血管紧张素Ⅱ及替米沙坦对大鼠心房肌细胞钾和钙电流的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和替米沙坦对SD大鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和L型钙电流(ICa-L)的作用。方法急性酶解法分离SD大鼠心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,观察AngⅡ、替米沙坦以及AngⅡ联合替米沙坦对大鼠心房肌细胞Ito和ICa-L的影响。结果 AngⅡ(0.1μmol/L)和替米沙坦(0.01μmol/L)以及两药联合均能抑制大鼠心房肌细胞Ito,AngⅡ组、替米沙坦组、联合组干预前后Ito的电流密度值比较差异有统计学意义[(22.48±2.75)vs(15.71±2.06)pA/pF,(24.16±2.36)vs(16.15±1.82)pA/pF,(24.41±2.27)vs(21.35±1.46)pA/pF,P<0.05]。AngⅡ(0.1μmol/L)能显著增强大鼠心房肌细胞ICa-L的峰值电流密度[(-4.51±0.38)vs(-5.16±0.29)pA/pF,P<0.01];替米沙坦(0.01μmol/L)对心房肌细胞ICa-L无明显作用[(-4.35±0.27)vs(-4.29±0.34)pA/pF,P>0.05],但联合组中替米沙坦可拮抗AngⅡ对ICa-L的增强效...     

胺碘酮对人心房肌细胞钙电流和钙离子浓度影响的研究

目的　采用血管紧张素(Ang)Ⅱ刺激人的心房肌细胞,观察细胞膜钙通道电流及胞内游离钙浓度的变化,了解AngⅡ参与房性心律失常的电生理机制,同时观察胺碘酮的干预作用,为临床应用胺碘酮提供实验依据。方法　急性分离单个人心房肌细胞,采用全细胞膜片钳方法记录L 型钙电流(ICa L),同时应用共聚焦显微镜技术测定细胞内游离钙的浓度。实验分为对照组、AngⅡ组(0.1μmol/L AngⅡ)、胺碘酮组(30 nmol/L胺碘酮)及AngⅡ+胺碘酮组。结果　与对照组相比,0.1μmol/L AngⅡ能使人心房肌细胞膜ICa L峰值电流密度明显增加[(-12.77±1.61) pA/pF比(-5.78±0.81) pA/pF,P<0.05];30 nmol/L胺碘酮对人心房肌细胞膜ICa L无明显影响[(-5.58±0.62) pA/pF];但胺碘酮可拮抗AngⅡ的作用,AngⅡ+胺碘酮组的ICa L峰值电流密度[(-7.16±0.82) pA/pF]与AngⅡ组的差异有显著性(P<0.05)。共聚焦显微技术发现,对照组和胺碘酮组人心房肌细胞内荧光强度和荧光吸光度值较低;加入AngⅡ后即刻,细胞内荧光吸光度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光吸光度值明显增高,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05);而AngⅡ+胺碘酮组细胞内荧光吸光度值显著低于AngⅡ组(P<0.05)。结论　AngⅡ使人心房肌细胞膜ICa L峰值电流密度明显增加,同时可引起人心     

血管紧张素Ⅱ对人心房肌细胞内Ca2+的影响及替米沙坦的拮抗作用

目的:研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人心房肌细胞[Ca2+]i的影响,以及AngⅡ受体拮抗剂替米沙坦的拮抗作用. 方法:急性分离单个人心房肌细胞,实验分4组:正常对照组;AngⅡ组,加入终浓度为0.1 μmol/L的AngⅡ;替米沙坦组,加入终浓度为10 nmol/L的替米沙坦;AngⅡ+替米沙坦组,替米沙坦10 nmol/L与AngⅡ 0.1 μmol/L同时加入. 以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,应用激光共聚焦显微镜技术,分别于加入干预药物后即刻与15 min检测[Ca2+]i变化. 结果:对照组和替米沙坦组人心房肌细胞内荧光强度和荧光光密度值较低. AngⅡ加入后即刻,细胞内荧光光密度值开始增加,15 min后细胞内荧光强度和荧光光密度值显著增高(P<0.01 vs对照组). 而AngⅡ+替米沙坦组细胞内荧光光密度值显著低于AngⅡ组(P<0.01 vs AngⅡ组). 结论:AngⅡ可引起人心房肌细胞内钙超载,替米沙坦能显著减轻AngⅡ诱导的人心房肌细胞内Ca2+超载.     

胡椒碱对H2O2所致兔心房肌细胞瞬时外向钾电流异常的保护作用

目的研究胡椒碱对H2O2引起的兔单个心房肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)异常的保护作用。方法采用全细胞膜片钳技术分析50μmol/L的H2O2对兔单个心房肌细胞Ito的影响,并研究预先应用7μmol/L的胡椒碱对其的保护作用。结果 7μmol/L胡椒碱对正常兔心房肌细胞Ito及其通道动力学无显著影响。在50μmol/L H2O2作用下,兔心房肌细胞Ito峰值由(39.3±5.4)pA/pF降低至(32.8±2.0)pA/pF(P<0.05),电流-电压曲线下移,通道稳态激活曲线右移,通道稳态失活曲线及恢复时间不变,关闭态失活加速。预先给予7μmol/L胡椒碱,明显减轻H2O2对Ito的抑制作用(P<0.01),并可减轻H2O2对瞬时外向钾通道动力学的异常影响。结论胡椒碱可减轻氧化应激对心房肌细胞Ito的影响。     

槲寄生黄酮苷对大鼠心室肌细胞钾离子通道的作用

目的观察槲寄生黄酮苷对大鼠心室肌细胞钾离子通道的作用,探讨槲寄生黄酮苷抗心律失常作用机制。方法应用全细胞膜片钳技术记录槲寄生黄酮苷对大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)的影响。结果应用50μg/ml和250μg/ml两种浓度的槲寄生黄酮苷分别使大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)在实验电压-120mV时从给药前(-26.23±9.52)pA/pF减少到(-20.82±7.88)pA/pF,(-18.11±7.89)pA/pF(n=7,P<0.05);使大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)在实验电压+50mV时,从给药前(26.14±6.67)pA/pF减少到(16.41±6.23)pA/pF,(13.25±3.78)pA/pF(n=4,P<0.05)。结论槲寄生黄酮苷抑制大鼠心室肌细胞IK1,Ito可能是其抗心律失常作用的一个机制。     

参松养心胶囊对心室肌细胞钾通道的影响

目的观察参松养心胶囊干粉提取溶液对大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(IK1)、瞬时外向钾电流(Ito)以及豚鼠心肌细胞延迟整流钾电流(Ik)的影响。方法用酶解法分离单个心室肌细胞,并用全细胞膜片钳记录技术。结果当药物浓度0.5%时,可以使大鼠心肌细胞IK1内向成分降低,使-100mV时IK1电流密度从(-10.8±1.8)pA/pF降至(-7.2±2.1)pA/pF,平均抑制率为(33.1±16.9)%(n=11,P<0.05),但不改变电流的翻转电位及整流特性。药物同时对Ito电流的瞬时成分有抑制作用,60mV时Ito电流密度从(-19.8±7.1)pA/pF降至(-10.0±3.9)pA/pF,平均抑制率为(50.6±10.8)%(n=6,P<0.05),稳态失活曲线左移,失活后恢复时间常数增大。药物浓度0.5%时,对Ik有电压依赖性抑制作用,50mV时对尾电流峰值的抑制率为(30.8±1.1)%(n=5,P<0.05)。结论参松养心胶囊干粉提取溶液对IK1,Ito和Ik均具有不同程度的阻滞作用。这种多离子通道阻滞作用不仅使参松养心胶囊具有广谱的抗心律失常疗效,减少致心律失常的副作用,对Ito的阻滞效应还将显示其独特的抑制2相折返的作用,值得对其作更深入和广泛的研究。     

缬沙坦对心房肌细胞钾电流的影响

目的:从心肌细胞电生理的角度探讨血管紧张素II受体阻断剂(ARB)类药物抗房颤的可能机制.方法:采用全细胞膜片钳技术的电压钳方法记录心房肌细胞的延迟整流钾电流(Ik).观察ARB类药物缬沙坦对豚鼠心房肌细胞离子通道电流的影响.结果:缬沙坦100μM明显抑制心房肌细胞IK的峰值电流,从(5.33±0.13)pA/pF减小至(4.49±0.48)pA/pF,P<0.05,并呈电压依赖性.结论:缬沙坦抑制心房肌细胞延迟外向钾电流,可能是引起其动作电位时程延长的一个重要因素.缬沙坦延长心房肌动作电位时程,可能在房颤的转复及房颤转复后窦性心律的维持中有价值.     

兔心肌梗死后右心室肌细胞离子通道电流的变化

目的探讨心肌梗死后右心室肌细胞离子通道电流的变化.方法该研究采用结扎兔冠状动脉左前降支的方法建立心肌梗死动物模型,应用膜片钳全细胞记录方法,记录心肌梗死后2个月右心室心肌细胞钠通道电流(INa)、L-钙通道电流(ICa-L)、瞬间外向钾电流(Ico)的变化.结果心肌梗死后2个月,心肌梗死组INa电流密度峰值[(20.42±1 73)pA/pF,n=15]较对照组[(35 40±3.43)pA/pF,n=16]明显下降(P＜0.05);心肌梗死组ICa-L电流密度峰值[(5.71±0.93)pA/pF,n=12]与对照组[(6.28±1.03)pA/pF,n=10]略下降,但无明显差异(P＞0.05);心肌梗死组Ito电流密度( 60 nV时)[(8.61±0.95)pA/pF,n=16]较对照组[(14.38±1.24)pA/pF,n=17]明显下降(P＜0.05).结论心肌梗死可引起右心室肌细胞INa和Ito的下降,造成心肌传导速度下降和动作电位时程相对延长、复极异常,可能是导致心肌梗死后出现室性心律失常的离子机制.     

氟哌啶醇对豚鼠心室肌细胞IK的影响

目的 观察氟哌啶醇对豚鼠单个心室肌细胞延迟整流钾电流(IK)通道的作用,探讨氟哌啶醇致心律失常的离子基础.方法 应用全细胞膜片钳技术记录氟哌啶醇对豚鼠单个心室肌细胞IK的影响.结果 在获得单个细胞后,分别给予0.3、1.0 、3.0 μmol/L的氟哌啶醇.延迟整流钾电流在试验电压+70 mV时,从给药前的(16.660 4±1.571 7)分别减少至(5.025 5±1.937 2)、(9.857 2±3.900 2)、(7.179 4±1.816 0)pA/pF (n=7,P＜0.01).结论 氟哌啶醇可抑制IK,使动作电位时程延长而引发心律失常,其致心律失常作用可能与其对钾通道的作用有关.     

心房峡部L型钙电流特征的研究

目的研究心房峡部L型钙电流的特性,探讨心房峡部参与心律失常的机制。方法新西兰大白兔15只,麻醉后取心脏,灌流后分离右心房峡部及游离壁,利用全细胞膜片钳技术,对比观察心房峡部和右心房游离壁L型钙电流的电流密度,并观察异丙肾上腺素灌流后,其电流密度的变化。结果正常状态下,心房峡部和右心房游离壁L型钙电流的电流密度分别为-(7.03±0.71)pA/pF、-(6.30±0.61)pA/pF,二者比较差异无显著意义(P>0.05)。异丙肾上腺素灌流后,心房峡部和右心房游离壁L型钙电流的电流密度分别为-(11.01±0.46)pA/pF、-(8.51±0.31)pA/pF,两处的L型钙电流均显著增大,且心房峡部的L型钙电流密度显著大于右心房游离壁(P<0.01)。结论L型钙电流的异常变化可能是心房峡部参与心律失常发生机制的重要因素。     

BRL-37344对豚鼠心肌细胞ICa-L、Ito的影响

目的 为研究β3肾上腺素能受体介导的心脏生物学效应--β3肾上腺素能受体激活后心肌细胞电生理活动的变化.方法 以原代培养的豚鼠心肌细胞为对象, 采用全细胞膜片钳技术记录心肌细胞孵育β3肾上腺素能受体激动剂4-[-[2-hydroxy-(3-chlorophenyl)ethyl-amino]propyl]phenoxyacetate(BRL-37344; BRL)5~10 min前后ICa-L,Ito(L型钙离子通道和瞬时外向钾通道)的变化.结果 显示10-6 mol/L的BRL显著增强豚鼠心肌细胞的Ito,上移I-V曲线;去极化刺激到+80 mV时,电流密度从(6.11±1.03) pA/pF上升到(8.46±2.07) pA/pF(n=6,P=0.013064).10-6 mol/L的BRL显著增强豚鼠心肌细胞的ICa-L,为对照组的(2.30±0.75)倍(n=5,P=0.0063);去极化刺激到+10 mV时,电流幅度从(89.25±17.83) pA上升到(205.00±72.24) pA.结论 BRL-37344可增强豚鼠心肌瞬时外向钾电流和L型钙电流,进而调控心脏的活动.     

复智胶囊主要成分对SH-SY5Y细胞延迟整流钾电流的作用

目的:观察复智胶囊主要成分大黄素对体外培养的SH-SY5Y细胞延迟整流钾电流(IK)的影响。方法:体外培养SH-SY5Y,MTT法检测大黄素细胞毒性确定加药浓度,将SH-SY5Y分为空白对照组、OGD组、糖氧剥夺OGD+大黄素(Xμmol/L)治疗组,全细胞膜片钳技术描记IK变化并绘制I-V曲线。结果:SH-SY5Y经过糖氧剥夺后细胞存活率显著下降,IK电流密度减弱,此现象可被大黄素逆转,在指令电压为+50mV时IK峰密度值分别从(4.474±0.4182)pA/pF增大至(5.947±0.7415)pA/pF(P0.05,n=15);大黄素可使被OGD抑制的IK电流-电压曲线(I-V)慢慢上升,并且伴随着的去极化幅度的逐步升高而越来越大。结论:大黄素对SH-SY5Y细胞具有保护作用;对IK有激活作用。     

HEK293细胞内源性电压门控钾离子通道电生理学特性研究

目的探讨人胚胎肾细胞(HEK293细胞)内源性电压门控钾通道的电生理特性,避免HEK293细胞上内源性离子通道对外源性离子通道表达时的干扰。方法利用全细胞膜片钳技术分析了HEK293细胞内源性电压门控钾通道的电生理特性。结果在HEK293细胞上去极化电压从-80 mV开始可触发1个外向电流。在+100 mV时电流为(422.78±68.87)pA,电流密度为(21.91±3.20)pA/pF。钾通道阻断剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)、4-氨基吡啶(4-aminopyri-dine,4-AP),在将细胞外液钾浓度由4 mmol/L提高到40 mmol/L时,对外向电流有影响。结论正常培养的HEK293细胞本身有内源性的钾通道。该外向电流可能包括了IK、IK1、IKur和Ito。     

小鼠心室肌细胞钾电流及动作电位特征

目的比较小鼠左心室、右心室及室间隔心肌细胞的钾电流、动作电位的特征.方法采用全细胞膜片钳技术.结果左、右心室肌细胞的动作电位特征和Ito, Ik1钾电流密度无差异;与左心室比较,室间隔细胞存在两种特征的Ito,Ikslow (5.9pA/pF±1.35pA/pF,+50mV) 电流密度低型和Itof(3.47pA/pF±1.1pA/pF) and Ikslow (4.75pA/pF±1.5pA/pF)电流密度均低型;室间隔细胞亦存在两种特征的动作电位,一种与左、右心室无差异,另一种明显延长.结论小鼠心脏细胞存在不同的电生理特征分布,这种分布是由于编码通道的基因分布不同造成的.     

心力衰竭患者抗β1肾上腺素能受体自身抗体阳性血清对心肌细胞L-型钙通道的影响

目的探讨心力衰竭患者抗β1肾上腺素能受体自身抗体(Abs)阳性血清对豚鼠心室肌细胞膜上L型钙电流(IGa-L)的影响.方法应用全细胞钳制技术,定量观察并比较β1肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素(Iso)和心力衰竭患者Abs阳性血清对豚鼠单个心室肌细胞的ICa-L电流强度的影响.结果β1肾上腺素能受体激动剂Iso可使基础ICa-L峰值电流强度和标准电流密度从(997.09±227.5)pA和(8.20±0.86)pA/pF增大到(2 241.01±348.5)pA和(18.98±1.18)pA/pF(P＜0.01),而β1肾上腺素能受体阻滞剂艾司洛尔(Esm)可以阻断这一作用.同样,心力衰竭患者Abs阳性血清可使基础ICa-L峰值电流强度从(963.57±207.56)pA增大到(1 382.41±241.36)pA,标准电流密度从(8.14±0.72)pA/pF增大到(11.70±1.03)pA/pF(P＜0.01),Esm也可阻断此作用.结论人类心脏Abs阳性血清对心肌细胞受体有异丙肾上腺素样激动剂效应,可能参与了心力衰竭时心肌细胞的病理生理过程.     

血管紧张素Ⅱ对大鼠血管平滑肌细胞T型钙通道及其信号转导通路的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞Cav3.1表达的影响及其作用机制.方法 酶消化法原代培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,应用第5代传代细胞,实验随机分为7组:对照组(不加任何药物)、AngⅡ组[加入AngⅡ(0.1μmol/L)培养24 h]、AngⅡ+氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、AngⅡ+PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)预刺激1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、PD98059组[加入PD98059(10 μmol/L)培养1h]、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组[先加入氯沙坦钾(1μmol/L),PD98059(10 μmol/L)培养1h,再加入AngⅡ(0.1 μmol/L)共同培养24 h]、氯沙坦钾组[加入氯沙坦钾(1μmol/L)培养4h].RT-PCR、Western blot方法测定各组T型钙通道的表达.结果 PCR结果显示:与对照组(1.000±0.315)比较,AngⅡ组Cav3.1表达量(17.930±0.954)明显增加(P＜0.01);PD98059组、氯沙坦钾组Cav3.1表达量为0.928±0.262、0.978±0.292,与对照组比较差异无统计学意义(P＞ 0.05);AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组、AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组的Cav3.1表达量分别为0.125±0.007、0.066±0.015、0.109±0.018,明显低于AngⅡ组(P＜0.01).Western blot结果显示:与对照组比较,AngⅡ+氯沙坦钾组、AngⅡ+PD98059组及AngⅡ+氯沙坦钾+PD98059组Cav3.1蛋白表达明显降低(P＜0.05);而PD98059组及氯沙坦钾组Cav3.1蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ通过Ras/PKCξ/MEK/ERK 1/2路径增加血管平滑肌细胞Cav3.1的表达.     

多西紫杉醇对MCF-7人乳腺癌细胞延迟外向钾电流的作用

目的:探讨多西紫杉醇对MCF-7人乳腺癌细胞延迟外向钾电流(IK)的作用。方法:采用全细胞膜片钳记录方式,设保持电位-90mV,刺激电位为-60～ 60mV,步阶脉冲10mV,波宽200ms,刺激间隔3s,刺激频率为2Hz。结果:随着多西紫杉醇的浓度增加,MCF-7细胞IK电流电压曲线斜率减少,多西紫杉醇对IK通道具有关闭作用;在同一指令电压下,IK随着多西紫杉醇浓度的增加而减少,具有剂量依赖性,当指令电压为 60mv时,多西紫杉醇浓度从1×10-7mol·L-1增加到1×10-5mol·L-1时,IK从(124.03±8.43)pA/pF,减少到(75.16±9.10)pA/pF,每个浓度的IK与给药前相比,差异显著(P<0.01)。结论:多西紫杉醇对MCF-7人乳腺癌细胞的延迟整流K 通道具有关闭作用,能够抑制乳腺癌细胞的增殖。     

哇巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌细胞钠电流的作用

目的 观察哇巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌细胞钠电流的作用,探讨二药诱发心律失常的机制.方法 用全细胞膜片钳技术分别记录豚鼠和大鼠单个心肌细胞钠电流.结果 在-40mV电压下,哇巴因5μmol/L使Ina从(-48.3±8.9)pA/pF减少到(-22.6±5.6)pA/pF(抑制60.1%,n=5,P＜0.01);乌头碱1μmol/L使Ina从(-21.8±5.8)pA/pF增加到(-67.3±7.8)pA/pF(增加208.7%,n=4,P＜0.01).结论 哇巴因抑制豚鼠心肌细胞钠电流而乌头碱增加大鼠心肌细胞钠电流.不论是抑制还是促进钠电流,二药均使离子通道失衡,这是其诱发心律失常的重要机制.     

急性冠状动脉综合征患者淋巴细胞电压依赖性钾通道的变化

[郭丽芬,张存泰,吴杰等.中华心血管病杂志,2007,35(9):818～821]用全细胞膜片钳技术和Western印迹法,探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者外周血淋巴细胞电压依赖性钾通道(Kv)电流及Kv1.3蛋白表达的变化。收集12例ACS患者和10例健康志愿者外周血淋巴细胞,采用膜片钳全细胞电流记录方法,记录淋巴细胞膜Kv的电流密度。用Western印迹法检测外周血淋巴细胞Kv1.3蛋白的表达。发现ACS患者淋巴细胞Kv的电流密度为(269±94)pA/pF,明显高于正常人[(191±64)pA/pF,P<0.01]。ACS组淋巴细胞膜电容为(2.3±0.7)pF,对照组为(2.2±0.5)pF,两组间差…     

高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响

目的研究高浓度姜黄素对大鼠心室肌细胞瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响。方法采用急性酶解分离法获得大鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳技术记录Ito和Ik1,观察50μmol/L姜黄素对Ito和Ik1的影响。结果 50μm/L姜黄素对Ito和Ik1通道电流的抑制率分别是(84±11)%(P<0.05)和(59±8)%(P<0.01)。它使Ito和Ik1通道电流密度-电压曲线电流幅度减小,但不改变其整流特性。结论 50μmol/L姜黄素能明显抑制大鼠心室肌细胞Ito和Ik1电流,提示其可能存在心脏毒性作用。