PRMT2下调NF-кB对甲状腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:构建稳定表达PRMT2和空载体细胞系SW579-PRMT2-V5、SW579-V5,探讨PRMT2对人甲状腺癌SW579细胞生长的影响及其作用机制.方法:应用Lipofectamine 2000将真核表达载体pCDNA3.1/NT-V5-PRMT2和空载体pCDNA3.1/NT-V5导入SW579细胞,经G418抗性筛选得到稳定的克隆并扩大培养成细胞系,MTT法检测稳定表达PRMT2对SW579细胞生长的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡的变化.Western blot检测转录因子NF-кB及相关基因的变化.采用RT-PCR和Western blot鉴定稳定表达PRMT2的SW579细胞.结果:成功建立了稳定表达PRMT2和空载体的细胞系SW579-PRMT2-V5、SW579-V5.PRMT2显著抑制SW579细胞体外增殖能力.而且在诱导SW579细胞发生凋亡的同时,PRMT2可下调NF-кB活性及其调节基因cyclin D1的表达.结论:PRMT2可通过诱导细胞凋亡和下调NF-кB活性而抑制人甲状腺癌细胞增殖.     

EX527对胰腺癌细胞 PANC1侵袭迁移能力的影响

目的 应用EX527特异性下调胰腺癌细胞PANC1中SIRT1的去乙酰化活性,观察其对细胞侵袭转移能力的影响。方法 使用EX527处理PANC1细胞,下调SIRT1乙酰化转移酶活性,通过transwell侵袭及划痕实验,观察EX527对PANC1细胞侵袭转移能力的影响,应用Western blot方法观察其对侵袭转移相关因子MMP-2和MMP-9蛋白表达的影响。结果 EX527可以明显降低细胞去乙酰化转移酶活性,但对SIRT1蛋白表达无影响。与对照组相比,经EX527处理后的PANC1细胞的侵袭及转移能力呈现明显抑制作用,且细胞MMP-2和MMP-9的mRNA及蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论 EX527可以下调胰腺癌细胞SIRT1去乙酰化活性,明显抑制胰腺癌PANC1细胞的侵袭转移能力,作用机制可能与下调MMP-2和MMP-9表达相关。     

精氨酸对胰腺癌介入治疗患者血清sTNFR-1与 T淋巴细胞rDNA转录活性的影响

［摘要］目的探讨精氨酸增强的胃肠外营养对胰腺癌患者介入治疗术后血清可溶性肿瘤坏死因子受体1（sTNFR 1）和T淋巴细胞rDNA转录活性水平的影响及其临床意义。方法分别用酶联免疫法（ELISA）和核仁形成区相关蛋白银染技术测定50例中晚期胰腺癌患者（胰腺癌组）行动脉栓塞化疗术治疗前后血清sTNFR 1和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的改变,并与健康对照组比较分析。结果胰腺癌组介入治疗前sTNFR 1增高,外周血T淋巴细胞rDNA转录活性降低,与对照组比较差异有极显著性 （P＜0.01）;行化疗栓塞术后,患者血清sTNFR 1降低,外周血T淋巴细胞rDNA转录活性增高,治疗前后差异有显著性 （P＜0.05）;应用精氨酸治疗组较未用组血清sTNFR 1下降和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性升高更显著（P＜0.05）。结论检测胰腺癌患者血清sTNFR 1和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的水平,有助于了解患者的免疫状况,介入治疗辅以合理的免疫营养素能增强患者的免疫功能。     

MAP3K14下调miR-17-5p对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究MAP3K14在胰腺癌组织中的表达及对胰腺癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 采用RT-PCR法检测胰腺癌组织和正常胰腺组织中MAP3K14的表达.利用脂质体转染胰腺癌细胞,实验分组:Con组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-MAP3K14组、pcDNA3.1-MAP3K14+miR-NC组...     

Plk1在胰腺癌细胞中的表达及其临床意义

目的探讨胰腺癌细胞系中Plk1表达的意义。方法以胰腺癌细胞株(AsPC-1、PANC1、BxPC3)和正常胰腺细胞株(HPDE6C7,一种永生但非转化的胰腺上皮细胞来源的细胞株)为研究对象,应用RT-PCR检测Plk1 mRNA的表达,用Western blot检测Plk1蛋白的表达。结果 Plk1 mRNA和Plk1蛋白在胰腺癌细胞中均有高表达,而在正常胰腺细胞株中几乎不表达。结论 Plk1在胰腺癌细胞中的表达具有一定肿瘤特异性,有可能成为胰腺癌治疗的新靶标。     

Cyclin D1在胰腺癌中的表达及意义

目的检测Cyclin D1在胰腺癌中的表达,探讨其在胰腺癌中的作用。方法收集50例原发性胰腺癌组织标本和36例癌旁组织,采用免疫组织化学法、逆转录荧光定量PCR法、蛋白免疫印迹检测胰腺癌及癌旁胰腺组织中Cyclin D1的表达;并分析Cyclin D1表达与胰腺癌生物学行为的关系。结果 Cyclin D1在胰腺癌组织中出现较高表达;Cyclin D1的表达与胰腺癌的病理组织分级、增殖活性、肿瘤转移和临床分期关系密切,与年龄、性别、发病部位、生存时间无关。结论 Cyclin D1高表达与胰腺癌的发生发展有关。     

细胞因子诱导的杀伤细胞体外扩增及生物学活性研究

细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)是外周血淋巴细胞经多种细胞因子如γ-IFN、IL-2、CD3单克隆抗体等体外刺激、活化扩增出来的新型、广谱、杀瘤的免疫活性细胞,具有体外扩增能力强,杀伤活性高等优点而逐渐引起人们的研究兴趣。本实验通过对淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、CD3因子激活的杀伤细胞(CD3AK)、CIK细胞在体外培养。     

integrin β_1在胰腺癌中的表达及临床意义

目的:观察integrinβ1在胰腺癌及癌旁组织中表达,与临床病理特征参数进行相关性分析,初步探讨其临床意义。方法:应用免疫组化技术(SABC法)检测integrinβ1在25例胰腺癌及其癌旁组织中的表达,图像分析软件分析其表达强度,分析与胰腺癌临床病理特征参数之间的关系。结果:integrinβ1在胰腺癌及其癌旁组织中的高表达率分别为76.00%、40.00%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。在胰腺癌组织中,integrinβ1的表达强度和临床分期及有无淋巴结转移有关(P<0.05,P<0.05),与性别、年龄、肿瘤部位、大小及分化程度无关。结论:integrinβ1可以作为胰腺癌新的分子病理标志物,可能为胰腺癌的基因治疗提供新的靶点。     

干扰hENT_1表达增加5-FU在胰腺癌SW1990细胞内浓度

目的明确hENT1在5-FU跨膜转运和返流中的作用,以及返流对5-FU在细胞内浓度的影响。方法将能特异性下调hENT1的重组及对照质粒用脂质体法转染到SW1990细胞内,RT-PCR检测hENT1 mRNA表达情况。分别培养SW1990、pSilence-hENT1Si SW1990、pSilence-Control SW1990细胞,3组细胞均置于含5-FU100mg·L-1的DMEM中温浴。各组取等量细胞刮取液两份,一份用毛细管区带电泳测定5-FU含量、另一份作平行样本测定蛋白含量,最后计算细胞内5-FU浓度。结果pSilence-hENT1Si SW1990细胞hENT1 mRNA表达水平下调0.5。SW1990组用5-FU温浴后,细胞内5-FU浓度在早期迅速升高,120min后处于平台期。pSilence-hENT1Control-SW1990组与SW1990组相比无差异(P>0.05)。而pSilence-hENT1SiSW1990细胞内5-FU浓度早期上升较慢,但随着时间延长,浓度逐渐升高,120min后细胞内浓度稳定,高于对照组中浓度(P<0.05)。结论干扰hENT1表达可以提高5-FU在SW1990细胞内浓度。hENT1是SW1990细胞向外返流5-FU的主要通道。     

胰腺癌中AQP-1和MMP-9的表达及临床意义

目的研究水通道蛋白-1（aquaporin-1,AQP-1）和基质金属蛋白酶-9（metalloproteinase9protein,MMP-9）在胰腺癌组织中的表达,并探讨它们的相关性及临床意义。方法采用免疫组化sP法检测60例胰腺癌组织和20例正常胰腺组织中AQP-1和MMP-9蛋白的表达情况。结果AQP-1和MMP-9在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为75％、80％,二者均为高表达;胰腺癌有无淋巴结转移、分化程度以及TNM分期与AQP-1和MMP-9蛋白的表达相关（P〈0．05）;两种蛋白在胰腺癌组织中的表达呈正相关（P〈0．05）。结论AQP-1和MMP-9在肿瘤侵袭转移中发挥了重要作用,AQP-1和MMP-9的表达可作为预测胰腺癌的转移趋势指标,为胰腺癌的诊治提供临床参考。     

SUMO特异性蛋白酶1在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)在胰腺癌发生、发展中的作用。方法收集胰腺癌组织及其配对癌旁正常组织各44份,采用免疫组化法、Western blotting法和RT-PCR法检测SENP1蛋白和mRNA表达,并分析其表达与患者临床病理参数的关系。结果胰腺癌组织中SENP1蛋白的相对表达量、阳性表达率分别为1.18±0.11、90.9%(40/44),其配对癌旁正常组织分别为0.57±0.04、13.6%(6/44),二者比较P均<0.01。胰腺癌组织中SENP1 mRNA的相对表达量、阳性表达率分别为79.33±2.33、93.2%(41/44),其配对癌旁正常组织分别为16.67±1.20、13.6%(6/44),二者比较P均<0.01。胰腺癌组织中SENP1阳性表达与患者病理分期、血管侵犯有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、分化程度和淋巴结转移无关(P均>0.05)。结论SENP1在胰腺癌组织中过表达,其过表达可促进胰腺癌的发生、发展。     

α-synuclein过表达下调Nurr1转录活性的机制研究

目的研究α-synuclein过表达对多巴胺能神经元核受体相关因子-1(Nurr1)转录活性的影响及作用机制。方法 PC12细胞转染α-synuclein质粒后,采用双荧光素酶检测方法和Western blot方法分别检测Nurr1转录活性及蛋白水平变化情况。同时检测调控Nurr1转录活性的GSK3β/β-catenin通路中相关信号蛋白水平变化。结果与对照组相比,α-synuclein过表达可明显降低Nurr1转录活性,但对Nurr1蛋白水平无明显影响。通过检测GSK3β/β-catenin中相关信号蛋白发现,α-synuclein过表达可明显降低GSK3β(Ser9)磷酸化水平和β-catenin蛋白水平。结论α-synucle-in可能通过调控GSK3β/β-catenin通路下调Nurr1转录活性。     

蛋白质精氨酸甲基转移酶5抑制剂的设计、合成及活性评价

蛋白质精氨酸甲基转移酶5 (PRMT5)是人体中重要的II型甲基转移酶,可以催化多种组蛋白及非组蛋白的对称性双甲基化,并在多种肿瘤中高表达,是一种潜在的治疗癌症的新靶点。本文根据已报道的EPZ015666与PRMT5复合物晶型,并分析其相互作用模式,开展对GSK3326595 (原为EPZ015938)的结构改造,使用构象限制原理设计合成了16个化合物,经过生物学评价发现化合物B8和C系列6个化合物均具备与GSK3326595相当的PRMT5抑制活性。Caco-2细胞透膜性实验表明化合物C3、C4的透膜性较差,可能是细胞抗增殖活性较差的一个原因,为下一步结构设计提供思路。     

蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对TGF-β1表达的影响

目的研究蟾毒灵对裸鼠人胰腺癌的疗效及细胞凋亡的作用和机理。方法建立裸鼠人胰腺癌模型,随机分为对照组(NS)、5-氟尿嘧啶组(5-Fu)、蟾毒灵低剂量组(BuL)、蟾毒灵高剂量组(BuH)。分别腹腔注射生理盐水NS,20ml/kg、5-Fu24mg/kg、Bu1mg/kg、Bu1·5mg/kg。用药后第7天处死,计算肿瘤生长抑制率;TUNEL法检测瘤体凋亡指数;免疫组化S-P法检测P38、TGF-β1的表达。结果治疗后与NS组相比,各组瘤体体积均显著缩小(P<0·05)。其中Bu高剂量组瘤体体积明显相似文献   

PCDH7在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞的影响

目的探讨原钙黏素7(PCDH7)在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞的影响。方法采用免疫组化检测76例胰腺癌组织和对应的癌旁组织中PCDH7的表达,分析其与临床特征的关系。培养胰腺癌细胞株SW1990和ASPC1,利用逆转录病毒载体构建过表达PCDH7的SW1990细胞,利用Lenti-CRISPR-v2载体构建PCDH7基因敲除的ASPC1细胞,检测细胞增殖情况。克隆形成实验检测克隆性生长情况。皮下移植瘤实验检测肿瘤的生长。结果 PCDH7在胰腺癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(47.37%vs.7.89%)(P<0.01)。PCDH7的表达与胰腺癌分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。细胞增殖实验发现,过表达PCDH7对细胞增殖情况无明显影响(P>0.05),敲除PCDH7能抑制细胞的增殖(P<0.05)。克隆形成实验发现,过表达PCDH7能促进细胞的克隆性生长(P<0.01)。皮下移植瘤实验发现,过表达PCDH7后,肿瘤重量增加(P<0.05);敲除PCDH7后,肿瘤重量减轻(P<0.01)。结论 PCDH7在胰腺癌组织中...     

S100A11过表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响

目的探讨钙囊素(S100A11)过表达对人胰腺癌细胞PANC-1增殖的影响。方法构建S100A11过表达载体质粒pcDNA3.1-S100A11,并转染人胰腺癌细胞PANC-1细胞。Western blot检测转染效果;CCK-8检测转染后PANC-1细胞增殖活力;流式细胞术检测PANC-1细胞的凋亡和细胞周期的变化。结果 S100A11蛋白表达量与pcDNA3.1-S100A11的转染量成正相关。过表达S100A11基因可明显提高PANC-1细胞增殖速度,降低凋亡细胞比例,并使PANC-1细胞S期细胞比例增加,G1期细胞减少(P<0.05)。结论S100A11过表达能调控PANC-1细胞周期,并促进PANC-1细胞的增殖。     

miR-375及其靶基因PDK1在胰腺癌中的表达

目的 探讨微小RNA 375(miR 375)与3磷酸肌醇依赖蛋白激酶1(PDK1)在人胰腺癌中的表达及其相关性.方法 实时荧光定量PCR方法检测胰腺癌组织中miR-375和PDK1表达,分析两者的相关性.结果 在人胰腺癌组织中,miR-375表达下调,而PDK1表达上调,两者呈负相关.结论 miR-375在胰腺癌中发挥抑癌基因作用,对其靶基因PDK1具有负性调控作用.     

齐留通对胰腺癌细胞增殖与凋亡的影响

[摘要]目的 探讨齐留通阻断5-脂氧合酶（5-LOX）代谢途径对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 将胰腺癌细胞SW1990与不同浓度齐留通（浓度分别为40，30，20，10，5，3和1 μg·mL-1）共同孵育,以不加齐留通的细胞为对照组。采用MTT法检测作用不同时间后齐留通对SW1990细胞的抑制率；倒置显微镜观察齐留通浓度为20 μg·mL-1时细胞形态变化；将SW1990胰腺癌细胞与不同浓度齐留通（浓度分别为80，40，20，10和5 μg·mL-1）作用24 h，对照组加入等量培养基和溶媒，流式细胞仪(FCM)AnnexinⅤ/PI双染法检测各组SW1990细胞增殖指数， FCM检测细胞周期。结果 培养48 h后，40和30 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌SW1990细胞增殖的抑制作用明显强于对照组，且均差异有极显著性（均P<0.01）；培养72 h后，40，30和20 μg·mL-1齐留通组对胰腺癌细胞的抑制较对照组显著增强（均P<0.01）。其他检测结果亦表明，齐留通可抑制SW1990细胞增殖，促进细胞凋亡，该作用呈浓度和时间依赖性。与对照组相比, 20 μg·mL-1齐留通作用18 h后G0/G1期细胞所占比例较对照组明显增高（P<0.01）,G2/M期、S期细胞所占比例降低。结论 齐留通能抑制胰腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡，使细胞DNA合成受抑制,产生G1期阻滞。     

雷公藤红素通过抑制PAK1抗胰腺癌作用及其机制研究

P21活化蛋白激酶1 (p21-activated kinases 1, PAK1)是P21活化蛋白激酶家族成员之一,在胰腺癌细胞增殖和肿瘤形成过程中起着十分重要的作用,是胰腺癌治疗的重要靶点。目前,靶向PAK1的激酶抑制剂尚处于临床前研究阶段。因此,筛选开发出新的PAK1激酶抑制剂对于胰腺癌治疗具有重要的意义。本研究发现天然产物雷公藤红素(celastrol)对PAK1具有显著的抑制作用,其IC50约为3.614μmol·L^-1。分子对接结果显示,雷公藤红素与PAK1激酶结构域的ATP结合口袋结合。MTT实验结果表明,雷公藤红素对胰腺癌细胞BxPC-3、PANC-1的增殖均具有抑制作用。进一步机制研究显示,干扰PAK1后,雷公藤红素对胰腺癌细胞BxPC-3的抑制作用发生逆转。同时,雷公藤红素可以抑制PAK1及其下游信号通路蛋白的表达,从而激活凋亡信号通路引发胰腺癌细胞发生凋亡。上述研究结果表明,雷公藤红素可以通过靶向抑制PAK1激酶信号通路诱导胰腺癌细胞的凋亡,具有用于治疗胰腺癌的潜在价值。