RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）肽图谱

目的:建立重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]胰蛋白酶或V_8蛋白酶肽图分析方法。方法:酶解缓冲液分别为1%碳酸氢铵缓冲液(pH7.8)和磷酸盐缓冲液(pH7.8),酶与底物的比例为1∶10,酶解时间分别为3h和6h。采用ODS柱(250mm×4.6 mm,5μm),以三氟醋酸-水(0.1∶100)为流动相A,三氟醋酸-水-乙腈(0.1∶5∶95)为流动相B。胰蛋白酶洗脱梯度:0-30min,流动相A与B的比例为80:20→55:45。V_8蛋白酶洗脱梯度:0-8min,流动相A与B的比例为99:1→95:5;8-55 min,比例为95:5→48:52。流速:1.0mL·min~(-1),检测波长214nm,柱温:37℃。结果:无论用胰蛋白酶或V_8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36),控制好酶与底物的比例及酶解的时间,都可以得到重现性好的稳定的肽图。结论:本方法可用于重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)胰蛋白酶和V_8蛋白酶肽图分析,简便,可行。     

ELISA试剂盒方法测定重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)浓度

目的：定量检测血浆样本中重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）[rhGLP-1（7-36）]的含量。方法：用LINCO公司生产的试剂盒对rhGLP-1（7-36）的标准品和血浆样本进行定量检测。结果：测定的特异性、灵敏度、测量范围、重现性和回收率满足生物制品药代动力学研究的要求。结论：用LINCO公司生产的试剂盒定量血浆样品中的rhGLP-1（7-36），该检测方法符合生物制品检测方法，可以作为其药代动力学研究血药浓度的检测方法。     

重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)免疫原性的实验研究

目的:观察重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)]对小猎兔犬的免疫原性。方法:健康小猎兔犬随机分为rhGLP-1(7-36)高、中、低剂量组(200、100、50μg/kg)和生理盐水对照组,每组6只,雌雄各半。皮下注射给药,每天1次,每周6次,连续9个月。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和碱性磷酸酶免疫斑点试验检测犬血清中的抗体。结果:连续给药3、9个月及恢复期血清均未发现抗rhGLP-1(7-36)抗体。结论:长期给予rhGLP-1(7-36)对小猎兔犬无免疫原性。     

重组人胰高血糖素样多肽-1(7-36)在健康人体的药代动力学

目的研究重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGLP-1(7-36)](促胰岛素生成药)在健康志愿者的药代动力学。方法选择12,9名健康志愿者,分别单次(0.1,0.15,0.2mg)和多次(0.2mg)皮下注射rhGLP-1(7-36),连续5日,用荧光酶联免疫分析法测定其血药浓度,用DAS软件计算其药代动力学参数。结果单次:药-时曲线符合一房室模型,Cmax、AUC0-t随剂量增加而增加,tmax约为19~21min,t1/2为10~14min。多次:首次与末次给药后的Cmax分别为(726.76±94.07),(737.15±72.12)ng·L-1;tmax为18min左右;t1/2为15~17min。结论在0.1~0.2mg内,过程呈一级线性动力学特征,体内无蓄积,耐受性较好。     

RP-HPLC法测定重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）原料及其制剂的肽含量和有关物质

目的:建立重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)[rhGIP-1(7-36)]原料及制剂的肽含量和有关物质的RP-HPLC测定方法。方法:采用ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.2 mol·L-1硫酸钠缓冲液(用乙醇胺调节pH至2.3)-乙腈(82:18)为流动相A,50％乙腈为流动相B,调整流动相的比例[A-B(55:45)]使主峰的保留时间在20-25 min,流速为1.0 mL·min-1,检测波长214 nm,柱温为45℃。结果:线性范围为0.6-18.6μg,制剂平均回收率为96.01％,原料和制剂精密度试验RSD分别为0.15％和0.25％,最低检测限6.25 ng。结论:本方法可用于rhGLP-1(7-36)原料及其制剂的肽含量和有关物质的测定,具有准确、简便、快速、灵敏的特点。     

重组人胰高糖素样多肽-1(7-36)对胰岛β细胞分泌功能影响的实验研究

目的观察重组人胰高糖素样多肽-1（7-36）（促胰岛素生成药）对大鼠血糖和胰岛β细胞功能的影响.方法12周龄OLETF大鼠随机分为给药组和模型组（n=10）,并以同种系非糖尿病LETO大鼠作为对照组;干预2,8周后,处死;于12,14及20周龄时,行口服葡萄糖耐量试验,测定血糖及血清胰岛素.结果经该药治疗,能降低2型糖尿病OLETF大鼠的进食量和体质量,增加血清胰岛素水平,部分改善葡萄糖耐量.结论重组人胰高糖素样多肽-1（7-36）能够改善OLETF大鼠分泌胰岛素的功能,降低血糖.     

重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)对化学致糖尿病模型动物的降血糖作用

目的　本文研究了重组人胰高血糖素类多肽 1(7 36 )[rhGLP 1(7 36 ) ]对化学所致糖尿病模型动物的降血糖和促胰岛素分泌作用。方法　对四氧嘧啶型糖尿病小鼠及链脲霉素型糖尿病大鼠皮下注射不同剂量的rhGLP 1,分别于给药 4天后采血 ,收取血清 ,测定血糖及胰岛素值。结果　四氧嘧啶型糖尿病小鼠皮下注射 4 0、80 μg·kg-1rhGLP 1后 ,血糖值显著下降 (P <0 0 1) ,而 2 0 μg·kg-1剂量组则无显著性改变 ;链脲霉素型糖尿病大鼠皮下注射 2 8、5 6 μg·kg-1rhGLP 1后 ,血糖值显著下降 (P <0 0 5、P <0 0 1) ,而 14 μg·kg-1剂量组则无显著性改变。结论　rhGLP 1对实验动物部分 β细胞破坏的胰岛仍有促分泌胰岛素及降糖作用     

重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)对正常动物降糖作用的实验研究

目的 :观察rhGLP 1(7 36 )对正常动物的降血糖和促胰岛素分泌作用以及该作用的葡萄糖依赖性。方法 :用不同动物模型sc不同剂量的rhGLP 1(7 36 )后 ,收集血清 ,测定血糖值及胰岛素值。结果 :正常C5 7小鼠和家兔sc不同剂量的rhGLP 1(7 36 )后 ,血糖和胰岛素分泌均无明显改变 ,提示rh GLP 1(7 36 )并不影响血糖正常动物的胰岛素分泌及血糖 ;对于给糖负荷动物 ,rhGLP 1(7 36 )使其胰岛素分泌增加 ,并进而使升高的血糖明显降低 ,表明rhGLP 1(7 36 )具有明显的葡萄糖依赖的促胰岛素分泌作用。在C5 7小鼠和家兔糖耐量实验中发现 ,rh GLP 1(7 36 ) 16 μg·kg-1使糖负荷家兔胰岛素分泌增加 ,血糖升高曲线明显降低 ,说明rhGLP 1(7 36 )能明显增加动物对糖的耐受。结论 :rhGLP 1(7 36 )通过葡萄糖依赖的胰岛素分泌作用降低过高血糖 ,而不降低正常血糖 ,同时用量小 ,起效快 ,安全性高。     

rhGLP-1(7-36)对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护机制研究

目的 探讨rhGLP-1（7-36）对糖尿病肾病（diabetic kidney disease,DKD）大鼠肾脏的保护机制。方法 DKD模型大鼠随机分成模型组、rhGLP-1（7-36）低剂量组（20 μg·kg^-1）、rhGLP-1（7-36）中剂量组（40 μg·kg^-1）、rhGLP-1（7-36）高剂量组（80 μg·kg^-1）,另设正常组,皮下注射给药4周。全自动生化分析仪检测24 h尿微量白蛋白、血肌酐及尿肌酐水平,计算肌酐清除率;进行腹腔糖耐量实验并计算药时曲线下面积（area under the cure,AUC）;HE染色行肾组织病理形态学观察;Western blotting检测肾组织SIRT1蛋白水平。结果 与模型组相比,rhGLP-1（7-36）高剂量组大鼠肌酐清除率有明显改善（P<0.05）;24 h尿微量白蛋白水平明显下降（P<0.05）;腹腔糖耐量AUC水平明显减小（P<0.05）;肾组织病理变化有不同程度改善;肾组织SIRT1蛋白水平明显上升（P<0.05）。结论 rhGLP-1（7-36）能有效改善DKD大鼠的肾脏功能,其机制可能与上调肾脏组织的SIRT1水平有关。     

重组人胰高血糖素样肽-1对实验性糖尿病大鼠血糖的影响

目的观察重组人胰高血糖素样肽 1[rhGLP 1(7 36 )NH2 和rhGLP 1(7 37) ]对实验性糖尿病大鼠模型血糖和血浆胰岛素水平的影响。方法正常SD大鼠按 3.2 4g/kg腹腔注射 5 0 %葡萄糖 ,诱发暂时性高血糖动物模型。腹腔注射不同剂量 (2 0、4 0、80 μg/kg)rhGLP 1(7 36 )NH2 和rhGLP 1(7 37) ,间隔取血测定血糖与血浆胰岛素水平。正常SD大鼠按 6 0mg/kg腹腔注射链脲佐菌素 ,建立实验性 1型糖尿病大鼠模型。静脉输注rhGLP 1(7 36 )NH2 [4.0ng/(kg·min) ]12 0min并观察血糖变化。结果腹腔注射 4 0、80 μg/kgrhGLP 1(7 36 )NH2 和rhGLP 1(7 37)处理组大鼠的血糖、血浆胰岛素水平与对照组之间的差别具有非常显著性意义 (P <0 .0 0 1) ,且呈现一定的量效关系。二者之间促胰岛素分泌和降血糖活性差异无显著性。静脉输注rhGLP 1(7 36 )NH2 6 0min后 ,血糖水平 (17.0 4± 1.31)mmol/L(P <0 .0 5 ) ,12 0min后血糖水平 (11.98± 1.0 5 )mmol/L(P <0 .0 0 1)。结论rhGLP 1能显著改善实验性糖尿病大鼠的血糖水平 ,这与其促胰岛素分泌活性有关。     

胰高血糖素样肽-1及相关降糖药物的研究进展

胰高血糖素样肽-1（glucagon-like peptide-1,GLP-1）是近几年糖尿病治疗药物研究的热点之一,具备多重降血糖作用。它的两大类药物：GLP-1类似物和二肽基肽酶-Ⅳ抑制剂作为新的降糖药物相继完成临床研究,并在糖尿病治疗中发挥越来越重要的作用。本文就GLP-1的结构、药理作用以及两类相关降糖药物的临床应用作一概述。     

人胰高血糖素样肽-1类似物基因治疗对糖尿病大鼠机体代谢的影响

目的观察人胰高血糖素样肽-1(hGLP-1)类似物基因(2×Val2-hGLP-1)对糖尿病大鼠模型机体代谢的影响。方法建立糖尿病大鼠模型,尾静脉注射携带hGLP-1类似物基因的重组表达载体(pIRES2-EGFP/Val2-hGLP-1),观察30d,期间测定相关指标。结果治疗后糖尿病大鼠体重、进食及饮水量改善明显(P<0.01)。治疗15d后,血糖水平由(27.06±1.73)mmol/L降至(17.57±2.17)mmol/L(P<0.01),血清胰岛素水平由(5.53±0.79)mIU/L升高至(9.88±0.96)mIU/L(P<0.01)。总胆固醇水平降低(P<0.05或P<0.01)。hGLP-1蛋白在胰腺、肝、肾、肌肉组织中表达。结论 hGLP-1类似物基因可导入糖尿病大鼠体内并成功表达,基因治疗降低大鼠血糖,血脂水平,改善大鼠的机体代谢。     

胰高血糖素样肽-1在药物成瘾中的作用及机制

胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种肠降血糖素,具有调节葡萄糖稳态和食欲的作用,与2型糖尿病和肥胖症的发生发展有关。GLP-1主要通过调节胰岛素的分泌和激活GLP-1受体(GLP-1R)而起作用。最近研究发现GLP-1与可卡因、尼古丁、酒精和苯丙胺类等所致的成瘾行为有关。该文主要对GLP-1在药物成瘾中的作用及机制进行综述。     

胰高血糖素样肽1与糖尿病的治疗

胰高血糖素样肽1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是由肠道L细胞分泌的一种重要的肠促胰岛素激素,其在体内的主要生理作用有刺激胰岛素的分泌和释放、抑制胰高血糖素的分泌、促进胰腺β细胞的增殖并抑制其凋亡、抑制胃的排空、促进饱食感的产生等。GLP-1对糖尿病和肥胖具有很好的治疗前景。由于GLP-1在体内很快被二肽酰基肽酶Ⅳ降解,血浆半衰期很短,因而限制了其临床应用。现已发现了促进GLP-1分泌的物质,开发了多种GLP-1的衍生物和二肽酰基肽酶Ⅳ抑制剂,为开发新型糖尿病治疗药物开辟了新的天地。     

胰高血糖素样肽-1长效注射微球的研究

目的制备载胰高血糖素样肽-1(GLP-1)的长效注射微球，并对其体外释放特性及药效学进行考察。方法采用复乳法(W/O/W)制备载GLP-1聚乳酸-羟基乙酸嵌段共聚物(PLGA)的微球；考察微球的粒径大小、外观及包封率等理化特性；以HPLC法测定微球的体外释放速率；在体动物法评价微球制备工艺和体外释放过程中GLP-1的生物学活性。在糖尿病模型小鼠体内考察了微球的降血糖作用。结果微球球形圆整，分散性好，包封率在80%以上；GLP-1微球1个月的体外累积释放可达85%，其释放行为符合近似零级释放模式；使用明胶溶液作为内水相，较好地保持了制备工艺过程中的GLP-1生物学活性，在体外释放过程中GLP-1的生物学活性略有下降；GLP-1微球可显著降低糖尿病模型小鼠的血糖水平，降糖作用可维持1个月。结论用可生物降解的聚合物PLGA作为载体材料，可以将GLP-1制备成缓释1个月的注射微球。     

前胰高血糖素样肽-1对非糖尿病小鼠降糖作用的实验研究

摘要目的：观察胰高血糖素样肽-1（glucagon—likepeptide-1，GLP-1）的前体药物前胰高血糖素样肽-1（Pro-GLP-1）对非糖尿病小鼠的血糖和血清胰岛素水平的影响。方法：C57BL／6小鼠皮下注射不同剂量Pro-GLP-1，不同时间间隔取血测定血糖及血清胰岛素水平。结果：非糖尿病小鼠注射Pro-GLP-1后，血糖血清和胰岛素水平均无明显改变；给予糖负荷后的小鼠Pro—GLP-1呈剂量依赖性降低血糖浓度，同时升高血清胰岛素水平。等剂量Pro-GLP-1的降糖作用较GLP-1作用强。于第一次糖负荷后150min给予第二次糖负荷，Pro—GLP-1仍能发挥其降糖作用。结论：Pro—GLP-1通过葡萄糖依赖方式促进胰岛素分泌，剂量依赖性降低过高血糖，不降低正常血糖，其降糖作用可以维持3h以上。     

Pharmacokinetic study of methylnaltrexone after single and multiple subcutaneous administrations in healthy Chinese subjects

1. Pharmacokinetics of methylnaltrexone (MNTX) were evaluated after subcutaneous administrations (s.c.) in healthy Chinese subjects.

2. In a cross-over single dose study, 12 subjects were given 0.075, 0.15, and 0.3?mg/kg of MNTX bromide injection. In a multiple doses study, another 12 subjects subcutaneously received 0.15?mg/kg of MNTX bromide injection every 48?h, in total five administrations. The concentrations of MNTX in plasma were quantified by LC–MS/MS.

3. After single s.c. administrations of 0.075, 0.15, and 0.3?mg/kg of MNTX bromide, C_max values of MNTX were 93.5?±?28.6, 191?±?37, and 364?±?54?ng/mL, respectively, and AUC_0–∞ were 88.8?±?8.8, 181?±?16, and 357?±?34?ng?h/mL, respectively. The t_1/2 of MNTX was about 7.7?h. After multiple doses administration, the C_max, C_av, AUC_ss, and MRT_0–∞ values were 191?±?50, 3.79?±?0.40?ng/mL, 182?±?19?ng?h/mL, and 3.56?±?1.17?h, respectively.

4. Methylnaltrexone bromide displayed dose-proportional pharmacokinetics in the dose range of 0.075–0.3?mg/kg. After multiple doses administration, t_1/2 was slightly prolonged, with the cumulative factor of 1.02. This study provides a pharmacokinetic reference after a single dose and multiple doses of MNTX bromide in Chinese subjects.     

单次静滴人参皂苷-Rd注射液在中国健康志愿者的药代动力学及耐受性

目的 研究中国健康志愿者单次静滴人参皂苷-Rd(防治脑缺血中药)注射液的药代动力学及耐受性.方法 选12名健康志愿者,按双拉丁方设计分组,每位受试者于3个周期内交叉静脉滴注人参皂苷-Rd注射液10、40、75 mg 3个剂量;用LC/MS/MS法测定血浆人参皂苷-Rd浓度,用DAS软件计算药代动力学参数;试验过程中密切观察药物不良反应.结果 3个剂量(10、40、75 mg)的主要药代动力学参数:Cmax分别为(2.84±0.47)、(10.48±1.74)、(19.34±2.62)mg·L-1,t1/2分别为(19.29±3.44)、(18.41±2.92)、(17.67±2.01)h,AUC0-t分别为(27.26±8.12)、(112.62±24.08)、(208.36±51.36)mg·L-1·h-1,Cmax、AUC0-t与剂量的线性关系良好,随给药剂量的增加基本成比例增加.试验过程中未出现严重不良事件.结论 该药在中国健康受试者的体内过程符合线性药代动力学特征,剂量在10～75 mg内较安全.