AML 和ALL 患者骨髓DNMT1，SFRP1 基因甲基化及其与临床病理特征和预后相关性研究

目的 检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)和急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者骨髓中DNA 甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)、分泌型卷曲相关蛋白1(secretedfrizzled related protein 1, SFRP1)基因甲基化及 mRNA 表达水平,探讨其与临床病理特征和预后的关系。方法 根据FBA (French-American-British classification systems;法- 美- 英分型系统) 标准选取2019 年11 月～ 2020 年11 月于邯郸市中心医院新诊断的急性白血病患者70 例,其中AML 50 例和ALL 20 例;另选取65 例非恶性血液病患者作为正常对照组。用甲基化特异性聚合酶链式反应(methylation-specific PCR,MSP) 检测所有研究对象骨髓标本中DNMT1 和SFRP1 基因甲基化状态,并分析两基因甲基化与AML 和ALL 患者临床参数之间的关系;用实时定量 PCR 检测所有研究对象化疗前和化疗缓解后骨髓标本中 DNMT1,SFRP1 和β-catenin mRNA 表达;Pearson 相关分析明确DNMT1,SFRP1 和β-catenin mRNA 水平之间的相关性;对所有患者进行随访,比较DNMT1 和SFRP1 基因甲基化与预后的关系。结果 AML 和ALL 患者中DNMT1 基因甲基化发生率分别为26.0% 和25.0%,较对照组(73.8%)显著下降(χ2=47.683,P ＜ 0.001);SFRP1 基因甲基化发生率分别为78.0% 和85.0%,较正常对照组(18.5%)显著增加(χ2=55.265,P ＜ 0.001),差异均有统计学意义。AML 组DNMT1 基因甲基化与WBC 水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ2=6.524,5.732,均P ＜ 0.001);SFRP1 基因甲基化与WBC 水平、BM 水平和遗传学预后分组有明显相关性(χ2=8.115, 5.395, 5.060,均P＜ 0.05)。ALL 组DNMT1 基因甲基化只与遗传学预后分组有关(χ2=4.802,P ＜ 0.05);SFRP1 基因甲基化与WBC 水平、遗传学预后分组有明显相关性(χ2=4.920, 5.115,均P ＜ 0.05)。与对照组相比,AML 和ALL 患者化疗前DNMT1 和β-catenin mRNA 表达均显著升高(t=4.807 ～ 10.456,均P＜ 0.05),SFRP1 表达显著下降(t=24.791,12.069,均P＜ 0.05)。与化疗前相比,AML 和ALL 患者化疗后DNMT1 和β-catenin mRNA 表达显著下降(t=3.461 ～ 6.374,均P ＜ 0.05),SFRP1 表达显著上升(t=17.076,7.454,P ＜ 0.05)。两组患者DNMT1 与SFRP1 表达呈明显负相关(r=-0.328,-0.315,均P ＜ 0.05);SFRP1 与β-catenin 表达呈明显正相关(r=0.682,0.728,均P ＜ 0.05);两组患者DNMT1与β-catenin 表达均无明显相关性。两组患者DNMT1 基因甲基化生存率高于其未甲基化生存率(χ2=3.862,3.679,均P ＜ 0.05);SFRP1 基因甲基化生存率低于其未甲基化生存率(χ2=2.927,3.155,均P ＜ 0.05)。结论 DNMT1 和SFRP1 基因甲基化与恶性血液病患者临床病理及预后相关,究其原因可能与DNMT1 和SFRP1 基因甲基化异常激活Wnt/β-catenin 信号通路有关。     

Reprimo和hMLH1基因甲基化在胃癌早期诊断价值的研究

目的 探讨Reprimo和hMLH1基因启动子区甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值。方法 通过陕西省人民医院2013年9月～2014年4月收治的慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生患者50例、异型增生患者50例、胃癌患者50例,取内镜下胃活检组织,并取正常胃黏膜活检组织30例作为对照组,分析Reprimo基因和hMLH1基因启动子区甲基化表达情况,比较各组患者间的差异。结果 患者组的胃黏膜组织中Reprimo基因和hMLH1基因启动子区甲基化阳性率显著高于正常组,差异有统计学意义(P＜0.05)。Reprimo基因启动子区甲基化阳性率:慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组28%(χ²=10.18,P＜0.05); 异型增生组56%(χ²=25.84,P＜0.05); 胃癌组62%(χ²=30.36,P＜0.05); hMLH1基因启动子区甲基化阳性率:慢性萎缩性胃炎伴肠上皮化生组20%(χ²=4.39,P＜0.05); 异型增生组44%(χ²=15.13,P＜0.05); 胃癌组48%(χ²=17.41,P＜0.05),检测的特异度高。结论 Reprimo和hMLH1基因甲基化检测在胃癌早期诊断中的价值很高,特异度高,是一种有效的诊断方式,在患者的临床诊断方面拥有广阔的治疗前景。     

骨髓增生异常综合征患者SFRP5基因启动子区甲基化状态研究

背景:SFRP5基因启动子区的甲基化与急性髓系白血病的发生密切相关.作为白血病的前期,骨髓增生异常综合征患者中SFRP5基因启动子区的甲基化状态尚不清楚.目的:探索骨髓增生异常综合征中WNT/β-catenin信号传导通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白5(SFRP5)基因的甲基化状态.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)法对43例骨髓增生异常综合征患者的骨髓或外周血进行SFRP5基因启动子区甲基化状况检测,并以70例门诊普通患者的外周血作为对照.结果与结论:113例样本均成功进行了MSP检测,进入结果分析.43例骨髓增生异常综合征患者中检出5例(11.6%)SFRP5的甲基化,70例正常对照中检出1例(1.4%)SFRP5的甲基化,并且均为不完全甲基化状态.SFRP5在骨髓增生异常综合征患者中的甲基化率显著高于正常对照(χ2=5.511,P=0.019).43例患者样本中,17例为骨髓样本,26例为外周血样本.而5例甲基化的样本中,2例为骨髓样本,3例为外周血样本.样本的来源(骨髓/外周血)对于甲基化状态的结果无显著差异(χ2=0.001,P=0.982).提示,SFRP5基因的甲基化与骨髓增生异常综合征有相关性,SFRP5基因的甲基化可能是引起骨髓增生异常综合征的分子机制之一.     

儿童急性淋巴细胞白血病p16基因甲基化及表达水平临床意义

目的 探讨p16基因甲基化及表达水平改变在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)发病机制中的作用.方法 ALL患儿76例,其中初发(uALL)患儿69例、复发(rALL)患儿7例,健康儿童28例纳入对照组.采用荧光定量聚合酶链反应(RTPCR)检测外周血淋巴细胞p16基因mRNA表达;采用基于SYBR Green的甲基化特异性定量PCR(MethySYBR PCR)检测p16基因启动子甲基化水平.结果 ALL患儿淋巴细胞p16基因启动子甲基化水平高于健康儿童,uALL患儿p16基因甲基化水平低于rALL患儿(P＜0.05);ALL患儿p16基因mRNA水平低于健康儿童,uALL患儿p16基因转录水平高于rALL患儿(P＜0.05);p16基因转录水平与其启动子甲基化水平呈负相关关系(r=-0.63,P＜0.05);首次化疗即获完缓解ALL患儿p16基因甲基化水平低于未完全缓解患儿,而p16 mRNA表达水平高于后者(P＜0.05);p16基因低甲基化或高表达水平ALL患儿巩固强化治疗平均缓解时间明显低于p16基因高甲基化或低表达患儿(P＜0.05).结论 p16基因甲基化及表达低下可能与ALL发病有关,p16基因甲基化状态及表达水平检测或可用于儿童ALL预后评估.     

骨髓增生异常综合征患者SFRP5基因启动子区甲基化状态研究

背景：SFRP5基因启动子区的甲基化与急性髓系白血病的发生密切相关。作为白血病的前期,骨髓增生异常综合征患者中SFRP5基因启动子区的甲基化状态尚不清楚。目的：探索骨髓增生异常综合征中WNT/β-catenin信号传导通路拮抗基因分泌型卷曲相关蛋白5（SFRP5）基因的甲基化状态。方法：应用甲基化特异性PCR（MSP）法对43例骨髓增生异常综合征患者的骨髓或外周血进行SFRP5基因启动子区甲基化状况检测,并以70例门诊普通患者的外周血作为对照。结果与结论：113例样本均成功进行了MSP检测,进入结果分析。43例骨髓增生异常综合征患者中检出5例（11.6%）SFRP5的甲基化,70例正常对照中检出1例（1.4%）SFRP5的甲基化,并且均为不完全甲基化状态。SFRP5在骨髓增生异常综合征患者中的甲基化率显著高于正常对照（χ2=5.511,P=0.019）。43例患者样本中,17例为骨髓样本,26例为外周血样本。而5例甲基化的样本中,2例为骨髓样本,3例为外周血样本。样本的来源（骨髓/外周血）对于甲基化状态的结果无显著差异（χ2=0.001,P=0.982）。提示,SFRP5基因的甲基化与骨髓增生异常综合征有相关性,SFRP5基因的甲基化可能是引起骨髓增生异常综合征的分子机制之一。     

恶性血液病细胞系分泌型卷曲相关蛋白基因启动子CpG岛甲基化状态的检测及意义

为了研究分泌型卷曲相关蛋白（secreted frizzled—related protein,SFRP）家族基因启动子CpG岛的甲基化状态,探讨SFRP基因启动子区CpG岛的异常甲基化状态与恶性血液病发病机制的可能联系,采用甲基化特异性PCR（Methylation—specificPCR,MSP）的方法检测了9种恶性血液病细胞系及正常人外周血单个核细胞中sFRP基因启动子区的甲基化状态。结果显示：9种恶性血液病细胞系中SFRP1、2基因启动子区均呈高甲基化状态,CA46、HL60和U937细胞中的SFRP4基因以及U266细胞中的SFRP5基因启动子区呈部分甲基化状态,其他细胞系SFRP4、5基因启动子均呈完全甲基化状态。正常人外周血单个核细胞中SFRP1、2,4、5基因启动子区均呈非甲基化状态。结论：SFRP基因启动子区异常甲基化模式与恶性血液病的发生密切相关。SFRP基因启动子区的甲基化状态有可能成为恶性血液病新的分子诊断标记物。     

Fibulin-1基因启动子区域甲基化与食管癌的关系研究

目的:检测食管癌Fibulin-1基因启动子区域甲基化的情况,探讨其相关的临床意义。方法:选取黄石市中心医院2014年1月至2016年2月收治的食管鳞状细胞癌患者96例,另取同期黄石市中心医院因食管良性病变手术切除的食管组织40例作为对照。Fibulin-1基因启动子甲基化使用亚硫酸盐修饰后PCR检测。免疫组织化学检测显示Fibulin-1蛋白表达。结果:食管癌患者中Fibulin-1基因启动子甲基化阳性率为36.5%,显著高于对照组的15.0%(χ2=2.517,P=0.036)。免疫组织化学检测显示Fibulin-1基因启动子甲基化标本中Fibulin-1蛋白阳性表达率为90.2%。食管癌患者男女性别和不同年龄之间Fibulin-1基因启动子甲基化率无显著性差异(P0.05)。Ⅲ,Ⅳ临床分期患者Fibulin-1基因启动子甲基化率为43.1%,显著高于Ⅰ,Ⅱ临床分期患者的28.9%(χ~2=2.4 2 6,P=0.0 4 6)。肿瘤有淋巴结转移患者Fibulin-1基因启动子甲基化率为44.4%,显著高于无淋巴结转移患者的26.2%(χ2=2.438,P=0.041)。肿瘤中、低分化患者Fibulin-1基因启动子甲基化率为42.6%,显著高于高分化患者的25.7%(χ~2=2.431,P=0.043)。结论:Fibulin-1基因启动子在食管癌组织中高甲基化,Fibulin-1基因启动子高甲基化与食管癌的临床分期、肿瘤分化程度以及有无淋巴结转移密切相关。     

血浆相关基因甲基化在食管癌复发中的临床价值

目的 评估血浆相关基因甲基化在食管癌复发中的临床价值。方法 收集81例食管癌(ESCC)患者及60例健康体检者血浆。采用甲基化特异性PCR技术分析了81例食管癌患者及60例健康体检者血浆中四个基因SFRP-1,WIF-1,DKK-3和RUNX3启动子区域的甲基化。结果 这四种基因在食管癌血浆甲基化频率均超过25%,其中:SFRP-1为29.6%,WIF-1 35.8%,DKK-3 37.4%,RUNX-3 35.8%; 健康体检者血浆中均未检测到相关基因的甲基化。食管癌患者血浆中SFRP-1(χ²=14.16,P<0.01),DKK-3(χ²=6.21,P<0.05)和RUNX3(χ²=11.75,P<0.01)基因甲基化明显与食管癌的复发有关,未发现WIF-1基因甲基化与食管癌复发有关(χ²=3.39,P>0.05)。结论 食管癌血浆相关基因甲基化可能与食管癌复发相关。     

骨髓增生异常综合征患者SHP-1基因启动子甲基化状态及相关机制的探讨

目的　探讨SHP-1基因异常甲基化在骨髓增生异常综合征(MDS)发生、发展中的作用和相关机制.方法　将63例MDS患者根据IPSS积分系统分为较低危和较高危组.采用甲基化特异性PCR(MS-PCR)对MDS细胞系SKK-1细胞和MDS患者骨髓细胞进行SHP-1基因启动子甲基化状态的检测;用Western blot方法检测正常对照者和患者骨髓单个核细胞和SKK-1细胞磷酸化信号传导和转录激活因子3( p-STAT3)蛋白的表达.结果　SKK-1细胞存在SHP-1基因启动子部分甲基化,正常对照者骨髓细胞均为非甲基化,较高危组MDS患者SHP-1启动子甲基化率显著高于较低危组(63.3％对24.2％)(P＜0.05);按WHO分型中染色体核型和骨髓原始细胞比例分组,SHP-1启动子甲基化率在RAEB-Ⅱ、核型差组和骨髓原始细胞占0.11 ～0.19组显著增高(P＜ 0.05);SKK-1细胞中存在p-STAT3蛋白的表达,较高危组MDS患者p-STAT3蛋白的表达显著高于较低危组(66.7％对18.2％);相关分析显示SHP-1启动子甲基化的出现与p-STAT3蛋白的表达有相关性.结论　SHP-1基因启动子的异常甲基化在MDS的发病和疾病进展中发挥作用,其机制可能涉及STAT3信号通路的激活,检测MDS患者SHP-1启动子甲基化状态有助于对疾病预后的判断.     

儿童急性淋巴细胞白血病患者肝癌缺失基因1启动子的异常甲基化

目的 分别采用甲基化特异性PCR(MSP)检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子的甲基化水平,探讨DLC-1启动子甲基化用于判断儿童ALL预后的临床价值.方法 选择34例ALL患者骨髓,5例正常骨髓和T淋巴细胞白血病细胞系6T-CEM,分别采用MSP和焦磷酸测序法检测DLC-1启动子甲基化,并采用荧光定量PCR检测5-aza-2'-deoxycytidine处理6T-CEM细胞前后DLC-1的表达.结果 经MSP检测,21例ALL患者骨髓中存在DLC-1甲基化,而在正常骨髓中未发现该基因甲基化.采用焦磷酸测序法检测的结果与MSP法完全一致,而焦磷酸测序法能对DLC-1启动子上的CG位点甲基化进行定量,DLC-1基因的甲基化与年龄、性别、WBC计数、FAB分类、免疫学分型、临床分型等临床病理学参数无显著相关性(P＞0.05).DLC-1基因甲基化阳性的18例获得完全缓解的ALL患者中有14例在12个月内复发,而甲基化阴性的12例获得完全缓解的ALL患者仅4例复发.采用5-aza-2'-deoxycytidine在体外处理DLC-1甲基化细胞6T-CET后,可使DLC-1恢复表达,且呈剂量依赖性.结论 从儿童ALL患者中检测到DLC-1启动子存在高频率的异常甲基化,DLC-1甲基化对预测儿童ALL复发具有一定意义.同时证明焦磷酸测序法是一种敏感、简单,并能对DLC-1启动子甲基化进行定量检测的新方法.     

基于TCGA数据库分析葡萄糖代谢相关基因与乳腺癌临床病理特性及预后相关性

目的 探究乳酸脱氢酶A(LDHA)、溶质载体家族16成员(SLC16A)1及SLC16A3基因与乳腺癌病理特征及预后的关系。方法 获取肿瘤基因组图谱数据库(TCGA)中1 060位乳腺癌患者的组织样本,分析LDHA、SLC16A1及SLC16A3基因表达量与乳腺癌临床病理特征及预后的关联性,用Kaplan-Meier生存分析绘制生存曲线,Cox比例风险回归模型进行单因素和多因素生存预后分析。结果 LDHA表达与远处转移(M分期)(χ²=5.560,P=0.018)、雌激素受体(ER)表达(χ²=8.532,P=0.003)、人表皮生长因子受体-2(HER-2)表达(χ²=4.418,P=0.036)相关;SLC16A1表达与年龄(χ²=8.040,P=0.005)、ER表达(χ²=17.428,P<0.01)、孕激素受体(PR)表达(χ²=5.486,P=0.019)相关;SLC16A3表达与ER表达(χ²=22.447,P&l...     

急性髓系白血病TFPI-2基因表达及启动子甲基化的研究

本研究检测了组织因子途径抑制物-2（tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2）基因在急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）患者骨髓单个核细胞中的表达水平及其甲基化状态,探讨其与AML发生、发展及危险度分层的关系.分离33例初治、19例完全缓解、12例复发/难治AML患者及15例单纯缺铁性贫血患者（对照组）骨髓单个核细胞,采用实时定量PCR （RT-PCR）检测TFPI-2 mRNA在其中的表达水平,采用甲基化特异性PCR （MSP）检测启动子CpG岛甲基化状态.结果表明,初治组、完全缓解组及复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平均低于对照组（P＜0.05）,复发/难治组TFPI-2 mRNA表达水平明显低于初治组（P =0.006）,与完全缓解组相比,初治组TFPI-2 mRNA表达水平也显著降低（P=0.030）;64例AML患者TFPI-2基因启动子甲基化频率为64.63％ （42/64）,其中初治组、完全缓解组和复发/难治组患者中TFPI-2基因启动子甲基化频率分别为66.67％（22/33）、52.63％ （10/19）和83.33％ （10/12） （P＞ 0.05）;甲基化AML患者与非甲基化AML患者骨髓单个核细胞中TFPI-2 mRNA的相对表达量分别为0.165（0.005-2.099）和0.597（0.011-2.787） （P ＜0.05）,在对照组骨髓单个核细胞中未检测到TFPI-2基因启动子的甲基化;初治组经2个疗程化疗后,完全缓解组（CR）骨髓单个核细胞TFPI-2 mRNA表达量显著高于未完全缓解组（PR＋ NR） （P=0.031）.结论：在AML中TFPI-2基因表达下调或沉默与启动子甲基化有关,TFPI-2基因表达水平及启动子甲基化状态可以作为AML分层及病情进展的指标.     

慢性髓系白血病患者中基因SCIN表达及启动子甲基化的临床研究

目的:探讨基因SCIN表达及启动子甲基化在慢性髓系白血病(CML)患者中的临床意义。方法:应用实时定量PCR检测64例CML患者和37例对照骨髓单个核细胞SCIN的表达水平。应用实时定量甲基化特异性PCR结合亚硫酸盐测序PCR检测65例CML患者和29例对照SCIN启动子甲基化水平。结果:CML患者与对照组相比细胞SCIN表达水平明显下调(P=0.010);慢性期、加速期与急变期患者中SCIN表达下调率分别为61%、67%和75%,有增加趋势。Spearman相关性分析显示,基因SCIN表达与BCR-ABL1转录水平呈负相关(r=-0.315,P0.05)。然而,SCIN低表达组与高表达组相比较,在性别、年龄、外周血白细胞数、血红蛋白水平、血小板数量、染色体特征、CML分期及BCR-ABL1转录水平等临床参数中未见差异(P0.05)。CML患者SCIN启动子甲基化水平与对照组比较无统计学差异,且SCIN表达与启动子甲基化水平无相关性(P0.05)。结论:基因SCIN在CML患者中非甲基化依赖性表达下调,可能与BCR-ABL1融合基因致病CML有关;SCIN表达下调可能与CML进展有关。     

急性髓系白血病患者SFRP2基因甲基化的检测及临床意义

目的检测分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)基因在急性髓系白血病(AML)患者中的甲基化状态,探讨SFRP2基因启动子区甲基化状态与AML发生的关系。方法收集了99例AML患者的骨髓或外周血样本,匹配以70例门诊普通患者的外周血作为对照。采用甲基化特异性PCR(MSP)方法对所有研究样本进行SFRP2基因启动子区甲基化状况检测。结果 99例AML患者中有27例检测到SFRP2基因的甲基化,甲基化率为27.3%;而正常对照组中未检出SFRP2基因的甲基化;两者比较差异有统计学意义(P<0.001)。SFRP2基因的甲基化状态与AML的年龄、性别、临床分型及样本来源(骨髓/外周血)间均未见显著关系(P>0.05)。结论 SFRP2基因启动子区的甲基化与AML的发生有相关性,可能是引起AML的分子机制之一。外周血中的SFRP2基因的甲基化可望作为一项新的分子标记物应用于AML的临床早期检测。     

宫颈鳞癌组织中ASPP家族的表达和预后分析

目的 研究宫颈鳞癌组织中P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating P53 protein,ASPP)家族的表达模式以及预后分析。方法 应用免疫组织化学(SP)方法检测72例宫颈鳞癌和正常组织中ASPP蛋白家族的表达,采用Kaplan-Meier和log-rank方法分析5年生存期与ASPP家族的相关性。结果 在正常组织中ASPP1和ASPP2的表达阳性率明显高于癌组织(χ²=25.533,33.029,P=0.000),而宫颈癌组织中iASPP的表达阳性率高于正常组织(χ²=36.575,P=0.000)。宫颈鳞癌中ASPP2的低表达和iASPP的高表达均与患者的年龄明显相关(χ²=5.426,P=0.020; χ²=13.117,P=0.001); ASPP1的表达与宫颈癌病理分级有关(χ²=8.814,P=0.023),而iASPP的表达与临床分期和淋巴结转移均有关(χ²=14.859,P=0.001; χ²=15.376,P=0.000),iASPP的表达与患者5年生存期有关(χ²=34.888,P=0.000)。结论 ASPP蛋白家族可能参与宫颈鳞癌癌变机制过程中,iASPP可能是基因治疗宫颈鳞癌的一个分子靶点。     

重亚硫酸氢盐测序法检测Wnt信号通路抑制基因在急性早幼粒细胞白血病细胞中甲基化变化

目的:应用重亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测急性早幼粒细胞白血病细胞株(NB4)Wnt信号通路抑制基因启动子区CPG岛的甲基化状态,筛选NB4细胞中高甲基化的Wnt信号通路抑制基因,并探讨BSP法作为定量研究基因甲基化方法的优缺点。方法:以NB4细胞为研究对象,20例健康人单个核细胞为对照;常规提取DNA并用亚硫酸氢盐处理,然后用PCR扩增目标序列,应用重亚硫酸氢盐测序法(BSP)分析在NB4细胞中Wnt信号通路抑制基因基因的甲基化状态。并通过与甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,M SP)、焦磷酸测序技术(pyrosequencing)比较、评价BSP法检测NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化状态的优缺点。结果:BSP产物克隆测序检测NB4细胞Wnt信号通路抑制基因甲基化发生率分别为:WIF-1基因95.26%,DKK3基因86%,SFRP1基因81.67%,SFRP2基因95.71%,SFRP4基因85%,SFRP5基因95%;20例健康人单个核细胞为对照组中Wnt信号通路抑制基因甲基化发生率分别为:WIF-1基因1.5%,DKK3基因4.2%,SFRP1基因0%,SFRP2基因0.9%,SFRP4基因2.5%,SFRP5基因1.75%。与正常人M NC相比,NB4细胞的Wnt信号通路相关抑制基因启动子甲基化率明显增高。结论:急性早幼粒细胞株NB4细胞中存在Wnt信号通路多个抑制基因高甲基化状态。此类基因异常甲基化有可能成为急性早幼粒细胞白血病的早期诊断指标和治疗靶点。     

急性髓系白血病中DKK-3和WIF-1甲基化状态和mRNA表达的研究

目的:研究DKK-3和WIF-1在急性髓系白血病(AML)患者中的启动子甲基化状态和mRNA表达情况及其临床意义。方法:用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例AML患者骨髓标本和20例缺铁性贫血患者(对照组)骨髓标本中DKK-3和WIF-1启动子甲基化状态;用实时定量PCR检测上述标本中β-catenin、DKK-3和WIF-1mRNA表达情况,并分析其与临床资料及生存时间的关系。结果:AML组中DKK-3和WIF-1启动子甲基化率明显高于对照组(χ2=15.330,P0.001;χ2=17.371,P0.001),且与性别、年龄、临床分型无相关性。DKK-3和WIF-1 mRNA相对表达量在AML患者中依次为0.840±0.320和0.792±0.313,明显低于对照组的1.134±0.392和1.047±0.334(t=3.415,P=0.000;t=3.070,P=0.003)。AML患者骨髓标本β-catenin的mRNA相对表达量为0.756±0.304,高于对照组骨髓标本表达量0.342±0.105(t=5.943,P=0.001),且AML骨髓标本中DKK-3和WIF-1 mRNA相对表达量和β-catenin相对表达量呈均呈负相关性(r=-0.543;r=-0.562)。KaplanMeier生存曲线分析显示,DKK-3甲基化阳性组AML患者总体生存时间短于阴性组患者(χ2=3.957,P=0.042),而WIF-1甲基化阳性组AML患者总体生存时间亦短于阴性组患者(χ~2=4.520,P=0.029)。结论:AML患者中Wnt/β-catenin信号通路存在有异常激活,DKK-3和WIF-1启动子甲基化可能参与了Wnt通路激活及AML的发病过程并影响其总体预后。     

儿童急性淋巴细胞白血病SOCS3 mRNA的表达水平与临床特点、早期治疗反应的相关性

目的:观察细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3 mRNA)在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)中的表达水平,分析SOCS3 mRNA表达水平高低与儿童ALL疾病状态、危险度之间的关系,探讨SOCS3 mRNA在儿童ALL疾病状态和危险度评估、靶向治疗中的应用。方法:采用SYBR Green荧光定量PCR的方法检测45例新诊断ALL患儿初诊时、诱导缓解期和13例正常儿童骨髓单个核细胞中SOCS3 mRNA表达水平;分别采用方差分析和秩和检验的方法分析SOCS3 mRNA表达水平与ALL危险度、临床特点的关系。同时采用免疫荧光组织化学染色联合激光共聚焦显微技术测定ALL患儿骨髓单核细胞中SOCS3 mRNA的位置与表达量。结果:45例患儿初诊时SOCS3mRNA表达水平明显低于正常儿童(P0.05);诱导缓解期45例患儿的SOCS3 mRNA表达水平与正常儿童无显著差异(P0.05);初诊时中、高危组患儿SOCS3 mRNA表达水平高于低危组(P0.05);按照中位数法将45例患儿初诊时SOCS3 mRNA表达水平分为高表达组和低表达组,比较2组患儿临床特点发现,SOCS3 mRNA高表达组具有更高的外周血白细胞计数、乳酸脱氢酶水平和预后不良基因。此外,2组在危险度比较时SOCS3 mRNA高表达组危险度更高。结论:SOCS3 mRNA在初诊时下调而在疾病诱导缓解后恢复正常表达,SOCS3可以作为评价疾病状态的指标。SOCS3 mRNA的高表达使ALL危险度上调,SOCS3 mRNA可以作为评价ALL危险度的因子,通过调节SOCS3 mRNA表达水平治疗ALL或许可以成为治疗的新方向。     

低氧诱导因子1α在G-CSF诱导小鼠造血干细胞动员中的表达变化

目的:探究小鼠骨髓微环境低氧诱导因子1α(HIF-1α)在G-CSF动员造血干细胞(HSC)过程中的表达变化及相关机制。方法:采用流式细胞术检测注射G-CSF前后小鼠外周血Lin^-Sca-1⁺c-kit⁺(LSK)细胞比例，并采用RQ-PCR、免疫组化等方法检测G-CSF动员不同时间点小鼠骨髓及骨内膜HIF-1α、骨钙素(OCN)mRNA和蛋白的表达水平，光学显微镜下观察小鼠股骨标本成骨细胞数。结果:G-CSF动员4 d小鼠外周血LSK细胞比例开始升高，动员5 d达到高峰，均较对照组显著升高(P<0.05);稳态小鼠HIF-1α mRNA在骨髓有核细胞和骨内膜成骨细胞中表达差异无显著统计学意义(P=0.073),OCN mRNA主要表达于骨内膜细胞，显著高于骨髓有核细胞(P=0.034);动员过程中HIF-1α基因、蛋白表达水平升高，OCN基因、蛋白表达水平下降，骨内膜成骨细胞数量减少(P<0.05);HIF-1α的表达变化晚于OCN(P=0.004),且与小鼠外周血LSK细胞比例变化趋势一致(P=0.000...     

Gli1在成人急性淋巴细胞白血病中的表达及意义

目的:探讨Hedgehog信号通路转录因子Gli1在急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者白血病细胞中的表达及其临床意义。方法:选取确诊的初治ALL 32例,复发ALL 6例,同时选取健康体检者15例作为正常对照。采用实时荧光定量PCR及Western blot方法检测ALL患者及正常对照者骨髓单个核细胞G li1 mRNA的表达水平,比较G li1 mRNA与ALL患者临床参数的关系。结果:G li1 mRNA在初治及复发ALL患者组中的表达较正常对照组明显升高(P0.05)。24例初治ALL诱导化疗后获得完全缓解患者Gli1 mRNA表达水平显著低于化疗前(P0.05),而4例未缓解者的Gli1 mRNA水平较治疗前无明显差异(P0.05)。相关性分析显示,Gli1 mRNA水平与ALL患者外周血白细胞数呈正相关(R=0.725,P0.05)。Western blot检测也发现,初治及复发ALL患者中Gli1蛋白表达较正常对照者显著升高,治疗缓解后Gli1蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论:Gli1 mRNA及蛋白在初治和复发ALL患者中高表达,其表达水平变化可能与ALL的疗效及预后有关。