乙型肝炎病毒耐药变异与基因型检测在临床上的应用

目的 建立直接测序法检测HBV P区耐药变异情况并分析基因型.探讨HBV基因型与临床病情的关系.方法 检测46例乙肝患者血清样本,采用特异的引物对待检标本HBV P区进行PCR扩增后作基因序列检测,利用Chromas2.23软件对测序结果 进行分析有无突变产生,测序结果 用软件clustalx1.81进行基因分型分析.结果 可通过一次测序反应完成对HBV.DNA P区的基因检测及基因型分析.检出YMDD变异株8例,其中YIDD 5例,YVDD 3例.在检测的46例标本中23例为B基因型,阳性率为50.0%;有21例为C基因型,其阳性率45.6;D基因型2例,阳性率4.4%.B基因型HBV感染者中HCC 2例,占8.7%;C基因型HBV感染者中HCC 8例,占38.1%.结论 直接测序法分析HBV常见耐药突变位点及基因型准确可行,B基因型乙肝患者预后优于C基因型患者.     

鲁南地区HBV基因型和HBV核心启动子双点突变与肝硬化、肝癌的关系

目的 研究鲁南地区肝细胞癌(HCC)、肝硬化(LC)患者与乙型肝炎病毒(HBV)基因型及基本C区启动子(BCP)基因区A1762T/G1764A双位点变异之间的关系,探讨其相关性.方法 按慢性HBV感染者111例的不同临床分型,对其中HCC、LC和慢性乙型肝炎(CHB)患者各37例,采用实时荧光定量PCR法及PCR微板核酸杂交ELLSA技术进行HBV基因定量、分型检测;采用HBV基因多态性芯片检测BCP区A1762T/G1764A双位点变异;对不同性别、年龄、病毒基因型分布、临床分型患者进行HBV基因分型、BCP区双突变,以及不同HBV基因型BCP双突变的比较.结果 在CHB、LC、HCC患者中,HBeAg阴性者分别为24.3％、75.7％和83.8％;HCC患者HBeAg阴性率较CHB患者明显升高(P＜0.05).男、女性别HBV均以C基因型占优势,分别为57.3％和54.5％,性别间无统计学差异(P＞0.05);年龄＜30岁组HBV以B基因型(40.3％)、C基因型(51.7％)占优势,≥30岁组以C基因型(67.2％)占优势,＜30岁组B基因型构成比高于≥30岁组(29.6％,P＜0.05);HCC、LC患者中HBV以C基因型为主,分别占73.0％和75.6％.BCP双突变率在HCC、LC分别为64.9％和56.8％;HBV C基因型多发生BCP双突变,占63.6％ (42/66).结论 鲁南地区HBV基因型以C型和B型为主,其中LC、HCC患者基因型以C型占优势,HCC患者BCP双突变率显著高于CHB患者,在慢性HBV感染者中HBV C基因型多发生BCP双突变.     

阿德福韦酯耐药株感染者乙型肝炎病毒基因型和多聚酶区基因变异分析

目的了解阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型、多聚酶区基因变异位点和变异类型,并分析HBV基因型和多聚酶区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测73例阿德福韦酯耐药患者HBV基因型、多聚酶基因区变异位点、病毒载量。结果 73例阿德福韦酯耐药株感染者中,HBV B基因型占35.6%,C型占64.4%;HBV多聚酶基因区基因突变位点主要以rtA181V/T(39.8%)、rtN236T(31.5%)为多见,rtA181V/T+rtN236T(20.5%),其他(8.2%);其中rtA181V/T位点变异中B型占10.3%,C型占89.7%;rtN236T位点变异中B型占78.3%,C型占21.7%。rtA181V/T+rtN236T位点变异B型占26.7%,C型占73.3%;基因型B和C的病毒载量分别为(6.38±1.24)lg和(6.27±1.10)lg拷贝/毫升。结论阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型主要为B型和C型;HBV多聚酶区基因突变位点主要为rtA181V/T和rtN236T,基因型与多聚酶区基因突变位点之间有一定相关性。C基因型易发生rtA181V/T变异,B基因型多出现rtN236T变异。C基因型比B基因型更易出现rtA181V/T+rtN236T双突变,可能与C基因型容易导致的严重的肝脏疾病有关,基因型与病毒载量之间无相关性。     

韶关地区乙型肝炎患者HBV亚基因型的分布

目的 探讨韶关地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况. 方法 应用PCR法结合琼脂糖电泳方法对378例乙型肝炎患者进行基因分型和检测,根据PCR产物大小直接判定HBV基因型,应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分样品的亚基因型,并探讨前S区编码情况. 结果 在378例乙型肝炎患者中B基因型263例占69.6％,C基因型113例占29.9％,BC混合型2例占0.5％.B基因型中HBeAg阳性患者占66.5％,抗-HBe阳性占33.5％. 结论 广东韶关地区乙型肝炎患者HBV基因型以B型为主,C型次之,少量BC混合型,HBV复制强弱与病毒基因型无关.     

HBsAg和HBsAb双阳性慢性乙肝患者血清中HBV基因型与S区突变的关系

目的 探讨HBsAg和HBsAb同时阳性（HBsAg＋/HBsAb＋）慢性乙肝患者血清中HBV基因型与S区氨基酸序列突变的关系.方法 将43例HBsAg＋/HBsAb＋慢性乙肝患者作为实验组,并选取35例HBsAg＋/HBsAb-慢性乙肝患者作为对照组,对血清中HBV DNA S区基因序列进行PCR扩增和测序,根据测序结果对患者的基因型进行分型并对S区氨基酸序列突变进行比对分析.结果 实验组中B基因型8例、C基因型35例,对照组中B基因型9例、C基因型26例.实验组C基因型患者的年龄[（50.2±16.3）岁]明显大于B基因型[（34.4±13.4）岁]（P=0.015）;实验组B基因型和C基因型的S区氨基酸突变率分别为0.77%和1.64%（P=0.005）;而对照组的B、C两种基因型的突变率分别为0.59%和0.49%（P=0.597）.同样为C基因型的两组患者,实验组S区氨基酸突变明显多于对照组（P=0.000）,而且实验组S区氨基酸突变大多分布在主要亲水结构区域（MHR）α决定簇的第一个环状结构区内;而B基因型只有少数患者有α决定簇内的突变.结论 HBsAg＋/HbsAb＋的乙肝患者C基因型较B基因型更易发生突变;且C基因型患者的氨基酸突变大多发生于S区的α决定簇内,可能正是由于此种突变使HbsAg的抗原性发生改变,最终导致了HbsAg和HbsAb同时阳性.     

广西北部乙型肝炎病毒基因型流行分布的研究

目的了解广西北部桂林乙型肝炎病毒(HBV)基因型的流行分布情况.方法用套式PCR扩增检测41例桂林慢性无症状HBV携带者血清HBV DNA,阳性者用直接测序法进行HBV基因分型.结果19例HBV DNA阳性,阳性率为46.34%(19/41),其中15例为基因型B,占78.9%(15/19),4例为基因型C,占21.1%(4/19),未见到其它目前已知的HBV基因型A、D、E、F、G和H;另外,还发现HBV基因型C组HBeAg阳性率显著高于基因型B组(P＜0.05),提示HBV基因型C比HBV基因型B危害更大.结论广西北部桂林流行的HBV基因型有基因型B和C两种,以基因型B为主要流行的优势基因型.     

反向点杂交法检测湘潭地区乙型肝炎病毒基因型及其临床意义的研究

目的了解湘潭地区乙型肝炎病毒（HBV）基因型流行情况及其临床意义,并对HBV基因分型试剂盒进行评价。方法用HBV基因分型试剂对湘潭地区95例HBV感染者的样本进行检测,并对PCR产物进行测序分析。结果HBV基因分型试剂盒检测结果与测序的符合率为100％,湘潭地区HBV各种基因型分布比例：B型占74．74％。C型占11．58％,B、C型混合感染占13．68％。无症状携带者组与慢性重型肝炎组,慢性乙型肝炎组与慢性重型肝炎组及肝硬化组之间HBVB型和C型感染率存在显著性差异。其中慢性重型肝炎组及肝硬化组C型感染率要明显高于其他组。结论HBV基因分型检测试剂盒检测结果是准确、简便的,具有临床推广和应用价值。湘潭地区流行的HBV基因型主要为B型和C型,其中B型为优势基因型,具有其自身的特点。     

HBsAg和HBsAb双阳性慢性乙肝患者血清中HBV基因型与S区突变的关系

目的 探讨HBsAg和HBsAb同时阳性（HBsAg+/HBsAb+）慢性乙肝患者血清中HBV基因型与S区氨基酸序列突变的关系。方法 将43例HBsAg+/HBsAb+慢性乙肝患者作为实验组,并选取35例HBsAg+/HBsAb-慢性乙肝患者作为对照组,对血清中HBV DNA S区基因序列进行PCR扩增和测序,根据测序结果对患者的基因型进行分型并对S区氨基酸序列突变进行比对分析。结果 实验组中B基因型8例、C基因型35例,对照组中B基因型9例、C基因型26例。实验组C基因型患者的年龄[（50.2±16.3）岁]明显大于B基因型[（34.4±13.4）岁](P=0.015);实验组B基因型和C基因型的S区氨基酸突变率分别为0.77%和1.64%（P=0.005）;而对照组的B、C两种基因型的突变率分别为0.59%和0.49%（P=0.597）。同样为C基因型的两组患者,实验组S区氨基酸突变明显多于对照组（P=0.000）,而且实验组S区氨基酸突变大多分布在主要亲水结构区域（MHR）α决定簇的第一个环状结构区内;而B基因型只有少数患者有α决定簇内的突变。结论 HBsAg+/HbsAb+的乙肝患者C基因型较B基因型更易发生突变;且C基因型患者的氨基酸突变大多发生于S区的α决定簇内,可能正是由于此种突变使HbsAg的抗原性发生改变,最终导致了HbsAg和HbsAb同时阳性。     

深圳市乙型肝炎病毒基因型分子流行病学研究

目的探讨深圳市宝安区乙型肝炎患者血清中乙肝病毒（HBV）基因型的分布情况,了解各基因型与HBV—DNA水平、HBeAg、肝损程度、抗病毒疗效、疾病进展和预后关系。方法采用s基因片段测序的基因分型法,通过上下游引物经PCR反应体系和操作程序扩增S基因片段,经1．5％琼脂糖凝胶电泳,用3730双向测序技术,将130例HBV—DNA阳性患者测序结果在NCBI上进行HBV基因分型,得出基因型。结果宝安区HBV基因型只有B型和C型,无其他型和混合型,B型占55．74％,C型占44．26％,无性别和年龄分布差异（P〉0．05）。B型与C型HBV—DNA水平无显著性差异（P〉0．05）,B基因型HBeAg阳性率较c基因型高,C型肝损程度比B型重,进展为肝硬化、肝细胞性肝癌的几率高,两者相比有显著性差异（P〈0．01）。结论研究病例HBV基因型以B型为主,C型次之。C基因型患者病情重,进展快,预后差,值得引起临床医生重视。     

大理白族自治州乙型肝炎病毒基因型分布研究

目的了解大理地区白族人群感染乙型肝炎病毒（HBV）基因型的分布。方法对202份乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阳性血清采用基因型特异性引物-PCR法进行基因型检测。结果202份血清标本中100份（49．5％）HBV基因分型阳性。其中,B基因型41份,占41％;C基因型25份,占25％;B＋C混合基因型34份,占34％。在HBV基因型B、C、B＋C中HBeAg阳性率分别为：68．3％（28／41）、40．0％（10／25）、58．8％（20／34）,B、C基因型比较HBeAg阳性率有显著性差异（x^2=5．089,P=0．024）。结论大理地区HBV基因型主要为B基因型、C基因型和B＋C混合基因型,最显著的特点是B＋C混合基因型感染占很大比例。