下呼吸道分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制探讨

目的探讨下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及可能的作用机制。方法收集下呼吸道标本中分离的铜绿假单胞菌58株。采用纸片扩散法检测铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性,采用改良三维试验方法检测超广谱-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC酶）,采用外膜蛋白图谱紫外吸收法测定外膜蛋白OprD2含量。结果22株对亚胺培南耐药,其中检出单产ESBLs8株,单产AmpC酶6株,同时产AmpC酶和ESBLs3株。亚胺培南耐药株OprD2相对含量明显低于敏感株（P〈0.01）。结论ESBLs和AmpC酶的产生以及外膜蛋白OprD2的减少是患者下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的主要原因。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药机制研究

目的了解汕头地区对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌（PA）的耐药情况及其机制。方法收集临床分离耐亚胺培南的PA共141株,PCR法检测包括KPC,SME,GES,PER和VEB型超广谱β内酰胺酶（ESBLs）22．PSE酶基因。结果菌株对头孢哌酮,舒巴坦的耐药率较低,未发现产KPC,SME,GES,PER和VEB型ESBLs,6株菌株产PSE酶。结论ESBLs并非汕头地区铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,可能是多种机制协同作用的结果。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的检测及其耐药性分析

目的检测铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶并分析其耐药性。方法采用E-test方法进行抗菌药物敏感试验,产金属β-内酰胺酶菌株进行脉冲场凝胶电泳分析。结果105株铜绿假单胞菌对9种抗菌药物的敏感率分别为:哌拉西林/他唑巴坦75.19%、头孢他啶64.0%、阿米卡星44.5%、环丙沙星64.32%、头孢哌酮/舒巴坦70.12%、亚胺培南79.1%、氨曲南58.32%、哌拉西林47.62%、头孢吡肟51.43%。22株耐头孢他啶和亚胺培南铜绿假单胞菌的产金属β-内酰胺酶率为31.8%。7株产金属β-内酰胺酶菌株经脉冲场凝胶电泳分析有4个克隆株。结论产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对碳青酶烯类抗生素及头孢菌素耐药的机制之一,准确的实验室检测不仅可以帮助临床合理使用抗生素并可减少耐药性的传播。     

亚胺培能对铜绿假单胞菌青霉素结合蛋白亲和力的研究

应用[14C]-青霉素对50株铜绿假单胞菌进行了青霉素结合蛋白亲和力及与膜通透性、β-内酰胺酶、药物敏感性间关系的研究,并对液闪同位素计数法测定青霉素蛋白结合率进行了尝试。结果表明①亚胺培能对铜绿假单胞菌的致死靶位蛋白为PBPs2。②铜绿假单胞菌临床分离株对亚胺培能耐药率达14%;所有敏感株的膜通透率（35.0%）与PBPs结合率(46.58%)均高于耐药株（23.61%、34.50%,P<0.05）。③耐药株中高产酶株（～）可达28.59%远高于敏感株13.95%（P<0.01）,其β-内酰胺酶产酶量越高则膜通透率及PBPs结合率越低。④无论膜通透率是0还是100%,PBPs结合率无明显改变。结果提示耐碳青烯类抗生素的铜绿假单胞菌,其耐药机制是多方面的,主要与细菌膜通透性改变及β-内酰胺酶水解有关,而与PBPs无关。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β-内酰胺酶研究

目的分析临床分离的27株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及β-内酰胺酶的类型.方法采用K-B法测定美罗培南等15种抗菌药物对27株铜绿假单胞菌的体外抗菌活性;三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)分析β-内酰胺酶类型.结果阿米卡星敏感性最高为66.7%,其它依次为头孢哌酮/舒巴坦(55.6%)、头孢吡肟(51.9%),美罗培南敏感率为29.6%.三维试验结果表明,12株产碳青霉烯酶中金属酶2株;单产AmpC酶3株.2-巯基丙酸抑制试验筛选金属酶2株阳性,与三维试验结果相符.根据参考文献设计VIM-2特异性引物,PCR反应结果阳性,经克隆测序证实VIM-2型金属酶.结论我院铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制中很重要一部分原因是产碳青霉烯酶.     

产β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的检测及药敏分析

目的为了解铜绿假单胞菌对各种抗生素的耐药情况,为临床对由铜绿假单胞菌引起的感染的治疗提供依据。方法对从临床不同感染部位标本中分离到的93株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶的检测及药敏测定,并对检测结果进行分析。结果93株铜绿假单胞菌对所测试的11种抗生素耐5种以上的有36株,占38.7%,其中β-内酰胺酶阳性的30株,占32.4%.β-内酰胺酶阴性的有6株,占6.2%。结论产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的耐药性更加严重,目前治疗铜绿假单胞菌的感染可首选亚胺培南,其次为阿米卡星和头孢他啶。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及产金属β-内酰胺酶基因型分析

目的研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药性以及其产金属β-内酰胺酶(MBL)的基因型。方法收集2016-2017年东莞市人民医院以及东莞市东华医院2家医院的110株耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株,采用VITEK2系统分析临床菌株耐药性;采用组合纸片法对亚胺培南耐药菌株进行MBL表型检测,同时采用PCR法检测MBL相关基因(包括IMP型、VIM型、SPM型、SIM型、GIM型和NDM型);比较分析产与不产MBL的耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药谱差异。结果耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星的耐药率为10.00%,对妥布霉素、庆大霉素、头孢吡肟、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率在17.27%～21.82%之间,对头孢他啶、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率为26.36%～31.82%,对其余β-内酰胺类、氟喹诺酮类、四环素、磺胺类抗生素耐药严重(74.54%～100.00%)。110株耐亚胺培南铜绿单胞菌中筛选出18株(16.36%)MBL表型阳性的菌株,用PCR法也检测出18株MBL基因阳性的菌株(16.36%),其中9株检出是IMP-25(8.18%),8株检出是VIM-2(7.27%),4株检出是SIM-2(3.64%),有3株同时检出VIM-2和SIM-2,其他基因型均阴性。产MBL菌株对所有药物的耐药率高于非产MBL菌株。结论产金属β-内酰胺酶在铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药中发挥重要作用,酶基因型主要为IMP-25、VIM-2和SIM-2。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制

目的 探讨临床分离的铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制.方法 收集该院58株耐亚胺培南和美罗培南铜绿假单胞菌,①在M-H琼脂平板中分别加入β内酰胺酶抑制剂和外排泵抑制剂,形成改良K-B法,进行药敏试验;②用改良三相水解试验检测β内酰胺酶;③用聚合酶链反应(PCR)检测金属酶基因(IMP、VIM)以及外膜膜孔蛋白基因(OprD2).结果 58株耐碳青霉烯类抗生素铜绿假单胞菌中,53株主动外排系统过度表达合并持续高产AmpC酶,其中15株伴有外膜膜孔蛋白OprD2缺失,1株产超广谱β内酰胺酶;在5株既不过度表达主动外排系统又不产β内酰胺酶细菌中,有1株OprD2基因缺失;未检出产金属酶菌株.结论 该院铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制是主动外排系统的过度表达并伴有持续高产AmpC酶,其中16株菌株伴有外膜膜孔蛋白OprD2基因缺失.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性及超广谱β-内酰胺酶的基因分析

目的:探讨临床分离铜绿假单胞菌的药敏谱及其产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况、基因分布和流行特性。方法:分析208株铜绿假单胞菌对16种抗生素的药敏谱,筛选耐亚胺培南铜绿假单胞菌,采用PCR检测ESBLs基因(TEM、SHV、OXA-10、OXA-2、PER、VEB)。结果:53株对亚胺培南耐药,耐药率为25.48%(53/208),且对头孢替坦(CTE)、头孢唑林(CZ)、氨苄西林/舒巴坦(AMS)、呋喃妥因(FTN)等耐药率较高;53株亚胺培南耐药菌经PCR检测,产ESBLs菌株23株,其中TEM型16株,OXA-10型4株,PER型3株,未检测出OXA-2和SHV型。结论:耐亚胺培南铜绿假单胞菌中产ESBLs菌株的基因型主要为TEM型,且为多重耐药,临床应结合药敏谱,合理使用抗生素。     

铜绿假单胞菌产β内酰胺酶检测及耐药性分析

目的了解佛山地区铜绿假单胞菌临床分离产诱导型β内酰胺酶及其耐药性。方法采用美国DADE产MicroSean AUTOScan-4型微生物分析仪、NC21鉴定板和药敏板,对128株铜绿假单胞菌检测产诱导型β内酰胺酶,和对20种抗生素的敏感性,用符合NCCKS标准的VerSion22软件进行处理和分析。结果①铜绿假单胞菌对头孢他啶、哌拉西林／三唑巴坦、环丙沙星、阿米卡星、头孢吡肟、亚胺培南的敏感性高达62．6％-80．0％。妥布霉素、哌拉西林、庆大霉素次之,而其他头孢菌素敏感性低下。②128株铜绿假单胞菌产诱导型β内酰胺酶者115株（89．8％）,在产诱导型β内酰胺酶菌株中,哌拉西林/三唑巴坦、头孢他啶、哌拉西林、安曲南诱导铜绿假单胞菌产诱导型β内酰胺酶的出现率为64．3％～86．1％。③产诱导型β内酰胺酶株对哌拉西林／三唑巴坦、阿米卡星、头孢吡肟、头孢他啶、环丙沙星、妥布霉素等抗生素的敏感性显著高于不产诱导型β内酰胺酶株,而氨苄西林／舒巴坦、复方新诺明的敏感性则完全相反（P〈0．05）。结论本地区抗生素诱导铜绿假单胞菌产诱导型β内酰胺酶率较高,哌拉西林／三唑巴坦、头孢他啶、哌拉西林、安曲南是强诱导剂,对于产酶菌株可选择环丙沙星、阿米卡星或联合使用耐酶的抗生素。     

痰标本中铜绿假单胞菌AmpC酶的检测及其耐药性研究

目的　调查痰标本中铜绿假单胞菌AmpC酶的表达情况 ,比较产酶菌和非产酶菌的耐药性。 方法　收集来源痰标本中的铜绿假单胞菌 114株 ,首先采用K -B法检测铜绿假单胞菌的AmpC酶以及 3种不同表型的AmpC酶产生情况 ,然后使用微量肉汤稀释法分析产酶菌株与不产酶菌株耐药性。结果　在 114株铜绿假单胞菌中检出产AmpC酶菌 79株 ( 69.5 % )。产AmpC酶的菌株表现为 3种表型 ,高产高表达型 61株 ( 5 3 .5 % )、低产高表达型 3 3株( 2 7.5 % )、低产低表达型 43株 ( 3 7.7% )。高产高表达AmpC酶菌株明显多于低产高表达型和低产低表达型。 3种不同AmpC酶表型的菌株 ,低产低表达型对哌拉西林 /他唑巴坦 (P/T)、哌拉西林 (PI)、氨曲南 (ATM )、头孢他啶 (CAZ)、头孢吡肟 (FEP)、亚胺培南 (IMP)的敏感率均明显高于低产高表达型和高产高表达型。结论　痰标本中铜绿假单胞菌AmpC酶产生率高 ,可能是对 β -内酰胺类抗生素耐药的主要机制。     

多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶分析

目的分析临床分离的4株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的同源性及β-内酰胺酶.方法采用浓度梯度法(E test)测定亚胺培南等12种抗菌药物对4株菌株的最低抑菌浓度(MIC),脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株间的同源性,等电点聚焦电泳(IEF)、三维试验、2-巯基丙酸抑制试验、聚合酶链反应(PCR)及克隆测序等方法分析β-内酰胺酶.结果4株亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌来自同一克隆株,耐药谱基本一致,仅1株对头孢吡肟、头孢哌酮舒巴坦中度敏感,对其余抗菌药物均高度耐药.三维试验显示4株细菌存在能水解亚胺培南的酶.3株细菌有pI 5.4、5.8、6.6、7.2条带,另1株少pI 5.8条带,pI 5.4、5.8条带均能被克拉维酸抑制.PCR扩增产物经克隆测序证实同时存在OXA-23、PER-1基因.结论存在同时产OXA-23型碳青霉烯酶和PER-1型超广谱β-内酰胺酶的鲍曼不动杆菌引起的医院感染.     

重症监护病房鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌的分布及耐药性研究

目的探讨重症监护病房（ICU）鲍曼不动杆菌以及铜绿假单胞菌的分布情况以及耐药性。方法收集2012年1月-2014年1月,我院ICU感染患者的送检标本160份,鉴定感染菌株种类,并对鲍曼不动杆菌以及铜绿假单胞菌进行耐药性分析。结果 ICU鲍曼不动杆菌以及铜绿假单胞菌均存在不同程度的耐药性,其中,鲍曼不动杆菌对于亚胺培南敏感性最高（88.0%）,其次为头孢哌酮/舒巴坦（81.3%）,其余均在70%以下;铜绿假单胞菌对亚胺培南以及头孢他啶的敏感性最高,均为82.4%,其次为头孢哌酮/舒巴坦（81.2%）。结论 ICU鲍曼不动杆菌以及铜绿假单胞菌均存在严重抗菌药物耐药性,强化ICU耐药监测对于预防医院感染的发生和流行具有重要意义。     

hMSH2、PCNA及P53在子宫颈癌组织中的表达及意义

[目的]探讨子宫颈癌hMSH2、PCNA及P53蛋白表达的状况和意义。[方法]用免疫组织化学SP法检测54例子宫颈癌的hMSH2、PCNA及P53蛋白表达。[结果]子宫颈癌组织hMSH2、PCNA及P53蛋白表达阳性率为62.96%(34/54)、75.93%(41/54)及66.67%(36/54);在hMSH2阳性表达和阴性表达的子宫颈癌病例PCNA阳性表达率为85.29%(29/34)和60.00%(12/20),P53阳性表达率为76.47%(26/34)和50.00%(10/20)。hMSH2与PCNA、hMSH2与P53表达呈正相关(P<0.05)。[结论]hMSH2可能通过与PCNA、P53蛋白相互作用参与子宫颈癌的发生。     

转座子tnpU基因在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况

目的 研究转座子tnpU基因和β-内酰胺酶在多重耐药革兰阴性杆菌中的分布情况.方法 用纸片扩散初筛试验、扩散确证试验进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型检查,头孢西丁三维试验进行AmpC β-内酰胺酶的表型检查,纸片协同试验筛选产金属β-内酰胺酶(MBL)菌株;用多重聚合酶链反应(PCR)技术扩增转座子tnpU基因,并进行DNA测序;用MIC药敏法分析多重耐药革兰阴性杆菌的药物敏感性.结果 转座子tnpU的总检出率为25.5％,在各菌种的检出率分别为大肠埃希菌占6.3％(3株)、肺炎克雷伯菌占8.3％(1株)、鲍曼不动杆菌占33.3％(20株)、铜绿假单胞菌占43.2％(16株);β-内酰胺酶表型检测中,ESBLs的检出率最高,转座子tnpU基因阳性的菌株大多数β-内酰胺酶表型为阳性;转座子tnpU基因阳性菌株对抗生素的耐药率显著高于转座子阴性菌株(P＜0.05).结论 转座子tnpU基因在非发酵菌中的分布较广泛,可能在多重耐药机制中起重要作用.     

铜绿假单胞菌临床分离株感染分布与耐药性分析

目的探讨铜绿假单胞菌临床分离株的感染分布情况及其耐药性与耐药趋势,方法对2005年7月～2007年7月本院各科室送检合格临床标本进行常规细菌分离培养与鉴定、进行药物敏感性测试,统计分析其院内感染的分布及耐药性。结果共检出204株铜绿假单胞菌。感染部位依次为呼吸道、伤口等在感染患者中,以老年患者为主,主要分布在ICU病房,3年间铜绿假单胞菌对18种常用抗生素耐药率存在普遍增高的趋势。18种抗菌药物中耐药率最高的是头孢呋辛、头孢噻肟钠和四环素,高达90％以上;敏感性最强的是亚胺培南和环丙沙星,敏感率为92．65％和87．25％。结论：本院铜绿假单胞菌分布以呼吸道和伤口感染为主,患者多为老年人。铜绿假单胞菌与院内感染密切相关,且耐药性严重。表现为多重耐药。加强耐药性监测,合理选用抗生素,以减少耐药菌株的出现与传播至关重要。     

双纸片协同法与GNS-NT卡法检测超广谱β-内酰胺酶比较

【目的】比较双纸片协同法与法国生物梅里埃公司VITEK GNS-NT药敏分析卡法对肠杆菌科细菌所产超广谱β-内酰胺酶(Extended-spectrum β-lactamases，ESBLs)检测的实用性。【方法】以头孢他啶、头孢噻肟、头孢三嗪、氨曲南为指示底物的双纸片协同法和GNS-NT卡法同时检测临床分离的239株肠杆菌科细菌的ES—BLs产生情况。【结果】从239株肠杆菌科细菌中用纸片确证试验检出56株ESBLs阳性；用双纸片协同法和GNS-NT卡法分别检出50株和54株ESBLs阳性。【结论】GNS-NT卡法检测ESBLs结果可靠，检测范围广，快速准确，双纸片协同法只适用于实验室常规应用。     

对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌同源性及碳青霉烯酶基因型研究

目的探讨我省11个地区20家医院临床分离的对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌耐药性、同源性和碳青霉烯酶基因型。方法收集我省11个地区20家医院2004年12月至2005年12月临床分离的271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌。采用琼脂稀释法和浓度梯度法（Etest）测定亚胺培南耐药菌株对14种抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）值；采用脉冲场凝胶电泳法（PFGE）分析亚胺培南耐药菌株的同源性；采用PCR扩增及克隆测序分析碳青霉烯酶基因型。结果271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌对多黏菌素E耐药率最低（11.8％），头孢哌酮／舒巴坦、氨苄西林／舒巴坦耐药率分别为55．4％和68．6％，米诺环素耐药率75．6％，其余抗茵药物耐药率均大于90．O％；PFGE分型发现271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌中235株属于3个克隆株。在多个城市的医院内流行，另有13株属于2个克隆株。分别在一个城市的医院内播散；271株对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌均携带OXA-51组基因，258株携带OXA-23组基因，未检测到金属酶基因。结论克隆播散是对亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌最主要的传播方式，OXA-23和OXA-66D类β-内酰胺酶基因是最主要的碳青霉烯酶基因型。     

2012至2015年昆明医科大学第一附属医院流感嗜血杆菌耐药性监测

目的 了解昆明医科大学第一附属医院临床分离的流感嗜血杆菌对常用抗菌药物的耐药情况, 为临床合理使用抗生素提供依据.方法 收集2012年1月至2015年12月184株临床分离的流感嗜血杆菌, 采用纸片扩散法 (K-B法) 进行抗菌药物敏感性试验, Nitrocefin纸片检测定β-内酰胺酶, 用WHONET5.6软件对流感嗜血杆菌耐药率进行统计分析.结果 184株临床分离的流感嗜血杆菌对氨苄西林耐药率最高, 达46.7%, 其次对氯霉素、氨苄西林/舒巴坦耐药率分别为23.2%、13%.该菌对阿奇霉素、环丙沙星、美洛培南、头孢呋辛、头孢噻肟的耐药率均在10%以下.儿童分离株对氨苄西林的耐药率 (56.9%) 高于成人分离株 (42.1%) ;除环丙沙星、美洛培南和氯霉素外, 儿童株对其他测试抗菌药物的耐药率均较成人株高.产β-内酰胺酶株总检出率为52.8%, 其中儿童分离株产酶检出率为64.3%高于成人分离株产酶检出率47.6%.共检出氨苄西林耐药而β-内酰胺酶阴性菌株1株, 占0.5%.结论 流感嗜血杆菌主要分离自住院患者呼吸道分泌物标本.虽然该菌对头孢菌素类、大环内酯类、酶抑制剂复方制剂、喹诺酮类、碳青霉烯酶类抗菌药物保持良好的抗菌活性, 但是产β内酰胺酶仍是流感嗜血杆菌的重要耐药机制, 表现为氨苄西林耐药率较高, 因此不建议作为流感嗜血杆菌感染的经验性治疗.     

原位肝移植病人术后细菌感染病原菌及耐药性的研究

目的 研究原位肝移植病人术后感染的主要病原菌分布及耐药情况,探讨防治方法.方法 分析从67例原位肝移植病人术后各部位分离出的167株病原菌及药敏结果.结果 67例肝移植病人分离的病原菌,革兰阴性杆菌82株,占49.1%,革兰阳性球菌79株,占47.3%,真菌6株,占3.6%.主要致病菌依次为金黄色葡萄球菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌.感染部位最常见呼吸道,其次为胆汁和腹腔引流液.其中有21例病人合并有两种以上病原菌感染.碳青霉烯类和糖肤类抗生素分别对革兰阴性杆菌和革兰阳性球菌有较高敏感性.结论 感染是肝移植术后主要的并发症,合理、适当选用抗生素对降低肝移植病人术后感染,提高病人存活率非常重要.