大黄（庶虫）虫丸加减对大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制

目的：探讨大黄（庶虫）虫丸加减对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的保护作用及机制。方法：采用单侧输尿管结扎（UUO）致大鼠肾间质纤维化模型,将50只SD大鼠随机分为5组,分别为假手术组,模型组,依那普利组（0.001 g·kg^-1）,大黄（庶虫）虫丸加减大、小剂量组（19,9.5 g·kg^-1）。术后第15天处死各组大鼠,收集血清,酶法测定血肌酐（SCr）,尿素氮（BUN）水平,收集24 h尿液,连苯三酚红钼终点法测定24 h尿蛋白量（24 h-Upro）;留取结扎侧肾组织行苏木素-伊红（HE）染色,马松（Masson）染色;采用免疫组化法（IHC）检测转化生长因子-β₁（TGF-β₁）,纤连蛋白（FN）,α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测TGF-β₁,p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）,磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）蛋白表达。结果：与假手术组比较,模型组大鼠24 h-Upro,SCr,BUN含量明显增高（P<0.01）,光镜下肾组织损伤严重,TGF-β₁,FN,α-SMA含量明显升高（P<0.05）,TGF-β₁,p38 MAPK,p-p38 MAPK蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,大黄（庶虫）虫丸加减大、小剂量组24 h-Upro,SCr,BUN明显降低（P<0.05）,肾脏组织损伤减轻,TGF-β₁,FN,α-SMA含量明显降低（P<0.05）,TGF-β₁,p-p38 MAPK蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论：大黄（庶虫）虫丸加减方可通过降低FN,α-SMA的高表达,下调p38 MAPK信号通路中的p-p38 MAPK,TGF-β₁表达,减少细胞外基质过度沉积和肾脏固有细胞损伤来改善肾间质纤维化。     

三七对酒精肝大鼠肝组织TGF-β1/Smads,CTGF表达量的影响

目的:研究三七对酒精性肝损害大鼠肝脏TGF-β1/Smads,CTGF的影响,探讨三七对酒精性肝硬化的保护作用机制。方法:50只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、三七高、低剂量组、异甘草酸镁组,除对照组外大鼠灌服白酒-玉米油-吡唑混合液14周建立酒精性肝病模型,造模同时三七高、低剂量组分别灌服12,3 g·kg^-1,异甘草酸镁组腹腔注射24 mg·kg,每天给药1次,连续14周。测定肝功能、大鼠肝脏Masson染色病理学检查,以及各组大鼠肝组织TGF-β1,Smad3,Smad7,CTGF mRNA的表达量。结果:与模型组比较,治疗组能明显降低肝脏ALT,AST,抑制胶原纤维沉积,减少肝组织TGF-β1,Smad3,CTGF mRNA的表达量,增加Smad7 mRNA的表达量,三七组不同剂量组之间存在显著性差异,高剂量三七组与异甘草酸镁组之间无显著性差异。结论:三七可以影响TGF-β1/Smads信号通路,减少CTGF表达。     

丹芪合剂对糖尿病大鼠肾组织Smurf 2信号通路的调节作用研究

目的: 观察丹芪合剂对糖尿病(DM)大鼠肾组织Smad泛素化调节因子2(Smurf 2)表达的影响,初步探讨丹芪合剂抑制糖尿病肾病(DN)的分子机制。方法: 链脲佐菌素诱导1型DM大鼠模型,分为正常组、DM组和丹芪合剂 1.8 g·kg^-1治疗组;12周处死各组大鼠,HE染色观察胰腺和肾组织病理学改变;免疫组化和Western blot测肾组织Smurf 2、核转录共抑制因子(SnoN)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)、磷酸化Smad 2和Smad 3表达。结果: 与正常组相比,DM组肾组织Smurf 2蛋白显著增加,SnoN蛋白表达下调,TGF-β₁、 磷酸化Smad 2和磷酸化Smad 3蛋白上调;与DM组相比,丹芪合剂治疗组Smurf 2蛋白显著减少,SnoN蛋白上调,TGF-β₁和磷酸化Smad 2蛋白下调,磷酸化Smad 3无显著差异。结论: 丹芪合剂作用机制可能与减少Smurf 2蛋白表达、进而抑制SnoN蛋白泛素化降解有关。     

复方黄连胶囊对早期糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1/ BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用

目的: 研究复方黄连胶囊(CRCC)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡及其Smad信号通路的调控作用,探讨CRCC对DN大鼠早期肾损伤的作用及其可能机制。 方法: 以链脲佐菌素(STZ)复制早期DN大鼠模型,动物分为正常组、模型组、消渴丸组(0.8 g·kg^-1)、依那普利组(1 mg·kg^-1)与CRCC 低、中、高剂量组(生药含量分别为1.09,2.18,4.36 g·kg^-1),灌胃给药,每天1次,5周后生化指标检测空腹血糖(FBG)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、胰岛素(Ins)、24 h尿蛋白(24 h Upro)及24 h 尿微量白蛋白(24 h UmAlb);光镜观察肾组织形态学的改变;免疫组化法检测肾组织TGF-β1,BMP-7,Smad2/3,Smad1/5及Smad7蛋白表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾组织TGF-β1和BMP-7 mRNA表达。 结果: 与模型组比较,各CRCC治疗组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,Scr,24 h Upro 和24 h UmAlb水平,改善肾组织病理形态学异常,TGF-β1与Smad2/3蛋白表达减少,BMP-7,Smad1/5与Smad7蛋白表达增加,TGF-β1 mRNA表达减少,但BMP-7 mRNA表达未增加。 结论: CRCC可改善早期DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与通过Smad信号通路调控DN肾组织TGF-β1/BMP-7表达失衡有关。     

加味真武汤对肾间质纤维化大鼠TGF-β及FN表达的影响

目的: 探讨加味真武汤对肾间质纤维化大鼠转化生长因子(TGF-β)及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。 方法: 大鼠随机分为假手术组、模型组及治疗组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)模型,术后7,14,21 d分别处死大鼠,测定肾脏指数、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);肾组织HE及Masson染色,观察肾脏病变;免疫组化法比较各组TGF-β及FN的表达。 结果: 术后随时间的延长,模型组和治疗组大鼠可见明显的肾间质纤维化改变,肾间质TGF-β,FN的表达明显高于假手术组(P<0.05)。治疗组大鼠肾间质纤维化程度及TGF-β,FN的表达均低于模型组(P<0.05)。 结论: 加味真武汤可降低UUO模型大鼠血Cr,BUN水平,抑制TGF-β表达,减少FN形成,对肾间质纤维化有积极的治疗意义。     

下瘀血汤通过Wnt/β-catenin和TGF-β1/Smad信号串联干预肾纤维化大鼠的机制

目的 观察下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠的保护作用及其对Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路的影响。方法 50只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组,氯沙坦组（9 mg·kg^-1）,下瘀血汤低、高剂量组（2.43,4.86 g·kg^-1）,采用腺嘌呤灌胃（250 mg·kg^-1）诱导肾纤维化大鼠模型,造模连续24 d,随后给予相应药物,给药连续30 d。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肾脏组织病理改变情况;马松（Masson）染色观察大鼠肾脏胶原沉积情况;免疫组化法（IHC）和蛋白免疫印迹法（Western blot）测定大鼠肾脏Wnt5a,Wnt5b,β-catenin,TGF-β₁,Smad4,Smad7蛋白表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠SCr和BUN水平显著升高（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后SCr和BUN水平显著降低（P<0.01）;HE和Masson染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾间质损伤严重且肾间质胶原大量沉积,给予下瘀血汤干预后肾间质损伤减轻,胶原物质沉积减少;IHC和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肾脏Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达上调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达下调（P<0.01）,给予下瘀血汤干预后Wnt5a,β-catenin,TGF-β₁表达下调（P<0.01）,Wnt5b,Smad7表达上调（P<0.01）,且下瘀血汤低、高剂量组间差异无统计学意义。结论 下瘀血汤对腺嘌呤致肾纤维化大鼠具有保护作用,其机制与抑制Wnt/β-catenin和TGF-β₁/Smad信号通路串联相关。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对AngⅡ诱导心房成纤维细胞胶原合成及TGF-β1活化的影响

目的：观察丹参酮Ⅱ_A磺酸钠（sodium tanshinone Ⅱ_A sulfonate,STS）对血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）诱导心房成纤维细胞胶原合成及TGF-β₁活化的影响。方法：培养新生大鼠心房成纤维细胞,检测胶原含量,并[³H]-脯氨酸掺入法测定胶原合成速率作为心肌纤维化指标。ELISA法检测培养细胞上清中活性TGF-β₁及总TGF-β₁含量。Western blot测定血小板反应素-1（thrombospondin-1,TSP-1）表达。结果：AngⅡ能够明显上调心房成纤维细胞胶原含量、胶原合成速率;TSP-1表达及活性TGF-β₁分泌量上调,而总TGF-β₁表达无明显改变。在STS处理后,除总TGF-β₁外,其他指标均明显下调。结论：STS能减轻AngⅡ诱导心房成纤维细胞胶原分泌及合成速率,机制与抑制TSP-1/TGF-β₁通路有关。     

复肾颗粒对肾间质纤维化大鼠肾脏的保护作用

目的 :观察复肾颗粒在肾间质纤维化过程中对转化生长因子β激活激酶(TAK1)表达的影响及其可能的肾脏保护作用机制。 方法 :采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型,将60只大鼠随机分为6组:假手术组(N)、模型组(M,UUO组)、福辛普利组 ·kg^-1 ·d^-1]、复肾颗粒1组(F1,7.5 g ·kg^-1 ·d^-1)、复肾颗粒2组(F2,15 g ·kg^-1 ·d^-1)、复肾颗粒3组(F3,30 g ·kg^-1 ·d^-1)。14 d后处死大鼠,取结扎侧肾组织采用HE及Masson染色观察病理变化,RT-PCR和Western-bloting检测肾组织TAK1和α-SMA的表达。 结果: 模型组大鼠肾纤维化程度及肾组织TAK1和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达较假手术组显著升高(P <0.01),复肾颗粒各组及福辛普利组较模型组显著降低,尤以复肾颗粒2组为甚(P <0.01,P <0.05)。 结论: 复肾颗粒可能通过降低TAK1和α-SMA的含量而起到减轻肾间质纤维化病程进展的作用,推测其抑制TAK1和α-SMA表达上调的作用可能是其抗肾小管间质纤维化的机制之一。     

小檗碱对Aβ25-35致SH-SY5Y细胞株炎症反应中TNF-α及I型受体表达的干预作用

目的: 研究小檗碱对β淀粉样肽(Aβ)沉积导致SH-SY5Y细胞株炎症反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及Ⅰ型受体(TNFR1)表达的影响。 方法: 5 μmol·L^-1Aβ_25-35作用于SH-SY5Y细胞24 h,复制阿尔茨海默病(AD)细胞模型,造模前给予小檗碱预处理2 h。实验分为正常对照组、AD模型组、吲哚美辛组、小檗碱低、高剂量组。通过分光光度法检测培养液中LDH的活力,ELISA测定TNF-α的水平,RT-PCR检测TNFR1基因的表达,Western blot测定TNFR1蛋白的表达。 结果: 与对照组比较,AD细胞模型组培养液中LDH及TNF-α水平明显升高,TNFR1基因和蛋白的表达显著增加。小檗碱干预后细胞上清液中LDH活力及TNF-α水平下降。小檗碱干预可下调TNFR1基因和蛋白的表达,其中1×10^-5 mol·L^-1小檗碱对TNFR1的调节作用更加显著。 结论: 小檗碱对Aβ导致的SH-SY5Y细胞炎性损伤有保护作用,其机制可能与其抑制炎症因子TNF-α及其Ⅰ型受体的表达有关,其中对TNFR1的调节呈剂量依赖性。     

柴胡含药血清通过Smad3/Rheb轴调节HFL1细胞凋亡和肌成纤维细胞转化

目的 利用转化生长因子-β₁（TGF-β₁）刺激人胚肺成纤维细胞（HFL1）模拟特发性肺纤维化（IPF）的病理过程,探讨柴胡含药血清对IPF的作用和机制。方法 采用10 μg·L^-1 TGF-β₁刺激HFL1细胞,给予不同体积分数柴胡含药血清（5%、10%、15%、20%）干预24 h后,利用细胞增殖与活性检测试剂盒-8（CCK-8）检测细胞增殖率。随后细胞分为空白血清组（20%空白血清）、TGF-β₁组（20%空白血清和10 μg·L^-1 TGF-β₁）、TGF-β₁+柴胡含药血清组（5%空白血清、15%含药血清和10 μg·L^-1 TGF-β₁）、TGF-β₁+SIS3组（3 μmol·L^-1 SIS3、20%空白血清和10 μg·L^-1 TGF-β₁）。采用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率;通过实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）mRNA表达情况;通过免疫荧光法检测α-SMA、脑Ras同源蛋白（Rheb）、磷酸化（p）-Smad3蛋白表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Rheb、p-Smad3、Smad3蛋白表达。结果 与空白血清组比较,TGF-β₁组细胞增殖率明显上升（P<0.05）。与TGF-β₁组比较,TGF-β₁+15%柴胡含药血清组和TGF-β₁+20%柴胡含药血清组细胞增殖率显著降低（P<0.01）。与空白血清组比较,TGF-β₁组细胞凋亡率显著下降,Bcl-2、α-SMA mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,α-SMA、Rheb蛋白表达增加,Smad3磷酸化水平明显上升（P<0.05）;与TGF-β₁组比较,TGF-β₁+柴胡含药血清组和TGF-β₁+SIS3组细胞凋亡率显著上升,Bcl-2、α-SMA mRNA表达减少,Bax mRNA表达增加,α-SMA、Rheb蛋白表达减少,Smad3磷酸化水平下降（P<0.05）。结论 柴胡能够抑制TGF-β₁诱导的HFL1细胞增殖和肌成纤维细胞转化,促进成纤维细胞凋亡,该作用可能与Smad3/Rheb轴有关。