中药对Aβ25-35损伤的SH—SY5Y细胞的保护作用

目的：研究阿尔兹海默病（Alzheimer disease,AD）治疗常用中药熟地黄、黄芪等几种单味药及中药复方左归丸对β淀粉样蛋白（Aβ）产生及聚集的影响,以探讨中药对AD的保护作用。方法：用Aβ25-35对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞进行损伤,制备AD细胞模型。采用刚果红染色、MTT法检测熟地黄、黄芪、石菖蒲等中药对Aβ聚集的影响;Real—timePCR方法观察这几种中药的药物血清对细胞的β淀粉样蛋白前体（APP）基因、β-分泌酶、γ-分泌酶表达的影响。结果：刚果红染色结果显示,山茱萸、黄芪、当归和左归丸可以抑制Aβ25-35聚合,形成长的淀粉样原纤维;熟地黄、山茱萸、黄芪、当归、左归丸对Aβ所致细胞的损伤均有保护作用,并呈现剂量依赖关系;低浓度的石菖蒲及远志能够保护细胞,但高浓度的石菖蒲和远志对细胞无保护作用。实时定量PCR结果显示,熟地黄、黄芪、左归丸对APP、β-分泌酶及γ-分泌酶的mRNA表达均有不同程度的抑制;当归能抑制β-分泌酶mRNA的表达。结论：熟地黄、山茱萸、黄芪、当归等中药及左归丸对Aβ损伤的神经细胞均有保护作用,其可能是通过抑制APP、β-分泌酶及γ-分泌酶mRNA的表达,从而减少Aβ的产生及聚集、降低Aβ的沉积,以达到防治AD的作用。     

Max作用蛋白1⁃0在氧糖剥夺诱导SH⁃SY5Y细胞凋亡中的作用

目的：探讨Max作用蛋白1?0（max action protein 1?0,Mxi1?0）在氧糖剥夺（oxygen?glucose deprivation,OGD）诱导SH?SY5Y细胞凋亡中的作用。方法：利用Western blot检测SH?SY5Y细胞在OGD条件下Mxi1?0和线粒体自噬相关蛋白LC3?Ⅱ、p62、Tom20的表达水平。Mxi1?0 siRNA转染SH?SY5Y细胞,以CCK?8法和Annexin V/PI染色法检测Mxi1?0在OGD诱导细胞凋亡中的作用。结果：OGD条件下,SH?SY5Y细胞中Mxi1?0的表达先上升后下降。OGD处理使线粒体自噬相关蛋白LC3?Ⅱ表达升高,p62和Tom20蛋白表达下降。OGD条件下,Mxi1?0沉默可抑制OGD诱导的线粒体自噬,增强OGD诱导的SH?SY5Y细胞凋亡。结论：Mxi1?0通过增强线粒体自噬拮抗OGD诱导的SH?SY5Y细胞凋亡。     

尼古丁对Aβ25-35诱导的细胞毒性拮抗作用

目的:研究尼古丁对神经细胞的保护作用及其机制。方法:通过检测细胞形态变化、细胞活力及细胞周期的变化,研究不同浓度尼古丁对PC12细胞的影响。结果:人β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对PC12的细胞毒性作用呈时间、剂量依赖。尼古丁浓度为1μmol/L至100μmol/L时具有细胞保护作用,但不能逆转Aβ25-35对于细胞的损伤,而高浓度尼古丁(1 000μmol/L)则失去细胞保护作用。结论:Aβ25-35诱导细胞活性下降具有时间、剂量依赖性,此作用可被适宜浓度的尼古丁部分拮抗。     

海马区注射Aβ1～42对不同年龄大鼠记忆能力和脑内Aβ1～42沉积的影响

目的:探讨不同年龄大鼠海马区注射同等量β-amylod protein 1～42(Aβ1～42)后记忆能力和Aβ1～42沉积情况的变化.方法:SD雄性幼年鼠(月龄1个月)、成年鼠(月龄3个月)、老年鼠(月龄12个月以上)各21只,每个年龄段大鼠分别随机平均分入正常对照组、假手术组和模型组3个组.模型组选择双侧海马区注射Aβ1～42,制备AD模型.假手术组操作同模型组,但注入等体积生理盐水.正常对照组不做任何处理.采用Y型电迷宫和改进的甲醇刚果红染色分别观察大鼠的记忆能力和海马区Aβ1～42沉积情况.结果:与正常对照组比较,模型组成年和老年鼠记忆能力减退,海马部位出现大量的Aβ1～42沉积,并伴有神经元的皱缩或丢失以及胶质细胞的浸润.而幼年鼠未出现记忆障碍,Aβ1～42沉积程度较轻,神经元的形态数目基本正常.结论:不同年龄的大鼠对Aβ1～42的代谢能力不同,这可能与AD发病有关.     

丁苯酞拮抗Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡的保护机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对Aβ1-42致原代培养皮层神经元凋亡线粒体的保护作用及其机制.方法 用0.1、1、10 μmol/L NBP预处理4h,Aβ1-42 10 μmoVL作用24h后,用MTT比色法检测细胞存活率,分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫荧光法染色观察细胞形态、计算凋亡细胞比率,Western blot定量检测Bcl-2、Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、Cytc等线粒体凋亡途径相关蛋白的表达水平.结果 Aβ1-42作用24h后细胞存活率显著下降,神经元凋亡率显著增加,MDA含量和LDH活性明显增高,SOD活性下降,Bax、Capsase-3、Cleaved easpase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).NBP预处理可以使细胞存活率明显升高,细胞凋亡率明显降低,MDA含量和LDH活性下降、SOD活性增高(P＜0.05),NBP预处理可以拮抗Aβ1-42引起的Bax、Capsase-3、Cleaved caspase-3、胞浆中Cytc表达增加、Bcl-2和线粒体内Cytc表达下降(P＜0.05).结论 NBP可以减少Aβ1-42引起氧化损伤,通过线粒体凋亡途径抑制神经元凋亡.     

水飞蓟宾对H2O2诱导SH⁃SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的：探究水飞蓟宾对过氧化氢（H2O2）诱导SH?SY5Y细胞损伤的保护作用及可能机制。方法：采用体外培养方法,建立SH?SY5Y细胞的H2O2损伤模型。用水飞蓟宾预处理细胞后MTT法测定细胞的存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）、细胞凋亡和线粒体膜电位的变化;Western blot法检测Cleaved?Caspase?9、Cleaved?Caspase?3蛋白表达情况。结果：与模型组比较,用50和100 μmol/L水飞蓟宾预处理SH?SY5Y细胞3 h能明显减轻H2O2诱导的SH?SY5Y损伤,显著提高细胞存活率（P < 0.01）和减少凋亡（P < 0.05）,减少细胞内ROS水平,稳定线粒体膜电位（P < 0.05）,使Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量下降。结论：水飞蓟宾可以保护SH?SY5Y细胞免受H2O2的损伤,其机制可能与水飞蓟宾的抗氧化性、保护线粒体膜电位和降低Cleaved?Caspase?9和Cleaved?Caspase?3的表达量有关。     

侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40和Aβ1-42表达增加

目的:探讨大鼠侧脑室注射链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导与Aβ表达的关系.方法:24只SD大鼠随机等分为手术组和对照组(n=12),手术组双侧侧脑室注入STZ 3 mg/kg,第3日重复此剂量,对照组只手术操作但不注射药物.21 d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ1-40和Aβ1-42阳性表达.结果:与对照组相比,手术组皮层、海马Aβ1-40和Aβ1-42阳性细胞明显增多.结论:侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多,提示胰岛素/胰岛素受体系统障碍与阿尔茨海默病(AD)发病有密切关系.     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25~35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响。方法人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验。MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化。运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响。结果结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P<0.05);10 UEpo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P<0.05)。Hoechst 33258核染色发现10 UEpo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P<0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P<0.05)。结论Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用。本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础。     

促红细胞生成素对β-淀粉样蛋白诱导细胞凋亡的保护作用

目的 探讨促红细胞生成素(Epo)对凝聚态β-淀粉样蛋白25～35片断(Aβ25-35)诱导细胞凋亡的影响.方法 人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)体外传代培养,细胞进入对数生长期后进行实验.MTT比色法检测不同浓度Aβ25-35作用24 h后细胞活力变化;Hoechst 33258核染色和Western blotting法分别观察和检测20 μmol/L Aβ25-35作用24 h后,细胞形态及细胞caspase-3、cleaved caspase-3水平的变化.运用同样方法检测不同浓度Epo预处理3 h,对20μmol/L Aβ25-35作用24 h所致细胞活力、细胞形态以及caspase-3和cleaved caspase-3水平改变的影响.结果 结果显示不同浓度的Aβ25-35作用24 h后,SH-SY5Y细胞活力均明显下降,并呈剂量依赖性(P＜0.05);10 U Epo预处理可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞活力下降(P＜0.05).Hoechst 33258核染色发现10 U Epo预处理可明显减轻Aβ25-35诱导的细胞凋亡现象(P＜0.05);Western blotting检测表明,10 U Epo可显著抑制Aβ25-35诱导的cleaved caspase-3表达增高(P＜0.05).结论 Epo通过抑制Aβ25-35引起的cleaved caspase-3表达增高而对其诱导的细胞凋亡发挥保护作用.本实验为研究阿尔茨海默病的发病机制及探索新的有效治疗药物提供了重要的理论基础.     

淀粉样蛋白Aβ1-42在阿尔茨海默病中的意义

目的 :探讨老年人阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease ,AD)脑脊液淀粉样蛋白Aβ1 - 42 的含量及其意义。方法 :采用ELISA法检测 30例AD ,非AD痴呆患者 2 5例和对照组 2 1例患者脑脊液中Aβ1 - 42 的浓度。结果 :AD患者脑脊液中Aβ1 - 42 水平明显低于非AD痴呆和对照组。结论 :Aβ1 - 42 在AD的发病中起重要作用 ,脑脊液Aβ1 - 42 值对AD的诊断具有一定的临床应用价值     

贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导原代大鼠皮层细胞凋亡的保护作用

目的探讨贯叶连翘衍生物GF1029对经Aβ1-42诱导的大鼠原代培养皮层细胞凋亡的保护作用。方法采用老化的Aβ1-42处理大鼠原代培养皮层细胞12 h,用电镜观察细胞的形态变化,MTT法观察细胞活力变化,用荧光实时定量RT-PCR、Western-blot检测细胞中Bcl-2,Bax mRNA和蛋白的水平及GF1029预处理后这些指标的变化。结果老化的Aβ1-42处理可诱导大鼠皮层神经元凋亡,使神经细胞活力下降,降低Bcl-2 mRNA及蛋白表达,增加Bax mRNA及蛋白表达;而经40、80μmol/L的GF1029预处理2 h后,神经细胞活力增加,Bcl-2 mRNA及蛋白表达增加,Bax mRNA及蛋白表达减少。结论贯叶连翘衍生物GF1029对Aβ1-42诱导的大鼠原代皮层神经细胞凋亡有保护作用,其机制可能与Bcl-2表达增加、Bax表达下调有关。     

Aβ诱导PC-12细胞凋亡建立阿尔茨海默病细胞模型

目的:用β-淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导PC-12细胞凋亡以建立阿尔茨海默病细胞模型。方法:体外培养大鼠嗜铬细胞瘤PC-12细胞,以不同浓度Aβ_(25-35)诱导并于不同时间收获细胞,应用MTT法观察细胞活力,Fura-2/AM荧光分析法检测细胞内游离Ca~(2+)浓度,Hoech-st33258及碘化丙啶复染分析细胞凋亡。结果:Aβ_(25-35)作用于PC-12细胞后,细胞活力逐渐下降,并呈时间和剂量依赖性;同时细胞内Ca~(2+)浓度显著上升;不同浓度Aβ_(25-35)作用后,PC-12细胞于不同时间出现凋亡的典型形态学特征,该时间比Ca~(2+)浓度上升约晚6-12 h。结论:Aβ_(25-35)诱导PC-12细胞活力下降、细胞内Ca~(2+)浓度上升及细胞凋亡,可作为较理想的阿尔茨海默病细胞模型。     

β2肾上腺素受体对Aβ1-40诱导阿尔茨海默病大鼠脑内胆碱能水平的影响

目的:研究β2肾上腺素受体激动剂和抑制剂对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力和脑内乙酰胆碱含量的影响?方法:40只健康雄性SD大鼠随机平均分为4组:对照组?AD组?克伦特罗组和ICI118,551组?AD组给予海马内注射Aβ1-40 1 μl(10 μg),克伦特罗组和ICI118,551组同样注射Aβ1-40 后分别腹腔注射克伦特罗0.5 mg/kg和ICI118,551 1 mg/kg?对照组注射生理盐水?Y迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力后检测海马内胆碱酯酶(AChE)和乙酰转移酶(ChAT)的含量,Nissle染色观察海马CA1区神经元的形态学改变?结果:与AD组相比,克伦特罗组的学习记忆能力明显下降(P < 0.01),海马ChAT?AChE活力下降,CA1区神经元凋亡明显(P < 0.01);而ICI118,551组学习记忆能力?海马ChAT?AChE活力均较AD组提高,海马神经元的损伤情况较AD组有所改善(P < 0.05)?结论:β2肾上腺素受体激动剂?抑制剂分别能加重和减轻AD病变,其机制可能与改变脑内胆碱能水平有关?     

神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型诱导人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y表达β-淀粉样蛋白

目的 探讨单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）感染对人成神经细胞瘤细胞SH-SY5Y β-淀粉样蛋白（Aβ）表达的影响。方法 通过非洲绿猴肾细胞Vero扩增HSV-1,测定病毒滴度。取感染复数（MOI）为10的3.2×10⁸ PFU/mL HSV-1分别感染SH-SY5Y细胞12、24 h,显微镜下观察SH-SY5Y细胞的形态变化,使用PCR检测细胞中HSV-1 DNA的表达;双色免疫荧光检测SH-SY5Y细胞中Aβ和载脂蛋白E（ApoE）的表达;蛋白质印迹法检测淀粉样蛋白前体（APP）、黑素代谢酶（MME）、ApoE、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK-3β）蛋白的表达。结果 HSV-1感染SH-SY5Y细胞12 h后,镜下可见细胞突触减少,突起回缩;感染24 h后细胞开始聚集,呈圆形,并有细胞脱落。与磷酸盐缓冲液（PBS）对照组相比,HSV-1感染12 h后细胞中Aβ表达增加（P<0.01）,ApoE蛋白表达无明显改变;感染24 h后,Aβ表达仍增加（P<0.05）,但弱于12 h时（P<0.01）,APOE蛋白表达增加（P<0.01）。蛋白质印迹分析结果显示,与PBS对照组比较,HSV-1感染12 h后细胞中APP蛋白的表达水平降低（P<0.05）,GSK-3β总蛋白的表达水平增加（P<0.05）且磷酸化活性增强（P<0.05）,MME蛋白的表达水平增加（P<0.05）;感染24 h时MME蛋白的表达水平降低（P<0.05）,ApoE蛋白的表达水平增加（P<0.05）。结论 HSV-1感染后可诱导SH-SY5Y细胞Aβ表达增加,在感染12 h时可能通过促进APP代谢、GSK-3β Ser9磷酸化诱导Aβ产生,而在24 h时主要是通过抑制Aβ降解促使Aβ表达增加。     

阿尔茨海默病中β淀粉样蛋白的神经毒作用

阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)是一种最常见的老年期痴呆综合征,其病因和发病机理未明.目前研究认为β淀粉样蛋白(β amyloid protein, Aβ)在AD发病中起主要作用,文章就Aβ的产生、神经毒作用的表现、作用机制作一综述.     

淀粉样蛋白Aβ1—42在阿尔茨海默病中的意义

目的：探讨老年人阿尔茨海默病（Alzheimer‘s disease,AD)脑脊液淀粉样蛋白Aβ1－42的含量及其意义。方法：采用ELISA法检测30例AD，非AD痴呆患者25例和对照组21例患者脑脊液中Aβ1－42的浓度。结果：AD患者脑脊液中Aβ1－42水平明显低于非AD痴呆和对照组。结论：Aβ1－42在AD的发病中起重要作用，脑脊液Aβ1－42值对AD的诊断具有一定的临床应用价值。     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35致小鼠海马神经元损伤保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1对β-淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)所致小鼠海马神经元损伤的保护作用及ICI182,780的阻断作用。方法 C57BL/6雌性OVX小鼠侧脑室注射Aβ25-35制备Alzheimer病(AD)小鼠模型,在有或无雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780的情况下,腹腔注射Rg1。Morris水迷宫测试小鼠的空间学习记忆能力,RT-PCR技术检测海马bcl-2基因的表达情况。结果与对照组相比,Aβ25-35可导致小鼠的潜伏期和总路程增长(F=11.34、10.90,q=6.184、5.905,P<0.05),穿越平台次数减少(F=10.90,q=6.023,P<0.05),明显降低海马bcl-2基因的表达(F=18.47,q=6.082,P<0.05);与Aβ25-35组相比,Rg1可降低AD小鼠的潜伏期和总路程(q=5.478、6.097,P<0.05),提高其穿越平台次数(q=6.023,P<0.05),逆转Aβ25-35所致的bcl-2基因表达的降低(q=9.661,P<0.05);Rg1的这些作用可被ICI182,780完全阻断(q=5.360~7.482,P<0.05)。结论 Rg1可减弱Aβ25-35对小鼠海马神经元的损伤,其机制可能与雌激素受体途径的激活有关。     

Aβ诱导内质网应激性凋亡通路的启动及二苯乙烯苷的影响

目的:探讨在阿尔茨海默病(AD)脑损伤中β淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性对大鼠行为学、内质网应激特异性凋亡因子Caspase12的影响及何首乌提取物二苯乙烯苷(TSG)的干预作用.方法:将大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、TSG组,除对照组外,其余各组采用立体定向仪于海马部位注射微量Aβ1-42诱发大鼠行为学障碍,造A...     

文冠果壳苷对侧脑室注射Aβ1-42致小鼠学习记忆障碍的改善作用

目的 研究文冠果壳苷对侧脑室注射β肽淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)小鼠学习记忆障碍的改善作用,并初步探讨了其作用机制.方法 通过避暗和水迷宫实验检测了小鼠的学习记忆能力;使用分光光度计检测小鼠大脑组织中乙酰胆碱酯酶(AchE)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性的变化.结果 小鼠侧脑室注射凝聚态Aβ1-42显著降低了小鼠被动回避学习记忆能力及空间学习记忆能力(P<0.01),并且小鼠大脑AchE和ChAT活性显著降低(P均<0.05);而文冠果壳苷能够显著减少避暗错误次数,延长潜伏期(分别P<0.05、P<0.01);剂量依赖性地缩短水迷宫实验中小鼠到达安全台的游泳时间(分别P<0.05、P<0.01),不同程度地抑制Aβ1-42模型小鼠的AchE和ChAT活性的降低(P<0.05和<0.01).结论 文冠果壳苷对侧脑室注射Aβ1-42小鼠学习记忆障碍具有显著的改善作用,其作用机制可能与保护中枢胆碱能神经细胞,改善中枢胆碱能神经系统功能等有关.