不同亚型缺血性脑卒中与磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶启动子232基因多态性的研究

目的研究磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK1)启动子232基因多态性与不同亚型缺血性脑卒中的关系。方法 165例缺血性脑卒中患者,采用CISS分型法分为动脉粥样硬化血栓形成亚组(AT)、急性穿支小动脉闭塞亚组(APSAO)和心源性栓塞亚组(CE),并选取健康成人90例作为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法,进行PCK1启动子-232基因多态性分析,比较各组间基因型分布及等位基因频率。结果 (1)PCK1启动子232突变纯合子GG基因型及突变G等位基因频率,在AT、APSAO亚组显著高于对照组(P0.05),而CE组突变基因型频率及突变等位基因频率与对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(2)收缩压、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高血压史、糖尿病史、PCK1启动子232基因多态性(P=0.005)是CIS的危险因素。结论 PCK1启动子232基因多态性可能与CIS中AT、APSAO亚型相关。     

丙酮酸脱氢酶激酶的研究进展

丙酮酸脱氢酶激酶（PDK）具有能够调节线粒体丙酮酸脱氢酶复合体（PDC）催化丙酮酸脱羧氧化的活性,并进一步将糖酵解与三羧酸循环以及ATP的生成联系在一起。本文主要介绍了PDKs的调节机制以及PDKs抑制剂在降低血糖、减少心肌缺血时造成的损伤和诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。PDKs有可能成为糖尿病、心肌缺血和癌症治疗的潜在药物靶点。     

乙醛酸还原酶/羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体的制备与鉴定

目的：制备鼠抗人乙醛酸还原酗羟基丙酮酸还原酶单克隆抗体（mAb）并进行初步鉴定。方法：将正常成人肝组织匀浆离心并分离出肝脏胞质总蛋白，用肝脏胞质总蛋白免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备mAb，并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特异性鉴定，通过免疫沉淀联合质谱和Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原。结果：通过间接ELISA筛选获得杂交瘤细胞株ADB291，其分泌的mAb Ig亚类（型）为IgG1（κ），Western blot结果显示该mAb识别相对分子质量（Mr）为35000的蛋白；对免疫沉淀获得的相应抗原回收、酶切、质谱鉴定为GRH—PR。同时应用mAb ADB291对人肝脏cDNA表达文库（Uni-ZAP XR）进行筛选，筛选所获得的阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为GRHPR；阳性克隆转化表达后的Western blot结果确认该抗体识别肘，35000的表达蛋白。结论：mAb ADB291特异识别的抗原为GRHPR，该mAb在GRHPR的功能研究和二型原发性尿草酸盐过多遗传疾病的临床诊断等方面具有应用价值。     

抗丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定.方法 将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原.结果 获得1株可稳定分泌抗人PDC-E2 mAb 的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ), 该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验.结论 成功制备了抗人PDC-E2的mAb,为PDC-E2的研究提供了有力的工具.     

磷酸果糖激酶的进化

磷酸果糖激酶(PFK)是糖酵解的关键酶。近二十年来已先后提取和纯化了原核细胞和真核细胞的PFK。不同来源的PFK均能催化如下反应: F6P+ATP PFK/FDP+ADP 但原核细胞和真核细胞的PFK也表现出多种理化性质的差异,表1以Bacillus Ste-arothermophilus(Bs)和兔骨骼肌(RM)的PFK为例说明两者的异同。     

牛肿瘤坏死因子α小鼠单克隆抗体的制备

目的制备抗牛肿瘤坏死因子α(BoTNF-α)的单克隆抗体(mAb)。方法以原核系统表达的带有组蛋白(His)标签的重组牛TNF-α蛋白(rHis-BoTNF-α)为免疫原,带有谷胱甘肽硫转移酶(GST)标签的重组牛TNF-α蛋白(rGST-BoTNF-α)为检测原,采用杂交瘤细胞技术制备mAb。Western blot法检测mAb与rHis-BoTNF-α和rGST-BoTNF-α的反应性,间接ELISA检测mAb效价、特异性以及mAb与商品化重组BoTNF-α的反应性,流式细胞术分析mAb识别天然抗原的活性。结果成功筛选出7株稳定分泌抗rBoTNF-αmAb的杂交瘤细胞株。结果证明7株mAb均具有良好的反应性及特异性。流式细胞术分析显示mAb 4G4具有良好的识别天然抗原的活性。结论成功制备了抗BoTNF-α的mAb。     

氨甲酰磷酸合成酶单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的:制备抗人氨甲酰磷酸合成酶(CPSI)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定与应用.方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb,并通过间接ELISA法、Western blot、免疫组化及免疫荧光染色的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR表达文库筛选鉴定抗原,借助免疫捕获的方法用抗体来分离复合物.结果:获得3株可稳定分泌抗人CPSI mAb的杂交瘤细胞系.mAb的Ig亚类(型)为IgGl(K),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化、免疫荧光染色、免疫沉淀实验和复合物的分离.结论:成功制备了抗人CPSI的mAb,为CPSI的研究提供了有力的工具.     

抗人体神经特异性烯醇酶单克隆抗体的产生

人神经特异性烯醇酶(enolase NSE),被认为是神经内分泌(amine precursor uptake and decarboxylation APUD)细胞肿瘤及肺的小细胞肿瘤的标志。为了获得NSE的单克隆抗体,作者首先创立了一个简单方法,即从脑组织中纯化人NSE。纯化的第一步是粗提取的脑组织直接染色聚焦。洗脱烯醇酶的各部分在pH4.5左右进行SDS凝胶电泳,通过凝胶板银染色可以表明大部分NSE片段已被纯化,因此,只有纯化的片段能被选择性地收集并浓缩。这种方法比较简便易行。由于色谱分离的烯醇酶峰的所有片段都被非选择的收集,接着     

抗牛碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的：制备抗牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)单克隆抗体(mAh)，并鉴定其亚类，建立ELISA检测bFGF含量的方法。方法：应用基因重组的牛bFGF免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合，建立分泌抗bFGF mAh的杂交瘤细胞株。应用免疫沉淀技术鉴定抗bFGF mAh的亚类；应用基因重组的牛bFGF免疫青紫蓝兔，制备抗bFGF的多抗血清；将抗bFGF mAb及兔抗血清用Protein A亲和层析纯化后，建立检测bFGF含量的ELISA方法。结果：共获得3株稳定分泌抗bFGF mAb的杂交瘤细胞株；它们所分泌的mAb均为IgG1；采用夹心ELISA法检测bFGF的敏感性达ng水平。结论：抗bFGF mAb(IgG1)和多克隆抗体制备为临床应用及相关研究提供了必要的试剂。     

卡洛芬单克隆抗体的制备

目的:制备卡洛芬单克隆抗体,为研制卡洛芬的免疫学快速检测奠定基础。方法:通过活性酯法制备了以牛血清白蛋白(BSA)为载体的免疫抗原卡洛芬-BSA(Carprofen-BSA)和以卵清白蛋白(OVA)为载体的检测抗原卡洛芬-OVA(Carprofen-OVA)。通过免疫BALB/ c 小鼠、杂交瘤技术获得稳定分泌卡洛芬单抗的细胞株51C3,并通过变异系数及添加回收率的测定初步建立了卡洛芬的ELISA 检测方法。结果:将该细胞株注射BALB/ c 小鼠制备腹水单抗。腹水纯化后效价为1 .3.2*105 ,属于IgG1 型。卡洛芬单抗的灵敏度为0.32 ng/ ml,IC50 为0.882 ng/ ml。单抗与布洛芬、酮洛芬、萘普生、非诺洛芬、吲哚洛芬、芬布芬的交叉反应率均小于0.04%。且猪肉样品中卡洛芬的添加回收率在81.4% ~ 104.4% 之间,变异系数在16.3% ~25.8%之间。结论:本研究成功制备了卡洛芬单克隆抗体,该单抗可以成功应用于卡洛芬的ELISA 快速检测,为研制卡洛芬的胶体金快速检测奠定基础。     

蛙皮素单克隆抗体的制备

蛙皮素(Bombesin,MW 1620)是癌细胞自分泌生长因子之一。为肽类半抗原。在交联剂羰二亚胺(ECDI)作用下与牛血清白蛋白(BSA)偶联。克分子比例为:Bombesin:BSA:ECII=60:1:6000。在4℃生理盐水中搅拌、反应8小时后透析,去除羰二亚胺后浓     

鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体制备和鉴定

目的制备特异性鸡细胞周期检验点激酶2(cChk2)单克隆抗体(m Ab)。方法反转录PCR扩增cChk2基因,将其克隆入原核表达质粒p GEX-4T-3中,在BL21(DE3)中经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS-PAGE检测可溶性。用cChk2腹腔免疫BALB/c小鼠,利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot法检测抗血清;血清检测阳性后,取小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,利用IFA和有限稀释法筛选阳性单克隆杂交瘤细胞株。结果 cChk2主要以包涵体形式存在,多抗血清具有良好的效价,获得9株阳性杂交瘤细胞株,即1F4、2D9、2G1、3D9、3E3、4B5、4E2、5C9及5F7。结论成功制备了特异性良好的cChk2 m Ab。     

抗KDR单克隆抗体的制备

目的：研制针对肿瘤新生血管内皮细胞生长因子受体（KDR）的特异性单克隆抗体（mAb）。方法：以谷胱甘肽转硫酶耦联的KDR（GST-KDR）可溶性融合蛋白免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备分泌抗KDRmAb的杂交瘤细胞。结果：获得1株稳定分泌抗KDRmAb的杂交瘤细胞株,命名为3E9B2G11。结论：成功获得能分泌抗KDRmAb杂交瘤细胞,为以后将该mAb改造成小分子酪氨酸激酶抑制剂,使其能进入细胞内与受体KDR特异性结合并阻断血管内皮细胞生长因子的强大生物学功能奠定了重要基础。     

小鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:制备鼠抗人磷脂酰肌醇3激酶相互作用蛋白1(PIK3IP1)的单克隆抗体(mAb),探讨PIK3IP1蛋白的结构和功能.方法:利用重组蛋白GST-PIK3IP162-168为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞Sp2/0进行常规融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得鼠抗人PIK3IP1蛋白mAb的杂交瘤细胞株,通过ELBA,Western blot和免疫荧光技术等方法对其特性进行鉴定.结果:成功地建立了1株稳定分泌抗PIK3IP1蛋白的mAb杂交瘤细胞株,命名为5C6,其免疫球蛋白亚类为IgG1.ELISA检测的腹水效价可达1:107.5C5 mAb与重组GST-PIK3IP162-168蛋白有较强的特异性反应,而与大肠杆菌裂解液以及谷胱苷肽2S转移酶(GST)没有交叉反应.同时,5C6 mAb也能特异性地结合真核细胞超表达的全长PIK3IP1蛋白和变异体PIK3IP1-v1,但检测不到内源性的PIK3IP1蛋白.共聚焦免疫荧光显微镜结果显示PIK3IP1和PIK3IP1-v1定位于胞质,在胞质中呈现不均一的斑点状分布.结论:获得了效价高、特异性好的PIK3IP1蛋白的mAb,为进一步研究PIK3IP1的生物学功能提供了有用的工具.     

抗地高辛单克隆抗体的制备

抗地高辛单克隆抗体(以下简称单抗)对免疫化学的基础研究是一种有用的样品,可用于研究内源性地高辛样物质及对强心甙进行免疫测定。全部表型的特性鉴定对选择不同用途具有理想结合参数的抗体是不可缺少的。在两次融合试验中,获得22株高亲和性抗地高辛单抗。应用硫氰酸钾(KSCN)处理抗原抗体复合物和吸收ELISA可在杂     

单克隆抗体的制备和鉴定

单核吞噬细胞系统在特异性免疫中的主要作用,已增强了人们对此系统细胞成分的研究,利用单克隆抗体研究细胞表面结构是最可行的方法。现已经研制出一批抗单核吞噬细胞表面抗原的单克隆抗体,以及粒细胞表面抗原的单克隆抗体。这些抗体曾广泛地用于研究巨噬细胞和粒细胞的表面结构和功能上的异质性,还用于非淋巴细胞性白血病的鉴别诊断。在苏联关于制备单核吞噬细胞和粒细胞分化抗原的抗体的报道极少。     

仙台病毒的单克隆抗体Ⅰ.单克隆抗体制备及其特性

作者制备了12株抗仙台病毒单克隆抗体,并对其特异性、生物学功能和同种型等进行了研究。以100μg纯化的仙台病毒作为抗原加弗氏完全佐剂,腹腔注射Lou鼠,14和30天后分别以相同剂量的抗原加弗氏不完全佐剂再次注射,约10天后以放射免疫法(RIA)测试抗仙台病毒抗体滴度。取抗体滴度于1:200以上的Lou鼠,以200μg抗原加强免疫一次,4天后取其脾细胞与FO骨髓瘤细胞或Y3骨髓瘤细胞融合。经RIA筛选出