芦荟大黄素对阿尔茨海默病大鼠PI3K/AKT/mTOR通路介导自噬的影响

目的 研究芦荟大黄素对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）大鼠的神经保护作用以及可能的调控机制。方法 选择健康雄性SD大鼠30只,采用随机分组的方式将大鼠分为空白组、模型组和芦荟大黄素组,每组10只。采用腹腔注射D-半乳糖和双侧颅内海马注射Aβ25-35的方式联合进行AD大鼠模型的复制。芦荟大黄素组大鼠按10 mL/kg给予芦荟大黄素混悬液,空白组和模型组给予等容积纯水,共28 d。Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,苏木精-伊红染色观察海马CA1区神经细胞损伤情况,Western blot法和qRT-PCR法分别检测大鼠海马磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（the mammalian target of rapamycin,mTOR）通路蛋白、自噬相关蛋白及其mRNA的表达水平。结果 AD大鼠学习记忆能力明显下降（P＜0.05）,海马CA1区神经细胞出现明显损伤,而芦荟大黄素可显著改善 AD大鼠学习记忆能力（P＜0.05）,减轻海马CA1区神经细胞损伤;AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62的蛋白表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平（P＜0.05）;AD大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平显著增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3 mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 芦荟大黄素能够显著改善AD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬来实现的。     

丹参素经PI3K/AKT信号通路改善血管性痴呆小鼠认知功能的机制研究

目的：基于磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路探讨丹参素对血管性痴呆小鼠认知功能的改善情况。方法：将60只昆明种小鼠按随机数字表法分为6组：正常对照组、模型组、阳性对照组（尼莫地平注射液,2 mg·kg-1）、丹参素低（10 mg·kg -1）、中（20 mg·kg -1）、高（30 mg·kg -1）剂量组,每组10只。模型组、阳性对照组、丹参素低、中、高剂量组小鼠构建血管性痴呆模型。建模成功后,从第1天开始丹参素各剂量组和阳性对照组腹腔注射相应的药物,正常对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水,每天1次,持续28d。给药结束后对小鼠进行水迷宫实验,检测小鼠脑损伤相关因子血清星形胶质源性蛋白（S-100β）、神经元特异性烯醇化酶（NSE）含量,苏木精-伊红（HE）染色观察小鼠脑组织结构,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测小鼠脑组织中PI3K、AKT蛋白水平。结果：正常对照组小鼠脑组织结构正常,细胞排列整齐,无明显空泡结构;模型组可见明显的脑白质受损,细胞排列紊乱,视野中大量空泡结构;在给予丹参素干预后,随着丹参素给药剂量的增加,可见脑组织细胞排列逐渐变整齐,空泡结构逐渐减少。与正常对照组比较,模型组小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量显著升高,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著降低（P<0.05）;与模型组比较,丹参素低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量显著降低,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;随着丹参素给药剂量的增加,小鼠逃避潜伏期、血清S-100β、NSE含量逐渐降低,脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平逐渐升高,具有量-效关系（P<0.05）;丹参素高剂量组和阳性对照组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：丹参素可通过调节PI3K/AKT信号通路及相关细胞因子,改善血管性痴呆小鼠的认知功能障碍。     

基于PI3K/AKT信号通路探讨针刺对脑缺血再灌注损伤大鼠线粒体自噬作用的机制研究

目的 观察针刺疗法对脑缺血再灌注损伤(Cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠脑组织线粒体自噬的影响,并探究其对脑组织保护作用的机制。方法 将SD大鼠随机分为假手术组、CIRI组、非穴位针刺组、针刺穴位组,每组10只。采用改良线栓法构建脑缺血再灌注大鼠模型,针刺穴位组针刺“大椎”、“人中”、“百会”三穴,非穴位针刺组针刺穴位左侧旁开0.3cm处,假手术组和CIRI组不行针刺。在脑缺血再灌注后24h用Zea Longa评分法对大鼠进行神经功能评分,取大鼠脑组织TTC染色法检测梗死体积,JC-1法检测大鼠脑组织线粒体膜电位变化。通过Western blot检测自噬相关蛋白及PI3K-AKT信号通路相关蛋白表达。结果 相较于假手术组,CIRI组大鼠神经功能评分显著升高,脑组织线粒体自噬相关蛋白LC3II、BNIP3水平显著升高,p62水平降低,自噬水平增强,线粒体膜电位降低,同时PI3K-AKT信号通路相关蛋白磷酸化水平显著降低;相较于非穴位针刺组,针刺穴位对脑缺血再灌注大鼠脑组织起保护作用,表现为大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积以及脑半球肿胀显著降低(P＜0.05),线粒体膜电位升高,自噬水平降低,同时PI3K-AKT信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT和p-mTOR水平显著升高。结论 针刺疗法可能通过激活PI3K/AKT信号通路抑制线粒体自噬,从而实现对脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路研究双氢青蒿素对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响

目的:研究双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对人肝癌SMMC-7721细胞自噬的影响,并初步探讨其作用机制.方法:采用不同浓度(0 μmol.L-1、6.25 μmol·L-1、12.5 μmol·L-1、25 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100 μmol·L-1)DHA分别作用于...     

EGF通过PI3K/AKT通路介导小鼠卵巢颗粒细胞增殖

目的探讨表皮生长因子（EGF）介导,经PI3K/AKT信号通路调控小鼠卵巢颗粒细胞增殖的作用与机制。方法取分离纯化的小鼠卵巢颗粒细胞,添加10ng·mL^-1的EGF对其培养24h后,然后再添加20μM浓度的P13K抑制剂LY294002处理细胞72h,利用CCK-8检测颗粒细胞增殖情况;应用Real-time PCR法检测AKT mRNA的表达;应用Western blot法检测体外培养小鼠颗粒细胞中总AKT（t-AKT）及磷酸化AKT Thr308位点（p-AKTThr308）蛋白的表达情况。结果 （1）10ng·mL^-1的EGF对小鼠颗粒细胞增殖效应明显,能够显著提高AKT基因在颗粒细胞中的表达（P〈0.05）,能显著性促进t-AKT及p-AKTThr308蛋白的表达（P〈0.05）。（2）PI3K特异性抑制剂LY294002明显抑制EGF促进颗粒细胞增殖的效应（P〈0.05）。结论EGF能活化小鼠颗粒细胞的PI3K/AKT信号通路,促进颗粒细胞生长、增殖。     

基于PI3K/AKT信号通路探讨中医药治疗肺癌研究进展

磷脂酰肌3-激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路是生物体内重要的信号转导系统之一,具有调节细胞生长、分化、凋亡等多种功能,与肺癌细胞的增殖、凋亡、自噬、侵袭转移、上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)等细胞活动密切相关。中医药可以通过干预PI3K/AKT通路及其相关靶点蛋白调节细胞周期蛋白与凋亡相关蛋白的表达,从而抑制增殖、诱导凋亡;通过上调自噬相关蛋白的表达,促进肺癌细胞自噬;通过下调基质金属蛋白酶(matrix-metalloproteinase, MMP)的表达,降低肺癌细胞侵袭转移能力;通过多靶点、多机制逆转EMT和耐药。但是,中医药基于PI3K/AKT信号通路治疗肺癌的研究也存在许多不足：(1)PI3K/AKT信号通路与多条通路纵横交错,许多研究发现,中医药可以同时影响多条信号通路的表达,但各条通路之间的相互影响与相互作用尚未阐明。(2)PI3K/AKT信号通路作用广泛,多数研究仅证实中医药的抗肺癌作用与通路...     

骨桥蛋白通过PI3K/AKT/mTOR信号通路调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞自噬和增殖的机制探讨

背景 骨桥蛋白(osteopontin,OPN)可参与低氧引起的血管重塑,使肺动脉压力升高。但OPN调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)自噬在低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)形成中的作用机制尚不明确。目的 探讨低氧条件下OPN对PASMCs增殖及通过PI3K/AKT/mTOR通路对PASMCs自噬的调控作用。方法 原代分离PASMCs,采用免疫细胞化学法进行平滑肌细胞鉴定。将细胞分为常氧对照组(Normoxia)、低氧对照组(Hypoxia)、低氧+OPN干扰空病毒组(H+OPN EV)、低氧+OPN干扰慢病毒组(H+OPN shRNA)、低氧+PI3K抑制剂LY294002组(H+LY)。各组分别用EdU阳性标记率法检测细胞增殖能力;Western blot法检测各组PASMCs中的OPN、PI3K、AKT、mTOR及自噬相关蛋白Beclin1、LC3B的表达;透射电镜、免疫荧光法观察各组PASMCs自噬情况。结果 与Normoxia组相比,...     

电针联合丰富康复训练对局灶性脑缺血大鼠PI3K/AKT信号通路的影响

目的 探讨电针联合丰富康复训练对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase,PI3K/AKT）信号通路的影响及血管新生机制。方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、针康组、抑制剂组,每组15只,参照Longa线栓法建立局灶性大脑中动脉缺血动物模型。针康组于模型复制后给予电针及康复治疗,电针取穴“百会”“风府”“内关”“心俞”,每日1次,连续治疗7 d。抑制剂组侧脑室注射AKT阻断剂后,进行电针联合康复训练干预,每日1次,连续治疗7 d。干预结束后,比较各组大鼠神经功能评分、脑梗死面积,分别采用免疫组织化学法和Western blot法检测缺血侧脑组织中PI3K、AKT蛋白的表达水平。结果 与假手术组比较,模型组神经功能缺损评分显著增加（P＜0.05）,梗死面积显著增大（P＜0.05）,缺血侧脑组织中PI3K、AKT蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与模型组比较,针康组神经功能缺损评分显著降低（P＜0.05）,脑梗死面积显著缩小（P＜0.05）,缺血侧脑组织PI3K、AKT蛋白表达水平显著增加（P＜0.05）;与针康组比较,抑制剂组大鼠神经功能缺损评分显著增加（P＜0.05）,脑梗死面积显著增大（P＜0.05）,缺血侧脑组织PI3K、AKT蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 电针联合丰富康复训练可有效促进脑缺血大鼠神经功能恢复,减小脑梗死面积,这可能与其激活PI3K/AKT信号通路,诱导血管新生有关。     

自噬基因Beclin1在卵巢癌SKOV3细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响及其与紫杉醇耐药关系实验研究

目的:探究自噬基因Beclin1在卵巢癌SKOV3细胞中对PI3K/AKT信号通路的影响,并分析其与紫杉醇耐药的关系.方法:以人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株SKOV3/TXA作为研究对象,构建自噬基因Beclin1真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,并通过试剂盒将其转染至SKOV3细胞中.采用MTT实验测定各组细胞...     

骨关节炎大鼠模型软骨组织中PI3K/AKT信号通路功能与细胞凋亡的相关性研究

目的:研究骨关节炎(OA)大鼠模型软骨组织中脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路功能与细胞凋亡的相关性。方法:选择清洁级雄性Wistar大鼠作为实验动物,并随机分为OA模型组和对照组;采用木瓜蛋白酶溶液与L-半胱氨酸关节腔内注射的方式建立OA模型。造模后第4周和第8周时,测定关节软骨中PI3K/AKT信号分子、炎症介质、细胞凋亡标志分子、细胞自噬标志分子的表达量。结果:OA组大鼠关节软骨组织中p-PI3K、pAKT的表达量显著低于对照组;OA组大鼠关节软骨组织中白介素(IL)-1β、IL-6、IL-17、IL-18、eIF4E、Bax、Caspase-3、mTOR、Beclin1、Atg5、Atg7的表达量显著高于对照组,且与p-PI3K、p-AKT的表达量呈负相关,Bcl-2的表达量显著低于对照组且与p-PI3K、p-AKT的表达量呈正相关。结论:骨关节炎大鼠模型软骨组织中PI3K/AKT信号通路功能的抑制能够促进软骨细胞的凋亡和自噬。     

中药基于PI3K/AKT/mTOR信号通路治疗膝骨关节炎

磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositiol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路在膝骨性关节炎(knee osteoarthritis, KOA)的形成、发展和治疗中起着关键作用,其在软骨增殖与凋亡、软骨下骨重塑和滑膜炎症中扮演重要角色。抑制PI3K/AKT/mTOR信号传导,能够促进自噬,减轻关节炎症反应,恢复关节稳态;激活PI3K/AKT/mTOR信号传导,可以促进软骨细胞增殖分化,减少凋亡。以中药单体和中药复方为研究对象,依据中药基于PI3K/AKT/mTOR信号通路分析其促进软骨细胞增殖、减少凋亡、抑制炎症反应、增强软骨细胞自噬、恢复关节稳态、减轻关节损伤等方面的机制,以期为KOA的临床治疗及基础研究提供思路。     

基于PI3K/AKT信号通路的中药单体治疗肺癌的研究进展

肺癌是一种发病率较高的恶性肿瘤,是威胁人类生命健康的重大疾病.中药单体是从中药材中提取出的主要有效成分.近年来,有多篇文献报道中药单体通过调控PI3K/AKT信号通路抑制肺癌细胞增殖、侵袭和迁移,并诱导肺癌细胞凋亡.PI3K/AKT信号通路在肺癌发生和发展的过程中扮演着一个重要的角色,PI3K/AKT信号通路的异常激活...     

中药布鲁生调节PI3K/AKT /mTOＲ 信号通路在胶质母细胞瘤增殖、迁移和自噬中的作用

目的: 探讨布鲁生调节PI 3 K－AKT－mTOＲ 信号通路对胶质母细胞瘤增殖、迁移和自噬中的影响方
法:将U 251 胶质母细胞瘤细胞分为A、B、C、D 四组,A 组:作为对照,B 组:布鲁生处理;C 组:PI 3 K inhibitor 处
理;D 组:布鲁生与PI 3 K inhibitor 处理,MTT 法检测U 251 胶质母细胞瘤细胞存活;划痕实验检测细胞迁移能
力;ＲT－PCＲ 法检测布鲁生对PI 3 K、AKT、mTOＲ mＲNA 的变化,Western blot 检测PI 3 K、AKT、mTOＲ 、LC 3－Ⅰ、
LC 3－Ⅱ、Beclin－1 蛋白的变化。结果: B、C、D 三组均显著抑制U 251 胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移,但D 组抑
制效果更显著(P＜0．05),B、C、D 三组PI 3 K、AKT、mTOＲ mＲNA 和蛋白水平表达均下调,LC 3－Ⅰ、LC 3－Ⅱ、
Beclin－1 mＲNA 和蛋白水平表达均上调,且D 组与B 组和C 组具有显著差异性(P＜0．05)。结论: 布鲁生可通过
抑PI 3 K/AKT/mTOＲ 信号通路减弱胶质母细胞瘤增殖和迁移,并促进自噬。     

氧化三甲胺通过PI3K/AKT/SREBP1通路诱导肾纤维化

目的 探讨尿毒症毒素氧化三甲胺（trimethylamine N-oxide, TMAO）在肾脏纤维化中的作用及其机制。方法 将20只雄性BALB/c小鼠随机平均分为对照组和TMAO组,每组10只。对照组腹腔注射生理盐水,TMAO组腹腔注射含TMAO的生理盐水[20 mg/(kg·d)],每日1次,持续8周;使用HE染色与Masson染色法观察分析小鼠肾脏切片病理及纤维化水平;采用免疫组化法检测肾脏组织中α-肌动蛋白（alpha smooth muscle actin, α-SMA）、重组人纤维连接蛋白片段（recombinant human fibronectin fragment, Fibronectin）、胆固醇调节元件结合蛋白-1(sterol-regulatory element binding protein 1, SREBP1)水平;采用Western blot检测肾脏组织中α-SMA、SREBP1、磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3kinase, PI3K）、磷酸化PI3K(phospho-PI3K, p-PI3K)、蛋白激酶B(protei...     

miRNA-21对PI3K/AKT通路影响的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)最早是由Victor Ambros和Gary Ruvkun在1993年研究线虫(nematode C.elegans)时发现的类似于siRNA的分子.它由lin-4基因转录生成,但不翻译生成蛋白质,在线虫的发育过程中起着短暂调节作用.目前研究发现,miRNAs负性调控人体约1/3的基因表达[1],其中microRNA-21(miRNA-21)是最受关注的miRNAs分子之一.miRNA-21可作用于不同的靶基因,如人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、程序性细胞死亡因子4(PDCD4)等,通过调控不同的信号通路发挥作用.磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(protein kinase B,PKB,又称Akt)是细胞内重要的信号通路,参与细胞增殖、分化和凋亡等过程的信号转导.     

PI3K/AKT信号转导通路与肿瘤转移及其机制的研究进展

PI3K/AKT信号转导通路与肿瘤的发生发展关系密切,本文概述PI3K、AKT的结构特征、PI3K/AKT信号转导通路的活化及其与恶性肿瘤转移的关系及机制。     

RGFP966通过PI3K/AKT通路抑制胃癌细胞增殖

目的：探讨组蛋白去乙酰化酶3特异性抑制剂RGFP966对胃癌细胞增殖能力和细胞周期的影响及其作用机制。方法：采用CCK-8法检测RGFP966处理MKN-45和MGC-803细胞后各组细胞的活力;细胞克隆形成实验检测RGFP966对胃癌细胞集落形成能力的影响;流式细胞术检测细胞周期;Western blot 实验检测细胞增殖和周期相关蛋白 Ki-67、c-Myc、Cyclin A2、Cyclin D1以及PI3K/AKT 信号通路相关蛋白的表达情况。结果：与对照组相比,RGFP966可显著抑制胃癌细胞MKN-45 和MGC-803的增殖能力、集落形成能力。与对照组相比,流式细胞术显示RGFP966诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期。与对照组相比,RGFP966处理后细胞增殖和周期相关蛋白Ki-67、c-Myc、Cyclin A2、Cyclin D1表达均下降,RGFP966可显著降低PI3K和 AKT的磷酸化水平。结论：RGFP966抑制胃癌细胞的增殖能力并诱导胃癌细胞阻滞在G0/G1期,其作用机制可能与RGFP966 抑制PI3K/AKT信号通路有关。