葡萄糖转运蛋白3在皮肤鳞状细胞癌中的表达及其对A431细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的探究葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)在皮肤鳞状细胞癌(cSCC)中的表达及其对cSCC细胞系A431的影响。方法收集2016年6月至2020年12月经北京大学第三医院皮肤科病理确诊为cSCC患者的石蜡组织标本22份, 皮肤科手术中废弃的正常皮肤组织20份作为对照, 采用免疫组化法检测cSCC和正常皮肤组织中GLUT3的表达。将A431细胞分为GLUT3过表达组和阴性对照组, 分别转染携带SLC2A3基因的慢病毒载体和慢病毒空载体。实时荧光定量PCR及Western印迹法检测各组细胞中GLUT3 mRNA及蛋白的表达水平, MTS法检测各组细胞增殖活力, 动态细胞成像分析系统Incucyte S3实时检测各组细胞的迁移和侵袭能力。分别用葡萄糖及乳酸试剂盒检测并比较各组细胞48 h葡萄糖消耗量及乳酸产生量。两组间比较采用两独立样本t检验, 多组间比较采用单因素方差分析。结果 cSCC组织中GLUT3的表达[免疫组化评分:(9.39 ± 2.56)分]显著高于正常皮肤组织[(2.30 ± 2.60)分], t = 8.91, P<0.05。与A431细胞阴性对照组相比, GLUT3过...     

Dectin-1慢病毒过表达载体的构建与鉴定

目的通过构建Dectin-1慢病毒过表达载体,感染巨噬细胞RAW264.7,建立Dectin-1过表达的巨噬细胞模型。方法根据小鼠Dectin-1基因序列设计引物,经PCR扩增目的基因后克隆至载体pLenti6.3-IRES2-EGFP/V5 DEST(MCS),获得重组质粒pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGF。经和包装质粒Mix共同转染293T细胞,收获慢病毒,利用293T细胞大量扩增慢病毒并进行慢病毒的滴度测定,根据MOI值感染巨噬细胞RAW264.7,经荧光显微镜和荧光定量PCR鉴定感染慢病毒组和感染空病毒组中Dectin-1基因的表达。结果 PCR和测序结果证明已成功构建pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGFP,成功包装慢病毒,计算慢病毒滴度为3.12×10~9 Tu/mL,成功感染巨噬细胞RAW264.7,荧光显微镜下可见绿色荧光,RT-PCR检测到感染重组慢病毒组Dectin-1表达量是感染空病毒组的1 275倍(P0.01)。结论成功构建Dectin-1基因过表达的巨噬细胞模型,为进一步研究Dectin-1基因在巨噬细胞对抗真菌感染中的作用打下基础。     

SLC35E1和SLC35E2B蛋白在分枝杆菌感染性疾病皮损中的表达

目的:观察溶质转运家族35E1（SLC35E1）和SLC35E2B蛋白在分枝杆菌感染患者皮损中的表达。方法:收集2014—2018年南方医科大学皮肤病医院确诊为分枝杆菌感染患者的石蜡包埋皮损组织,其中多菌型麻风患者10例,非结核分枝杆菌感染9例,皮肤结核7例,硬红斑5例,同时收集10例健康人石蜡包埋皮损组织作为正常对照...     

一例锌缺乏患者的SLC39A4基因突变检测并文献复习

目的：检测1例锌缺乏患者SLC39A4基因的突变,并对国内外报道的肠病性肢端皮炎和获得性锌缺乏的文献进行回顾性分析。方法：提取患者外周血DNA,采用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)和DNA直接测序方法检测患者SLC39A4基因的突变。结果：在SLC39A4基因上没有检测出致病突变。文献检索共检索锌缺乏患者139例,结合本院1例,共140例。其中肠病性肢端皮炎患者有84例,获得性锌缺乏患者有56例。肠病性肢端皮炎患者中进行SLC39A4检测的有39例,突变检出率为100%,其中预后需要长期补锌治疗的34例（87.2%）。获得性锌缺乏患者中进行SLC39A4基因检测的有19例,突变检出率为0%,均不需要长期补锌治疗。结论：肠病性肢端皮炎与SLC39A4基因的突变有关,而获得性锌缺乏的发病未发现与SLC39A4基因的突变相关,SLC39A4基因检测对肠病性肢端皮炎和获得性锌缺乏的鉴别有重要意义。     

ALDH2基因和其他脂质代谢基因在麻风患者外周血中的表达

目的研究乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)基因和脂质代谢与麻风的相关性。方法入选27例麻风病例和18例健康对照,转录组测序的方法比较了麻风病例皮损和健康对照中22个脂质代谢相关基因mRNA表达水平的差异。q PCR的方法检测了18例麻风患者和26例健康对照的外周血中ALDH2基因mRNA的表达水平。酶联免疫吸附测定(ELISA)的方法检测27例麻风患者和18例健康对照血清中ALDH2的浓度。结果麻风病例组和对照组皮损中22种脂质代谢相关基因表达差异有统计学意义(P0.05);麻风病例外周血中ALDH2的mRNA水平与健康对照差异无统计学意义(P=0.50);麻风病例血清中ALDH2浓度低于对照组,差异有统计学意义(P0.01)。结论麻风病例的脂质代谢相关基因与健康对照相比存在显著差异。麻风病例血清中乙醛脱氢酶2浓度显著低于健康对照,ALDH2可能通过调节脂质代谢影响麻风分枝杆菌对宿主的感染和麻风的发病。     

Fonsecaea monophora色素株促进巨噬细胞凋亡的研究

 目的 探讨Fonsecaea monophora（F.monophora）色素株对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响。方法 将巨噬细胞分别与F.monophora色素株和白化株进行共培养，设置PBS对照组，Western blot检测PARP-1的表达；实时定量 PCR 检测各组中BCL-2、BAX的表达; Annexin V FITC荧光染色检测凋亡。 结果 孢子与巨噬细胞共培养后，F.monophora色素株较白化株贴壁的巨噬细胞明显减少，并且能明显切割PARP-1,下调BCL-2/BAX表达的比值，上调Annexin V FITC的阳性细胞数量。结论  F.monophora色素株可能通过促进巨噬细胞凋亡，进而抵抗巨噬细胞的免疫杀伤作用；而白化株不能明显促使巨噬细胞的凋亡。     

分枝杆菌感染肉芽肿体外模型的建立和验证

【摘要】 目的 构建可用于分枝杆菌感染肉芽肿研究的体外模型。 方法 采用人免疫细胞分别与分枝杆菌（海鱼杆菌、结核杆菌、卡介苗及麻风杆菌）共培养的方法构建分枝杆菌感染肉芽肿体外模型,显微镜下动态观察肉芽肿的体外形成过程,并用流式细胞仪检测不同时期细胞表面抗原分子表达,实时定量PCR法检测细胞因子的mRNA表达及ELISA法检测重要细胞因子的分泌等。 结果 共培养7 ～ 9 d后观察到与肉芽肿结构相似的细胞聚集团块,部分细胞形成多核巨细胞;CD14、CD68、CD80等巨噬细胞表面抗原在不同的分枝杆菌组均有阳性表达;肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白介素1β、白介素10亦有不同程度的mRNA表达及分泌。结论 初步构建了人分枝杆菌肉芽肿体外模型,为研究分枝杆菌感染过程中肉芽肿形成和免疫反应诱导提供条件。     

miR-195靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移

 目的:探讨微小RNA-195（miR-195）对皮肤鳞癌细胞增殖与恶性转移的影响及其机制。方法:通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-195和MYB基因在皮肤鳞癌细胞（A431细胞）和人正常皮肤细胞（HaCaT细胞）中的表达。CCK-8实验检测过表达及下调miR-195对A431细胞增殖能力的影响;Western blot检测过表达及下调miR-195对A431细胞凋亡相关蛋白Bcl-2相关蛋白X（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）表达的影响;Western blot分析过表达及下调miR-195对A431细胞上皮细胞-间充质转化（EMT）的影响。TargetScan和双荧光素酶报告基因实验分析miR-195和MYB之间的关系,分析下调MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。Western blot检测过表达MYB后对PI3K-Akt通路的影响。LY294002作用细胞后,检测过表达MYB对A431细胞增殖和EMT的影响。结果：与HaCaT细胞相比,A431细胞中miR-195表达明显下调（P<0.01）,MYB表达明显上调（P<0.01）。过表达miR-195抑制A431细胞增殖与EMT,促进细胞凋亡,下调miR-195则起到相反作用;miR-195和MYB具有靶向和负调控关系;下调MYB的表达抑制A431细胞增殖与EMT;过表达MYB激活细胞内PI3K Akt通路,且通过该通路促进A431细胞增殖与EMT。结论：miR-195通过靶向MYB激活PI3K-Akt通路调控A431细胞的增殖和转移。     

槲皮素通过抑制溶质载体家族7成员11表达诱导前列腺癌细胞铁死亡的临床研究

目的 探讨槲皮素对溶质载体家族7成员11(SLC7A11)的调节作用,分析其对前列腺癌(PC)细胞铁死亡的影响。方法 将对数期LNCaP细胞株随机分为对照组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组、槲皮素高剂量+SLC7A11阴性转染组、槲皮素高剂量+SLC7A11过表达组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测各组LNCaP细胞的增殖情况;流式细胞仪检测各组LNCaP细胞凋亡情况;免疫印迹法检测SLC7A11、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、p53相关蛋白表达情况;试剂盒法检测丙二醛(MDA)含量情况。结果 与对照组比较,槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组LNCaP细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA、p53蛋白升高(P<0.05),SLC7A11、GPX4相关蛋白表达水平降低(P<0.05),且槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组间上述各项指标比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与槲皮素高剂量组、槲皮素高剂量+SLC7A11阴性转染组比较,槲皮素高剂量+SLC7A11过表达组LNCaP细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA、p53降低(P<0.05),SLC7A11、GPX4相关蛋...     

分枝杆菌感染易感基因的研究进展

人致病性分枝杆菌主要有结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌和非结核分枝杆菌,是严重危害人类健康的病原微生物之一,其感染与宿主遗传背景关系密切.研究表明,宿主基因在分枝杆菌感染中起重要作用.近年来通过全基因组关联分析、人群候选基因研究、基于家庭连锁分析和罕见易感个体基因分析,发现和分枝杆菌感染易感相关的基因有IL12B、IL12RB1、IFNGR1、IFNGR2、TLRs、NOD2、MRC1、IRGM、NRAMP1、VDR及LTA4H等,研究这些基因为揭示分枝杆菌感染免疫机制提供可能,同时也为麻风和结核高危人群的筛查,预防提供理论依据.     

免疫缺陷性皮肤病

20 0 4 0 82 0　朗格汉斯细胞特异性递呈在巨噬细胞亲和性人类免疫缺陷病毒感染中的作用/施伟民(上海同济大学同济医院中心实验室)…∥中华医学杂志.- 2 0 0 3,83(16 ) .- 14 42～14 46以基因枪转染A D8及N L 4 3分子克隆至皮肤,流式细胞仪和荧光显微镜观察病毒在表皮细胞中的表达,磁分离术分离CD80 和CD80 -的游离细胞,进而以PCR和逆转录酶检测游走细胞中H IV对CD4 淋巴细胞的感染和表达。结果,A D8及N L4 3经基因枪直接转染皮肤后,表皮游走细胞皆显示HIV转染,可扩增到gag基因。只有A D8转染的游走细胞能进一步感染CD4 T淋巴…     

人乳头状瘤病毒16 E6/E7基因稳定表达的永生化角质形成细胞的建立及鉴定

【摘要】 目的 构建人乳头状瘤病毒（HPV）16 E6/E7基因稳定表达的人永生化角质形成细胞（KC），为研究HPV16 E6/E7诱导的细胞永生化及恶性转化机制提供细胞模型。方法 两步消化法分离培养原代人包皮角质形成细胞（HFK），利用慢病毒感染技术对细胞稳定转染HPV16 E6/E7基因，连续培养30代以上，筛选出永生化KC，分为3组：①空白对照组：传代2次的原代HFK；②实验组：传代2次的原代HFK感染LV5-HPV16 E6/E7，感染细胞记录为A0代，感染后以传代次数记录（A1、A2……）；③阳性对照组：HPV16阳性宫颈癌细胞SiHa。应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western印迹实验分别检测空白对照组、实验组、阳性对照组HPV16 E6/E7 mRNA、蛋白及CK14蛋白的表达，CCK-8及Transwell Insert方法检测细胞的增殖及侵袭能力。裸鼠致瘤实验检测实验组A30、阳性对照组SiHa细胞的致瘤能力。结果 成功分离原代HFK。LV5-HPV16 E6/E7重组质粒感染原代HFK后，空白对照组细胞无荧光表达，连续传代后出现衰老表现，实验组A30细胞体积、形态较原代HFK无明显变化，且荧光表达率为100%。与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E6 mRNA表达水平显著升高（t值分别为7.12、8.07、6.53、5.66；P值分别 < 0.001、 < 0.001、 = 0.001、 = 0.005）；与空白对照组相比，实验组A1、A10、A20、A30细胞HPV16 E7 mRNA表达水平也显著升高（t值分别为3.20、4.29、3.75、4.22；P值分别为0.024、0.008、0.013、0.014）。空白对照组未见HPV16 E6/E7蛋白的表达，而A30及SiHa细胞可见HPV16 E6/E7蛋白的表达。CCK-8实验显示，实验组A10、A20、A30细胞增殖水平显著高于空白对照组（t值分别为6.49、7.55、9.43；P值分别为0.003、0.002、0.001），而A1的增殖水平与空白对照组比较，差异无统计学意义（t = 2.40，P = 0.074）。Transwell Insert侵袭实验显示，A30不能穿过基底膜，SiHa细胞可穿过基底膜被染成蓝色。裸鼠接种A30细胞2个月后无肉眼可见肿瘤，组织学亦显示无肿瘤形成，裸鼠接种SiHa细胞后可于皮下形成肿瘤。结论 通过采用慢病毒技术转染HPV16 E6/E7基因成功建立人永生化角质形成细胞，可作为HPV相关研究中的理想细胞模型。     

海分枝杆菌感染的历史与现状

海分枝杆菌属于非结核分枝杆菌，人类可因接触污染水源、水产等而感染，近年来此菌致人类的感染有逐渐增多的趋势。目前针对本病的诊疗尚无统一规范化标准，临床亟待完善。本文对目前发表相关文献进行总结，就此疾病的发展历史及现状进行综述。     

痤疮丙酸杆菌诱导人单核细胞iNOS、NO及 Nramp1表达的研究

目的：观察人源性单核细胞系THP-1在痤疮丙酸杆菌（P．acnes）活菌刺激后，不同时段诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、自然抗性相关巨噬细胞蛋白1（Nramp1）的表达水平和细胞培养液上清中一氧化氮（NO）的含量，初步探讨天然免疫过程中单核-巨噬细胞反应氮中间产物（RNI）系统对PP．acnes感染的反应机制。方法：使用实时荧光定量PCR技术检测iNOS、Nramp1表达量，Griess法检测培养液上清NO含量。结果：P．acnes活菌可以有效诱导人源性单核细胞系THP-1 iNOS、NO和Nramp1的显著表达，表达量在刺激后6～24h达到高峰。结论：天然免疫中的RNI系统在P．acnes感染的初期即参加免疫反应，同时Nramp1也开始表达，对RNI系统起到辅助作用。     

斑块型银屑病患者外周血SLC35E2B基因的表达及其变异研究

目的通过检测斑块型银屑病患者外周血中SLC35E2B的表达情况,并利用数据库分析基因富集的功能和参与的通路,探讨SLC35E2B在银屑病发病机制中的作用。方法收集斑块型银屑病47例、正常对照14例的外周静脉血,提取样本基因组DNA,用外显子捕获-高通量测序(exon-capture high-throughput sequencing,EC-HTS)技术进行检测,数据经过Calling、数据库比对、软件分析得到最终SLC35E2B基因病理性突变位点,利用GO和KEGG pathway数据库分析基因富集的功能和参与的通路。结果对61例样本所得数据进行生物信息学分析得到致病性突变位点1个:SLC35E2Bc.833CT(p.T278M),仅见于斑块型银屑病组,正常组未见;GO富集提示SLC35E2B生物学过程主要涉及调节IL-12家族细胞因子、IL-17家族细胞因子、调节对生物刺激的细胞应答、TNF的合成、调节Th1细胞相关的免疫应答以及抵抗病原微生物等多细胞生物过程;KEGG通路分析提示SLC35E2B基因主要与结核病、1型糖尿病、弓形虫病、哮喘、类风湿性关节炎等疾病相关。结论 SLC35E2B可能参与银屑病发病的病理过程。     

溶瘤腺病毒介导的IL-18在黑素瘤A375细胞中的表达

目的构建携带人IL-18基因的溶瘤腺病毒,观察在A375细胞中IL-18基因的表达情况。方法将pZD55-IL-18与含有腺病毒右臂的质粒pBHGE3共转染293细胞获得重组腺病毒。PCR鉴定条件增殖腺病毒ZD55- IL-18。以ZD55-IL-18感染人黑素瘤A375细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-18基因mRNA的表达;Western blot法检测腺病毒E1A的表达情况;结晶紫染色法检测细胞杀伤作用;MTY法检测细胞存活情况。结果PCR鉴定表明ZD55-IL-18构建成功;RT-PCR和Western blot结果表明,ZD55-IL-18能高效介导IL-18基因在A375细胞中的表达,并在肿瘤细胞内表达E1A;结晶紫染色和MTT结果表明,ZD55-IL-18对A375细胞有明显的杀伤作用。结论构建成功的溶瘤腺病毒ZD55-IL-18,可在A375细胞中高效表达IL-18基因,并能抑制黑素瘤细胞生长。     

p53相关的细胞周期调控在UVB诱导的皮肤成纤维细胞早衰中的作用

目的探讨中波紫外线(UVB)诱导皮肤成纤维细胞(HSF)应激诱导的早衰(SIPS)后细胞周期调控的变化。探讨p53相关的生长停滞、细胞凋亡相关基因表达在UVB诱导的SIPS中的变化情况。方法对UVB诱导发生SIPS的HSF,流式细胞仪检测细胞周期;Western blot法检测衰老信号通路中p53,p21,p16的表达;实时荧光定量PCR芯片检测与p53相关的生长停滞(p53,p21,p16,p19)、凋亡(bax,bcl-2)基因的mRNA表达水平。结果流式细胞仪对UVB诱导的SIPS模型进行细胞周期检测发现,大部分细胞发生了G1期阻滞;衰老通路中p53,p21和p16的表达都明显增加;实时荧光定量PCR芯片检测发现,与生长停滞相关的抑癌基因p53,p21,p16,p19的表达均上调;p53下游的凋亡相关基因中的抑凋亡基因bcl-2表达稍上调,而凋亡基因bax表达下调。结论G1期阻滞和衰老信号通路蛋白表达增加进一步印证了UVB诱导HSF发生的SIPS。p53信号通路相关基因的表达变化提示UVB诱导的SIPS可能具有与p53相关的抗凋亡作用,但其中p53信号通路所起的作用还需更进一步的实验探索。     

虾刺伤致腱鞘炎一例

患者，女，59岁。右手拇指结节2个月余。发病前右手拇指指腹被虾刺伤，组织病理符合感染性肉芽肿改变，海分枝杆菌qPCR(组织)阳性，超声符合右手指屈肌肌腱腱鞘炎。诊断为海分枝杆菌感染导致的腱鞘炎。给予克林霉素、盐酸米诺环素治疗后病情好转。     

基于通路分析的重型痤疮全基因组关联研究

目的 探讨与重型痤疮相关的基因通路。方法 使用全基因组关联研究（GWAS）的芯片数据,包括1 056例重型痤疮患者和1 056例健康对照标本,每个标本检测900 015个SNP位点。对重型痤疮进行基因通路（KEGG数据库定义）分析。采用超几何分布检验计算每条通路与重型痤疮的关系,使用错误发现率（FDR）对得到的结果进行多重检验校正,校正后P < 0.05视为通路与重型痤疮相关。结果 统计分析发现12条基因与重度痤疮相关（P < 0.001）,包括TMPRSS11E、DDB2、RIC1、CLLU1OS、IL3、PLA2G4B、SLC16A14、SOX17、FAHD2A、ENTPD7、MRPL50、TXLNB。通路分析发现,5条通路与重型痤疮相关（校正后P < 0.05）,包括催乳素信号通路、丙型肝炎、肾细胞癌、高亲和力IgE受体信号通路、酪氨酸代谢。结论 本研究发现5条通路与重型痤疮相关,分别涉及人体的内分泌、免疫、代谢等过程。     

Ki67启动子调控的肿瘤增殖腺病毒对黑素瘤细胞的杀伤作用

目的：研究Ki67启动子调控增殖腺病毒Ki67-ZD55对黑素瘤A375细胞的杀伤作用。方法：将PBS、ZD55-EGFP和Ki67-ZD55分别作用于A375细胞。FIT—PCR法检测Ki67-promotermR—NA的表达;荧光显微镜观察Ki67-ZD55增殖过程;MTr法检测细胞存活率;WesternBlot法检测E1A蛋白及线粒体途径凋亡相关蛋白BAX、Bcl—XL、MCL-1和Caspase-3的表达。结果：RT—PCR检测结果显示Ki67-ZD55能够在A375细胞中表达Ki67-promoter序列;荧光显微镜观察结果显示Ki67-ZD55增殖明显;MTT结果表明Ki67-ZD55组对A375细胞的增殖具有明显抑制作用,抑制效果大于ZD55-EGFP组（P〈0．05）;WesternBlot法检测结果表明E1A、BAX的表达量增加,Bcl—XL、MCL-1的表达量均降低,Procaspase-3发生了明显剪切。结论：Ki67-ZD55能够明显抑制A375细胞增殖,促进A375细胞凋亡。