冬凌草甲素提取工艺进一步纯化的研究

对冬凌萆甲素的提取纯化工艺进行进一步的优化，以提高其粗品的收率。重点建立了冬凌草甲素粗晶的进一步纯化工艺，为高纯度冬凌草甲素的制备提供了一种有效的方法。使纯度为99．2％的结晶收率达到了9．0％。     

冬凌草甲素提取纯化方法

目的:探讨香茶菜属植物冬凌草的主要有效成分冬凌草甲素提取纯化方法。方法:以HPLC法测定提取物中冬凌草甲素的含量为检测指标,考察影响冬凌草甲素提取分离的各种相关因素。结果:研究表明,按10 L/kg干草的比例使用80°C乙醇浸泡提取30 min得到的冬凌草浸膏是适合实验室大规模提取冬凌草甲素的方法,采用石油醚丙酮溶剂体系进行首次硅胶柱层析分离可以去除浸膏中大部分杂质,采用乙酸乙酯乙醇体系进行二次硅胶柱层析分离并加以乙醇结晶处理可以得到99%以上纯度的冬凌草甲素。结论:确定了适合实验室内较大规模提取冬凌草甲素的方法。     

HPLC法检测冬凌草甲素壳聚糖微球包封率及载药量

【目的]建立冬凌草甲素壳聚糖微球载药量和包封率测定的高效液相色谱分析方法。【方法]采用酸回流破乳法对制得的冬凌草甲素壳聚糖微球进行破乳,采用高效液相色谱法测定微球的载药量和包封率。色谱条件：流动相：甲醇-水（50：50）;Kromasil C18柱（50mm×4．6mm,5μm）;流速：1．0mL／min;检测波长：238nm;柱温：30℃。[结果】当冬凌草甲素投药量与载体的质量比为4：10时,载药量为2．238％,包封率为0．789％,达到最高值。[结论】此色谱奈件对冬凌草甲素的检测具有良好的稳定性。     

冬凌草甲素的提取工艺研究

目的 采用近红外光谱(NIR)技术对冬凌草中冬凌草甲素的提取工艺进行研究。方法 采用柱色谱法分离冬凌草甲素，应用NIR技术寻找最佳工艺条件。结果 此工艺所得冬凌草甲素纯度较高，且样品与对照品的HPLC峰保留时间相同，NMR和IR图谱相同。结论 本法洗脱速度快，安全、成本低、方便，并且重现性好。     

超滤法测定冬凌草甲素的血浆蛋白结合率

目的测定冬凌草甲素在健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆中的蛋白结合率,为设计合理的给药方案提供依据。方法采用超滤法结合高效液相色谱法（HPLC）对冬凌草甲素与大鼠、家兔和健康人血浆的蛋白结合率进行测定。结果冬凌草甲素在覆盖临床给药范围的5．4,21．6和108．0I．zg／mL下与健康人血浆的血浆蛋白结合率分别为80．6％,78．3％,76．2％,与大鼠的血浆蛋白结合率分别为69．3％,67．5％,68．1％．与家兔的血浆蛋白结合率分别为65．2％,66．7％,64．3％。覆盖临床给药浓度的3个浓度的冬凌草甲素在同种血浆中血浆蛋白结合率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论结果表明本法简便快速、灵敏度高、专属性好,能够满足测试生物样品的要求,超滤法结合高效液相色谱法可用于冬凌草甲素血浆蛋白结合率的检测。在本研究试验浓度范围内,冬凌草甲素的血浆蛋白结合率与药物浓度无显著相关性,不同种血浆的蛋白结合率试验结果表明,冬凌草甲素与健康人血浆、大鼠血浆和家兔血浆蛋白均具有中等强度的结合。     

冬凌草中冬凌草甲素的超临界CO2萃取工艺研究

目的 采用超临界萃取技术从冬凌草中萃取冬凌草甲素。方法 以冬凌草甲素的提取率为指标,通过正交试验考察萃取工艺条件,得到冬凌草甲素的超临界CO₂适宜的萃取工艺条件,采用HPLC法对萃取物进行定量分析。结果 冬凌草甲素的超临界CO₂适宜的萃取工艺条件为：压力35 MPa,温度328.15 K,夹带剂流量4 mL/min,CO₂流量25 g/min,各影响因素对萃取收率的影响程度：夹带剂流量>压力>温度>CO2流量。冬凌草甲素的提取率为0.402%,优于文献中报道的039%的提取率。结论 采用超临界萃取技术从冬凌草中萃取冬凌草甲素实用可行。     

冬凌草甲素脂质体的制备及体内药动学研究

目的 制备冬凌草甲素脂质体，延长冬凌草甲素体内循环时间，提高生物利用度。方法 采用薄膜分散法制备冬凌草甲素脂质体，测定其粒径、多分散指数、zeta电位及包封率。采用交叉实验法，以大鼠为模型动物分别经尾静脉单次注射(20 mg/kg)给予冬凌草甲素溶液和冬凌草甲素脂质体，利用超高效液相色谱法测定不同时间点的血浆冬凌草甲素质量浓度，PKSolver软件计算药动学参数。结果 制备得到的冬凌草甲素脂质体平均粒径为142 nm,多分散指数为0.246,zeta电位-24.3 mV,包封率84.2%。大鼠单次尾静脉注射冬凌草甲素溶液及脂质体，模型拟合均符合二室模型。冬凌草甲素溶液和冬凌草甲素脂质体在大鼠体内的消除半衰期分别为(3.14±0.61)h和(14.38±3.69)h,平均驻留时间分别为(3.57±0.89)h和(19.30±5.04)h,血药浓度曲线下面积分别为(2.36±0.27)μg·h/ml和(9.51±1.11)μg·h/ml,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 本研究制备的冬凌草甲素脂质体工艺简单可行，脂质体制剂通过延长半衰期和平均驻留时间，延长冬凌草甲素在大鼠体...     

冬凌草甲素、迷迭香酸在冬凌草植株内空间积累的动态规律

目的:揭示冬凌草甲素、迷迭香酸在冬凌草植株内空间积累的动态规律.方法:用高效液相色谱法测定冬凌草甲素、迷迭香酸的含量.结果:在同一株植物内,从上到下随着叶位及节问的降低,冬凌草甲素、迷迭香酸的含量也逐渐降低.结论:本结果为确定冬凌草的最佳采收部位提供了依据.     

冬凌草甲素衍生物的制备和评价

目的 为研究冬凌草甲素的构效关系,对冬凌草甲素进行结构修饰,合成其衍生物,并评价其细胞毒活性。方法 经常规提取分离得到冬凌草甲素(Ⅰ);通过氧化和酰基化,制备冬凌草甲素衍生物,所获产物采用NMR和MS确证结构;采用MTT法观察衍生物的细胞毒活性。结果 制备了6个冬凌草甲素的衍生物,分别为14-乙酰基冬凌草甲素(Ⅱ)、1,14-二乙酰基冬凌草甲素(Ⅲ)、14-对甲苯磺酰基冬凌草甲素(Ⅳ)、1-氧代冬凌草甲素(Ⅴ)、14-乙酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅵ)、14-对甲苯磺酰基-1-氧代冬凌草甲素(Ⅶ),其中化合物Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ为3个新化合物。初步药理实验表明部分衍生物细胞毒活性高于冬凌草甲素。结论 首次评价了1-氧代冬凌草甲素衍生物的细胞毒活性,其活性高于冬凌草甲素。     

冬凌草甲素对人红白血病细胞系K562细胞生长的抑制作用

冬凌草甲素（oridonin）是从冬凌草中提取的一种有效抗肿瘤成分,属四环二萜类化合物,分子式为C20H28O6,相对分子量为364,42。曾有研究显示冬凌草甲素具有抗肿瘤作用[1],我们发现该物质在体外可有效地抑制白血病细胞增殖,并诱导细胞调亡,报道如下。1材料与方法1．1细胞人红白血病细胞株K562细胞,用含10％灭活小牛血清的RPMll640培养体系培养,2～3d传代一次,取对数生长期细胞进行试验,分别用各种浓度的冬凌草甲素处理细胞,细胞数为2XIO‘几,并设对照组。1．2药物冬凌草甲素按文献方法提取［‘j,用少量二甲基亚巩（DMSO）…     

超声提取-HPLC法测定冬凌草中冬凌草甲素

冬凌草Rabdosia rubescens Hemsl.为一传统草药,俗称抗癌植物,在我国具有丰富的野生资源。该植物主要生长在我国黄河流域及其以南广大地区。冬凌草中的二萜类成分冬凌草甲素具有很强的抗肿瘤活性[1,2]。对于冬凌草甲素的测定方法,传统方法往往采用TLC法[4]及HPLC法[5]。由于索氏提取是一种连续热回流提取方法,不仅提取时间较长,而且药液长时间处于被加热状态,有效成分容易受到破坏,测出的冬凌草甲素的质量分数偏低,且提出的药液色重,因此测定前还必须进行脱色除杂,给测定工作带来很多不便。超声提取技术已被用于多种植物的提取,具有提取…     

HPCE法测定冬凌草片中冬凌草甲素的含量

目的:探讨高效毛细管电泳法测定冬凌草片中冬凌草甲素的方法.方法:样品用乙醚超声提取,缓冲液为20 mmol/L磷酸盐缓冲液,pH=7.0,紫外检测波长238 nm.结果和结论:线性范围为50～450 mg/L,回收率为96.97%,RSD为1.03%,该方法简便、快速且消耗试剂少,适于冬凌草片剂的质量控制.     

清心透毒颗粒的质量研究

目的 建立清心透毒颖粒的质量标准。方法 采用薄层层析法(TLC)鉴别清心透毒颖粒中的玄参、紫花地丁、丹参、五味子；用薄层扫描法测定制剂中黄芪甲苷的含量。结果 3批样品黄芪甲苷的平均含量为0．520mg/袋，RSD为1．36％。平均回收率为96．90％，RSD为1．37％。结论 上述方法简单、准确，能有效地控制制剂质量。     

冬凌草甲素对胆管癌QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响

目的 探讨冬凌草甲素对胆管癌细胞系QBC939细胞增殖、凋亡及端粒酶活性的影响.方法 采用不同浓度冬凌草甲素(0、10、20、40、80、100μmol/L)处理QBC939细胞24、48、72 h,MTT法测定QBC939细胞活力并计算增殖抑制率;不同浓度冬凌草甲素(0、20、40、80 μmol/L)处理QBC939细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,Western Blot法检测QBC939细胞B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,端粒酶重复序列扩增法检测QBC939细胞的端粒酶活性.结果 QBC939细胞增殖抑制率随冬凌草甲素的药物浓度升高、作用时间延长而升高;与0μmol/L冬凌草甲素组相比,其他浓度冬凌草甲素组的S期细胞比例降低;0、20、40、80 μmol/L冬凌草甲素组QBC939细胞的凋亡率分别为0.5％、14.8％、25.8％及37.7％;Western Blot结果显示随着药物浓度的升高,QBC939细胞的Bax表达量逐渐升高,Bcl-2表达量逐渐降低;其他浓度冬凌草甲素组QBC939的端粒酶活性均低于0μmoL/L冬凌草甲素组,且QBC939细胞的端粒酶活性随冬凌草甲素浓度的升高而降低(P＜0.05).结论 冬凌草甲素可抑制QBC939细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Bel-2表达以降低端粒酶活性有关.     

冬凌草化学成分的研究

目的：从冬凌草Rabdosia rubescerts Hemsl．的全草中提取分离活性成分。方法：采用硅胶柱层析．Sephadex LH-20凝胶柱层析进行分离，通过理化性质和波谱分析方法鉴定化合物结构。结果：从其石油醚及醋酸乙酯部分分离并鉴定了6个化合物，分别为胡萝卜苷(Ⅰ)、β-谷甾醇(Ⅱ)、冬凌草乙素(Ⅲ)、冬凌草甲素(Ⅴ)、Fffusanin E(Ⅳ)和Aurantiamide acetate(Ⅵ)。结论：化合物Ⅳ为首次从该植物中分得，化合物Ⅵ为首次从该属植物中分得。本文还首次对化合物Ⅳ的^1HNMR和^13CNMR作了较全面的归属。     

冬凌草不同提取工艺的研究

对冬凌草不同提取工艺进行了研究，并以冬凌草甲素为指标分别对其进行了含量测定。结果表明，破碎提取法较其它提取法提取的冬凌草甲素含量为最高。     

冬凌草甲素磷脂复合物的制备及其性质研究

目的制备冬凌草甲素磷脂复合物,并研究其理化性质。方法溶剂挥发法制备冬凌草甲素磷脂复合物,差示扫描量热法研究复合物的热力学性质变化,X射线衍射分析研究冬凌草甲素在复合物中的存在状态,紫外-可见分光光度法验证是否有新化学键生成,显微镜检复合物在水中分散情况。结果磷脂复合物中冬凌草甲素熔点峰发生改变;冬凌草甲素在磷脂复合物中以无定型存在,晶体衍射峰消失;紫外-可见分光光度法分析显示无新化合物生成;显微镜镜检证实冬凌草甲素磷脂复合物在水中不稳定、易析出晶体。结论成功制备冬凌草甲素磷脂复合物,但是该系统在水中不稳定,不能单独作为冬凌草甲素的药物传递系统。     

冬凌草甲素对大鼠肺及肝原代细胞非程序DNA合成的影响

目的 :探讨冬凌草甲素的抗突变作用。方法 :用大鼠肺及肝原代细胞非程序DNA合成 (UnscheduledDNASynthesis,UDS)实验检测冬凌草甲素对UDS的影响。结果 :冬凌草甲素可明显地抑制诱变剂诱导的UDS水平 ,尤其是对盐酸氮芥 (NH2 ·HCl)诱导肝原代细胞UDS的抑制作用更为明显 (P <0 .0 1) ,其抑制率达 73 8%。结论 :冬凌草甲素具有明显的抗DNA突变作用     

冬凌草甲素长循环冻干脂质体的制备及大鼠体内药动学研究

目的：研究处方及工艺,制备冬凌草甲素长循环冻干脂质体,延长冬凌草甲素体内循环时间。 方法：乙醇注入法制备冬凌草甲素长循环脂质体,冷冻干燥技术制备脂质体冻干制剂。使用葡聚糖凝胶柱纯化脂质体,单因素实验考察不同处方因素对脂质体包封率的影响,研究冻干脂质体复溶后粒径大小、分布及体外释放曲线。大鼠尾静脉给药后,HPLC测定血药浓度,KineticaTM软件计算药动学参数,比较长循环脂质体与普通制剂的药动学特性。 结果：最优长循环脂质体处方为：大豆磷脂∶胆固醇∶DSPE-PEG 2000=1∶0.5∶1.8（w/w）,药脂比为1∶6（w/w）。葡萄糖∶甘露醇=3∶1合用作为冻干保护剂,脂质体包封率约65%。复溶后脂质体平均粒径164 nm,分布均匀,长循环脂质体体外释放具缓释效果。大鼠静脉注射冬凌草甲素制剂均符合二室模型,长循环冻干脂质体的MRT约为普通脂质体及溶液组的2倍和6倍;AUC约为普通脂质体及溶液组的2倍及3倍,差异均具统计学意义（P<0.05）。 结论：选用合适的处方及工艺可得到包封率较高的冬凌草甲素长循环脂质体冻干制剂,显著提高冬凌草甲素大鼠体内循环时间和生物利用度。     

冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响

目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌SW1900细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 采用MTT法观察不同浓度冬凌草甲素对SW1900细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测冬凌草甲素作用于SW1900细胞后的凋亡情况;Western blot观察Bcl2-2和Bax表达变化.结果 冬凌草甲素明显抑制SW1900细胞的增殖,诱导SW1900细胞凋亡,具有明显的量-效与时-效关系.冬凌草甲素作用48 h后.凋亡过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调.结论 冬凌草甲素对人胰腺癌Sw1900细胞具有生长抑制和诱导凋亡作用,同时抗凋亡蛋白Bcl2-2表达的降低和促凋亡蛋白Bax上调是冬凌草甲素体外诱导胰腺癌SW1900细胞发生凋亡的重要作用机制之一.