IMP3 基因沉默介导Notch 信号通路对结直肠癌上皮间质转化及血管生成的影响

目的:探究胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)基因沉默介导Notch信号通路对结直肠癌上皮间质转化(EMT)及血管生成的调控机制。方法:收集我院73例结直肠癌患者肿瘤切除术后癌组织及癌旁组织。免疫组化检测结直肠癌组织及癌旁组织中IMP3蛋白表达。将人结肠癌细胞系SW620细胞进行IMP3沉默或Notch通路抑制处理,设置阴性对照。Western blot检测处理后的细胞中Notch1、Hes1、Vimentin、E-cadherin、N-cadherin、VEGF、TNF-α和TGF-β蛋白表达。MTT比色法检测各组细胞活力。Transwell实验测定各组细胞侵袭能力。结果:免疫组化实验发现IMP3在癌组织中高表达。细胞实验表明IMP3沉默可下调Notch通路相关蛋白Notch1及Hes1表达。与阴性对照组相比,沉默IMP3或抑制Notch通路后,SW620细胞活力、转移能力、EMT管生成明显受到抑制(P0.05)。细胞经沉默IMP3联合抑制Notch通路处理,对上述指标的抑制效果较单独处理(沉默IMP3或抑制Notch通路)更加显著(P0.05)。结论:IMP3基因沉默能够抑制Notch通路活化进而抑制结直肠癌EMT及血管生成。     

肺鳞状细胞癌中Notch1～4和DLL4的表达及与微血管密度的相关性

目的探讨Notch1～4及DLL4在肺鳞状细胞癌肿瘤细胞和间质中表达的临床病理意义及与微血管密度的相关性。方法免疫组化SP法检测64例肺鳞癌和癌旁非肿瘤肺组织中Notch1～4及DLL4的表达,免疫组化SP法检测CD31计数肺鳞癌的微血管密度。结果 (1)肺鳞癌肿瘤细胞内Notch1～4及DLL4的表达明显高于癌旁支气管黏膜上皮(P<0.05),其中Notch1、3和DLL4的表达与肿瘤的大小呈正相关(r=0.334、0.421、0.475,P<0.05),Notch1与Notch2的表达与肿瘤淋巴结转移呈正相关(r=0.356、0.417,P<0.05);(2)肺鳞癌间质及癌旁肺间质中Notch1～3的表达无明显差异(P>0.05),而Notch4与DLL4在肺鳞癌间质中的表达明显高于癌旁肺间质(P<0.05),且与肿瘤大小(r=0.300、0.440,P<0.05)及临床分期(r=0.365、0.336,P<0.05)呈正相关;(3)肿瘤细胞中DLL4及间质内DLL4、Notch4的表达与肺鳞癌的微血管密度呈负相关(r=-0.285、-0.323、-0.258,P<0.05)。结论肺鳞癌肿瘤细胞和间质中Notch与DLL4的表达可能促进肿瘤发展,并对肿瘤血管的生成具有重要的调控作用。     

IL-6调控miR-204及Notch1促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

为探讨IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平及其对人乳腺癌细胞MCF-7 Notch信号通路、增殖、迁移和侵袭的影响,采用免疫组化法检测IL-6在人乳腺癌组织中的表达水平,并以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞,采用MTT、Transwell和qRT-PCR检测细胞增殖、迁移、侵袭能力及细胞中miR-204和Notch1的表达。在MCF-7细胞中过表达miR-204后检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。用TargetScan在线预测、双荧光素酶报告基因试验和Western blotting验证miR-204与Notch1的靶向关系。将miR-204 mimics转染至MCF-7细胞并联合外源性IL-6干预后检测细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果显示,与癌旁正常组织比较,IL-6在人乳腺癌组织中高表达(P0.05)。以50 ng/mL外源性IL-6干预MCF-7细胞对细胞的增殖、迁移和侵袭具有促进作用(P0.05),同时能够下调miR-204 mRNA(P0.05)、上调Notch1 mRNA表达(P0.05)。而过表达miR-204能够抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P0.05)。miR-204能够靶向调控Notch1表达(P0.05)。过表达miR-204能够减弱外源性IL-6对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用(P0.05)。该研究提示,IL-6可通过调控miR-204和Notch信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭。     

敲减FEZF1-AS1通过阻断JAK2/STAT3通路抑制食管鳞状细胞癌细胞的侵袭和迁移

目的探讨长链非编码RNA Fez家族锌指蛋白1反义核糖核酸1(FEZF1-AS1)与食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭、迁移以及与Janus激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系。方法用实时定量PCR检测ESCC的癌组织和ESCC细胞系中FEZF1-AS1的表达;构建敲减FEZF1-AS1的慢病毒表达载体,敲减KYSE150、 KYSE510细胞的FEZF1-AS1后,流式细胞术检测细胞周期的变化,集落形成实验检测细胞增殖能力, Transwell~(TM)侵袭实验检测细胞侵袭能力, Transwell~(TM)迁移和划痕实验检测细胞迁移能力, Western blot法检测JAK2和磷酸化的STAT3(p-STAT3)蛋白水平。结果在ESCC的癌组织FEZF1-AS1高表达;与正常食管鳞状上皮细胞相比, KYSE150、 KYSE510细胞FEZF1-AS1表达高;敲减FEZF1-AS1表达后, ESCC癌细胞的细胞周期和增殖无明显变化,但明显抑制细胞的侵袭和迁移,且JAK2蛋白水平降低, p-STAT3蛋白水平增加。结论敲减FEZF1-AS1阻断JAK2/STAT3通路抑制ESCC细胞的侵袭和迁移。     

多巴胺受体D1(DRD1)通过抑制cAMP信号通路促进胶质瘤的增殖、侵袭和迁移

目的通过检测多巴胺受体D1(DRD1)蛋白在胶质瘤组织中的表达水平,分析DRD1的激动剂和拮抗剂对U87神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响,初步探讨DRD1对c AMP通路的作用。方法免疫组织化学染色法检测60例神经胶质瘤组织及其癌旁组织中DRD1蛋白的表达和分布,Western blot法检测其蛋白水平。培养U87细胞,采用DRD1激动剂SKF38393和拮抗剂SCH23390处理后,CCK-8细胞增殖实验检测处理后细胞增殖情况,Transwell~(TM)侵袭实验检测细胞侵袭情况、划痕实验检测细胞迁移能力; Western blot法检测c AMP通路及其相关蛋白[p44/42丝裂原活化蛋白激酶(p44/42MAPK)、磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶(p-p44/42MAPK)和蛋白激酶A(PKA)]的蛋白水平)。结果神经胶质瘤组织中DRD1的表达水平明显高于其癌旁组织。SCH23390明显抑制U87神经胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,而SKF38393明显促进U87细胞的增殖、侵袭和迁移。SCH23390激活c AMP及其相关通路蛋白的表达,而SKF38393抑制其表达。结论 DRD1蛋白在胶质瘤组织高表达,DRD1通过负向调节c AMP信号通路促进胶质瘤细胞的增殖、侵袭与迁移。     

IL-8通过激活PI3K/AKT通路促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

为研究IL-8对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制,应用免疫组织化学法检测结肠癌组织和正常癌旁组织中IL-8的表达;MTT法检测不同浓度IL-8处理或抑制PI3K/AKT信号通路后结肠癌细胞SW480的增殖情况;Western blotting检测IL-8处理后SW480细胞中p-AKT、t-AKT蛋白的表达;Transwell法检测抑制PI3K/AKT通路或IL-8处理后SW480细胞的迁移和侵袭能力。结果显示,与癌旁组织相比,结肠癌组织中IL-8的表达水平明显提高;IL-8处理后SW480细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显增加,且PI3K/AKT通路异常激活;抑制PI3K/AKT通路可逆转IL-8对SW480细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。由此IL-8可促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与激活PI3K/AKT通路有关,可为IL-8在结肠癌中的治疗提供参考。     

补体C1s对食管鳞状细胞癌生物学行为的影响

目的：探究补体分子C1s对食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞增殖、迁移、黏附以及裸鼠移植瘤生长的影响。方法：利用NCBI-GEO数据库分析ESCC组织和癌旁正常组织（ANTs）中C1S mRNA的表达;采用RT-qPCR和Western blot检测ESCC细胞系中C1s的表达;利用C1s小干扰RNA(siRNA)、C1s短发夹RNA(shRNA)或C1s过表达慢病毒对ESCC细胞进行C1s的敲低或过表达,CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,细胞-基质黏附实验检测细胞黏附能力;Western blot检测基质金属蛋白酶MMP1和MMP13表达;裸鼠皮下成瘤实验检测C1s对裸鼠移植瘤生长的影响,免疫组织化学法检测移植瘤中CD34表达,分析肿瘤微血管的形成。结果：ESCC组织中C1S mRNA表达明显高于ANTs,敲低C1s可明显抑制ESCC细胞的增殖、迁移、细胞-基质黏附以及裸鼠移植瘤的生长,而过表达C1S则具有相反的效果;C1s敲低的ESCC细胞TE-1中MMP1和MMP13的表达降低;与对照组相比,C1s过表达组移植瘤中的微血管更加丰富。结论：C1s在ESCC组织中显著上...     

miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用

目的研究miR-302b在食管鳞癌细胞中的免疫学作用。方法通过qRT-PCR检测ESCC癌症组织与癌旁组织中miR-302b的表达量,并在炎症刺激后观察食管鳞癌TE-10细胞的增殖与侵袭能力,以及miR-302b与癌症相关性炎症(cancer related inflammation,CRI)相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量变化;通过转染改变miR-302b的表达水平,观察TE-10细胞的增殖与侵袭能力以及IRF2、ERBB4、CXCR4蛋白的表达量。结论 ESCC组织中miR-302b表达量显著减少;miR-302b可以通过减少肿瘤相关性验证CRI相关基因IRF2、ERBB4、CXCR4的表达量来抑制TE-10细胞的增殖与侵袭,从而抑制ESCC的发生与发展。     

Th22细胞分泌IL-22激活STAT3通路促进人卵巢癌发展

目的研究Th22细胞和IL-22在卵巢癌患者和健康人体内的差异,分析其与卵巢癌分期的相关性及是否通过活化STAT3通路促进卵巢癌的发展。方法免疫组化检测IL-22在不同分期卵巢癌患者肿瘤组织及癌旁组织中的表达水平;q PCR和Western blot分别检测IL-22在临床标本中m RNA和蛋白表达水平差异;流式细胞术检测临床标本中Th22细胞的频率差异,探讨它们与卵巢癌分期的相关性;免疫荧光检测IL-22在不同组织中的细胞定位;Western blot检测卵巢癌组织和癌旁组织中STAT3和磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达;细胞共培养检测IL-22是否活化STAT3通路促进卵巢癌细胞增殖。结果免疫组化、q PCR和Western blot结果显示IL-22在卵巢癌组织中的表达水平高于癌旁组织,与肿瘤分期呈正相关。流式检测结果显示卵巢癌患者肿瘤组织中CD4+细胞和TILs-Th22频率显著升高,且与肿瘤分期呈正相关;免疫荧光激光共聚焦结果显示卵巢癌肿瘤组织中IL-22主要由CD4+细胞分泌。细胞共培养结果表明总TILs和CD4+TILs可分泌IL-22,进而活化STAT3通路并诱导下游分子表达。结论Th22细胞通过释放IL-22活化STAT3信号通路促进卵巢癌的发展,该研究结果可为临床卵巢癌的治疗提供策略参考。     

Notch1通过非经典的Notch信号通路调节胰腺星形细胞的活化

目的:探讨Notch1在胰腺星形细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)活化中的作用。方法:利用免疫组织化学法与免疫荧光双标法检测Notch1在人胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)组织的表达情况;原代分离培养小鼠PSCs,利用油红O染色、Western blot及RT-qPCR法对其进行鉴定,并利用Western blot及RT-qPCR检测Notch1及其下游关键分子HES1的表达情况;转染Notch1小干扰RNA(Notch1 siRNA)至小鼠PSCs后,利用Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin)、I型胶原(collagen typeⅠ,ColⅠ)、Notch1及HES1的表达情况;利用划痕实验与CCK-8实验检测Notch1 siRNA对小鼠PSCs迁移与细胞活力的影响。结果:免疫组化与免疫荧光双标染色结果显示,Notch1表达在α-SMA阳性的PDAC间质细胞中;成功培养了小鼠PSCs细胞,且活化的PSCs中α-SMA、fibronectin和ColⅠ的表达升高,Notch1与HES1的表达均高于未活化的PSCs(P<0.01);转染Notch1 siRNA至小鼠PSCs后,细胞中α-SMA和ColⅠ的表达显著降低,而fibronectin和HES1的表达无显著改变;敲减活化的PSCs中Notch1的表达后,细胞的活力及迁移能力显著降低。结论:Notch1参与调节PSCs的活化,抑制Notch1的表达可抑制活化PSCs标志物α-SMA和ColⅠ的表达,降低PSCs的活化程度、活力及迁移能力,并且Notch1调节PSCs的活化不依赖经典的Notch信号通路。     

食管鳞癌肿瘤微环境中miRNA与TGF-β1的相关性分析

目的 检测mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p和TGF-β1在食管鳞癌(ESCC)患者肿瘤微环境中的表达水平,分析它们在ESCC发生发展中的作用及相互关系.方法 收集52例ESCC患者癌组织、癌旁组织手术标本;实时荧光定量PCR检测ECA-109、TE-1细胞株、正常食管上皮细胞和52例ESCC患者手术标本的mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p和TGF-β1的mRNA表达水平;Western blot法检测TGF-β1在上述细胞以及组织中的蛋白表达情况.结果 与正常食管上皮细胞相比,mir-18a-5p、mir-24-3p、mir-25-3p、mir-23a-3p在ESCC细胞株ECA-109中的表达明显增高(P＜0.05),其中前3种miRNA在ESCC细胞株TE-1的表达明显增高(P＜0.05);TGF-β1在ESCC细胞株ECA-109、TE-1中明显低表达(P＜0.05).与癌旁组织对照组相比,52例ESCC患者癌组织标本的mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p显著升高[上调比例分别为86.5％ (45/52)、63.5％ (33/52)、78.8％(41/52)、86.5％(45/52),P＜0.05],TGF-β1显著降低(P＜0.05).ESCC患者mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p的高表达和TGF-β1的低表达与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置等无明显关系,但mir-18a-5p、mir-23a-3p与患者癌组织分化程度相关,mir-25-3p与患者癌组织分化程度、浸润深度和范围相关(P＜0.05).癌组织中TGF-β1的低表达与患者癌组织分化程度、浸润深度和范围相关(P＜0.05).mir-18a-5p、mir-23 a-3p与TGF-β1的表达无相关性,mir-24-3p、mir-25-3p与TGF-β1的表达呈负相关.结论 ESCC肿瘤微环境中mir-18a-5p、mir-23a-3p、mir-24-3p、mir-25-3p和TGF-β 1可能在ESCC的发生发展中有一定作用.     

siRNA干扰Notch1抑制肺癌干细胞脊柱转移瘤的生长

目的研究Notch受体1(Notch receptor 1,Notch1)在肺癌脊柱转移瘤中的表达,并探讨Notch1 siRNA对肺癌干细胞(lung cancer stem cells,LCSCs)迁移能力和脊柱转移瘤生长的影响。方法通过Western blotting法检测Sox2、Oct4和Notch1蛋白在肺癌脊柱转移瘤组织中的表达水平。通过lipofectamine 2000将Notch1 siRNA转染到肺癌干细胞(A549-CSC),Transwell法检测Notch1 siRNA对A549-CSC迁移能力的影响;将BALB/C裸鼠分为两组:control siRNA组和Notch1 siRNA组,分别通过左心室注射control siRNA和Notch1 siRNA转染的A549-CSC,通过Mic-CT检测小鼠脊柱转移瘤的生长。结果Western blot检测结果显示,Sox2、Oct4和Notch1蛋白在脊柱转移瘤组织中的表达显着高于癌旁对照组(P<0.01);Transwell结果显示,与control siRNA组比较,Notch1 siRNA组细胞迁移率显著降低(P<0.01);Mic-CT结果显示,与control siRNA组比较,Notch1 siRNA组小鼠脊柱转移瘤生长显著降低。结论siRNA干扰Notch1能够抑制LCSCs迁移能力,抑制小鼠肺癌脊柱转移瘤的生长。     

长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响

目的：探讨长链非编码H19靶向调节miR-107通过Notch通路对肺癌的侵袭迁移的影响情况。方法：qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中H19的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后肺癌细胞侵袭能力的变化;划痕实验检测沉默H19后肺癌细胞迁移能力的变化;双荧光素酶报告基因检测H19与miR-107的相互作用;qPCR检测肺癌和癌旁组织、不同肺癌细胞中miR-107的表达情况;Transwell侵袭实验检测沉默H19后miR-107对肺癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测沉默H19后miR-107肺癌细胞迁移能力的影响;裸鼠皮下成瘤检测沉默H19后miR-107对肺癌成瘤大小以及体积的影响。Western blot检测沉默H19后Notch通路蛋白的表达情况。结果：与癌旁组织相比,肺癌组织中H19表达明显增高;肺癌细胞A549中H19表达水平最高;沉默H19可以抑制肺癌细胞侵袭和迁移能力;H19能与miR-107的3′UTR特异性结合;与癌旁组织相比,肺癌组织中miR-107表达明显降低;沉默H19后,抑制miR-107可以促进肺癌细胞侵袭和迁移能力;与H19-siRNA组相比,H19-siRNA+miR-107-inhibitor组荷瘤小鼠肿瘤体积和重量都明显增大。沉默H19后Notch通路蛋白表达情况相应下调。结论：H19在肺癌发生发展过程中起重要作用,H19可以靶向调节miR-107通过Notch信号通路调控肺癌细胞的侵袭和迁移能力。     

miR-33b和高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的研究miR-33b与高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及意义。方法在ESCC组织及癌旁组织中采用茎环结构的逆转录实时定量PCR检测miR-33b的表达情况,实时荧光定量PCR检测HMGA2 mRNA的水平,免疫组织化学SP法检测HMGA2蛋白表达;将miR-33b模拟物、miR-33b抑制物、对照转染入TE-1细胞和Eca-109细胞;采用茎环结构的逆转录实时定量PCR法检测各组miR-33b的水平;实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测各组HMGA2mRNA和蛋白的水平。结果在40例ESCC组织中,miR-33 b mRNA的表达量显著低于癌旁正常组织;HMGA2 mRNA的表达量显著高于癌旁正常组织;HMGA2蛋白在ESCC组织中的阳性率显著高于癌旁组织;HMGA2蛋白阳性表达组的miR-33b的表达量低于HMGA2阴性组;相关性分析显示miR-33b和HMGA2的mRNA在ESCC组织中的表达呈负相关。在转染miR-33b模拟物、miR-33b抑制物转染的食管癌细胞中,转染各组间HMGA2 mRNA水平无显著差异;在miR-33b过表达的细胞中HMGA2蛋白水平明显降低。结论 ESCC组织中miR-33b表达下调,HMGA2表达上调;增加食管癌细胞中miR-33b的表达能抑制HMGA2的蛋白表达水平,但HMGA2 mRNA水平不受影响,提示miR-33 b可能在转录后水平调控HMGA2蛋白的表达。     

IL-8通过下调miR-199a-3p对肾癌细胞迁移、侵袭及上皮-间质转化的影响

目的研究IL-8、miR-199a-3p对肾癌细胞迁移、侵袭及上皮间质化的影响并探讨其作用机制。方法运用ELISA检测肾癌组织及癌旁正常组织中IL-8的表达;qRT-PCR检测肾癌组织及癌旁正常组织中miR-199a-3p的表达;将IL-8+miR-199a-3p组(转染miR-199a-3p mimics并与IL-8共处理)、IL-8+miR-con组(转染Negative control mimics并与IL-8共处理)均用脂质体法转染至786-0细胞,再用IL-8(100μg/L)处理;Transwell检测各组细胞的迁移、侵袭;Western blot检测各组细胞中Ecadherin、N-cadherin、p-Smad1的蛋白表达。结果与癌旁正常组织相比,肾癌组织中IL-8表达显著升高,miR-199a-3p表达显著降低(P0.05),且IL-8可呈浓度依赖性抑制miR-199a-3p表达;过表达miR-199a-3p可明显抑制IL-8对786-0细胞迁移、侵袭的促进作用,且可抑制IL-8对786-0细胞中E-cadherin、N-cadherin、p-Smad1蛋白的表达。结论 IL-8可促进肾癌细胞的迁移侵袭及上皮-间质转化,其机制可能与下调miR-199a-3p有关,这将可为肾癌的高效治疗提供依据。     

DAPPER1对食管鳞状细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其表观遗传学调节机制

目的检测DAPPER1蛋白对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞株恶性生物学行为的影响,并进一步分析ESCC组织中DAPPER1蛋白表达及引起其表达异常的可能机制。方法应用MTT、克隆形成、划痕修复实验检测DAPPER1对ESCC细胞株恶性生物学行为的影响;应用RT-PCR及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测细胞株(TE13、T.Tn、Eca109)中DAPPER1 mRNA的表达及其启动子区甲基化状态;应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法检测ESCC组织中DAPPER1蛋白的表达。结果 DAPPER1在3株细胞中呈弱表达或阴性,应用甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-Dc)处理细胞后,其表达强度在各细胞株中均有不同程度的增加;同时,DAPPER1过表达及5-Aza-Dc处理可明显抑制TE13细胞的增殖及迁移能力;而应用组蛋白去乙酰化酶抑制剂trichostatin A(TSA)处理细胞株后,DAPPER1在各细胞株中的表达无明显改变;DAPPER1蛋白在ESCC组织中的表达较癌旁组织明显下调(P0.01),且其表达与该基因启动子区域异常甲基化状态有关(P0.01)。结论 ESCC中DAPPER1主要起抑癌基因作用,并且该基因启动子区域的异常高甲基化可能是引起其表达下调的主要机制之一。     

Notch信号在脂多糖诱导的骨髓间充质干细胞中的作用

目的:探讨Notch信号对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和趋化因子CXCL1分泌的影响。方法:全骨髓培养法制备BMSCs;采用q PCR与Western blot实验比较LPS对BMSCs中Notch信号通路配体、受体及靶基因表达的变化;MTT法和活细胞计数检测Notch信号对细胞增殖的影响;并以ELISA法检测Notch信号通路抑制剂DAPT对IL-6和CXCL1分泌的调节作用。结果:经10μg/L、100μg/L和1 mg/L的LPS刺激后,BMSCs增殖和IL-6分泌呈现上升趋势(P0.05或P0.01)。q PCR与Western blot结果显示Notch信号通路受体和配体在BMSCs中均有表达,但LPS对其mRNA与蛋白水平并无明显影响,然而LPS可显著诱导Notch信号靶基因Hes1与Hey1的蛋白表达。Notch信号通路抑制剂DAPT可以降低LPS诱导的BMSCs活力的上升(P0.01),同时对LPS诱导的BMSCs增殖有抑制作用。另外,LPS显著诱导BMSCs中IL-6与CXCL1的分泌,而抑制Notch信号通路可显著抑制LPS所诱导的IL-6与CXCL1的分泌(P0.05)。结论:抑制Notch信号可以抑制LPS诱导的BMSCs增殖,并抑制IL-6与CXCL1的分泌。     

食管鳞状细胞癌中PTPN6的表达及与临床病理特征的关系

目的检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中非受体型PTPN6基因的表达,探讨其与ESCC临床病理特征及预后的关系。方法采用RT-qPCR法检测食管癌细胞和71例ESCC及癌旁正常组织中PTPN6基因mRNA的表达;应用Western blot法和免疫组化SP法检测食管癌细胞和ESCC及癌旁正常组织中PTPN6蛋白的表达;按ESCC组织中PTPN6的蛋白表达分为阳性组和阴性组,行Kaplan-Meier生存曲线分析,并通过Cox风险比例模型对其他变量进行校正。结果与正常食管上皮细胞相比,PTPN6 mRNA和蛋白在食管癌细胞中表达下调(P 0.05); ESCC组织中PTPN6 mRNA相对表达量显著低于癌旁正常组织[(1.000±0.001) vs (1.815±0.386),t=13.533,P 0.05]; PTPN6 mRNA表达与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移有关(P 0.05)。ESCC中PTPN6的阳性率为32.4%(23/71),明显低于癌旁组织(P 0.05); PTPN6蛋白表达与患者TNM分期、病理分级及淋巴结转移密切相关(P 0.05)。Kaplan-Meier结果显示,PTPN6低表达与患者生存时间有关(P 0.05)。多变量Cox模型校正后,PTPN6蛋白表达对患者预后有影响(OR=2.694,P 0.05)。结论 PTPN6基因在食管癌细胞系及ESCC组织中表达沉默,其与食管癌的发生、发展密切相关,有望成为ESCC患者预后评估的指标。     

ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制

目的观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC)Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制。方法使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA;Western blot检测总ERK1/2(t-ERK1/2)和磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21)。结果20μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P<0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P<0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P<0.05),显著下调miR-21的表达(P<0.05)。结论ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关。     

佐剂关节炎大鼠肺功能与Treg、Notch信号通路的关系

目的:观察佐剂关节炎(Adjuvant arthritis,AA)大鼠肺功能、外周血调节性T细胞(Treg)及肺组织Notch通路变化。方法:将20只SD大鼠随机分为正常对照组(NC)和模型对照组(MC),每组10只;向MC组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎,复制成AA模型;致炎18天后,观察两组大鼠足跖肿胀度(E)、关节炎指数(AI)、肺功能、肺组织形态学变化,采用流式细胞术检测外周血Treg,PT-PCR法检测肺组织Notch受体及配体表达。结果:AA大鼠E、AI、1秒内平均呼气流量(FEV1/FVC%)、肺组织Notch3、Notch4及Delta1的表达明显升高;75%肺活量的最大呼气流量(FEF75)、用力最大呼气流量(PEF)、肺动态顺应性(Cldyn)降低,外周血CD4+CD25+Treg、肺组织Notch1、Jagged1、Jagged2的表达水平显著降低(P<0.01或P<0.05)。相关分析显示,肺功能参数FVC、FEF75与CD4+CD25+Treg呈正相关,FEF50、MMF与Jagged1、Notch1呈正相关;FEF25、FEF50、PEF与Delta1、Notch3、Notch4呈负相关(P<0.01或P<0.05)。结论:AA大鼠发生关节炎症同时,出现肺功能、Treg降低及Notch通路的变化;肺功能与Treg、Notch受体/配体呈高度相关性,提示Treg和Notch通路可能参与肺功能降低的过程。