酵母双杂交系统的应用研究进展

酵母双杂交系统的应用范围巳扩展到蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA、蛋白质与RNA以及蛋白与其它小分子间相互作用的研究。基于传统酵母双杂交系统的衍生体系包括：单杂交、三杂交和逆向双杂交等。本文拟对酵母双杂交系统的原理、应用发展以及存在的不足作一简要介绍。     

酵母双杂交系统的应用研究进展

酵母双杂交系统的应用范围已扩展到蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA、蛋白质与RNA以及蛋白与其它小分子间相互作用的研究。基于传统酵母双杂交系统的衍生体系包括 :单杂交、三杂交和逆向双杂交等。本文拟对酵母双杂交系统的原理、应用发展以及存在的不足作一简要介绍     

酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究

酵母双杂交系统是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法,主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中,通过酵母双杂交系统能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。     

酵母双杂交系统的发展与细胞信号转导研究

酵母双杂交系统是一种建立在酵母菌基础上的遗传学分析方法，主要用于检测蛋白间的相互作用及克隆与已知蛋白相关的未知新基因。在功能基因组学和蛋白质组学的研究中起积极的促进作用。在细胞信号转导研究中，通过酵母双杂交系统能较全面真实地反映细胞内信号蛋白的网络性联系与调节。     

酵母双杂交系统筛选和验证与RARα-V相互作用的蛋白

目的 利用酵母双杂交技术筛选与RARα-V相互作用的蛋白,研究RARα-V的作用靶点及其生物学功能.方法 构建诱饵质粒pGBKT7-RARα-V,利用酵母双杂交技术从K562细胞cDNA文库中筛选与RARα-V相互作用蛋白的基因序列,并通过酵母回转试验与GST pull-down技术进行验证.结果 成功构建诱饵质粒,且没有毒性、渗漏和自激活现象;利用酵母双杂交技术筛选到16个能与RARα-V相互作用的蛋白质;经酵母回转试验得到8个阳性克隆;并经GST pull-down技术在体外验证了RARα-V与JTV-1蛋白的相互作用.结论 在细胞内RARα-V与多种蛋白有相互作用,白血病的发病机制可能与这些蛋白相互作用所致的生物学功能改变有关.     

丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定研究

目的构建含丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心(core,C)蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体,为C蛋白与宿主蛋白相互作用机制研究奠定基础。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增HCV 1b基因型C蛋白基因,经EcoR I和Pst I双酶切后插入到诱饵载体pGBKT7中,构建含HCV C蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-Core,经酶切分析及核酸测序分析加以鉴定。醋酸锂法将pGBKT7-Core转化入酵母菌株Y2HGold,蛋白印迹法检测C蛋白的表达,通过表型筛选检测诱饵蛋白对酵母细胞的毒性作用及对报告基因的激活作用。结果重组质粒pGBKT7-Core中的C蛋白基因为576 bp,经核酸测序分析与NCBI中注册的HCV 1b基因型C蛋白基因序列一致;转化酵母菌后检测到C蛋白的表达;HCV C蛋白对酵母菌Y2HGold无毒性,且对报告基因无激活作用。结论含HCV C蛋白基因的酵母双杂交诱饵载体构建成功,表达稳定。     

酵母双杂交系统3筛选人源核不均一核糖核蛋白E1的功能伙伴

背景:酵母双杂交系统3是目前最常用的筛选相互作用蛋白质的技术平台.目的:运用酵母双杂交系统3筛选人源核不均一核糖核蛋白E1的相互作用子.方法:构建酵母细胞表达载体hnRNP E1-pGBKT7/c-myc,转化酵母菌AH109,Western blot证实蛋白表达,进行毒性和自激活检验,与转化了cDNA文库的酵母菌Y187接合,经过营养删除、滤膜反应以及回交试验筛选酵母文库中与hnRNP E1相互作用的蛋白.结果与结论:hnRNP E1蛋白能在酵母中正常表达,对酵母细胞无毒性,不存在自激活现象.经缺陷培养基3次传代及滤膜反应初步筛选出了16个候选基因,再经NCBI基因比对(BLASTN和BLASTP)及酵母细胞中的免疫沉淀反应最终获得了8个候选蛋白.提示hnRNP E1可能参与特定细胞内的复制,转录,mRNA运输、细胞周期、细胞自噬及免疫应答的过程,并且可能参与某些遗传病的发病过程.     

问：荧光共振能量转移技术的原理和基本应用？

答：随着生命科学研究的不断深入，对各种生命现象发生的机制，特别是对细胞内蛋白质-蛋白质间相互作用的研究变得尤为重要。一些传统的研究方法如酵母双杂交、磷酸化抗体、免疫荧光、放射性标记等方法应用的前提都是要破碎细胞或对细胞造成损伤，无法做到活细胞生理条件下对细胞内蛋白质-蛋白质间相互作用进行实时动态研究。荧光共振能量转移（FRET）技术的应用结合基因工程等技术正好弥补了这一缺陷。[第一段]     

艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件优化及其纯化

目的：优化艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白诱导表达条件,在获得高表达融合蛋白后对其进行纯化,为艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3单克隆抗体的制备奠定基础。方法以诱导前菌液600 nm处的光密度值（OD600）、诱导温度、诱导剂异丙基-β-D巯基半乳糖苷（IPTG）浓度和诱导时间为单变量,分别诱导融合蛋白的表达,在此基础上采用正交试验对融合蛋白的诱导表达条件进行优化,通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳半定量分析融合蛋白的表达量及表达形式,以Western blot对融合蛋白进行鉴定,以GST 亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。结果融合蛋白诱导表达的最佳条件为诱导前菌液OD6000．8、IPTG浓度0．6 mmol/L、诱导时间12 h、诱导温度30℃,融合蛋白以可溶性蛋白表达形式为主,经纯化后,融合蛋白纯度超过90％。结论本研究成功优化了艰难梭菌毒素B受体结合区CDB3融合蛋白的诱导表达条件,获得大量表达,并成功对其进行了纯化,为后续单克隆抗体的制备奠定了基础。     

Factors effecting adoption of new neonatal and pediatric respiratory technologies

Objective There remains significant variation in the level and rate of adoption of new pediatric respiratory technologies, in spite of two decades of focus on “evidence-based medicine”. Nearly 50 years ago Rogers introduced a rubric for understanding issues that effect the adoption of technologies that included four factors plus evidence of advantage. We sought to determine whether Rogers' factors were useful in understanding contrasts between clinical utilization of technology and evidence of advantage. Design, setting, participants We conducted a written survey at two international neonatal/pediatric respiratory conferences. We asked about use of four specific indications for high-frequency ventilation (HFV) and nasal continuous positive airway pressure (nCPAP). Results These four specific respiratory therapies were aggressively used by most, despite significant differences in the evidence supporting their utility: elective use of HFV (57.4%); HFV to treat ARDS (62.7%); nCPAP for weaning following extubation (83.9%); and nCPAP to avoid intubation (82.1%). Conclusions Evidence of outcomes advantage should be the key factor in assessing potentially beneficial technologies. However, we suggest that understanding the influence of observe-ability, complexity and subjectivity of relative advantage explains much of the contrast between adoption level and outcome evidence. These factors described by Rogers, that encourage adoption of mediocre technologies or that retard adoption of potentially beneficial technologies, should be understood and acknowledged. This perspective can be applied not only to national adoption patterns, but also to adoption of best practices within an individual unit. Electronic supplementary material The online version of this article (doi:) contains supplementary material, which is available to authorized users.     

Mental health services responding to men and their anger

Due to their propensity for acting out with antisocial behaviours, angry men are often regarded as having antisocial personality disorder with little hope for treatment success. Whilst not denying the difficulties in working with angry men, this paper looks to challenge some of the received wisdom in this area. Antisocial personality disorder is compared with borderline personality disorder and the many similarities, including the association with childhood trauma, course of illness, symptoms and rates of occurrence, are discussed. Differences between the two groups may be associated with the internalization or externalization of anger. Some issues related to bias in diagnosis are raised, as is the universal hopelessness implied in the literature related to treatment of antisocial personality disorder. Some issues related to engaging traditional men are discussed. In this paper the term 'traditional men' is used to describe men who value stoicism, self-reliance, strength, work, status and aggression highly whilst denying any vulnerability and exhibiting restricted emotionality. There is a need to reframe the diagnosis in order to recognize the associated behaviours as being an adult manifestation of complex childhood trauma. Further, there is a need for treatment directed towards altering ongoing patterns of retraumatization which characterize the lives of these men. A case study is included to demonstrate a number of the issues involved in working with angry men. These include issues of connection, boundaries, safety and utilization of the general practitioner in setting up a containing structure. The case study is used to illustrate that when issues of connection and anger containment are positively addressed, good therapeutic outcomes are possible.     

ICU综合征的影响因素分析

目的 探讨影响ICU综合征发生的因素,以制定有效的护理对策.方法 收集2007年6-9月入住ICU的危重症患者的资料,包括年龄、性别、文化程度、宗教信仰、家庭收入、医疗费报销情况、是否有家庭成员缺失、原发病、患病时间、性格类型、急性生理及慢性健康评分Ⅱ等,采用SPSS 11.0统计软件包处理,单因素分析采用X2检验,多因素分析采用Logistic回归分析.结果 本组进入研究患者201例,其中54例发生ICU综合征,发生率26.9%;ICU综合征发生的影响因素为是否使用呼吸机治疗、住ICU时间、睡眠情况、性别、患病时间和是否经历同室患者死亡.结论 ICU综合征发病率较高,并受多种因素影响.有针对性地采取护理措施,如加强与患者交流,重视患者家属对患者的情感支持等,有助于降低ICU综合征发生率.     

小儿呼吸机相关肺炎的危险因素及护理对策

在机械通气后 2 4ｈ及以上发生的细菌性肺炎 ,称为呼吸机相关肺炎 (ＶＡＰ)。国外文献报道 ,ＶＡＰ的发生率为14 %～ 38% [1] ,为了探讨ＶＡＰ的危险因素及护理对策 ,本文选择我院机械通气在 2 4ｈ以上的 2 4 1例患儿进行研究。1　临床资料1.1　一般资料。 1999年 1月～ 2 0 0 2年 5月本院儿童ＩＣＵ收治的 ,机械通气时间在 2 4ｈ以上的 2 4 1例患儿 ,发生ＶＡＰ86例 ,男 5 1例 ,女 35例 ,新生儿 5 7例 ,儿童 2 9例。病种 :重度窒息及并发症 13例 ,肺出血 11例 ,反复呼吸暂停 5例 ,胎粪吸入性肺炎 8例 ,肺透明膜病 10例 ,重症肺炎 11例 ,中…     

影响医院护理研究因素调查及对策

通过问卷调查医院护理部及临床护士近五年护理科研及发表论文等有关情况。调查结果：医院护理研究工作落后，护理人员缺宪法相关护理科研知识，但参与护理研究的愿望强烈，且有参与研究工作的基础。因此我们提出了相应的对策：（1）建立医院护理研究基金；（2）成立医院护理研究学术团体；（3）进行系列护理研究知识的培训；（4）发挥大专护士的作用，加强护士在职学历教育；（5）加强医院护理研究管理工作。     

Effects of nicotine, cocaine and some of their metabolites on schedule-controlled responding by beagle dogs and squirrel monkeys

The behavioral effects of nicotine were compared with those of its metabolites, nornicotine and cotinine, in beagle dogs and squirrel monkeys. Subjects responded under a multiple fixed-interval (FI) 300-sec, fixed-ratio (FR) 30 response schedule of food presentation. Nicotine (0.01-1.0 mg/kg i.m.) and nornicotine (0.03-3.0 mg/kg i.m.) produced qualitatively similar effects in both dogs and monkeys. Nicotine produced dose-related increases, then decreases in rates of responding during FI components; rates of responding during FR components were only decreased. Nornicotine produced only dose-dependent decreases in responding during both FI and FR components. In the dogs, cotinine (0.01-10.0 mg/kg i.m.) produced only dose-dependent decreases in rates of responding during both FI and FR components. In the squirrel monkeys, however, cotinine (0.1-3.0 mg/kg i.m.) increased responding during FI components; a high dose of 30.0 mg/kg decreased responding during both FI and FR components. The behavioral effects of cocaine (0.03-3.0 mg/kg i.m.) and its metabolite norcocaine (0.01-1.0 mg/kg i.m.) were compared in the dogs. FI rates of responding first increased and then decreased with increasing doses of each drug, whereas FR rates of responding only decreased in a dose-related manner. Norcocaine was slightly more potent than cocaine in producing these effects on schedule-controlled responding in dogs. These experiments indicate the metabolites of nicotine and cocaine are behaviorally active and may contribute to the pharmacological profile of the parent compounds.     

精神分裂症患者家庭照料者负担的影响因素及护理对策

目的研究精神分裂症患者家庭照料者负担的影响因素及干预措施,从而减轻精神分裂症患者家庭照料者的负担。方法采用人口统计学问卷（自制）和照料者负担量表（caregiver burdenscale）对96例精神分裂症患者家庭照料者进行调查。结果精神分裂症患者家庭照料者负担的影响因素包括：照料者的年龄、文化水平、婚姻状况、居住地、与患者的关系以及患者的工作状况。结论精神分裂症患者家庭照料者在照料活动中承受了相当大的负担,应针对精神分裂症家庭照料者的年龄、文化水平、婚姻状况、居住地、与患者的关系以及患者的工作状况等进行个体化护理干预,从而减轻家庭照料者的负担。     

住院患者发生跌倒的相关因素分析及对策

目的调查和分析住院患者发生跌倒的相关因素,探讨有效控制和降低住院患者跌倒发生率的措施。方法对2005年1月至2008年12月19例住院跌倒患者进行回顾性调查和统计分析。结果19例住院患者跌倒案例中,主要是高龄患者(65岁的占68.42%),跌倒主要发生在高危时段(中班占26.31%、夜班占68.42%);分析相关因素有:(1)护士对患者评估不准确;(2)护士宣教、防范措施不到位。这些因素都与护理管理机制、人员结构层次等有关。结论医院应针对住院患者存在的高危因素,强化医护人员及患者、家属的安全意识,制定有效的防范措施,并落实到位,从而避免住院患者发生跌倒的危险。     

心内直视手术后呼吸衰竭的危险因素分析及对策探讨

目的:分析心内直视手术后发生呼吸衰竭的危险因素及其防治方法。方法:回顾分析2000年1月-2003年8月心内直视手术后发生呼吸衰竭32例成人患者的一般临床资料,以及是否存在合并症等资料;同时记录彩色多普勒超声心动图结果,术中心肌保护方式,转流时间,术前、术后的心肌酶谱,术后的血气分析结果,呼吸机功能参数,引流量,是否发生严重并发症和预后等临床资料,与同期心内直视手术术后呼吸机辅助支持不超过48h的患者中随机抽取32例进行原因分析和比较。结果:术后呼吸机辅助呼吸时间与患者术前心功能差、术中转流时间长、术中心肌保护不良、术后低氧血症以及发生心、肺、脑、多器官功能衰竭,术后引流多等6个因素是心内直视手术后呼吸衰竭的危险因素。结论:术前心、肺功能准备充分,尽可能缩短体外循环时间和主动脉阻断时间,预防和治疗心、肺、脑等重要器官并发症及合理应用呼吸机治疗,严密止血,列促进患者早日康复有重要意义。