端粒酶反义寡核苷酸对MCF—7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

为探讨端粒酶反义寡核苷酸对人乳腺癌MCF－7细胞端粒酶活性及细胞生长的影响,应用与人端粒酶RNA组分（hTR）模板区互补的硫代反义寡核苷酸处理MCF－7细胞。发现经反义hTR寡核苷酸作用后,细胞端粒酶活性明显受到抑制,至作用后72h,端粒酶活性较对照组降低61.0%（P＜0.05）;细胞生长明显受到抑制;细胞周期发生显著变化,G0／G1期细胞数增多,S期及G2／M期细胞数则减少;细胞增殖指数由0.46降低至0.29;并可观察到凋亡细胞的出现,凋亡发生率为10.7%;而无义寡核苷酸处理组及空白对照组以上各指标均无明显变化。提示：端粒酶反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞端粒酶活性,抑制细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡;表明应用反义技术抑制端粒酶活性治疗乳腺癌可能具有广阔的前景。     

hTERT反义寡核苷酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨hTERT反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用脂质体介导反义寡核苷酸转染MCF-7乳腺癌细胞株,采用TRAP-ELISA法检测转染后细胞端粒酶的活性,观察其前后的变化。MTT法检测细胞活性,流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰,细胞阻滞于S期,正义寡核苷酸则无此作用。结论端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

人类端粒酶逆转录酶基因的反义寡核苷酸对HeLa细胞的端粒酶活性的研究

目的：研究人类端粒酶逆转录酶RNA(hTR)的反义寡核苷酸对HeLa细胞端粒酶活性的影响。方法：采用PCR-ELISA法检测Hela细胞在反义寡核甘酸处理前后端粒酶活性的变化。结果：经反义寡核苷酸处理后,HeLa细胞的生长受到抑制,端粒酶活性明显降低。结论：hTR的反义寡核苷酸显抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。     

脂质体介导端粒酶反义RNA对人乳腺癌细胞MCF-7活性及增殖的影响

目的:探讨经脂质体介导转染端粒酶反义RNA对MCF-7细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法:用脂质体介导法将pBBS212-hTR(反义端粒酶RNA真核表达载体)导入人乳腺癌细胞MCF-7中,采用TRAP-PCR-ELISA法测定端粒酶活性,四唑盐比色(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖,FCM分析等方法观察其对MCF-7细胞的增殖影响。结果:端粒酶反义RNA能显著抑制MCF-7细胞的端粒酶活性,抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡。结论:脂质体转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,可促进MCF-7细胞凋亡。     

端粒酶反义寡核苷酸抑制端粒酶活性和诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

目的 研究端粒酶反义寡核苷酸在肺腺癌A549细胞中抑制端粒酶活性和诱导细胞凋亡的能力.方法 用脂质体将荧光标记的端粒酶反义寡核苷酸转染入肺腺癌A549细胞后,TRAP-PCR-ELISA检测端粒酶活性变化,凋亡细胞用透射电镜(TEM)观察,TUNEL法检测各组细胞凋亡率.结果 转染72h后,端粒酶反义寡核苷酸进入A549细胞内,端粒酶活性显著降低.透射电镜下,端粒酶反义寡核苷酸转染组细胞凋亡增加,细胞凋亡率比其他组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 端粒酶反义寡核苷酸能靶向端粒酶,抑制其活性,并诱导肺腺癌A549细胞凋亡.     

反义端粒酶RNA对肺癌细胞A549抑制作用研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA(human telomeric,RNA,hTR)对肺癌细胞A549端粒酶活性和细胞增殖的抑制作用，研究以端粒酶为靶的肺癌基因治疗的可能性。方法 将端粒酶hTR的cDNA反向插入到逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义hTR重组病毒，感染肺癌细胞A549。处理前后采用TRAP法检测端粒酶活性，光镜观察细胞形态，DNA电泳观察凋亡情况。结果 作用后端粒酶活性和细胞增殖受到明显抑制，并出现明显的细胞凋亡。结论 反义hTR 对肺癌细胞A549端粒酶活性具有明显的抑制作用，使肺癌细胞A549生长抑制，促进细胞凋亡。     

端粒酶RNA反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞生长的影响

目的检测针对端粒酶RNA的反义寡核苷酸对鼻咽癌HNE-1细胞株生长的影响。方法用PCR—ELISA法检测细胞内端粒酶活性。采用MTT法及平板集落形成实验评价细胞增殖活性。采用电镜观察细胞超微结构的改变。结果端粒酶RNA反义寡核苷酸作用HNE-1细胞后,细胞端粒酶活性受到明显抑制;细胞增殖受到明显抑制,此作用有剂量、时间依赖性和序列特异性;电镜发现少量细胞肿胀坏死,但未见细胞凋亡和大片坏死灶。结论端粒酶RNA反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌HNE-1细胞的生长。     

hTR反义寡核苷酸对急性白血病原代细胞端粒酶活性及凋亡的影响

目的　探讨端粒酶RNA(hTR)反义寡核苷酸 (ASODN)对急性白血病 (AL)原代细胞端粒酶活性及细胞凋亡的影响。方法　应用与人hTR起始密码子互补的硫代ASODN处理AL原代细胞 ,用台盼蓝拒染的方法计数活细胞 ,用端粒酶重复扩增分析 (TRAP) -PCR -ELISA检测法观察端粒酶活性的变化 ,用Giemsa染色、Hoechst332 5 8 PI双染荧光显微镜检查及流式细胞仪检测凋亡细胞的发生。结果　经hTR -ASODN作用后 ,AL原代细胞端粒酶活性明显受到抑制 ,并与ASODN的浓度和处理时间相关 ,10 μmol/LASODN在作用 72h时端粒酶活性为( 0 0 95± 0 0 6 ) ,较细胞对照组 ( 1 15 4± 0 15 )下调明显 (P <0 0 1) ;在作用第 5天经荧光显微镜可观察到ASODN组细胞凋亡形态学变化。流式细胞仪检测到其凋亡率为 ( 31 72± 8 6 4 ) ,与细胞对照组的凋亡率 ( 6 33± 0 91)比较 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。结论　hTR -ASODN可明显抑制AL原代细胞端粒酶活性并诱导其凋亡 ,hTR可能成为白血病基因治疗新靶点     

hTR反义寡核苷酸对食管癌细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子表达的影响

目的:探讨封闭端粒酶RNA功能区的反义寡核苷酸(hTR ASODN)对食管癌EC9706细胞端粒酶活性、细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)表达的影响.方法:应用hTR ASODN 1次/d、连续7 d转染EC9706细胞,以未加ASODN的脂质体对照组为空白对照,分别于转染后1 d、3 d、5 d、7 d采用TRAP-银染法检测EC9706细胞的端粒酶活性,原位末端转移酶标记法及吖啶橙荧光染色法检测EC9706细胞的凋亡及免疫细胞化学法检测AIF蛋白的表达.结果:与空白对照比较,hTR ASODN转染后EC9706细胞端粒酶活性受到抑制,细胞凋亡率及凋亡指数明显升高,AIF蛋白阳性表达率升高(P＜0.05).结论:hTR ASODN可有效抑制EC9706细胞的端粒酶活性,诱导肿瘤细胞凋亡,在此凋亡过程中,AIF可能发挥着重要作用.     

端粒酶反义基因对恶性胶质瘤细胞生长的作用

目的研究端粒酶RNA的反义寡核苷酸(AODN)抗恶性胶质瘤细胞系的作用。方法采用脂质体包裹AODN转染恶性胶质瘤细胞系U251-MG细胞。用四唑盐MTT法测定细胞生长曲线,用端粒重复序列扩增法(TRAP)检测细胞的端粒酶活性变化;用流式细胞术检测凋亡细胞。结果2~8μmol/L AODN转染恶性胶质瘤细胞系,培养1~4 d,恶性胶质瘤细胞系端粒酶活性下降,且有剂量依赖性和时间依赖性。AODN转染的恶性胶质瘤细胞培养后细胞增生速度减慢,发生了细胞凋亡。而无义寡核苷酸则无此效应。结论AODN能特异性抑制恶性胶质瘤细胞的端粒酶活性,诱导细胞凋亡。     

通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞生长的抑制作用

目的:通过观察通络散结丸药物血清对乳腺癌MCF-7细胞的芳香化酶和雌激素受体基因的表达、细胞增殖周期及细胞凋亡的影响,探讨通络散结丸治疗乳腺肿块性疾病的可能机制。方法:制备通络散结丸含药动物血清,以体外培养的MCF-7细胞为研究对象,以qRT-PCR法检测乳腺癌细胞芳香化酶CYP19及雌激素受体ER mRNA表达水平;流式细胞术(FCM)测定细胞增殖周期和凋亡水平;MTS实验测定细胞生长曲线。结果:与空白对照组比较,含药血清组作用细胞24 h后能明显抑制乳腺癌细胞株MCF-7的CYP19 mRNA、ER mRNA表达水平,表达水平分别降低0.346和0.128倍;药物血清作用48 h后S期和G2/M期细胞所占比例降低,尤以S期最为显著,相应的G0/G1期细胞增加,药物血清抑制了细胞增殖的正常进行;凋亡实验示细胞早期凋亡率和晚期凋亡率均增加,药物血清组总体凋亡率高于对照组;药物血清作用细胞48 h以后细胞生长曲线幅度开始明显低于对照组,在96 h时抑制效果最明显。结论:通络散结丸药物血清影响乳腺癌MCF-7细胞的雌激素合成及其作用发挥,同时抑制细胞生长。     

As_2O_3联合~（89）SrCl_2对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期和凋亡的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）联合氯化锶（89SrCl2）对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞周期与凋亡的影响。方法采用MTT比色法检测As2O3对MCF-7细胞的增殖抑制作用,求出细胞半数抑制浓度（ID50）。选择20%ID50以下两个不同浓度的As2O3联合89Sr照射,随机设置对照组、89SrCl2照射组、As2O3处理组,As2O3＋89SrCl2联合处理组（联合组）,并于处理后24h采用流式细胞术检测各组细胞周期分布及凋亡。结果 As2O3能明显抑制MCF-7细胞增殖,给药24h的ID50为11.7μmol/L。细胞流式术检测结果表明,与89SrCl2照射组相比,联合组G2/M期细胞明显增多（P〈0.05或0.01）,早期凋亡和死亡细胞数显著增高（P〈0.05）。结论 As2O3能够促进89Sr照射诱导的MCF-7细胞周期阻滞与凋亡。     

siRNA干扰乳腺癌MCF-7细胞VEGF-C表达及对细胞增殖影响的研究

目的研究慢病毒载体介导的siRNA对乳腺癌MCF-7细胞系血管内皮生长因子(VEGF-C)表达的敲减作用及对乳腺癌增殖和凋亡的影响。方法构建慢病毒VEGF-C/siRNA载体,转染乳腺癌MCF-7细胞,观察其转染效率,采用实时定量PCR检测MCF-7细胞在转染前后VEGF-C的mRNA表达,计算VEGF-C敲减率,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果慢病毒VEGF-C/siRNA转染效率超过80%,VEGF-C的mRNA表达敲减率达50%,MTT结果提示慢病毒VEGF-C/siRNA能有效抑制细胞增殖,流式细胞学实验结果提示VEGF-C/siRNA干扰后S期细胞明显减少,G0/G1期细胞显著增加,细胞凋亡增加。结论慢病毒VEGF-C/siRNA转染率高,能有效敲减VEGF-C的mRNA表达,使细胞增殖受到抑制,凋亡增加。     

靶向survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（ASODN）对MCF 7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系,RT-PCR检测survivin mRNA的表达,MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin ASODN可有效下调survivin表达水平,抑制细胞的生长,并呈时间剂量依赖关系;流式细胞术示,24h反义转染组细胞周期被阻滞于G₂/M期,细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期（6h）,survivin mRNA 表达增高,利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡,增加肿瘤耐药机会;反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制,对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后,下调survivin的表达,细胞凋亡增加,提高了对药物的敏感性。     

miR-548c-5p对乳腺癌细胞MCF-7的影响

目的研究miR-548c-5p转染乳腺癌MCF-7细胞株后对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。方法CCK-8试剂盒检测不同浓度的miR-548c-5p（50、75、100、125、150nmol／L）分别在24、48、72h不同时间点对细胞增殖的影响;miR-548c-5p转染MCF-7乳腺癌细胞株后,荧光定量PCR法检测其转染效率;划痕实验检测细胞迁移能力的变化;流式细胞术分析干扰后细胞周期的变化;荧光显微镜观察转染后乳腺癌细胞凋亡的变化。结果使用RNA干扰技术成功地将miRNA转染入乳腺癌细胞株,使得miR-548c-5p的表达升高。转染后48hmiR-548c-5p浓度为125nmol／L时,对乳腺癌细胞的抑制作用最明显。miR-548c-5p表达上调后细胞G0／G1明显增多,而s期明显减少（P〈0．01）,能-定程度上抑制细胞的迁移。荧光显微镜观察发现早期凋亡细胞升高。结论miR-548c-5p通过干扰细胞周期,增加G0／G1期的乳腺癌细胞数,进而抑制细胞增殖。抑制乳腺癌细胞株MCF-7的迁移能力并显著促进其凋亡。miR-548c-5p影响乳腺癌细胞的增殖、迁移和凋亡,有望成为乳腺癌诊疗的靶点之一。     

靶向survivin反义寡核苷酸对MCF-7乳腺癌细胞系Survivin mRNA及紫杉醇药物敏感性的影响

目的探讨靶向survivin基因的反义寡核苷酸（ASODN）对MCF-7细胞的增殖、凋亡及药物敏感性等生物学行为的影响。 方法采用脂质体介导survivin-ASODN转染MCF-7乳腺癌细胞系，RT-PCR检测survivin mRNA的表达，MTT法检测细胞增殖能力及对药物的敏感性，流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。 结果survivin-ASODN可有效下调survivin表达水平，抑制细胞的生长，并呈时间剂量依赖关系；流式细胞术示，24h反义转染组细胞周期被阻滞于G2/M期，细胞凋亡率增加到15.23%。 紫杉醇作用早期（6h），survivin mRNA 表达增高，利于肿瘤细胞逃避紫杉醇诱导的细胞凋亡，增加肿瘤耐药的机会；反义转染组中细胞早期survivin mRNA表达上调受到抑制，对药物的敏感性增加。 结论survivin基因ASODN转染细胞后，下调survivin的表达，细胞凋亡增加，提高了对药物的敏感性。     

三苯氧胺与阿霉素联合应用对乳腺癌MCF-7细胞生长与凋亡的影响

目的：探讨三苯氧胺（tamoxifen,TAM)和阿霉素(adriamycin，ADM)联合应用对乳腺癌细胞MCF—7(ER )生长和凋亡的影响。方法：分别或联合应用不同浓度的TAM、ADM作用于MCF—7细胞，应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用，应用流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率。结果：TAM与ADM均可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡。TAM可造成MCF—7细胞G0／G1期阻滞，且呈时间、剂量依赖性；ADM可造成G2／M期细胞增高；两者联用时MCF—7细胞的生长抑制率、凋亡率无明显增加，G0／G1期细胞增高。结论：TAM与ADM可抑制MCF—7细胞生长，诱导其凋亡，两者联合应用不能增强作用效果，无协同作用。