人外周血NK细胞及NKT细胞受体及亚群的差异表达与类风湿关节炎的关系

目的:探讨初诊类风湿关节炎(RA)患者的外周血NK和NKT细胞的活化性、抑制性受体及亚群表达水平的变化,揭示其在RA发病中的可能机制。方法:检测32例初诊RA患者和15例健康人的外周血NK和NKT细胞及其活化性受体和抑制性受体,对自发和刺激后的NK、NKT细胞分泌的IFN-γ、NKT细胞和CD107a+NK细胞进行检测,分析各细胞亚群与临床指标之间的潜在关系。结果:与健康对照组相比,初诊RA患者的NK细胞的比例显著降低(P=0.026);RA患者NK细胞活化性受体NKG2D+,NKP46+和NKT细胞活化性受体NKG2C+,NKG2D+,NKP46+的比例显著增高(P=0.011,P=0.010,P<0.001,P=0.032,P=0.001);NK细胞抑制性受体KIR2DL3+、KIR3DL1+和NKG2A+和NKT细胞抑制性受体KIR2DL3+,NKG2A+的比例显著降低(P=0.002,P=0.002,P=0.014,P=0.027,P=0.002);刺激后的IFN-γ+NK和IFN-γ+NKT细胞的比例,自发和刺激后的CD107a+NK细胞的比例在RA患者中要显著高于对照组(P=0.037,P=0.004,P=0.001,P=0.001)。此外,NK细胞、抑制性NK细胞受体NKG2A+和KIR2DL3+的比例和初诊RA患者的DAS28值显著相关(r=0.357,P=0.045;r=0.399,P=0.024;r=0.468,P=0.021)。结论:人外周血NK细胞及NKT细胞受体及亚群的差异表达、细胞功能的变化可能诱发RA的自身免疫反应。     

外周血自然杀伤T细胞数目减少、抑制性受体上调和功能障碍可能参与手足口病重症化

目的探讨手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)患儿外周血自然杀伤T细胞(natural killer T cells,NKT)数目、表型及功能活性在不同病情、EV71感染中的变化及意义。方法应用流式细胞术检测39例健康儿童和55例HFMD患儿的外周NKT细胞数量、表型(NKD2A、CD94和NKG2D)及杀伤颗粒或细胞因子分泌功能(CD107a、GB或IFN-γ、IL-10)。酶联免疫吸附法检测血浆细胞因子和趋化因子(IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ和MCP-1)的水平。结果与健康儿童相比,重症(EV71~+/EV71~-)患儿NKT细胞数量及百分比均显著降低(P0.05);重症(尤其EV71~-重症)患儿NKT细胞表达抑制性NKG2A/CD94受体显著升高(P0.05);轻症患儿的NKT细胞分泌IL-10显著增多(P0.05);重症HFMD患儿血浆IL-6、TNF-α、IFN-γ和MCP-1的水平显著增高(P0.05);EV71-重症患儿IL-10水平明显增高(P0.05)。NKT细胞数目与CD107a~+NKT或GB~+NKT%呈正相关(P0.05);IL-10~+NKT%与NKG2D~+NKT%或IFN-γ~+NKT%呈正相关(P0.05)。结论随着HFMD病情进展,外周血NKT细胞数目减少,抑制性受体(NKG2A/CD94)表达上调,细胞因子分泌和细胞毒性功能障碍等,可能促进HFMD患儿免疫功能紊乱并参与HFMD重症化。     

丹参酮ⅡA联合NK细胞杀伤急性髓系白血病细胞的机制研究

目的 探讨丹参酮ⅡA联合自然杀伤（NK）细胞对急性髓系白血病细胞杀伤作用的机制。方法 采用浓度分别为0、8、16、32、64μmol/L的丹参酮ⅡA处理NK细胞和HL-60细胞,用噻唑蓝（MTT）实验检测细胞增殖变化。钙黄绿素-AM释放法检测杀伤率;酶联免疫吸附法（ELISA）法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)含量;流式细胞术检测NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1及ULBP2表达率。结果 丹参酮ⅡA呈剂量效应抑制急性髓系白血病细胞增殖、促进NK细胞增殖,丹参酮ⅡA浓度为32μmol/L增殖率较高。丹参酮ⅡA+NK细胞组的杀伤率较丹参酮ⅡA组、NK细胞组明显增加。丹参酮ⅡA+NK细胞+HL-60细胞组的TNF-α、IFN-γ含量较丹参酮ⅡA+NK细胞组、NK细胞+HL-60细胞组、NK细胞组明显增加;丹参酮ⅡA+NK细胞、NK细胞+HL-60细胞组的TNF-α、IFN-γ含量较NK细胞组明显增加。丹参酮ⅡA+HL-60细胞组的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2表达率较HL-60细胞组明显增加。结论 丹参酮ⅡA联合NK细胞对急性髓系白...     

子痫前期小鼠动物模型的NK细胞和细胞因子的变化

目的:探讨磷脂酰丝氨酸(PS)/磷脂酰胆碱(PC)诱导的先兆子痫模型小鼠中自然杀伤(NK)细胞在外周血、脾脏及子宫的数量及其表面受体的变化,同时了解外周血中的细胞因子(TGF-β、TNF-α和IFN-γ)的水平.方法:用磷脂酰丝氨酸(PS)/磷脂酰胆碱(PC)诱导小鼠出现先兆子痫(PE)样症状,流式细胞仪检测自然杀伤(NK)细胞在外周血、脾脏及子宫的数量和表面受体,酶联免疫法检测外周血中TGF-β、TNF-α和IFN-γ.结果:我们建立的PE样小鼠模型是成功的;与对照组相比,gd17.5时PS/PC组外周血和脾脏中NK细胞数目增加.gd11.5时子宫中NK细胞数目突然增加,随后逐渐降低,且在gd14.5和gd17.5时PS/PC组比对照组NK细胞数目明显减少.PS/PC组脾脏中表面受体CD122表达显著降低,而CD244、CD94及NKG2D均显著增加;子宫中所有表面受体显著降低.在gd11.5、gd14.5及gd17.5时,与对照组相比,PS/PC组外周血中TGF-β的表达水平显著增加;而TNF-α和IFN-γ表达的水平大多不发生明显变化.结论:PE可能与母胎界面处NK细胞的数量及表面受体改变有关.外周血中TGF-β的增加可能抑制子宫处NKG2D等NK细胞表面受体的表达.关于TNF-α和IFN-γ在PE样小鼠模型中的作用还需进一步研究.     

板蓝根多糖促进NKG2D 配体表达增强NK 细胞对食管癌细胞的杀伤作用及机制研究

目的:研究板蓝根多糖(RIP)影响NK细胞对食管癌细胞杀伤作用的分子机制。方法:MTT法检测细胞增殖率,Western blot检测增殖相关蛋白CyclinD1、p21和p27的表达,ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的表达,流式细胞术检测NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,钙黄绿素释放法(CARE-LASS)检测NK细胞对食管癌细胞的杀伤率。结果:RIP可促进NK-92细胞增殖,抑制食管癌Eca-109细胞增殖,且具有显著剂量依赖性。食管癌可促进NK细胞中TNF-α和IFN-γ的表达。RIP可促进食管癌细胞Eca-109中NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1和ULBP2的表达,促进与食管癌细胞联合作用后NK细胞中TNF-α和IFN-γ表达,提高NK-92细胞对食管癌Eca-109细胞的杀伤活性。结论:RIP通过提高食管癌Eca-109细胞中NKG2D配体表达,促进NK-92细胞中TNF-α和IFN-γ表达,增强NK-92细胞对食管癌细胞的杀伤作用。     

NKG2A在银屑病患者外周血NK细胞中的表达及调控

目的检测寻常型银屑病患者外周血中NK细胞受体NKG2A的表达及其调控,并分析其与疾病进展的相关性。方法采用流式细胞术检测寻常型银屑病患者外周血中NK细胞表面受体NKG2A的表达水平,并探讨血浆中炎症因子对NKG2A表达的影响,最后分析其与患者PASI评分的相关性。结果与正常对照外周血相比,寻常型银屑病患者外周血中NK细胞的比例无显著统计学改变(P0.05),但NK细胞表达的NKG2A水平则显著下降(P0.05);进一步体外刺激实验发现患者血浆中的TNF-α可诱导NK细胞下调表达NKG2A;相关性分析显示NKG2A的表达水平与患者的PASI评分成负相关(P0.05)。结论寻常型银屑病患者外周血中NK细胞低表达抑制型受体NKG2A并与疾病的进展密切相关,监测其外周血NK细胞表达的NKG2A水平有助于对病程的判断。     

慢性HBV 感染者IFN-γ+ NK 细胞与Treg 及IL-10 的关系研究

目的:探讨慢性HBV感染者外周血自然杀伤(NK)细胞分泌的IFN-γ与CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及IL-10等细胞因子含量的关系。方法:收集119例慢性HBV感染肝病患者,其中CHB患者57例,LC患者40例,HCC患者22例,另收集同期健康志愿者(HC) 27例。流式细胞仪检测外周血Treg、NK细胞及IFN-γ~+NK细胞比例,CBA细胞因子(IL-10、IFN-γ、IL-2、IL-4、TNF及IL-5)含量,全自动生化分析仪检测血清ALT、AST水平。结果:CHB、LC、HCC患者外周血Treg百分比和血清中IL-10水平均显著高于HC组, CHB、HCC患者外周血Treg绝对数值显著高于HC组(P0.05),CHB、LC及HCC患者Treg与IL-10呈正相关(P0.01,r=0.564;P0.05,r=0.426;P0.05,r=0.476)。NK细胞绝对数、IFN-γ~+ NK细胞百分比及血清中IFN-γ含量在CHB、LC、HCC组中均显著低于HC组(P0.01)。同时CHB患者组IFN-γ~+NK细胞比例与Treg细胞比例、血清IL-10水平均负相关(P0.05,r=-0.618;P0.05,r=-0.635),血清IFN-γ水平亦与Treg负相关(P0.01,r=-0.342);LC患者中,外周血中NK细胞绝对数值与Treg细胞比例负相关(P0.05,r=-0.317),IFN-γ~+NK细胞比例与血清中IL-10水平负相关(P0.05,r=-0.514);HCC患者组IFN-γ~+NK细胞比例与Treg细胞比例、血清IL-10水平均负相关(P0.01,r=-0.676;P0.01,r=-0.615)。结论:CHB患者及其进展疾病如LC和HCC外周血IFN-γ~+NK细胞比例与Treg比例、血清IL-10水平负相关,提示Treg和IL-10参与抑制IFN-γ~+ NK细胞可能是慢性HBV感染及其进展的重要因素之一,因此逆转Treg及IL-10所致的免疫耐受,将会有力提高NK细胞抗HBV慢性感染及恶性进展。     

树突状细胞上调MHC Ⅰ类相关抗原A表达对NK细胞活性的影响

目的:观察单核细胞、未成熟和成熟树突状细胞(DCs)表达MHC Ⅰ类相关抗原A(MICA)的情况,以及DCs表达MICA后对NK细胞活性的影响.方法:用流式细胞术分别检测单核细胞、未成熟DC(iDCs)以及LPS、TNF-α、CD40L、IL-15和IFN-α分别刺激的成熟DCs表面MICA的表达,并观察DCs表达MICA后对NK细胞表达CD69、细胞毒活性和分泌IFN-γ的影响.最后用流式细胞术检测重组NKG2D/Fc蛋白和抗IL-12单克隆抗体(mAb)对DCs激活NK细胞的影响.结果:单核细胞不表达MICA,iDCs低表达MICA.LPS、TNF-α和CD40L对DCs表达MICA无影响;但IFN-α和IL-15可促进DC上调MICA表达.DCs表达MICA后可促进NK细胞表达CD69、分泌IFN-γ、杀伤K562细胞.NKG2D/Fe蛋白可抑制NK细胞的杀伤活性和分泌IFN-γ;而抗IL-12mAb仅抑制IFN-γ分泌.结论:MICA在DCs表面的表达受局部微环境影响,且DCs表达MICA后可增强NK细胞的活性.     

CpG-ODN活化人NK细胞的初步研究

目的：研究D型CpG-ODN对人免疫细胞的活化效应。方法：CpG-ODN体外刺激人外周血单个核细胞(PBMC)，ELBA检测培养液IFN-α及IFN-γ的含量；RT-PCR检测PBMC中TLR9的表达水平；MTF法观察活化的NK对K562的杀伤作用。结果：CpG-ODN有效诱导PBMC分泌IFN-α和IFN-γ，增强活化的NK细胞对K562细胞的杀伤作用，且能显著上调TLR9 mRNA的表达。结论：在TLR9的介导下，CpG-ODN能有效激活NK细胞，参与机体免疫调节。     

IFN-α磷酸化STAT1和STAT4诱导人NK细胞产生IFN-γ并增强其杀伤活性

目的研究IFN-α对CD56+NK细胞的细胞因子分泌、杀伤功能和细胞内信号传导的作用。方法分离健康人PBMC分别与培养液、IFN-α和IL-12培养,利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清中IFN-γ的水平。同时采用流式细胞仪在单个细胞水平上分析IFN-α诱导IFN-γ产生的细胞亚群以及该细胞亚群对肿瘤细胞的杀伤作用和信号传导机制。结果经IFN-α刺激后,PBMC能产生低剂量的IFN-γ。细胞亚群分析的结果表明,IFN-α诱导CD56+NK细胞产生IFN-γ,但对CD4+T和CD8+T细胞无明显作用。IFN-α促进NK细胞的杀伤功能。促进STAT1和STAT4磷酸化。结论 IFN-α通过磷酸化STAT1和STAT4,增加NK细胞IFN-γ分泌和增强杀伤功能。     

慢性乙型肝炎患者外周血NKG2A+NK 细胞与Treg 的关系研究

目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者外周血NKG2A+NK 细胞与调节性T 细胞(Treg)的关系及临床意义。方法:收集46 例CHB 患者和17 例健康对照者外周血,采用实时荧光定量PCR 法检测血清HBV DNA;采用流式细胞术检测NKG2A+NK 细胞及Treg 的比例。结果:将CHB 患者分为Low HBV DNA 组(300 ~ 104 U/ ml)及High HBV DNA 组(105 ~108 U/ ml)。我们发现High HBV DNA 组ALT 明显高于Low HBV DNA 组(P<0.05)。High HBV DNA 组CD56dim NK 细胞及NKG2A+CD56dim NK 细胞的比例均分别明显高于Low HBV DNA 组(P<0.05)。且High HBV DNA 组Treg 明显高于Low HBVDNA 组和对照组(P<0.05)。此外,NKG2A+CD56dim NK 细胞的比例与High HBV DNA 载量及Treg 水平均呈正相关性(r =0.59,P<0.05;r =0.53,P<0.05)。结论:CHB 患者的NKG2A+CD56dim NK 细胞的水平与HBV 的免疫逃逸及疾病的进展相关。     

淋巴瘤患者外周血TCRVα24+Vβ11+自然杀伤T细胞体外活化特性研究

目的:研究淋巴瘤患者外周血TCRVα24 Vβ11 自然杀伤T(NKT)细胞的数量以及体外活化后的功能状态,与正常人外周血NKT细胞的数量及功能状态进行比较.方法:制备30例淋巴瘤患者和30例年龄及性别匹配的正常对照外周血单个核细胞(PBMNCs),以流式细胞术(FACS)检测TCRVα24 Vβ11 NKT细胞数量,以α-半乳糖神经酰胺(α-Galcer)及白细胞介素-2(IL-2)从PBMNCs中扩增活化NKT细胞,采用细胞内细胞因子流式细胞术检测手段,测定NKT细胞中胞内白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)阳性细胞的比例.结果:淋巴瘤患者与正常对照PBMNCs中TCRVα24 Vβ11 NKT细胞的细胞比率分别为0.17%±0.10%、0.28%±0.18%(P<0.05).PBMNCs培养体系中加入α-Galcer及IL-2,将NKT细胞扩增活化7d后.淋巴瘤患者与正常对照的NKT细胞的扩增倍数分别为101.37±44.61、129.66±56.31(P<0.05).扩增活化后,淋巴瘤患者与正常对照的NKT细胞中胞内细胞因子IFN-γ阳性细胞的比例分别为41.96%±15.06%、52.48%±18.85%(P<0.05);TNF-α阳性细胞的比例分别为46.30%±16.03%、71.37%±17.28%(P<0.05);IL-4阳性细胞的比例分别为36.19%±11.74%、33.12%±12.95%(P>0.05).不同病理分型及分期的淋巴瘤患者之间上述各指标无显著差异.结论:淋巴瘤患者外周血TCRVα24 Vβ11 NKT细胞数量较正常对照明显减少,经α-Galcer扩增活化后扩增倍数较正常对照降低,分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α的功能较正常降低,此数量及功能的降低与淋巴瘤的分型及分期无关.但其仍保持有对α-Galcer刺激后的扩增活化反应能力.     

IFN-γ上调的单核细胞表面MHC-I类链相关分子促进NK细胞活化

目的:研究IFN-γ诱导上调表达的单核细胞MHC-I类链相关分子(MICs)分子对NK细胞的活化作用.方法:采用密度梯离离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),以免疫磁珠法从PBMC中特异性分选单核细胞及NK细胞,以细胞因子IFN-γ、TNF-α刺激单核细胞后,再将单核细胞与NK细胞共培养,以流式细胞术(FCM)检测NK细胞表面CD69分子及胞内IFN-γ表达,以51Cr释放试验检测NK细胞对K562细胞的杀伤效应.结果:IFN-γ上调人单核细胞表面MICs表达;IFN-γ刺激的单核细胞能促进异体NK细胞CD69及胞内IFN-γ表达,能增强NK细胞对K562细胞的杀伤效应;单核细胞的这种效应至少部分依赖于IFN-γ上调的MICs分子,因为用抗MIC抗体封闭或用细胞小室阻断细胞接触,可以明显地抑制NK细胞的活化.结论:IFN-γ上调人单核细胞表面MICs分子介导了NK细胞的活化.     

淋巴瘤患者外周血TCRVα24+Vβ11+自然杀伤T细胞体外活化特性研究

目的： 研究淋巴瘤患者外周血TCRVα24+Vβ11+自然杀伤T（NKT）细胞的数量以及体外活化后的功能状态，与正常人外周血NKT细胞的数量及功能状态进行比较。方法: 制备30例淋巴瘤患者和30例年龄及性别匹配的正常对照外周血单个核细胞（PBMNCs），以流式细胞术（FACS）检测TCRVα24+Vβ11+NKT细胞数量，以α-半乳糖神经酰胺（α-Galcer）及白细胞介素-2（IL-2）从PBMNCs中扩增活化NKT细胞，采用细胞内细胞因子流式细胞术检测手段，测定NKT细胞中胞内白细胞介素-4（IL-4）、干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）阳性细胞的比例。结果: 淋巴瘤患者与正常对照PBMNCs中TCRVα24+Vβ11+NKT细胞的细胞比率分别为0.17%±0.10%、0.28%±0.18%(P<0.05)。PBMNCs培养体系中加入α-Galcer及IL-2，将NKT细胞扩增活化7d后，淋巴瘤患者与正常对照的NKT细胞的扩增倍数分别为101.37±44.61、129.66±56.31(P<0.05)。扩增活化后，淋巴瘤患者与正常对照的NKT细胞中胞内细胞因子IFN-γ阳性细胞的比例分别为41.96%±15.06%、52.48%±18.85%(P<0.05)；TNF-α阳性细胞的比例分别为46.30%±16.03%、71.37%±17.28%(P<0.05)；IL-4阳性细胞的比例分别为36.19%±11.74%、33.12%±12.95%(P>0.05)。不同病理分型及分期的淋巴瘤患者之间上述各指标无显著差异。结论: 淋巴瘤患者外周血TCRVα24+Vβ11+NKT细胞数量较正常对照明显减少，经α-Galcer扩增活化后扩增倍数较正常对照降低，分泌细胞因子IFN-γ、TNF-α的功能较正常降低，此数量及功能的降低与淋巴瘤的分型及分期无关。但其仍保持有对α-Galcer刺激后的扩增活化反应能力。     

HBV-ACLF患者外周血和肝脏NK细胞的表达频率及功能与肝损伤的相关性

目的 探讨HBV相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血和肝组织自然杀伤(NK)细胞的表达频率及功能与肝损伤的相关性.方法 利用多色流式技术检测14例HBV-ACLF患者和15例HBV-CHB(慢性乙型肝炎)患者外周血NK细胞(CD3-CD56+)的表达频率和NK细胞表面CD107a的表达,胞内细胞因子染色技术检测NK细胞分泌IFN-γ的水平.收集20例HBV-ACLF患者、10例轻度CHB患者肝组织穿刺标本,利用免疫组织化学双染技术检测肝组织中CD3和CD57抗原的表达.分析轻度CHB和HBV-ACLF患者肝脏NK细胞的表达频率及与肝损伤程度(TBIL水平)的相关性.结果 HBV-ACLF患者与轻度CHB患者外周血NK细胞的表达频率和IFN-γ的表达差异均无统计学意义(12.7％ ±5.3％ vs 9.6％±3.3％和4.52％ ±2.52％ vs 9.06％±7.6％,P均＞0.05),HBV-ACLF患者外周血CD107a表达(NK细胞的杀伤活性)要显著强于轻度CHB患者(52.1％±18.9％ vs 30.9％ ±12.4％,P＜0.05).HBV-ACLF患者肝组织中CD57+NK细胞的表达频率显著高于轻度CHB患者(95.1±21.3/低倍镜视野 vs 9.5 ±10.6/低倍镜视野,P＜0.01).肝脏CD57+NK细胞的表达频率与TBIL水平显著正相关,相关系数为0.936.结论 外周血NK细胞杀伤活性显著增强和肝脏中CD57+NK细胞大量募集可能是导致HBV-ACLF免疫性肝损伤加剧,肝细胞大量凋亡和坏死的重要因素.     

IL-2促进PBMC来源的NK、NKT、CD8+T细胞高表达NKG2D

目的 观察大剂量IL-2活化的人外周血单个核细胞（PBMC）中，NKG2D在NK细胞、T细胞和NKT细胞表面的表达规律。方法 使用三重免疫荧光标记的流式细胞术检测NKG2D的表达情况。使用sMICA蛋白与人PBMC共同培养，之后使用流式细胞术分析NKG2D在NK细胞中的表达情况。使用半定量RT-PCR方法检测大剂量IL-2活化的人PBMC中NKG2D及其锚定蛋白DAP10 mRNA的表达变化。结果 使用大剂量IL-2活化人PBMC细胞后，NKG2D在NK细胞、CD^＋T细胞和NKT细胞表面的表达均增加，但是在CD4^＋T细胞表面始终不表达。同时IL-2可以拮抗sMICA对NKG2D的下调作用。半定量RT-PCR结果显示，使用大剂量IL-2活化人PBMC之后，NKG2D及其锚定蛋白DAP10的mRNA水平并不发生明显变化。结论 大剂量IL-2培养人PBMC之后，NKG2D在NK细胞、CD8^＋T细胞和NKT细胞表面的表达均增加，可能是PBMC活化并获得广谱抗肿瘤效应的机制之一．     

CD226在NK细胞亚群上表达规律与功能关系的研究

目的：观察CD226分子在NK细胞亚群上的分布和其他NK细胞活化性受体和抑制性受体的共存规律，及与NK细胞功能的关系。方法：分别以IL-2或IL-15刺激PBMC和MLC细胞为模型，采用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析，观察CD226分子在CD56^bright和CD56^dim NK细胞亚群上的表达，及与NK细胞活化性受体CD16和抑制性受体NKG2A的共存关系，同时用ELISA方法检测培养上清中IFN-γ的水平。用4小时^51Cr释放试实验检测NK细胞杀伤水平。结果：在PBMC中，CD226主要分布于CD56^dim亚群，在IL-2作用下，CD226主要分布于CD56^bright,亚群，而在IL-15作用下，NKG2A^ CD226^ 双阳性细胞明显增加。在MLC活化的NK细胞中，CD226主要分布于CD56^dim亚群，在IL-15作用下，CD226主要分布于CD56^bright亚群，IL-2和IL-15都能促进CD16^ CD226^ 和NKG2A^ CD226^ 双阳性细胞的增殖。IL-2和IL-15能明显提高PBMC培养上清中IFN-γ的水平，并能促进PBMC和MLC中NK细胞的杀伤活性。结论：CD226主要分布于活化NK细胞CD56^bright群上，其表达水平及与CD16及NKG2A共存关系可能受不同细胞因子调节并与NK细胞功能相关。     

卡介苗(BCG)通过诱导IL-12产生和受体表达促进人NK细胞功能

目的:研究卡介苗(BCG)对人自然杀伤细胞(NK)功能的作用及其机制.方法:分离抗结核抗体阴性志愿者外周血PBMC、纯化NK细胞, 分别与BCG、 IL-12、 BCG+IL-12、 BCG+抗IL-12Rβ1 mAb(2B10)培养.利用ELISA方法检测培养上清液IFN-γ、 IL-12p40含量;利用ELISpot方法检测IFN-γ、颗粒酶B产生细胞的频率;利用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定杀伤功能.利用流式细胞术检测NK细胞IL-12Rβ1的表达.结果:BCG呈剂量依赖的方式诱导PBMC产生IFN-γ.在BCG刺激条件下, PBMC颗粒酶B分泌细胞数明显高于不加任何刺激剂组(P<0.05).BCG增强PBMC杀伤活性.BCG不能诱导纯化NK细胞产生IFN-γ, 但与IL-12同时刺激则表现出协同作用.纯化NK细胞经BCG刺激后杀伤活性与未刺激相比差异无统计学意义.BCG呈剂量依赖方式诱导PBMC产生IL-12、并促进NK细胞不同亚群表达IL-12Rβ1.2B10抗体抑制BCG对PBMC产生IFN-γ和分泌颗粒酶B的诱导作用.结论:BCG间接地促进NK细胞的生物学活性, 其部分机制是通过诱导单核细胞产生内源性IL-12、并上调NK细胞表达IL-12R.     

乏氧对人外周血NK细胞NKG2A、NKG2D及CD44表达的影响

目的： 观察乏氧微环境对人外周血自然杀伤细胞(NK)表面自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)及CD44分子表达的影响,探讨乏氧抑制NK细胞杀伤活性的分子机制。方法: 采用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞（PBMC）,贴壁去除单核细胞获得外周血淋巴细胞（PBL）,分别置常氧（21％O2）、乏氧（1％O2）以及有或无人重组白细胞介素2(rhIL-2)（1×106 U/L）刺激条件下培养16 h,流式细胞术（FCM）检测不同 NK细胞亚群 NKG2A、NKG2D以及CD44分子的表达。结果: 常氧条件,人外周血CD3-CD56+NK细胞NKG2A、NKG2D表达的阳性率分别为16.16%和78.45%,乏氧条件下二者表达的阳性率分别为15.16%和71.08%;rhIL-2上调NKG2A和NKG2D的表达,乏氧不影响 rhIL-2对NKG2D、 NKG2A的上调作用;rhIL-2显著上调NK细胞CD44的表达,乏氧抑制CD44的表达（P<0.05）。结论: 乏氧下调外周血NK细胞表面受体NKG2D及CD44的表达,但对NKG2A的表达无显著影响。由此提示,NKG2D及CD44分子可能在乏氧引起的NK细胞杀伤活性抑制中具有重要作用。     

人外周血自然杀伤T细胞体外扩增及其功能的初步研究

为了建立人自然杀伤T(NKT)细胞在体外扩增的方法并对其功能进行初步的研究,通过不同的方法从人外周血单个核细胞(MNC)和纯化T淋巴细胞中扩增TCRVα24+/Vβ11+NKT细胞,并采用流式细胞术测定NKT细胞中IL-4、IFN-γ、TNF-α分泌水平。采用CD4/CD8免疫磁珠去除CD4+和CD8+细胞进一步纯化NKT细胞,并用DIOC18染色及流式细胞术测定NKT细胞杀伤活性。α半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2可以使NKT细胞在体外扩增。扩增19d后,TCRVα24+/Vβ11+细胞比率最高上升到25.5%±7.2%,NKT细胞最大扩增倍数达到(1.51±0.91)×104倍。体外扩增的NKT细胞高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56。在CD3单克隆抗体和IL-2刺激下,TCRVβ11+细胞分泌IL-4和IFN-γ的细胞比例均高于TCRVβ11-细胞(P<0.05)。去除CD4+和CD8+细胞后NKT细胞含量上升到80%。NKT细胞对肿瘤细胞株U937和HL60以及树突状细胞具有较强的细胞毒效应。NKT细胞可以通过α-Galcer直接从人外周血MNC扩增获得,从而简化实验步骤。