补肾法对IL-1诱导的破骨细胞性骨吸收及破骨细胞MMP-9的影响

用从出生２４小时的乳鼠长骨中分离出来的破骨细胞,从１月龄大鼠长骨中分离出来的骨髓基质细胞,建立破骨细胞培养和破骨细胞、骨髓基质细胞培养系。在白细胞介素１（ＩＬ１α）作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养２０小时。计数骨片形成的陷窝数及测算吸收陷窝面积。并采用原位杂交技术,研究密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶９（ＭＭＰ９）ｍＲＮＡ表达的调控。结果显示,在基质细胞存在的条件下,ＩＬ１可使骨吸收性增强２～４倍,ＭＭＰ９ｍＲＮＡ呈高表达。密骨片则可对抗ＩＬ１对基质细胞的影响,间接地抑制破骨细胞活性,使ＭＭＰ９ｍＲＮＡ表达降低,减少骨吸收。     

骨碎补提取液对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用

目的 :研究骨碎补对体外分离破骨细胞性骨吸收的作用。方法 :体外分离出破骨细胞 ,与牛骨磨片共同培养 ,通过 Leica图像分析仪观察破骨细胞所形成骨吸收陷窝的数目与面积 ,反映破骨细胞性骨吸收情况。结果用 SPSS软件包分析。结果 :与空白血清组相比 ,2 0 %骨碎补提取液使骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 ) μm2减少到 ( 1 3 .2 0± 1 .2 6)个 /片和 ( 683 .1 7± 3 41 .3 8) μm2 ,空白血清组与 2 0 %骨碎补血清组比较差异具有显著性意义 ( P<0 .0 1 ) ,而 1 0 %低浓度骨碎补提取液对破骨细胞在骨磨片上形成的吸收陷窝数和面积从 ( 2 8.0 5± 2 .75 )个 /片和 ( 1 2 3 9.45± 5 2 3 .2 1 )μm2 减少到 ( 2 4.1 5±1 .1 2 )个 /片和 ( 82 3 .5 2± 5 2 7.1 8) μm2 ,二者比较无显著性意义 ( P>0 .0 5 )。结论 :骨碎补提取液对破骨细胞性骨吸收有抑制作用 ,但与浓度有关     

温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的:探讨温阳补肾方含药血清对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法:体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化,分别用温阳补肾方低、中、高剂量组含药血清和0.9%氯化钠溶液血清干预,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)酶动力法测定各组TRACP活性,实时荧光定量PCR检测温阳补肾方对破骨细胞组织蛋白酶K(Cts K)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA水平。结果:与对照组比较,温阳补肾方含药血清可显著抑制破骨细胞TRACP活性(P<0.01),显著降低破骨细胞骨Cts K、MMP-9 mRNA的表达(P<0.01)。结论:温阳补肾方含药血清可抑制破骨细胞的骨吸收功能,中剂量组效果最佳。     

密骨片对破骨细胞基质金属蛋白酶-9mRNA表达的影响

目的:探讨白细胞介素-1(IL-1)诱导的破骨细胞性骨吸收过程中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA 的表达及补肾中药密骨片的调控作用。方法:从出生24 h 的乳鼠长骨中分离破骨细胞,从1月龄大鼠长骨中分离骨髓基质细胞,建立破骨细胞培养和骨髓基质细胞、破骨细胞培养系。在重组 IL-1α(rhIL-α)作用的同时,加入不同剂量的密骨片药液,分别与牛骨片共同培养20 h,计数骨吸收陷窝数及测算陷窝面积;并采用原位杂交技术研究破骨细胞 MMP-9 mRNA 的表达。结果:在基质细胞存在的条件下,IL-1可使骨吸收活性提高2～4倍,MMP-9 mRNA 呈高表达;而用密骨片药液处理后,MMP-9 mRNA 表达下降,作用呈量效关系。结论:密骨片可对抗 IL-1对基质细胞的影响,抑制破骨细胞重要的蛋白分解酶 MMP-9的表达而减少骨吸收。     

金刚健骨片对去势雌性大鼠骨质疏松症模型骨细胞超微结构的影响

为探讨金刚健骨片治疗骨质疏松症的疗效机理,将１４月龄雌性ＳＤ大鼠去势３个月以后造成骨质疏松症模型,随机分成６组,每组１０只,分别灌服金刚健骨片等药物１３周后处死,检查各组动物股骨骨密度及股骨颈骨细胞超微结构的变化 。结果显示,金刚健骨片能提高模型动物的骨密度、模型空白组比较差异有非常显著意义。     

结合状态伊班膦酸盐对破骨细胞骨吸收作用的影响

 目的 观察伊班膦酸盐（ibandronate,Iba）与羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）结合后对破骨细胞骨吸收作用的影响。方法 将Iba与HA复合成伊班膦酸盐-羟基磷灰石（Iba-HA）作为实验组,未结合Iba的HA作为对照组。分离、培养、纯化大鼠破骨细胞,Giemsa染色和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色显示破骨细胞及其细胞核的形态和数目。用两组材料与破骨细胞复合培养,透射电镜观察细胞内结构变化,SNAFL染色测定破骨细胞内氢离子浓度,骨吸收陷窝面积测定并辅以上清液内胶原C端肽片段（CTx）的浓度测定观察破骨细胞骨吸收功能。结果 Gimsa染色标本可见多核的破骨细胞、细胞核染成蓝紫色,TRAP染色标本可见TRAP酶活性的部位被染成红色,分布于破骨细胞胞浆内。透射电镜观察发现,破骨细胞与Iba-HA复合培养后,较之与HA复合培养的破骨细胞生物活性下降。SNAFL染色显示Iba-HA组破骨细胞荧光强度小于HA组,统计学有差异（P<0.05）;骨吸收检测时面积显示,Iba-HA组小于HA组,统计学有差异（P<0.05）,上清液CTx浓度,Iba-HA组小于HA组,统计学有差异（P<0.05）。结论 与ＨＡ处于结合状态的Iba对破骨细胞的骨吸收作用仍有显著影响。     

更年春方对破骨细胞的分化与凋亡及骨吸收活性的影响

目的 探讨更年春方对破骨细胞的分化、凋亡及骨吸收活性的影响.方法 分离培养大鼠破骨细胞,加入含不同浓度的"更年春"有物血清培养液培养,生理盐水作为阴性对照组,尼尔雌醇作为阳性对照组,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色对TRAP阳性多核破骨细胞计数;用显微摄影结合计算机图像分析测定骨吸收造成的陷窝面积;采用AnnexinV-FITC凋亡荧光染色结合TRAP染色法计数破骨细胞的凋亡率.结果 与生理盐水组相比,尼尔雌醇组和更年春高剂量组TRAP染色阳性的破骨细胞数量显著减少(P＜0.01);破骨细胞的凋亡率明显增加(P＜0.01);尼尔雌醇组,更年春高、中剂量组骨吸收陷窝的面积明显减少(P＜0.01).与尼尔雌醇组相比,更年春高剂量组差别无显著性.结论 更年春可抑制破骨细胞的形成和分化及骨吸收活性,促进破骨细胞的凋亡,从而发挥其抗骨质疏松的作用.     

清络通痹颗粒含药血清对破骨细胞骨吸收的影响

目的:确定清络通痹颗粒(QLT)含药血清的制备方法并观察其对体外培养破骨细胞的活性和骨吸收的影响。方法:选用高效液相色谱外标一点法测定,QLT含药血清中青藤碱的含量以确定含药血清的制备条件;乳鼠破骨细胞1×108/mL加入96孔板,将QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的大鼠含药血清1∶10稀释,分别加入各孔培养48 h,观察其对破骨细胞增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性及破骨细胞形成的骨吸收陷窝的影响。结果:QLT 7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的增殖能力和吸收陷窝面积(P<0.05,P<0.01),QLT 3.6,7.2,14.4 g.kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的TRAP活性(P<0.05,P<0.01)。结论:QLT含药血清可抑制破骨细胞增殖、TRAP活性和骨吸收能力,对破骨细胞引起的骨质破坏产生抑制作用。     

“肾主骨”理论与破骨细胞骨吸收

从骨的现代定义及“肾主骨”理论的内涵出发,结合实验研究分析肾主骨与抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性、骨吸收陷窝对破骨细胞骨吸收机制的影响作用,为中药防治破骨细胞骨吸收类疾病及其作用机制研究提供思路.     

健骨胶囊含药血清对体外培养破骨细胞活性和骨吸收作用的影响

目的：观察健骨胶囊含药血清对体外培养新生大鼠破骨细胞活性与骨吸收的干预作用。方法：3天给药法制备健骨胶囊含药血清;机械分离培养法将新生大鼠四肢长骨干体外分离和培养破骨细胞,应用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色,阳性破骨细胞计数、骨片吸收陷窝形态分析,评价健骨胶囊对破骨细胞的活性与骨吸收的作用。结果：健骨胶囊能减少体外破骨细胞的TRAP阳性细胞数及骨片吸收陷窝面积。结论：健骨胶囊含药血清对破骨细胞的活性与骨吸收具有抑制作用,为健骨胶囊治疗原发性骨质疏松症提供血清药理学依据。     

耳针和“补骨密骨”食疗法对去势雌鼠骨质疏松症的骨吸收和骨再建的影响

目的：探讨耳穴和“补 肾密骨”食疗对去势雌鼠骨质疏松症的影响。方法：通过切除6月龄雌鼠双侧卵巢建立骨质疏松症的动物模型，以假手术组和雌二醇作为对照组。耳针组、“补肾密骨”食疗组，耳针＋“补肾官骨”食疗组。雌二醇组分别经耳针、“补肾密骨”食疗和雌二 醇的3个月治疗。然后将大鼠处死，取血，用放免法测定血清的E2、BGP、IL－1、IL－6和骨的BMD、BMC。结果；耳针、“补肾密骨”食疗，雌二醇的治疗均能提高E2、BMD、BMC的水平。同时均能抑制BGP、IL－1、IL－6的分泌。结论：耳针、“补肾密骨”食疗，耳针＋“补肾密骨”食疗对去势雌鼠骨质疏松症的骨形成和骨吸收有调节作用。耳针与“ 补肾密骨”食疗通过刺激穴位和中药食补多方位和内部自身调节作用达到早期预防和治疗骨质疏松的发生和发展，具有良好的应用前景。加之它成本低廉，使用安全、方便，是值得进一步研究的新方法。     

中药骨康对破骨细胞活性及凋亡的影响

为研究中药治疗骨质疏松症的作用机理.采用体外分离培养大鼠破骨细胞并分为空白组、固邦组和骨康组,分别添加相应的药物血清共同培养,然后进行指标检测.结果骨康组HE染色可见破骨细胞胞浆浓缩、核固缩深染,有的细胞出现核碎裂,TRAP阳性细胞数明显减少,象牙骨片上的吸收陷窝数量及面积减少,流式细胞仪监测时在G1期前出现凋亡峰,共聚焦显微镜观察可见细胞凋亡征象.检测结果接近固邦组,但与空白组具有显著性差异.表明中药骨康是通过抑制体外培养的破骨细胞活性并能诱导破骨细胞凋亡,而起到抑制骨吸收的作用的.     

大血藤对破骨细胞活性及成骨细胞增殖分化作用的研究

该研究采用1α, 25-(OH)₂VitD₃诱导兔骨髓细胞法获得破骨细胞,以形态学观察、HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色来鉴定破骨细胞,用TRAP⁺细胞计数、TRAP活力测定和骨吸收陷窝的数量及面积来检测大血藤对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。培养MC3T3-E1Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)细胞,用MTT法、碱性磷酸酶活力测定检测大血藤对其增殖和分化的影响。结果表明大血藤醇提物和水煎物低、中、高剂量组(2,20,200 mg·L^-1)对破骨细胞分化及骨吸收功能具有抑制作用,并具有剂量依赖性。大血藤醇提物和水煎物低、中剂量组具有促进MC3T3-E1Subclone 14细胞增殖分化的作用,说明大血藤对骨质疏松有一定的防治作用,这种作用可能是通过抑制破骨细胞活性和促进成骨细胞增殖分化来实现的。     

仙茅苔黑酚类酚苷对去卵巢大鼠骨代谢和破骨细胞形成分化的影响

目的 探讨仙茅苔黑酚类酚苷(orcinol glucoside in Curculigo orchioideson,COOG)对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢及破骨细胞形成分化的影响.方法 3月龄Sprague-Dawley大鼠被随机分为正常对照组和去卵巢组.再将去卵巢大鼠分为5组,连续12周分别灌胃给0.5％的羧甲基纤维素...     

壮骨镇痛胶囊含药血浆对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的 探讨壮骨镇痛胶囊含药血浆对破骨细胞( osteoclast,oc)骨吸收功能的影响.方法 取1日龄新生SD大鼠四肢骨髓分离培养OC,实验组加入2.5％含药血浆,对照组采用生理盐水对照血浆,运用重氮盐法检测含药血浆对OC分泌抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)的影响;运用甲苯胺蓝染色法观察含药血浆对OC形成骨吸收陷窝的影响.结果 2.5％含药血浆共育组在48h、72h、96h对OC分泌TRAP的量都小于对照血浆组且呈明显的时效关系,与对照血浆组比较,其差异具有统计学意义(P＜0.01).2.5％含药血浆组在48h、72h、96h OC的存活数低于对照血浆组,且呈明显的时效关系,与对照血浆组比较,其差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 壮骨镇痛胶囊含药血浆能够明显抑制OC的活性.     

骨稳态中成骨细胞与破骨细胞的阴阳属性

从成骨细胞和破骨细胞来源的同一性,其间存在的生、克、制、化关系,阳性、阴性调控因子,阴阳属性的相对性等方面,阐释骨稳态中成骨细胞、破骨细胞的阴阳属性。认为成骨细胞和破骨细胞在骨稳态内是典型的阴阳关系,成骨细胞及其主导的骨生成属于"阴",破骨细胞及其主导的骨吸收属于"阳",二者动态平衡发挥维持骨稳态的作用。     

黑骨藤抑制破骨细胞分化及骨吸收能力的活性部位研究

目的:探究黑骨藤对破骨细胞分化的影响并确定其活性部位。方法:采用维生素D3(VD3)诱导兔骨髓细胞法获得破骨细胞,以形态学观察、苏木素和伊红(HE)染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨细胞,然后通过测定黑骨藤各极性部位低、中、高剂量组(1,10,100 mg·L-1)对破骨细胞TRAP酶活力,TRAP+细胞计数及骨吸收陷窝面积的影响来确定活性部位。结果:黑骨藤水饱和正丁醇层的高剂量组及乙酸乙酯层的中、高剂量组均对骨髓细胞向破骨细胞分化具有显著的抑制作用(P<0.01),并具有剂量依赖性。在抑制破骨细胞骨吸收能力实验中,黑骨藤乙酸乙酯层各剂量组均有显著抑制骨吸收陷窝面积的作用(P<0.01),而正丁醇层中、高剂量组具有显著抑制作用(P<0.01),均呈剂量依赖性。结论:黑骨藤抑制骨髓细胞向破骨细胞分化及骨吸收能力的主要活性部位是乙酸乙酯部位。     

补肾通络方对骨质疏松斑马鱼效应评价及破骨细胞自噬机制

目的:评价补肾通络方对斑马鱼骨质疏松模型的干预效应,并明确其对破骨细胞分化的自噬调控机制。方法:选取新生3 d健康斑马鱼幼鱼260尾,25 mmol·L~(-1)泼尼松龙(Pred)干预3 d,通过钙黄绿素染色确认建模成功,分为空白组,Pred组(25 mmol·L~(-1)),依替磷酸二钠组(300 mg·L~(-1)),补肾组(180 mg·L~(-1)),通络组(30 mg·L~(-1))和补肾通络组(210 mg·L~(-1))各40尾。药物干预4 d后采用钙黄绿素染色后拍照,统计斑马鱼脊椎骨荧光面积;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测斑马鱼碱性磷酸酶(ALP),骨形态发生蛋白-2b(BMP-2b),Runt相关转录因子2(Runx2),组织蛋白酶K(CTSK),抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及活化T细胞核因子(NFATC-1)mRNA表达。培养RAW264.7细胞至80%～90%密度后分为空白组,Rankl诱导组(10μg·L~(-1)),补肾组(180 mg·L~(-1)),通络组(30 mg·L~(-1))和补肾通络组(210 mg·L~(-1))。经Rankl诱导细胞破骨分化及药物干预4 d后,采用FITC标记鬼笔环肽染色检测肌动蛋白环表达,Real-time PCR检测RAW264.7细胞TRAP,CTSK和自噬相关基因5(ATG5),自噬相关基因7(ATG7),泛素结合蛋白62(p62)mRNA表达。结果:在体内研究中,与空白组比较,Pred组斑马鱼椎骨面积及ALP,BMP-2b,Runx2表达显著下降(P0.01),CTSK,TRAP,NFATC-1表达显著升高(P0.01)。与Pred组比较,通络组椎骨面积明显增加(P0.05),而补肾通络组椎骨面积显著增加(P0.01),补肾组,通络组及补肾通络组ALP,BMP-2b,Runx2表达均显著升高(P0.01),补肾通络组CTSK,TRAP,NFATC-1表达明显降低(P0.05,P0.01)。体外研究显示,与空白组比较,Rankl诱导组肌动蛋白环数目显著增多(P0.01),CTSK,TRAP和ATG5表达显著升高(P0.01),ATG7,p62表达明显升高(P0.05)。与Rankl诱导组比较,补肾组、通络组及补肾通络组均明显减少了肌动蛋白环数目及CTSK,TRAP表达(P0.05,P0.01),而补肾通络组同时降低了ATG5,ATG7,p62表达(P0.05,P0.01)。结论:补肾通络方能够显著改善泼尼松龙诱导的斑马鱼骨质疏松症,并通过降低自噬相关基因表达抑制破骨细胞分化。     

葛根素在共育体系中对破骨细胞活性的影响

目的：观察葛根素在共育体系中对破骨细胞（OC）活性的影响。方法：选取1日龄SD大鼠分离培养成骨细胞（OB）,取5日龄SD大鼠分离培养破骨细胞,建立成骨-破骨细胞共育体系;在共育体系中,分别加入0．05ug/ml、0．5ug/ml、5ug/ml、50ug/ml的葛根素,与空白组对照;用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）和光镜观察骨吸收陷窝数。结果：0．5ug/ml～50ug/ml的葛根素组在48h、72h、96h对成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRAP的活性均明显降低于对照组。结论：葛根素在共育体系中能够抑制OC活性。     

中药含药血清对体外培养鼠破骨细胞的影响

目的 :研究骨康抑制破骨细胞性骨吸收的机理。方法 :新鲜牛皮质骨经锯式切片机横切成 5 0um厚0 .5cm× 0 .5cm大小骨片 ,参照已建立的破骨细胞分离培养方法 ,从新生SD大鼠四肢长骨分离破骨细胞。原代破骨细胞培养 2 4小时后 ,加入含药血清培养 7天。结果 :发现培养的细胞具有典型破骨细胞的形态特点。结果可见破骨细胞能在骨片表面形成吸收陷窝 ,其形态多样 ,随时间延长 ,陷窝扩大 ,数量增多 ,而骨康含药血清可抑制骨陷窝数量。结论 :这说明含药血清可直接抑制破骨细胞的功能 ,骨康抑制骨吸收的功能可能与其直接抑制破骨细胞功能有关。