipids in blood serum]

An antiscorbutate reduction method for serum phospholipids assay was modified by decreasing the consumed quantity of sulphuric acid and perchloric acid to 30% of that before modification, and the quantity of serum to 40% of that before modification. The digesting time was only 50%-62% of that before modification. The coefficients of variation (CV) were 3.4% and 3.7% for two batches of assays. Recovery of phosphotidylcholine added to serum ranged form 94% to 109%, averagely 100.8%. Serum phospholipids assay of 50 normal adults by the methods before and after modification showed statistically no significant difference (2.813 +/- 0.333 mmol/L vs 2.828 +/- 0.316 mmol/L, P > 0.05), but good correlation (r = 0.991). The results indicate that the modified assay for serum phospholipids can decrease the use of serum and reagents, especially the harmful acids, and get the same result as that before modification.     

胶体金免疫层析试验快速检测HBsAg

0　引言　胶体金免疫层析试验是 2 0世纪 90年代初在免疫渗滤技术[1 ] 的基础上建立的一种快速简便的免疫检测技术 .我国有 40 %左右的人感染过乙型肝炎病毒 ,其中约有 1 0 %的人携带 HBs Ag,因而快速准确地检测和普查 HBs Ag,对于乙型肝炎的预防、诊断和治疗 ,具有极大的实用价值 .为此 ,我们研究建立了快速检测 HBs Ag的胶体金免疫层析试验 (GI-CA) ,取得了较为满意的结果 .1　材料和方法1 .1　材料　氯金酸购于上海试剂一厂 ;免疫层析的材料由吸水玻璃纤维、吸附胶体金的玻璃纤维纸、硝酸纤维素薄膜和塑料支持物四部分构成 ;抗 - H…     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导通路在胰蛋白酶激活中性粒细胞中的作用

目的:探讨胰蛋白酶对中性粒细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号转导通路的激活作用及PI3K抑制剂对其的影响。方法:应用Western blot技术检测特定浓度胰蛋白酶(40nmol/L)作用中性粒细胞后及应用PI3K抑制剂Wortmannin和LY294002后的p-PKB活化情况;同时应用ELISA及RT-PCR技术检测细胞培养液及中性粒细胞内TNF-α、IL-1β蛋白和mRNA的变化。结果:40nmol/L胰蛋白酶作用中性粒细胞后p-PKB的水平显著高于对照组(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白的表达也出现了同样的趋势;预先应用Wortmannin或LY294002后完全阻断了胰蛋白酶对中性粒细胞p-PKB的激活作用,与胰蛋白酶刺激组比较差异显著(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白及mRNA也随着p-PKB活性的抑制而表达减弱。结论:胰蛋白酶能够激活中性粒细胞内PI3K/PKB信号传导通路,Wortmannin及LY294002可以抑制胰蛋白酶对此通路的激活。     

一种可同时检测小肠推进和吸收的方法

目的:结合酚红法和D-木糖法,建立一种可同时检测小肠推进和吸收功能的简便方法。方法:用含有0.12%酚红、D-木糖(1.25%,2.5%and 5%)及明胶的混合试剂胃饲小鼠,用间苯三酚法测定血中D-木糖浓度,研究酚红对D-木糖吸收的可能影响;研究D-木糖浓度对酚红在小肠推进率的可能影响。结果:①10 min时,5%D-木糖混合试剂组与5%D-木糖对照组的血中D-木糖浓度无显著差异,说明酚红对D-木糖的吸收无明显影响。②15 min时,5%D-木糖混合试剂组的小肠推进率显著高于酚红对照组(P<0.05),而含2.5%和1.25%D-木糖混合试剂组的小肠推进率与酚红对照组无显著差异。结论:胃饲含有0.12%酚红、5%D-木糖和15%明胶的混合试剂,可同时检测小鼠小肠的推进和吸收。     

血管内皮依赖性舒张功能的无创性检测

采用高分辨超声测定２２名健康人休息时、反应性充血时和含服硝酸甘油（ＧＴＮ）后的肱动脉内径变化。结果表明：在反应性充血试验和含服ＧＴＮ后肱动脉明显扩张，与基础值比较分别增加１３．８±３．９％和２４．９±９．７％（ｐ〈０．０１）。提示在正常人中血流增加可引起肱动脉内皮依赖性舒张，而含服ＧＴＮ后引起肱动脉非内皮依赖性舒张。介绍了无创性血管内皮依赖性舒张功能的测定方法，并证实该方法简便易行、可靠实用。