基于间充质干细胞的小鼠急性移植物抗宿主病骨髓微环境损伤体外细胞模型的建立与评价策略研究

目的:建立小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)骨髓微环境损伤的体外细胞模型并进行评价。方法:以6-8周龄雌性C57BL/6N小鼠作为骨髓和淋巴细胞的供体,6-8周龄雌性BALB/c小鼠作为aGVHD模型的受鼠。受鼠接受致死剂量(8.0 Gy, 72.76 cGy/min)γ射线全身照射后6-8 h内,尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10⁷/只),建立骨髓移植(BMT)组小鼠模型(n=20);尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10⁷/只)及脾脏淋巴细胞(2×10⁶/只),建立小鼠aGVHD模型(n=20)。造模后d 7麻醉小鼠,摘取眼球取血,静置离心后吸取血清。分离小鼠间充质干细胞(MSC),分别用添加了2%、5%和10%的BMT组血清和相同浓度的aGVHD组血清的培养基进行培养。通过成纤维细胞集落形成实验(CFU-F)评价两组血清对MSC集落形成能力的影响;通过CD29和CD105免疫荧光染色评价两组MSC表面分子表达的差异;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nano...     

未成熟树突状细胞诱导半相合骨髓移植免疫耐受的实验研究

目的探讨未成熟树突状细胞(imDC)诱导半相合骨髓移植(HBMT)免疫耐受的疗效。方法用雄性SD大鼠及雌性Wistar大鼠建立HBMT动物模型,取供鼠外周血诱导培养imDC,实验组(n=10):接受HBMT+供鼠imDC输注;对照组(n=10)只接受HBMT;观察比较2组受鼠的急性移植物抗宿主病(aGVHD)发生率及其严重程度。结果 1)实验组受鼠的aGVHD发生率为60%(6/10)明显低于对照组的100%(10/10)(P<0.05);2)实验组受鼠的临床aGVHD评分为(2.7±1.0)分,明显低于对照组的(6.9±1.5)分(P<0.05);3)实验组受鼠小肠aGVHD的发生率44.4%(4/9)明显低于对照组的100%(10/10)(P<0.05)。结论 imDC可降低大鼠HBMT后aGVHD的发生率并减轻大鼠HBMT后aGVHD的严重程度。     

Th17细胞在小鼠移植物抗宿主病发病早期中的作用

目的 探讨Th17细胞在急性移植物抗宿主病(aGVHD)发病早期的作用及机制.方法 以C57/B6为供鼠,BABL/c为受鼠,致死性全身照射(TBI)后输注供鼠骨髓细胞和脾细胞混合细胞悬液,建立小鼠aGVHD模型.实验分为4组:正常对照组;单纯照射组(IRD);异基因骨髓移植(alloBMT)+二甲基亚砜(DMSO)组;allo-BMT+常山酮(HF)组.从-1 d开始到+10 d,观察小鼠弓背、翘毛、体质量变化等aGVHD的表现并进行临床评分.动态观察小鼠aGVHD发生及存活情况.取小鼠的肝、小肠和皮肤进行病理学分析.用流式细胞术检测移植后小鼠Th1/Th17亚群的变化.结果 移植后实验组小鼠均发生aGVHD,allo-BMT+HF组小鼠aGVHD表现较allo-BMT+DMSO组小鼠严重.病理学分析示allo-BMT+HF组小鼠皮肤损伤较轻,而肝脏和小肠损伤较重,与allo-BMT+DMSO组比较,+6 d allo-BMT+HF组Th17细胞比例明显下降(分别为1.04%和0.71%),Th1比例明显升高(分别为5.35%和12.81%),Th1/Th17比值显著升高(P<0.05).结论 异基因造血干细胞移植早期阻断Th17导致Th1比例明显升高(5.31和18.07),加重aGVHD.

Abstract：

Objective To explore the role of Th17 cells in early onset of acute graft-versus-host disease(aGVHD) and its mechanism. Methods Mice aGVHD model was established by irradiated BABL/c mice inoculated with mixed suspension of C57BL/6 bone marrow cells and splenocytes. The mice were divided into 4 groups:①normal control,②irradiated group, ③allo-BMT + DMSO group,④allo-BMT + halofugine (HF) group. HF was given intraperitoneally at 5 μg per mouse from -1 d to + 10 d after allogeneic bone marrow transplantation(allo-BMT). Mice aGVHD symptoms and survival were observed. Th1/Th17 cells ratio was evaluated by flow cytometry. Results All the experimental groups ③ and ④developed aGVHD after transplantation. More severe aGVHD was observed in group ④than in group ③. HF prevented cutaneous aGVHD in all the mice, but augmented hepatic and small intestine GVHD. The percentage of Th17 cells and the ratio of Th1/Th17 were significantly higher while the percentage of Th1 cells was significantly lower in group ④ at day+6(P<0.05). Conclusion Early blockage of Th17 cell results in increase of Th1 cell percentage, which exacerbates aGVHD.     

基质金属蛋白酶抑制剂对小鼠急性移植物抗宿主病的预防作用

目的探讨基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)对小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防作用。方法用主要组织相容性复合物完全不相合的纯种近交系小鼠[供鼠为雌性 C57B/L6(H-2~b)鼠;受鼠为雄性 BALB/c(H-2~d)鼠]建立 allo-HSCT 后 aGVHD 动物模型。将小鼠随机分3组,给予 TIMP(A 组)、环孢菌素 A(CsA)(B 组)作为 GVHD 的预防方案。结果移植小鼠出现典型的 aGVHD 症状,未用 aGVHD 预防方案的移植小鼠(C 组)死亡高峰在移植后第5天～第7天,全部死亡。用 aGVHD 预防方案的 A 组和 B 组小鼠 aGVHD 症状明显减轻,平均生存时间较 C 组显著延长[分别延长(4.8±1.4) d 和(4.3±0.9)d,p<0.05]。不同 aGVHD 预防方案的移植小鼠之间,移植后外周血常规变化差异无统计学意义。应用预防方案后,移植小鼠 aGVHD 病理表现减轻。结论 TIMP 能有效预防小鼠 allo-HSCT 后 aGVHD,减轻其症状和病理损害程度,显著延长平均生存时间。TIMP 对造血干细胞植入和造血恢复无显著影响。     

短肠综合征患儿促进肠道适应的影响因素及管理策略的研究进展

<正>短肠综合征患儿(short bowel syndrome,SBS)系指由于小肠大部分切除、旷置或先天性短肠等，导致小肠吸收能力受限，无法满足患儿正常生长发育的需求，需要肠外营养(parenteral nutrition,PN)支持42d以上者^[1]。肠切除术后早期，残余肠道为了代偿肠黏膜大面积缺失，而出现自发性结构和功能改变，以提高其对能量、水分和营养物质的吸收能力，此过程即肠道适应(intestinal adaptation)。     

骨髓间充质干细胞联合骨髓单个核细胞对肠辐射损伤修复作用的研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)在肠道辐射损伤修复中的作用。方法:体外培养C57BL/6雄性小鼠的骨髓MSCs,通过诱导其向脂肪细胞、成骨细胞分化的方法进行鉴定。将受鼠C57BL/6雌性小鼠随机分成照射对照组(组Ⅰ)、骨髓单个核细胞组(组Ⅱ)和骨髓MSCs+骨髓单个核细胞组(组Ⅲ),给予60Coγ射线全身致死量照射后,组Ⅰ不做处理,组Ⅱ2h内尾静脉移植C57BL/6雄性小鼠的骨髓单个核细胞,组Ⅲ移植骨髓MSCs和骨髓单个核细胞。观察各组小鼠4周的生存率、病理切片等指标,并用PCR检测雌性受鼠体内Y染色体的Sry基因,确定供体干细胞的植入情况。结果:组Ⅲ的生存率较其他两组显著升高(P﹤0.05),病理切片显示肠道损伤有明显修复,PCR检测显示修复的细胞来源为供鼠细胞。结论:骨髓MSCs联合骨髓单个核细胞移植有促进肠道辐射损伤修复的作用,其作用优于单纯的骨髓单个核细胞移植,为骨髓MSCs用于修复肠道辐射损伤提供了实验依据。     

游泳对小鼠肠动力功能的影响

目的：观察游泳对小鼠小肠推进运动的影响。方法：以昆明种小鼠为实验动物，随机分为2组：对照组，实验组；以小肠推进百分比为指标观察小鼠游泳前、20min游泳中、游泳后20min小肠推进运动的变化。结果：20min游泳运动中小鼠小肠推进百分比降低，对照组为(60&;#177;7)％，实验组为(37&;#177;5)％；游泳运动后20min小鼠小肠推进百分比提高，对照组为(61&;#177;4)％，实验组为(66&;#177;5)％，差异均有显著性意义(t=10．254，2．908，P=0．000，0．008)。结论：20min游泳运动中小鼠肠动力减弱；游泳运动后小鼠肠动提高。     

TLR5激动剂鞭毛蛋白预防小鼠异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的初步研究

本研究旨在探讨Toll样受体(TLR5)激动剂鞭毛蛋白(flagellin)对小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防作用和可能作用机制。用主要组织相容性抗原完全不合的纯种近交系小鼠〔供体鼠:雄性C57BL∕6鼠;受体鼠:雌性BALB∕c鼠〕建立allo-HSCT的aGVHD动物模型。受鼠随机分为3组:鞭毛蛋白组,于移植前后2次尾静脉注射高纯度(纯度≥95%)的鞭毛蛋白50μl〔5μg∕(只.次)〕预防aGVHD;单纯移植组,移植后仅给予等容量PBS;单纯照射组,仅照射不移植,亦给予等容量PBS。观察比较移植后aGVHD的表现。结果表明,移植小鼠均出现典型的aGVHD症状,单纯移植组小鼠死亡高峰在移植后第4-5天。用鞭毛蛋白作为aGVHD预防方案小鼠的aGVHD症状明显减轻,平均生存时间较单纯移植组显著延长(P<0.05)。三组小鼠移植前外周血白细胞数比较均无显著性差异,但在照射后第14、21天,鞭毛蛋白组较单纯移植组外周血白细胞数显著性升高(P<0.05)。鞭毛蛋白预防组移植小鼠aGVHD病理表现较单纯移植组明显减轻。流式细胞仪检测鞭毛蛋白组与单纯移植组移植前后不同时间点Treg细胞/CD4+T细胞含量结果也表明,移植后2-4周鞭毛蛋白组小鼠的Treg细胞数较单纯移植组明显增加(P<0.05)。结论:鞭毛蛋白对小鼠allo-HSCT后发生aGVHD有预防作用,能减轻其症状和病理损害程度,显著延长其平均生存时间,其机制有可能通过增加移植后小鼠的Treg细胞含量,从而有效改善并减轻移植后小鼠aGVHD。     

血清淀粉样蛋白A1和转化生长因子-β1在敌草快中毒小鼠急性肺损伤中的表达及意义

目的:观察血清淀粉样蛋白A1(SAA1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在敌草快(DQ)中毒小鼠急性肺损伤中的表达及意义。方法:将128只SPF级健康雌性C57小鼠随机分为对照组(N组,n=32)和模型组(DQ组,n=96),模型组予实验首日一次性腹腔分别注射DQ 20、30、40 mg/kg复制中毒小鼠模型,对照组予注射等剂量生理盐水,常规饲养。于模型建立后第1、3、5、7天分4批次处死小鼠并取材。检测小鼠肺湿/干重比,苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化,酶联免疫吸附法检测小鼠血清SAA1的表达情况,免疫荧光定量PCR法检测小鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达的情况。结果:与对照组相比,模型组小鼠肺组织炎症损伤严重,血清SAA1含量明显增多(P0.05);肺组织TGF-β1 mRNA的表达均增高(P0.05)。结论:SAA1和TGF-β1在DQ中毒小鼠肺损伤中显著增高,参与其炎症过程,并可能在其病程进展中发挥重要作用。     

GVHD靶器官中浸润CD3~+T细胞动态变化与组织损伤关系

目的:探讨T细胞在小鼠异基因造血干细胞移植术后急性移植物抗宿主病(aGVHD)靶器官中的浸润及其变化趋势,并研究其与靶组织病理损伤和a GVHD进展的相关性。方法:以8-10周龄雄性C57BL/6(H-2K~b)小鼠为供鼠,获取骨髓细胞、脾单个核细胞,将10-12周龄雄性BALB/c(H-2K~d)小鼠经7.5 Gy全身照射后作为受鼠进行移植。受鼠随机分为异基因骨髓移植(BMT)组和异基因骨髓移植联合脾细胞输注诱导aGVHD(BMT+T)组。移植后每天观察小鼠状态,动态检测各组小鼠体重变化及临床评分;HE染色观察aGVHD靶器官的病理学改变,并做病理评分;免疫组织化学方法动态检测移植后d 7、14、28、40、47靶器官中CD3+T细胞的数量并做数据统计。结果:与BMT组相比,BMT+T组小鼠a GVHD靶器官肝脏、肺以及各段肠道中浸润T细胞数量自移植后d 7开始升高。移植后d 14、28、40、47 BMT+T组小鼠靶组织中浸润的CD3+T细胞较BMT组明显增高(P0.05)。GVHD小鼠的靶器官病理评分和临床评分均明显升高(P0.05)。肝脏中浸润T细胞数量与病理损伤呈正相关,肠道中浸润CD3+T细胞数量与aGVHD临床病理评分亦呈正相关。结论:CD3+T细胞迁移至aGVHD靶组织介导靶器官的病理损伤,T细胞浸润数量是评价aGVHD严重程度的重要指标。     

骨髓间充质干细胞对小鼠急性移植物抗宿主病的预防及治疗作用

目的 观测小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)对急性移植物抗宿主病(aGVHD)的预防及治疗作用,并探讨其干预机制.方法 建立以C57BL/6小鼠为供体、致死剂量照射的BALB/c小鼠为受体的aGVHD动物模型.将小鼠分成6组:PBS组(单纯放射组)、BM组(单纯输注骨髓)、GVHD组(输注骨髓+脾细胞)、MSC-A组(输注骨髓+脾细胞,并于移植当天输注1×10~5 MSC)、MSC-B组(输注骨髓+脾细胞,并于移植当天输注5×10~5 MSC)、MSC-C组(输注骨髓+脾细胞,并于+7 d输注1×10~5 MSC),观测各组的生存状态;绿色荧光蛋白基因(Ad-EGFP)转染MSC,输入aGVHD模型小鼠,观察MSC在靶器官组织中的分布.结果①供体MSC可显著控制小鼠的GVHD症状,延长aGVHD小鼠的平均生存时间:PBS组为(13.5±2.6)d、GVHD组为(11.1±4.0)d,MSC-A组为(26.4±7.7)d、MSC-B组为(22.7±9.2)d,MSC-C组为(22.9±8.2)d,MSC各组与GVHD组比较差异均有统计学意义(P＜0.01),但MSC各组之间无明显差异(P=0.28).病理评估显示MSC可明显减少小肠及脾脏组织中淋巴细胞的浸润,减轻损害.②MSC可明显减少aGVHD环境中Th1类炎性因子的分泌:GVHD、MSC.A、MSC-B、MSC-C各组+14 d外周血上清中IFN-γ的水平分别为(607.9±157.1)、(143.6±37.5)、(117.0±77.8)、(131.4±63.4)ng/L,各组TNF-α的水平分别为(52.31±17.95)、(6.02±3.99)、(5.21±0.28)、(22.39±18.21)ng/L;MSC不影响aGVHD环境中异基因T淋巴细胞的增殖,但促进其凋亡:GVHD、MSC-A、MSC-B、MSC-C各组的CD3+ Annexin V+ PI-细胞率分别为(10.3±6.6)%、(13.5±13.8)%、(19.7±6.0)%、(16.6±7.3)%,其中MSC-B组与GVHD组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).③Ad-EGFP成功高效转染MSC,输注入aGVHD模型鼠6 d后,共聚焦显微镜下发现MSC可大量分布至肺及小肠,而肝、脾及肾脏有少量分布.结论 MSC可促进异基因T淋巴细胞凋亡、抑制其二次活化功能、减少Th1类炎症因子的分泌表达、参与修复aGVHD靶器官组织,可有效防治aGVHD.     

Th17细胞和白介素-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中的免疫调控分析

目的探讨Th17细胞和白介素-17(IL-17)在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)aGVHD中的免疫调控。方法采用野生型(WT)C57BL/6(H-2b)小鼠与C57BL/6(H-2b)IL-17基因敲除(IL-17-/-)小鼠作为供体,采用BALB/C(H-2b)小鼠作为受体,小鼠给予全身照射8.5 Gy进行清髓性预处理,移植野生型(WT)小鼠1×107个去除T细胞骨髓细胞(TCD-BMCs)以及WT小鼠1×106个CD4+IL-17-/-T细胞。移植之后每天对小鼠生存状况进行观察1~2次,每隔5 d对aGVHD进行临床评估。收集实验小鼠肝脏、肺、肠以及皮肤,并进行HE染色并进行病理组织学分析,并对移植后Th17细胞组、CD4+IL-17-/-T细胞组、IL-17-/-BMCs+IL-17-/-SCs组(KK组)、WT BMCs+IL-17-/-SCs组(WK组)及WT BMSCs+WTSCs组(WW组)小鼠的aGVHD积分进行评估。结果 1Th17细胞组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分均显著高于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05),且Th17细胞组小鼠平均生存时间显著小于IL-17-/-CDD4+T细胞组(P0.05);2KK组、WK组及WW组移植后5 d、10 d、15 d、20 d aGVHD积分差异均具有统计学意义(P0.05),且三组平均生存时间方面的差异也均具有统计学意义(P0.05)。结论 Th17细胞与IL-17在异基因造血干细胞移植aGVHD中具有较好的免疫调控作用。     

地塞米松联合IL-2对供鼠体内调节性T细胞选择性扩增作用及对急性移植物抗宿主病反应的抑制作用

目的 通过地塞米松(Dex)联合IL-2处理小鼠,建立体内扩增调节性T细胞(Treg细胞)的方法 .观察用该方法 处理的小鼠脾细胞移植后受鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生与转归.方法 使用Dex和IL-2处理雄性C57BL/6N供鼠3 d后提取脾单个核细胞(MNC),用流式细胞术(FCM)分析CD4~+ CD25~+、CD25~+ FOXP3~+细胞的变化.,以以上方法 处理的雄性C57BL/6N小鼠为供者,对雌性BALB/c受鼠进行非清髓异基因淋巴细胞移植.移植后观测受鼠的生存率、生存时间、组织病理学变化,以及用PCR和FCM分析测定受鼠嵌合体等来评价aGVHD的发生.结果 经过Dex和IL-2联合处理,供鼠脾CD4~+ CD25~+ FOXP3~+ Treg细胞数量[(24.2±7.6)%]明显高于对照组[(4.0±0.8)%](P=0.01).Dex联合IL-2组供鼠Treg细胞与效应T细胞(Teff)的比值(0.43±0.15)显著高于对照组(0.14±0.01)(P=0.01).经过Dex联合IL-2处理供鼠后进行异基因淋巴细胞移植,受鼠aGVHD明显减轻,中位生存时间＞60 d,与对照组的中位生存时间12 d相比明显延长(P=0.0045).对照组出现典型的aGVHD表现,移植后2周Dex联合IL-2组和对照组的总体死亡率分别为29.4%和71.4%(P＜0.05).结论 经IL-2和糖皮质激素处理供鼠后进行主要组织相容性抗原复合物完全不相合脾淋巴细胞移植能明显减轻aGVHD,显著延长生存时间,可能与供者体内诱导扩增的Treg细胞增加有关.     

受鼠年龄对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生的影响

本研究通过建立2种周龄的小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型,探讨受鼠年龄对小鼠异基因骨髓移植后aGVHD发生的影响。选用近交系8-10周龄C57BL/6(H-2Kb)小鼠作为供鼠,18-20周龄及8-10周龄的BALB/c(H-2Kd)小鼠作为受鼠;两种周龄的小鼠均分为正常对照组、单纯照射组和模型组。单纯照射组及模型组小鼠给予总剂量率为7.5 Gy的60Coγ射线全身照射,其剂量率为0.68 Gy/min。模型组小鼠照射后4 h进行骨髓细胞+脾细胞移植,每只小鼠输入骨髓细胞数5×106个,脾细胞数5×105个。每天观察各组小鼠的一般情况、生存状态。于照射后第5、10、15、20、25、30天计数各组小鼠外周血白细胞数量;采用流式细胞术测定各组小鼠外周血白细胞嵌合率及T淋巴细胞亚群、Th1细胞比例;观察正常对照组、单纯照射组及第5、15和25天模型组小鼠肝脏、小肠和皮肤的组织病理学变化。结果表明:照射后1个月模型组小鼠均发生aGVHD,18-20周龄组小鼠与8-10周龄组相比,移植后aGVHD发生率低(60%vs 100%),临床评分低,生存率比为83%vs 61%,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血白细胞在移植后第10天达到清髓,第15天白细胞开始恢复,而8-10周龄组则分别为移植后第5和第10天,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血供者来源的白细胞在移植后第20天达到完全嵌合,而8-10周龄组为第10天,两组间差异显著;18-20周龄组小鼠外周血T淋巴细胞亚群中CD8+T细胞及Th1细胞比例均低于8-10周龄组,两组间差异显著。组织病理学变化显示,在相同时间点,18-20周龄组小鼠的肝脏、小肠及皮肤的炎症和坏死程度均较8-10周龄组轻微。结论:18-20周龄受鼠比8-10周龄受鼠aGVHD发生率低,程度轻,生存状况较好,受鼠年龄影响aGVHD的发生和进程。     

TGF-β减轻异基因骨髓移植小鼠急性移植物抗宿主病

为了探讨转化生长因子β(TGF-β)对小鼠异基因骨髓移植后急性移植物抗宿主病发生发展的影响,用C57BL/6小鼠作为供鼠,BABL/c小鼠为受鼠,建立小鼠同种异基因骨髓移植模型。BABL/c受鼠随机分为4组:空白对照组、单纯照射组、移植对照组和TGF-β实验组。TGF-β实验组于移植前2天至移植后7天每日皮下注射TGF-β1(1μg/kg)。结果显示:TGF-β实验组小鼠生存时间明显长于移植对照组(p<0.01),TGF-β实验组小鼠小肠、皮肤及肝脏GVHD病理改变明显轻于移植对照组。移植后7天TGF-β实验组小鼠血清IL-2浓度较空白对照组高,但远低于移植对照组;TGF-β实验组血清IL-10浓度明显高于移植对照组。结论:TGF-β能够减轻或抑制小鼠allo-BMT后致死性的aGVHD发生,提高移植后存活率。TGF-β可能使Th1细胞向Th2细胞偏移,抑制IL-2等Th1类细胞因子的分泌,同时促进了Th2类细胞因子IL-10的表达,降低aGVHD的发生。     

新生小鼠肠侧群细胞的体外分离

背景:目前分离干细胞的方法主要基于其细胞标志,近年来发展一种非基于细胞标志的干细胞分离方法,即利用荧光激活细胞分类法将组纵中干细胞和成熟细胞分离.目的:分离新生小鼠小肠黏膜来源的侧群细胞,探讨利用荧光活化细胞分选系统构建鼠肠干细胞群的可行性.方法:取新生小鼠小肠全长,制作小肠黏膜的类器官片段并制备成单细胞悬液.使用Hoechst33342利碘化丙啶染色后用流式细胞仪分选侧群细胞.提取细胞总RNA和蛋白,RT-PCR及Western-blot方法分别检测其中MSI-1 mRNA及MSI-1蛋白的表达水平.结果与结论:新生小鼠来源的小肠黏膜单细胞悬液中包含一个特定的细胞群体即侧群细胞,染包液中加入维拉帕米后,侧群细胞被阻断后消失.侧群细胞中显示有MSI-1mRNA及蛋门的表达.提示新生小鼠的小肠黏膜侧群细胞富集小肠黏膜干细胞,荧光活化细胞分选系统可用于构建鼠肠干细胞群.     

老年COPD合并肺部感染患者肠道菌群分布及其与血清IL-6、SAA、PCT的相关性

目的 观察老年慢性阻塞性肺病(COPD)合并肺部感染患者肠道菌群分布情况,并分析其与血清白介素6(IL-6)、血清淀粉样蛋白A(SAA)、降钙素原(PCT)表达水平的关系。方法 选取华西广安医院225例老年COPD患者,其中168例合并肺部感染(肺部感染组),57例无肺部感染(无肺部感染组),检测其肠道菌群分布及血清IL-6、SAA、PCT,进行相关性分析,并采用Logistic回归模型分析老年COPD合并肺部感染相关危险因素。结果 2组肠道中梭杆菌(t=0.452,P=0.652)、乳杆菌(t=1.444,P=0.150)、拟杆菌(t=1.007,P=0.315)以及肠球菌(t=1.335,P=0.183)数目无显著差异;肺部感染组双歧杆菌明显少于无肺部感染组(t=9.293,P<0.001),肠杆菌明显多于无肺部感染组(t=11.400,P<0.001);2组在吸烟史(χ²=23.705,P<0.001)、糖尿病(χ²=21.500,P<0.001)、血清IL-6(t=34.106,P<0.001)、SAA(...     

益生菌辅助治疗对非霍奇金淋巴瘤患者肠道微生态失衡、T淋巴细胞亚群及食欲调节因子的影响

目的 探讨益生菌辅助治疗对非霍奇金淋巴瘤患者肠道微生态失衡、T淋巴细胞亚群及食欲调节因子的影响。方法 前瞻性选择2022年6月至12月来常州市第一人民医院诊治的非霍奇金淋巴瘤患者120例,根据随机数字表法将患者分为对照组(n=60)与观察组(n=60)。对照组行CHOP方案化疗,观察组在对照组基础上给予双歧杆菌四联活菌片,两组治疗疗程相同。比较两组的临床疗效,对比两组治疗前后的肠道微生态失衡情况、T淋巴细胞亚群水平、ghrelin及leptin水平,对比两组患者治疗期间的不良反应发生情况。结果 观察组的缓解率为81.67%,明显高于对照组(61.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组的肠球菌、肠杆菌、梭杆菌、拟杆菌水平低于对照组,双歧杆菌、乳杆菌高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组肠道微生态失衡比例为8.33%低于对照组(33.33%),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组的CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺明显高于对照组,CD8⁺     

药物去势与异基因造血干细胞移植后胸腺损伤关系的实验研究

目的 探讨促黄体激素释放激素(LHRH)去势对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后小鼠胸腺功能的保护作用.方法 构建C57BL/6→BALB/c小鼠MHC不相合allo-HSCT模型;对急性移植物抗宿主病(aGVHD)严重程度评分;采用蛋白液相芯片技术榆测小鼠胸腺细胞内IFNγ、TNFα和IL-1β表达水平,实时定量PCR分析小鼠外周血T细胞受体重排删除环(sjTREC)水平.结果 单纯allo-HSCT组(A组)、LHRH处理allo-HSCT组(B组)、同基因移植组(C组)三组小鼠均获得造血重建,WBC>1.0×109/L时间分别为(11.2±1.4)、(9.8±0.6)和(9.7±0.7)d(P=0.003).A、B两组aGVHD出现时间分别为(11.4±1.2)d和(14.1±0.7)d(P=0.000),C组未发生aGVHD,A、B组aGVHD发生率为100%.A组和B组aGVHD评分分别为(9.1±0.7)和(5.1±1.0)分(P=0.000).正常受鼠胸腺细胞内IFNγ、TNFα和IL-1β水平分别为(2.3±2.5)、(1.7±1.1)和(1.8±1.2)pg/ml.A、B、C三组IFNγ水平分别为(10.5±2.1)、(6.7±2.1)和(5.2±3.3)ng/ml;TNFα水平分别为(7.0±2.6)、(4.3±0.8)和(3.0±1.8)pg/ml;IL-1β水平分别为(24.9±9.0)、(17.4±3.9)和(10.8±3.1)pg/ml.A、B组IFNγ、TNFα和IL-1β水平比正常受鼠组明显升高(P值均<0.01);C组IFNγ和IL-1β水平明显高于正常对照组(P值分别为0.015,0.013).A组IFNγ、TNFα和IL-1β水平比B组明显升高(P值分别为0.002、0.002、0.004);A组IFNγ、TNFα和IL-1β水平较C组明显升高(P值均为0.000).Linear Regression分析提示,IFNγ和TNFα水平越高,aGVHD评分越高(r2=0.359,P=0.05;r2=0.228,P=0.019).正常受鼠1000个外周血单个核细胞中sjTREC拷贝数为(39.4±44.7).A、B和C组小鼠分别为(12.3±13.0)、(58.0±71.8)和(19.6±14.6),与正常受鼠组sjTRECs水平差异无统计学意义.结论 细胞因子IFNγ、TNFα和IL-1β参与了aGVHD对胸腺的损伤过程;LHRH药物去势能减轻aGVHD对胸腺的损伤,并通过保护胸腺减轻aGVHD的严重程度,其机制可能与降低胸腺细胞内IFNγ、TNFα水平有关.     

脑卒中血清培养骨髓间质干细胞移植对大鼠脑缺血再灌注的影响

目的 观察脑卒中血清预处理的骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)移植对大鼠脑缺血再灌注的影响。方法 分离培养骨髓MSCs并观察细胞形态,流式细胞术检测CD₄₄、CD₉₀、CD₃₄、CD₄₅抗原表达以鉴定细胞。分离缺血性脑卒中和正常大鼠血清,与MSCs共培养,制备SS-MSCs (脑卒中血清),NS-MSCs (正常脑组织血清)及FBS-MSCs (胎中血清)。Zea Longa线栓法制作MCAO大鼠模型,MSCs经尾静脉注射移植,分为MCAO组(等体积PBS)、MCAO+FBS-MSCs组(2×10⁶ cellsFBS-MSCs)、MCAO+NS-MSCs组(2×10⁶ cells NS-MSCs)、MCAO+SS-MSCs组(2×10⁶ cells SS-MSCs),并设sham组(等体积PBS)。监测大鼠MSCs移植后第1、7、14天行为变化。TTC、HE、Tunel染色观察脑组织梗死情况、组织状...