Apelin激活大鼠主动脉一氧化氮系统的研究

目的研究Apelin对大鼠主动脉L-精氨酸转运、一氧化氮合酶(NOS)活性和NO生成的影响.方法体外血管薄片孵育,测定孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量、L-精氨酸转运及血管NOS活性.结果大鼠主动脉孵育3h后,Apelin(10-9～10-7mol/L)呈浓度依赖地刺激血管NO2-生成增加(33%、46%和69%,与对照组比较,均P＜0.01);血管总NOS活性呈浓度依赖性(total nitric oxide sythase,tNOS)增加,分别较对照组增加0.68、2.36和2.5倍(均P＜0.01),且以内皮型NOS(endothelialNOS,eNOS)活性升高(均为P＜0.01)为主,较对照组分别增加2、4.6和5.5倍,而诱导型NOS(inducible NOS,iNOS)活性并无明显改变.结论Apelin通过激活血管组织NOS/NO系统,增加血管L-精氨酸转运与NO生成,引起血管的扩张.     

尾加压素Ⅱ对大鼠血管外膜阳离子氨基酸转运体的影响

目的观察尾加压素Ⅱ(UII)对大鼠主动脉血管外膜阳离子氨基酸转运体(CAT-1、CAT-2B)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达影响。方法 SD大鼠24只,250~300g,随机分为空白对照组、UII组(10-9和10-8mol.L-1)和脂多糖(LPS)阳性对照组,每组6只。分离雄性SD大鼠胸主动脉外膜,分别加入单纯孵育液、不同浓度UII和LPS孵育6h。测定孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量;RT-PCR方法测定CAT-1、CAT-2B和iNOS mRNA基因表达。结果与对照组比较UII(10-9~10-8.L-1)刺激血管外膜NO2-生成增加(27%,P<0.05,和49%,P<0.01);UII组血管外膜阳离子氨基酸转运体(CAT-1和CAT-2B)mRNA水平增加(均P<0.01),iNOS mRNA表达增加(P<0.01)。结论 UII可激活血管外膜CAT-1和CAT-2B基因表达,其变化可能参与了NO释放从而引起血管的扩张。     

尾加压素Ⅱ对大鼠血管外膜阳离子氨基酸转运体的影响

目的观察尾加压素Ⅱ（UII）对大鼠主动脉血管外膜阳离子氨基酸转运体（CAT-1、CAT-2B）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达影响。方法 SD大鼠24只,250~300g,随机分为空白对照组、UII组（10-9和10-8mol.L-1）和脂多糖（LPS）阳性对照组,每组6只。分离雄性SD大鼠胸主动脉外膜,分别加入单纯孵育液、不同浓度UII和LPS孵育6h。测定孵育液中亚硝酸盐（NO2-）含量;RT-PCR方法测定CAT-1、CAT-2B和iNOS mRNA基因表达。结果与对照组比较UII（10-9~10-8.L-1）刺激血管外膜NO2-生成增加（27%,P〈0.05,和49%,P〈0.01）;UII组血管外膜阳离子氨基酸转运体（CAT-1和CAT-2B）mRNA水平增加（均P〈0.01）,iNOS mRNA表达增加（P〈0.01）。结论 UII可激活血管外膜CAT-1和CAT-2B基因表达,其变化可能参与了NO释放从而引起血管的扩张。     

L-精氨酸转运体-CAT的表达及作用

1980年，Ferchgott发现内皮源性松弛因子(EDRF)，1987年，其他学者提出EDRF就是一氧化氮(NO)或含NO的物质。NO是一种自由基，包含一个不成对电子，是以左旋精氨酸(L—arg)为原料，经细胞膜精氨酸转运体转运入细胞内，在一氧化氮合酶(NOS)的作用下，氧化生成NO和L-精氨酸。NO具有双重作用，一方面，它是细胞间信息传递的重要调节因子，通过激活鸟苷酸环化酶(GC)，     

大鼠尾核内微量注射L-精氨酸对一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨大鼠尾核内L-精氨酸（L-Arg）、N^ω硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）、亚甲基蓝（MB）等对一氧化氮合酶（NOS）表达的影响。方法动物随机分为L-Arg组、L-NAME组、MB组和生理盐水（NS）组，用免疫组织化学结合计算机图像分析的方法观察给药后6、12、24、48和72h尾核内nNOS表达的变化。结果尾核内nNOS神经元散在表达，阳性部位主要在胞浆，神经纤维也有表达。L-Arg组nNOS神经元较正常表达增强（P〈0．05），且随着时间的延长而增强，48h达最高点。MB和L-NAME组nNOS神经元表达较正常减弱（P〈0．05），随时间延长继续减弱，48h达最低点。结论尾核内L-Arg通过NOS生成NO而发挥痛敏作用，L-NAME和MB通过抑制NOS的功能而减少NO的生成产生镇痛作用，NOS是体内合成NO的关键酶。     

L-硝基精氨酸对局灶性脑缺血大鼠脑组织氨基酸含量的影响

目的：观察一氧化氮合酶（NOS）抑制剂L-硝基精氨酸（L-NA）对脑缺血大鼠纹状体、海马、皮质中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸（GABA）含量的影响,探讨L-NA对大鼠脑缺血组织的保护作用及其作用机制。方法：采用线栓法复制大鼠大脑中动脉梗塞（MCAO）模型,缺血后给予L-NA治疗。相应时间断头取脑,然后测定脑梗死体积、脑组织中氨基酸的含量。结果：脑梗死体积L-NA组较缺血组明显缩小;与假手术组比较,缺血组大鼠纹状体、海马、皮质中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、GABA含量显著增加,给予L-NA治疗后,缺血后12 h治疗组中天冬氨酸、谷氨酸的含量明显降低,甘氨酸、GABA含量明显升高。结论：L-NA降低脑组织中兴奋性氨基酸的含量及升高抑制性氨基酸的含量可能是保护脑缺血的重要机制。     

腹主动脉缩窄性高血压大鼠心脏原生型一氧化氮合酶基因表达及 L-精氨酸的作用

目的　观察腹主动脉缩窄性高血压大鼠早期心脏原生型一氧化氮合酶基因表达及 Ｌ精氨酸对血压的影响。方法　１４ ～１６ 周龄雄性 Ｗｉｓｔｅｒ 大鼠采用缩窄腹主动脉法制备高血压模型,口服 Ｌ精氨酸（ 精氨酸组） 和未服 Ｌ精氨酸（ 手术组） 的高血压大鼠及正常血压大鼠（ 对照组） 在同样条件下喂养２ 周后,测量血压,并采用逆转录多聚酶链反应技术检测一氧化氮合酶基因表达。结果　①大鼠腹主动脉缩窄后发生严重的高血压且心脏一氧化氮合酶基因表达增强;②口服 Ｌ精氨酸２ 周未能防止腹主动脉缩窄性高血压的发生。结论　腹主动脉缩窄性高血压大鼠早期心脏一氧化氮合酶基因表达增强; Ｌ精氨酸的降压作用可能具有选择性。     

L-精氨酸对大鼠妊高征的治疗作用及其机制的探讨

为了研究L-精氨酸治疗孕鼠妊高征效果及机制，利用亚硝基左旋精氨酸甲酯建立孕鼠妊高征模型，并利用L-精氨酸治疗，观察其对孕鼠妊高征治疗效果及一氧化氮(NO))、一氧化氮合酶(NOS)、内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ（ANG Ⅱ)、血栓烷(TXA2)、前列环素(PGI2)等指标的影响。结果发现L-精氨酸可明显改善孕鼠妊高征症状、体征。模型组与对照组、低、高剂量L-精氨酸组比较血清NO、ANGII、PGI2水平、NOS活性均显著降低，而血清ET、TXA2水平明显增高。结果提示NO浓度、NOS活性降低及血管调节因子失衡，可能为妊高征的发病机制；L-精氨酸对大鼠妊高征有明显的治疗作用。这一结果可能为妊高征的预防和治疗提供新的合理方法及手段。     

L-精氨酸对大鼠尾核一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 研究尾核中一氧化氮在痛觉调制中的作用机制.方法 大鼠尾核内微量注射L-精氨酸、Nω-硝基-L-精氨酸甲酯、生理盐水,应用逆转录-聚合酶链反应测定4,8,12,24和48 h大鼠尾核nNOS mRNA表达的变化;新生Wistar大鼠尾核神经元原代培养液中加入L-精氨酸、Nω-硝基-L-精氨酸甲酯、生理盐水,观察给药12 h尾核nNOS mRNA表达的变化.结果 大鼠尾核给药24 h内L-精氨酸组nNOS mRNA表达较正常增强(P＜0.05),而Nω-硝基-L-精氨酸甲酯组nNOS mRNA表达较正常减弱(P＜0.05),48 h恢复正常.体外尾核原代神经元培养,nNOS mRNA表达的变化趋势和在体实验相一致.结论 中枢神经系统尤其是尾核中NOS活性是一氧化氮作为神经递质或调质参与中枢痛觉调制的关键因素之一.     

一氧化氮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的观察L-精氨酸(L-Arg)和氨基胍(AG)对大鼠局灶性脑缺血组织中一氧化氮(NO)含量的影响,探讨NO对脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法将60只大鼠随机分为假手术组、模型组、L-Arg组和AG组,每组15只。L-Arg组、AG组、模型组和假手术组用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型后,L-Arg组按500mg·kg-1腹腔注射1mLL-Arg注射液;AG组按100mg·kg-1术后腹腔注射1mLAG注射液;模型组和假手术组术后腹腔注射1mL灭菌生理盐水。观察缺血再灌注后12、24、72h大鼠行为学改变,血清中NO浓度和脑内一氧化氮合酶(NOS)分布的变化。结果与模型组相比,L-Arg组在缺血再灌注12h行为学评分显著降低(P<0.05),AG组在缺血再灌注24h行为学评分显著降低(P<0.05);AG组在缺血再灌注12h行为学评分高于L-Arg组(P<0.05)。与假手术组相比,模型组、L-Arg组和AG组缺血再灌注12、24、72h的NO含量均显著增加(P<0.05);与模型组相比,L-Arg组缺血再灌注12h的N0含量显著升高(P<0.05),AG组缺血再灌注24h的NO含量显著降低(P<0.05)。缺血再灌注12和24h,AG组的NO含量均显著低于L-Arg组(P<0.05);与假手术组相比,缺血再灌注12、24、72h的模型组、L-Arg组和AG组的iNOS阳性细胞均显著增加(P<0.05);与模型组相比,缺血再灌注12、24、72h的L-Arg组iNOS阳性细胞数差别无统计学意义(P>0.05);但AG组在3个时间点的iNOS阳性细胞数均显著低于模型组(P<0.05);AG组在3个时间点的iNOS阳性细胞数均低于L-Arg组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注损伤后脑组织内NO和NOS的表达随时间动态变化,且NO在参与缺血性脑损伤过程中可能具有双重作用。L-Arg、AG通过不同的作用机制对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马区星形胶质细胞谷氨酸转运体的影响

目的研究左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠星形胶质细胞兴奋性氨基转运体3(EAAT 3)、囊泡谷氨酸转运体2(VGLUT 2)表达的影响。方法采用高脂乳剂灌胃、尾静脉注射链脲佐菌素、28天慢性应激联合的方法复制糖尿病并发抑郁症大鼠模型,SD大鼠随机分为5组:糖尿病并发抑郁症组,二甲双胍+氟西汀组,左归降糖解郁方高、中、低剂量组,以正常大鼠为空白对照组,灌胃给药4周。药物干预后,采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习能力,免疫组化双标法检测星形胶质细胞中EAAT 3、VGLUT 2的表达情况。结果与空白对照组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠逃避潜伏期延长(P0.01),EAAT 3表达下降,VGLUT 2表达升高,差异有统计学意义(P0.05);与糖尿病并发抑郁症组比较,二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短,差异有显著统计学意义(P0.01),且二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组EAAT 3表达升高,二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方高剂量组VGLUT 2表达下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论左归降糖解郁方可以改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马区星形胶质细胞EAAT 3、VGLUT 2表达的紊乱状态。     

脂肪炎症因子在肾病综合征大鼠肾组织的变化及意义

目的: 观察脂肪炎症因子(Apelin)在阿霉素肾病大鼠模型肾组织中的表达,探讨Apelin与肾病综合征中蛋白尿及高脂血症之间的关系。方法: Wistar大鼠40只,随机分为肾病组32只和正常对照组8只,尾静脉单次注射阿霉素5 mg/kg建立肾病模型,测定24 h尿蛋白排泄量、血清中胆固醇含量,应用免疫组织化学法观察肾皮质中Apelin表达变化,并对Apelin表达与尿蛋白、胆固醇水平进行相关性分析。结果: 肾病组大鼠24 h尿蛋白排泄量、胆固醇含量、肾组织中Apelin蛋白表达量与正常对照组差异均有统计学意义(P < 0.05~P < 0.01),肾病组大鼠肾小球系膜基质增生明显,且Apelin蛋白表达与24h尿蛋白排泄量、血清胆固醇含量呈正相关关系(P < 0.05)。结论: Apelin在肾组织中的表达主要位于肾小球血管袢,随着尿蛋白量、胆固醇水平的增加,肾组织中Apelin蛋白水平亦增加。尿蛋白量及血脂水平与Apelin表达密切相关。     

缺血对胰岛素抵抗大鼠Apelin mRNA、APJ mRNA表达的影响

目的：研究胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）大鼠心肌Apelin、孤儿G蛋白偶联受体（APJ）表达及缺血对它的影响。方法：将24只SD大鼠随机分三组,即IR组、IR＋缺血组和对照组,每组8只。采用Real-time-PCR法测定心肌组织Apelin mRNA和APJ mRNA表达水平。结果：IR组Apelin mRNA、APJ mRNA相对表达量较对照组升高,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。IR＋缺血组Apelin mRNA、APJ mRNA相对表达量较对照组降低,两组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：大鼠心肌组织存在Apelin、APJ表达。在胰岛素抵抗大鼠中,心肌组织Apelin、APJ代偿性表达增加,推测Apelin、APJ可能参与了胰岛素抵抗的发生,对心脏发挥保护性作用。胰岛素抵抗大鼠心肌缺血后,心肌组织Apelin、APJ表达明显下降,推测可能与Apelin代偿不足或由于肾素-血管紧张素-醛固酮系统激活,反馈性抑制Apelin、APJ表达有关,Apelin、APJ对心脏的保护作用减弱。     

溶血磷脂酸激活大鼠血小板L-精氨酸/一氧化氮通路

目的:观察溶血磷脂酸(LPA)对血小板L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮(L-Arg/NOS/NO)通路的影响,并探讨其与血小板功能变化的关系.方法:LPA(10-6,10-5和5×10-5 mol/L)与大鼠血小板混悬液共孵育,采用Greiss法测定血小板孵育液中亚硝酸盐(NO-2)含量;同位素示踪法检测血小板NOS活性及L-Arg转运;荧光探针法测定血小板内游离钙浓度.结果:LPA孵育30和60 min, 血小板NO释放分别增加了35%和56%(P＜0.01),LPA(10-6,10-5和5×10-5 mol/L)呈浓度依赖性增加了血小板NO的生成,EC50为17.8 μmol/L,95%CI为13.1～24.2 μmol/L(P＜0.01).LPA浓度依赖性增加了 NOS活性和血小板L-Arg的转运(P＜0.01).LPA(5×10-5 mol/L)孵育30和60 min,显著升高血小板[Ca2 ]i水平(P＜0.01).NOS抑制剂L-NAME预处理的血小板,LPA升高[Ca2 ]i的反应分别增强20%和32%(P＜0.01);加入NO供体L-Arg预处理,则明显抑制LPA升高[Ca2 ]i,分别减少14%和18%(P＜0.01).结论:LPA通过激活血小板L-Arg转运和NOS活性,上调L-Arg/NOS/NO通路,增加血小板NO生成.     

慢性心力衰竭患者血浆Apelin12水平与神经末端脑钠肽水平及心功能关系的研究

目的观察慢性心力衰竭（CHF）患者血浆Apelin12含量变化并探讨其与NT—proBNP及心功能的关系。方法选取72例CHF患者和20例健康查体人员,收集各研究对象的一般资料并采集晨起空腹外周血,用酶联免疫吸附分析（ELISA）法测定血浆Apelin12水平,放射免疫法测定血浆NT—proBNP水平,进行分组分析对比研究。结果患者血浆Apelin12水平在早期（NYHAⅠ-Ⅱ）较对照组升高（P〈0．05）;在晚期（NYHAⅢ-Ⅳ）较对照组下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。血浆NT—proBNP浓度随着CHF患者NYHA心功能分级升高而升高（线形相关性检验：X^2=13．306,P=0．039）;多因素Logistic回归分析发现Apelin12与腰围、射血分数有正相关关系,而与舒张末内径、血压具有负相关关系（P〈0．05）。结论CHF患者血浆Apelin12、NT—proBNP水平随心功能变化而改变,可能一起参与心力衰竭的发生及发展。     

烟酸对矽尘暴露人群血清一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

【目的】观察烟酸对矽肺患者和矽尘高暴露人群血清NO、iNOS的影响。【方法】对矽肺患者和矽尘高暴露人群连续给予烟酸片干预12个月,观察其血清NO和iNOS。【结果】与对照组比较,接尘工人(0期)接受烟酸干预6个月和12个月后血清NO平均含量无显著性差异;可疑矽肺患者(0 期)接受烟酸干预6个月后血清NO平均含量低于对照组;与矽肺患者(Ⅰ期)接受烟酸干预6个月和12个月后干预组与对照组血清NO平均含量无显著性差异。接尘工人(0期)接受烟酸干预6个月和12个月后血清iNOS平均活力低于对照组;可疑矽肺患者(0 期)接受烟酸干预6个月和12个月后血清iNOS平均活力低于对照组;矽肺患者(Ⅰ期)接受烟酸干预6个月和12个月后后干预组与对照组血清iNOS活力无显著性差异。【结论】烟酸对矽肺纤维化的影响机制可能与其抑制NO与iNOS生成有关。     

氨基酸转运蛋白SLC6A14在大肠癌中的表达特征及其促癌功能研究

目的 研究氨基酸转运蛋白SLC6A14在大肠癌中的表达特征及其促进大肠癌细胞生长的作用.方法 采用实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测35对大肠癌及癌旁组织中SLC6A14 mRNA的表达水平;Western印迹法检测SLC6A14在大肠癌细胞株HT-29和SW620中的蛋白表达;免疫组化法检测108例...     

LAT1及CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1对其细胞生物学行为的影响

目的观察L型氨基酸转运载体1(LAT1)与其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中的表达及LAT1对细胞增殖与迁移能力的影响。方法将胃癌细胞SGC-7901分为1、10、100μmol/L BCH干预和空白对照共4组,RT-PCR、IF与Western blot检测胃癌细胞SGC-7901中LAT1与CD98hc mRNA、蛋白的表达。不同浓度的BCH作用于胃癌细胞SGC-7901 48 h后,新型四唑氮盐(MTS)比色法检测各组细胞生长情况,流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,Transwell细胞迁移小室检测各组细胞迁移能力的变化。结果 LAT1及其异二聚体CD98hc在胃癌细胞SGC-7901中呈高表达。与空白对照组相比,随着BCH浓度的提高,胃癌细胞SGC-7901的增殖能力与迁移能力逐渐降低。细胞周期分析发现,BCH处理的胃癌细胞组S期细胞减少,而G0/G1期细胞增加(P<0.05)。结论 LAT1及其异二聚体CD98hc在SGC-7901细胞中有表达,LAT1可能促进SGC-7901细胞的增殖,加快细胞周期进程,增强SGC-7901细胞的迁移能力。     

来源于肾上腺髓质素原的不同肽段对大鼠主动脉一氧化氮生成的影响

目的 :观察肾上腺髓质素 (ADM)对大鼠主动脉一氧化氮 (NO)生成的作用 ,以及肾上腺髓质素原N端 2 0肽 (PAMP)和肾上腺升压素 (ADT)对ADM这一作用的影响。方法 :ADM ,PAMP和ADT孵育离体大鼠主动脉 2h后 ,测定孵育液中亚硝酸盐的含量和所孵育组织中一氧化氮合酶 (NOS)的活性 ,其中亚硝酸盐的含量反映NO的生成量。结果 :ADM(10 -9～ 10 -7mol·L-1)浓度依赖地刺激大鼠主动脉组织亚硝酸盐的生成和NOS的活性。 10 -8mol·L-1的ADM孵育血管后 ,每毫克蛋白亚硝酸盐的生成量为 (0 .2 82± 0 .0 4 6) μmol,NOS活性为 (0 .3 2 3± 0 .0 5 6)pmol·min-1,显著高于对照组 [每毫克蛋白 (0 .173± 0 .0 2 6) μmol和 (0 .110± 0 .0 2 8)pmol·min-1,P <0 .0 1]。此浓度的ADM与相同浓度的PAMP或ADT共同孵育血管后 ,每毫克蛋白亚硝酸盐的生成量为 (0 .2 0 4± 0 .0 4 9)或(0 .15 0± 0 .0 3 6) μmol,NOS活性为 (0 .178± 0 .0 2 3 )或 (0 .12 3± 0 .0 3 1) pmol·min-1;ADM ,PAMP和ADT三者共同孵育 ,每毫克蛋白亚硝酸盐的生成量为 (0 .162± 0 .0 2 9) μmol,NOS的活性为 (0 .110± 0 .0 2 4 ) pmol·min-1,均显著低于ADM (10 -8mol·L-1)单独孵育组 (P <0 .0 1)。无论PAMP还是ADT单独孵育血管组织均不影响其亚硝酸盐