小分子化合物诱导人胚胎干细胞分化为角膜上皮样细胞

背景 角膜缘干细胞缺乏是角膜盲的主要病因,种子细胞来源有限是细胞移植疗法的瓶颈.目的 诱导人胚胎干细胞(human?embryonic?stem?cells,hESCs)分化为角膜上皮祖细胞和成熟的角膜上皮细胞(corneal?epithelial?cells,CECs).方法 采用拟胚体联合小分子化合物(SB505124和IWP-2)及碱性成纤维细胞生长因子(basic?fibroblast?growth?factor,bFGF)对人胚胎干细胞H9系(hESCs?H9)进行诱导,分别于诱导10?d、15?d和20?d时观察细胞形态,用免疫荧光法和实时定量PCR法对特征性标志物OCT4、SOX2、ΔNp63、CK14、CK3和CK12进行基因及蛋白水平的检测.结果 小分子化合物诱导后胚胎干细胞形态改变,类似角膜上皮细胞形态.诱导后干性标志物OCT4和SOX2表达下调(P均<0.01),角膜上皮祖细胞及角膜上皮细胞标志物ΔNp63、CK14、CK3和CK12表达均上调(P均<0.05).结论 通过拟胚体联合小分子化合物的方法,可以将ESCs诱导为角膜上皮样细胞.     

异种角膜缘上皮移植治疗碱烧伤动物的实验研究

[目的]观察异种角膜缘上皮早期移植对兔角膜碱烧伤的治疗效果。[方法]用鲤鱼角膜作异种角膜缘上皮移植的角膜来源，对角膜缘碱烧伤的兔动物模型进行异种角膜缘干细胞上皮移植术，观察术后新生血管长入角膜的情况以及基质中的炎症反应。[结果]异种角膜缘上皮移植术后，植片与植床粘附良好，基质中细胞浸润减轻，新生血管长入减少，实验组与对照组之间存在显著差异。[结论]异种角膜缘干细胞上皮移植术治疗角膜碱烧伤可减少角膜新生血管的形成，维持角膜缘的细胞屏障功能。     

培养角膜上皮和自体角膜缘移植治疗眼表损伤的比较

目的比较培养角膜上皮移植和自体角膜缘移植治疗严重眼表损伤的效果.方法对去除全角膜缘的新西兰大白兔行培养自体角膜上皮和自体角膜缘联合羊膜移植,观察术后角膜形态改变,并进行组织学和免疫细胞化学检测.结果培养角膜上皮移植后兔眼表面平整稳定,角膜中央无新生血管生长,自体角膜缘联合羊膜移植后兔眼表面不同程度结膜上皮化,两者治疗效果有显著性差异.结论培养角膜上皮移植能有效治疗以角膜缘干细胞受损为特征的严重眼表损伤.     

培养角膜上皮和自体角膜缘移植治疗眼表损伤的比较

目的比较培养角膜上皮移植和自体角膜缘移植治疗严重眼表损伤的效果。方法对去除全角膜缘的新西兰大白兔行培养自体角膜上皮和自体角膜缘联合羊膜移植,观察术后角膜形态改变,并进行组织学和免疫细胞化学检测。结果培养角膜上皮移植后兔眼表面平整稳定,角膜中央无新生血管生长,自体角膜缘联合羊膜移植后兔眼表面不同程度结膜上皮化,两者治疗效果有显著性差异。结论培养角膜上皮移植能有效治疗以角膜缘干细胞受损为特征的严重眼表损伤。     

自体MSC移植修复兔角膜碱烧伤的研究

目的:观察中度角膜碱烧伤后自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植后受损角膜的形态学变化,探讨BMSCs可能的修复作用。方法:体外分离培养得到BMSCs,生物学鉴定。制备中度角膜碱烧伤模型,移植后28d观察角膜透明度、角膜新生血管(CNV)。结果:兔BMSCs呈长梭形的成纤维细胞样形态。高表达CD29,低表达CD34。碱烧伤后裂隙灯下观察见符合中度角膜碱烧伤模型:角膜上皮剥脱,基质轻度浑浊,角膜缘缺血<1/2,球结膜水肿,虹膜细微结构窥不清楚。BMSCs移植后28d时实验组角膜较对照组透亮,新生血管面积减少。结论:兔角膜碱烧伤后行自体MSC一定程度上抑制了角膜新生血管的生长,促进受损角膜愈合。     

Transplantation of corneal stem cells cultured on amniotic membrane for cornea l burn: experimental and clinical study

目的：探讨离体培养的角膜干细胞增殖分化特性,观察干细胞羊膜移植片治疗角膜缘功能障碍的效果。方法：用克隆形成率（colony-forming efficiency,CFE）、免疫组织化学染色等方法观察培养角膜干细胞的增殖力和分化表达状况。角膜干细胞培养后接种生长于羊膜上进行干细胞羊膜片移植,观察角膜上皮、组织浸润和新生血管情况。结果：原代和传第1代角膜干细胞具有高增殖力,部分表达角质蛋白K3,角膜干细胞在羊膜上能够继续增殖分化为多层细胞结构的角膜上皮细胞层;角膜干细胞移植术后可以在角膜比存活,角膜比移植片紧密贴附,角膜上皮完整,经度基质炎性浸润,浅层新生血管减少,深层新生血管充盈减轻,睑球粘连得到松解。结论：角膜缘干细胞羊膜片移植治疗角膜缘功能障碍能够使患获得进一步进行角膜移植的条件。     

胚胎干细胞联合羊膜移植治疗早期严重眼化学伤的实验研究

[目的]探讨应用胚胎干细胞联合羊膜移植治疗早期严重眼化学伤.[方法]将培养的表达绿色荧光蛋白的胚胎干细胞(ES-GFP细胞)接种于羊膜,5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)标记后对严重化学伤模型眼行胚胎干细胞羊膜移植,实验共分3组,对照组、单纯羊膜移植、羊膜 ES细胞移植组,每组12只12眼,通过荧光示踪、病理学、免疫组织化学等检查,观察胚胎干细胞的生长分化和移植治疗效果.[结果]ES-GFP细胞能贴附在羊膜上呈集落状生长,移植治疗术后第14天,角膜溃疡穿孔:对照组5眼、单纯羊膜移植2眼、羊膜 ES细胞移植组0眼,对照组和羊膜 ES细胞移植组比较,P=0.037<0.05;角膜新生血管和角膜混浊:对照组、单纯羊膜移植组和羊膜 ES细胞移植组得分分别为3.57±0.53,2.20±0.41,1.40±0.36,和3.72±0.49,2.8±0.42,2.25±0.45,羊膜 ES细胞移植组与对照组和单纯羊膜移植组比较P均<0.01;病理学等检查羊膜 ES细胞移植组:角膜表面羊膜呈均匀红染的纤维样结构,羊膜下多层上皮样细胞,角膜基质少量细胞浸润,新生血管少见,后弹力层轻度肿胀,上皮细胞AE-5染色阳性,细胞核内可见BrdU阳性颗粒,荧光显微镜检查角膜上皮层可见绿色荧光带.[结论]以羊膜为载体培养ES细胞,移植到早期严重眼化学伤的眼表,ES细胞诱导分化为角膜上皮样细胞.ES细胞联合羊膜移植能抑制角膜新生血管、减轻炎症反应、减少角膜溃疡穿孔.ES细胞联合羊膜移植可能为早期严重眼化学伤的临床治疗提供一条新途径.     

自体角膜缘干细胞移植和羊膜移植治疗翼状胬肉的疗效观察

目的观察自体角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉术后临床效果。方法翼状胬肉86例（90眼）,随机分为两组。角膜缘干细胞组45例（47眼）行胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植;羊膜组41例（43眼）行胬肉切除联合羊膜移植。观察术后角膜愈合情况、羊膜上皮化、新生血管及胬肉复发情况。结果两种术式产生的不适症状时间相似。自体角膜缘干细胞移植后角膜创面愈合稍快于羊膜移植组。羊膜上皮化时间4～7 d。随访6个月至2年干细胞组胬肉复发2眼,羊膜组胬肉复发3眼。除复发病历外,手术区1个半月后均无明显新生血管生长。结论角膜缘干细胞移植及羊膜移植均有助于降低翼状胬肉术后复发率,是治疗翼状胬肉的良好术式。两种手术方式差异无统计学意义。     

无血清培养的角膜缘干细胞的生物学特性

目的 分析无血清培养基对兔角膜缘干细胞培养的影响.方法 获取兔角膜缘组织,酶分离后获得单细胞悬液进行体外无血清培养,观察其细胞克隆能力,并以羊膜为载体进行有血清条件下诱导分化的观察,采用免疫细胞化学技术检测培养细胞的PCNA、AE1、AE5的表达.结果 在无血清培养条件下角膜缘细胞具有细胞克隆能力,PCNA表达阳性,AE1呈阳性,AE5呈阴性,在羊膜载体上经血清诱导,出现AE5阳性的呈多角形胞体的上皮样细胞,在羊膜上排列呈复层.结论 应用无血清培养基培养兔角膜缘干细胞能获得成功,为体外培养扩增角膜缘干细胞提供了新的选择.     

角膜缘干细胞移植治疗烧伤后角膜血管翳的临床研究

目的治疗眼烧伤后角膜血管翳。方法采用自体或异体角膜缘干细胞移植联合新角膜移植治疗43例烧伤后角膜血管翳。结果自体角膜缘干细胞移植24例，视力增进22眼，新生血管消退。异体角膜缘干细胞移植19例，全部病例新生血管未见消退，视力增进不明显。自体角膜缘干细胞移植可为烧伤患者提供上皮再生来源，有效的阻止新生血管侵入角膜。     

角膜缘干细胞在眼表疾病中的重建作用研究进展

正常角膜上皮的完整性依赖于基底层角膜缘干细胞的不断增殖，角膜缘干细胞的增殖和分化对角膜上皮的再生起着重要作用，如果角膜缘干细胞因各种原因严重缺乏和位置改变，会导致持续性角膜上皮糜烂、角膜上皮结膜化、角膜新生血管和假性胬肉形成等，角膜的完整性和透明性将受到破坏。本文对角膜缘干细胞的特点、临床意义、各种干细胞移植术、干细胞的体外培养移植术、羊膜制备、羊膜特点、羊膜移植及作为载体的移植和移植术后的并发症中的排斥反应等进行综述，以便对角膜缘干细胞进行更进一步的研究。     

利用表皮干细胞治疗兔角膜缘干细胞缺损

目的利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞在体外构建双层组织工程角膜,并修复兔角膜缘干细胞的缺损.方法建立兔角膜缘干细胞缺损模型,以去细胞猪角膜基质片作为支架材料,以自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞作为种子细胞,在体外构建组织工程角膜,并用来修复兔角膜缘干细胞缺损.结果利用自体表皮干细胞与异体角膜基质细胞复合异种去角膜基质片在体外成功构建组织工程角膜;构建的组织工程角膜与正常角膜相似,具有上皮层和基质层;用组织工程角膜修复兔角膜缘干细胞缺损3个月后,损伤角膜透明度恢复良好,组织学结构基本恢复正常.结论成功构建了兔的双层组织工程眼角膜,并修复了兔角膜缘干细胞缺损.     

羊膜和角膜干细胞移植治疗眼表疾病临床观察

目的:探讨羊膜和角膜干细胞移植治疗眼表疾病临床疗效。方法:对我院2011年11月至2013年11月收治的经手术指证的各类眼表疾病患者进行抽样,选取312例患者随机分成2组进行对比观察,即实验组与对照组,每组156例,其中实验组予以羊膜联合角膜缘干细胞移植术,对照组予以自体角膜缘上皮移植术,比较两组患者术后眼表上皮修复时间、炎症反应、新生血管、视力等状况。结果:在眼表上皮修复时间上,实验组为(3.1±0.3)d,对照组为(3.4±0.2)d,差异有显著统计学意义(P0.05);在术后复发上,实验组复发2例,总复发率为1.28%,对照组复发12例,复发率为7.69%,差异有显著统计学意义(P0.05);针对术后视力提高情况而言,实验组视力提高有136例(87.18%),对照组视力提高患者有50例(32.05%),差异有显著统计学意义(P0.05)。结论:角膜缘干细胞联合羊膜能够有效恢复角结膜屏障功能,抗炎、抑制新生血管效果显著,同时具有纤维化与伤口愈合促进作用。     

兔角膜缘上皮细胞培养联合羊膜行自体移植的实验研究

目的：用体外培养的角膜缘上皮细胞联合人羊膜的方法，行自体移植治疗角膜缘干细胞完全缺乏的兔眼。方法：制作10只兔右眼于细胞缺乏的模型，取其中7只兔的左眼上方角膜缘取一小块组织进行体外培养，并传代在无上皮细胞的人羊膜上。1个月后，手术切除10只兔受伤眼角膜表面被覆的新生血管膜和结膜上皮，7眼接受了含自体培养上皮细胞的羊膜移植，另3眼仅移植无上皮细胞的羊膜。结果：1周后原代培养的角膜缘上皮细胞融合，传代至无上皮细胞的人羊膜上继续生长2～3周，角膜上皮细胞可牢固的附着于羊膜上。移植了含有角膜上皮细胞的羊膜的兔子，术后早期都形成了角膜上皮化，并明显抑制了新生血管的再生，而接受羊膜移植的兔子，术后又出现明显的新生血管。结论：利用无上皮细胞的羊膜作为载体，培养角膜缘上皮细胞并自体移植可以恢复角膜上皮化、抑制新生血管生长。     

手术切除联合羊膜和角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉临床研究

目的探讨手术切除联合羊膜和角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的临床效果。方法对28例(30眼)翼状胬肉患者施行手术切除联合羊膜和角膜缘干细胞移植治疗(研究组),记录角膜切口表面、角膜缘干细胞移植片状况、新生血管、纤维组织增生、羊膜移植片状况等,并与单纯切除及巩膜暴露的对照组30例(30眼)比较。结果研究组术后角膜修复时间比对照组明显缩短(P<0.01),总治愈率也显著高于对照组(P<0.05)。结论手术切除联合羊膜和角膜缘干细胞移植是治疗翼状胬肉安全、有效的方法。     

脂肪干细胞构建组织工程化角膜基质组织

 目的 探讨以可降解高分子材料聚羟基乙醇（polylactic-co-glycolic acid,PLGA）为支架,复合自体脂肪干细胞构建组织工程角膜基质修复角膜基质层缺损的可行性。方法 兔脂肪干细胞（rabbit adipose derived stem cells,rASCs）培养至第4代接种在PLGA载体支架上,扫描电镜观察细胞在支架上生长黏附情况。体外培养7天后将rASCs-PLGA复合物回植到角膜基质缺损模型的兔角膜基质层间,术后第12周和24周取材行组织学和透射电镜超微结构观察。未接种细胞的PLGA材料移植基质层间作为对照组。结果 细胞在PLGA支架上生长增殖良好,实验组移植术后12周材料降解,角膜基本恢复透明。组织学检查显示移植后24周新生角膜基质样组织与正常角膜基质组织相似,电镜下胶原纤维直径与正常角膜基质组织比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脂肪干细胞可作为种子细胞来源用于构建组织工程角膜基质。     

培养兔角膜缘干细胞自体移植治疗眼表碱烧伤研究

目的：探讨培养兔角膜缘干细胞，自体移值治疗眼表碱烧伤的可行性。方法：体外培养兔角膜缘干细胞，传代于去上皮羊膜，自体移植治疗眼表碱烧伤；术后应用裂隙灯观察、免疫组化、透视电镜等方法，与单纯羊膜移植组疗效进行对比。结果：体外培养细胞既有角膜上皮特性，又具有强的增殖潜力。培养细胞移植组术后角膜上皮完整，炎症化、血管化减轻，与单纯羊膜移植组各项指标差异有显著性意义。结论：培养角膜缘干细胞移植术可有效重建眼表。     

角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉的效果观察

目的观察自体角膜缘干细胞移植与羊膜移植治疗翼状胬肉术后临床效果。方法翼状胬肉288例（302眼），随机分为A、B两组。A组144例（156眼）行胬肉切除联合自体角膜缘干细胞移植；B组144例（156眼）行胬肉切除联合羊膜移植。观察术后患者自觉症状，角膜愈合情况，新生血管及胬肉组织增生。结果翼状胬肉切除联合角膜缘干细胞较联合羊膜移植术后不适症状轻、时间短、角膜创面愈合快。随访1～3a角膜缘干细胞移植胬肉复发10眼，羊膜移植胬肉复发13眼，睑球粘连2眼。结论角膜缘干细胞移植及羊膜移植均有助于降低翼状胬肉术后复发率，是治疗翼状胬肉的良好术式。但二者相比较前者术式优于后者，是处理翼状胬肉最佳术式。     

去上皮羊膜上培养兔角膜缘干细胞的实验研究

目的探讨去上皮羊膜上培养兔角膜缘干细胞的可行性。方法取小块兔角膜缘组织,采用组织块 细胞悬液共培养,待细胞长至对数生长期,分别传代于去上皮羊膜和完整羊膜,甲基偶氮蓝比色(MTT)法对比两组细胞增殖率,并行AE_5免疫鉴定。结果原代细胞接种7d左右,生长至对数生长期,细胞融合成单层。去上皮羊膜组细胞传代培养效果明显优于完整羊膜组。AE_5单克隆抗体染色强阳性。结论去上皮羊膜上培养出的兔角膜缘组织既有角膜上皮特性,又具有强的增殖潜力。     

自体角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗陈旧性眼部化学伤的疗效观察

目的探讨自体角膜缘干细胞联合羊膜移植治疗陈旧性眼部化学伤的临床疗效。方法对陈旧性眼部化学伤(伤后大于3月)后持续性角膜上皮缺损及角膜溃疡30例(30眼),采用自体角膜缘干细胞联合人羊膜移植术进行治疗,并随访观察8周。结果28眼原上皮缺损区恢复光滑透亮,角膜溃疡全部或部分修复,治愈率达93.3%。结论角膜缘干细胞为病灶角膜提供了健康干细胞来源,恢复了眼表屏障功能;人羊膜本身无抗原性,且具有抗炎及抗纤维化作用,使其成为角膜上皮移行及生长的支架。自体角膜缘干细胞联合羊膜移植是一种有效的治疗陈旧性眼化学烧伤的手段。