The comparative study on ultrastructure and immunohistochemistry in AFP negative and positive hepatocellular carcinoma.

Summary: To comparatively investigate ultrastructural characteristics and expressions of AFP (alpha-fetoprotein) and Tn (Thomsen-Friedenreich-related antigen) protein in AFP negative (AFP-) and AFP positive (AFP+) primary hepatocellular carcinoma. Fourty-three cases of AFP- and AFP+ hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and five cases of normal liver tissues were divided into three groups: control group (normal liver tissue, n=5); AFP+ HCC group (the serum AFP level was higher than 10 ng/ml, n = 22); AFP- HCC group (the serum AFP level was lower than 10 ng/ml, n=21). The ultrastructural morphology was studied by transmission electron microscopy, the expressions of AFP and Tn protein were detected by immunohistochemistry and cell image analysis. 1. The immunohistochemical study showed that (1) the expression intensity and positive rate of Tn protein in AFP- HCC group were markedly higher than that in AFP+ HCC group (P<0.01); (2) The expression intensity of AFP in AFP- HCC group was lower than that in AFP+ HCC group (P<0.01). 2. The transmission electron microscopy demonstrated that some AFP- HCC cells linked closely with each other, others dispersed loosely just as cultured cells, the remarkable morphologic features in AFP- HCC cells were simple organelles, but they were abundant in the free polyribosomes. In AFP+ HCC group, all the HCC cells linked closely together and were rich organelles in their cytoplasm, especially the rough endoplasmic reticula. In addition, mitochondria and Golgi complex were obviously observed. (1) The AFP and Tn protein had discrepancy distribution in AFP- and AFP+ HCC tissues, Tn protein may be one of the early diagnostic indicators in AFP- HCC; (2) The synthetic locations of the AFP and Tn protein were different in hepatocarcinoma cells by ultrastructural observation.     

肝癌及其癌旁组织中细胞凋亡抑制蛋白survivin的表达

目的：分析细胞凋亡抑制蛋白survivin在原发性肝癌（HCC）及其癌旁组织中的表达,探讨其在肿瘤血管形成和抵抗肿瘤血管内皮细胞凋亡中的作用。方法：采集HCC癌组织、癌旁组织和正常肝组织标本,通过免疫组织化学方法分析survivin蛋白表达阳性率与HCC病理参数的关系,采用流式细胞术分析survivin蛋白在不同组织中的表达水平,用荧光定量PCR方法分析不同组织中survivin基因的表达水平。结果：survivin蛋白在肝癌组织中表达水平与门静脉癌栓的形成有关联（P<0.05）,与肿瘤大小、包膜、甲胎蛋白（AFP）水平及HCC病理分期均无关联（P＞0.05）;流式细胞术结果,肝癌组织中survivin蛋白表达水平高于癌旁组织和正常肝组织（P<0.05）,癌旁组织中survivin蛋白表达水平高于正常肝组织,但差异无统计学意义（P＞0.05）;荧光定量PCR检测,survivin基因只在肝癌组织中表达,在癌旁组织和正常肝组织中无表达,其表达水平组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论：细胞凋亡抑制蛋白survivin在肝癌组织中表达水平较高,但在癌旁组织中检测不到其基因的表达,survivin蛋白可能是通过旁分泌作用从肝癌病变处进入癌旁组织细胞中发挥抑制细胞凋亡的功能。     

基质金属蛋白酶-9及其抑制剂与肝癌侵袭转移的关系

目的研究基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其组织抑制剂-2（TIMP-2）在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其与HCC侵袭转移的关系。方法应用组织芯片技术和免疫组化方法（SP法）检测93例HCC组织、66例癌旁组织和36例正常肝组织中MMP-9和TIMP-2的表达情况。结果MMP-9在HCC癌组织中的表达阳性率（62．4％）和癌旁组织（57．6％）高于正常肝组织（11．1％，P〈0．001）；MMP-9的表达随癌的转移而升高（P〈0．01）。TIMP-2在HCC中表达阳性率（51．6％）低于癌旁组织（83．3％，P〈0．001）和正常肝组织（86．1％，P〈0．001）；TIMP-2表达随癌的转移而降低（P〈0．05）。MMP-9和TIMP-2与患者合并硬化、组织分化、AFP水平和HBsAg状态无关（P〉0．05）。结论MMP-9和TIMP-2表达与HCC的侵袭转移密切相关，MMP-9和TIMP-2可以作为临床判断HCC侵袭转移有价值的参考指标。     

TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系。Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异。结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%)。TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关。TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系。结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移。     

肝动脉化疗栓塞联合射频消融术治疗肝癌的临床观察

目的 探讨肝动脉化疗栓塞(TACE)联合射频消融术(RFA)对肝癌综合治疗的效果.方法 47例原发性肝癌,分为单纯TACE组25例,联合组22例,先行TACE治疗,再行RFA治疗.治疗效果以1个月后增强CT扫描及甲胎蛋白(AFP)水平评估.结果 治疗后TACE和联合组AFP转阴率分别为39.1%和52.6%(P=0.428);缓解率分别为40%和72.7%(P=0.025);1年生存率分别为64%和86.4%(P=0.007).结论 TACE联合RFA治疗效果优于单纯化疗栓塞.     

GPC3在原发性肝细胞癌中的表达及其临床病理相关性研究

目的 测定磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican-3,GPC3）在原发性肝细胞癌、癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达,分析其与原发性肝癌临床病理特征的关系.方法 筛选赣州市人民医院肝胆外科近5年手术切除并经病理确诊为肝细胞癌患者43例（术前均未经任何抗肿瘤治疗）,应用免疫组化通用型二步法检测并对比GPC3在原发性肝细胞癌组织、癌旁组织、肝硬化组织及正常肝组织中的表达情况.同时对比分析GPC3和AFP在原发性肝细胞癌中的阳性表达率.结果 1.GPC3在肝细胞癌组织中阳性表达率高,与在癌旁组织、肝硬化组织及正常肝脏组织中表达差异有统计学意义（P＜0.05）.2.GPC3表达与肿瘤分化程度有关,差别有统计学意义（P＜0.05）.3.GPC3与AFP在肝细胞癌组织中的表达比较,GPC3对肝癌免疫组化诊断敏感性更高（P＜0.0005）.结论 1.与目前应用最广泛的肿瘤标志物AFP相比,GPC3具有更高的免疫组化诊断敏感性,有望成为一种新的免疫标志物应用于肝癌的临床免疫组化诊断和鉴别诊断.2.GPC3表达强度与肝癌患者肿瘤细胞分化有一定相关性.     

肝细胞癌甲胎蛋白表达与肝祖细胞激活状态及患者预后的关系

目的 探讨原发性肝细胞癌组织中甲胎蛋白（AFP）表达与肝祖细胞激活状态的相关性,并进一步观察对预后的影响。方法 回顾性分析92例接受根治性切除术的原发性肝癌患者资料。其中男性76例,女性16例;年龄25~72岁,中位年龄51岁。对手术病理标本进行AFP和细胞角蛋白19（CK19）染色,定量;分析祖细胞的激活状态评分与AFP表达的相关性;采用单因素Kaplan-Meier生存分析,观察AFP的表达对术后生存时间的影响。 结果 肝癌组织AFP高表达组总生存期短于肝癌组织AFP低表达组（P = 0.021）。祖细胞的激活状态评分与血清AFP浓度、肝癌组织AFP表达呈正相关（P = 0.046,P < 0.001）。结论 肝细胞癌甲胎蛋白表达对肝癌预后有不利影响,它与肝脏祖细胞的激活状态有密切相关性。     

C-myc、p53基因和AFP在家兔诱发性肝癌及癌旁组织中的表达

目的获得家兔二乙基亚硝胺诱发肝脏肿瘤的形态学资料,探讨Cmyc、p53基因和甲胎蛋白的表达情况。方法取5例家兔多结节肝癌的肿瘤性结节25个,瘤旁肝组织每例1块,进行一般病理组织学和超微结构观察。同时,以免疫组化方法检查Cmyc、p53基因和AFP的表达情况。结果和结论25个结节中,良性增生10个,高分化肝细胞癌11个,中分化肝细胞癌4个。家兔肝细胞癌的发生与Cmyc基因、AFP的过表达和p53基因的突变有关。参照肿瘤诱发过程中,增生性肝硬化、腺瘤样增生、高分化癌、中分化癌的变化顺序,在所检测的三种标志物中,Cmyc蛋白为最早出现的肿瘤标志物,p53基因突变相对较晚出现,AFP在恶性肿瘤结节中的表达率最高(933%)。     

AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨醛糖还原酶（AKR1B10蛋白）在肝癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化技术检测89例肝细胞癌组织及26例肝良性病变组织的AKR1B10蛋白表达,并检测89例肝癌患者的术前AFP、AFU水平．分析AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的表达及与患者术前血清AFP、AFU水平的关系。结果AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的阳性表达率显著高于肝良性病变组织中的阳性表达率（P〈0．05）。在肝细胞癌组织中．AKR1B10蛋白阳性表达率为843％,显著高于患者术前血清AFP的阳性率（68．5％）和血清AFU的阳性率（70．8％）。结论AKR1B10蛋白在肝细胞癌组织中的表达率显著高于肝良性病变组织,在肝细胞癌组织中的阳性率显著高于患者术前血清AFP、AFU的阳性率,为肝细胞癌的早期诊断提供了一个好的指标。     

黑色素瘤相关抗原A6在肝细胞癌中的表达及与预后的关系

目的 探讨黑色素瘤相关抗原A6(MAGEA6)在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及与预后的关系。方法 选取2013年2月—2016年10月海南省人民院收治入院的120例HCC患者为研究对象。分析受试者的年龄、性别、饮酒史、甲胎蛋白（AFP）、肿瘤直径、分化程度、TNM分期、肝功能Child-Pugh分级、淋巴结转移等临床资料。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测MAGEA6和AMPK mRNA的表达,免疫组织化学法检测MAGEA6蛋白的表达。根据肿瘤组织MAGEA6 mRNA相对表达量的中位值,将HCC患者分为MAGEA6低表达组和高表达组。比较两组患者的临床病理特征,绘制两组患者的Kaplan-Meier生存曲线,采用一般多因素Cox回归分析影响HCC患者预后的独立危险因素,Pearson法分析MAGEA6 mRNA与AMPK mRNA表达的相关性。结果 肿瘤组织MAGEA6 mRNA相对表达量、MAGEA6阳性率、MAGEA6蛋白免疫组织化学法评分高于癌旁组织（P <0.05）。MAGEA6低表达组与高表达组HCC患者的年龄、性别、饮酒史、分化程度、ChildPugh分级比较,差异...     

凹陷蛋白-1基因在乙型肝炎相关性肝癌中的表达及其意义

目的 探讨候选抑癌基因凹陷蛋白(Caveolin)-1在肝细胞癌(HCC)中的表达及其与HCC侵袭、转移的关系.方法 对123例HCC标本以及MHCC-97L和MHCC-97H肝癌细胞株进行实时荧光PCR法、免疫组化法及Western印迹法检测Caveolin-1 mRNA及蛋白表达,分析其表达与肿瘤侵袭、转移性间的关系.结果 Caveolin-1在肝癌组织中较癌旁组织表达明显下调(P<0.05);HCC 中的表达水平与大/小肝癌(≥5 em或<5 cm)、AFP表达水平、有无大血管侵袭、肿瘤单发或多发及pTNM分期5个因素均呈显著负相关(P<0.05),其在MHCC-97H细胞株中的表达显著低于MHCC-97L(P=0.000);Caveolin-1与HBx表达显著负相关(P=0.044).结论 Caveolin-1表达与HCC侵袭转移密切相关,其表达下调,预示HCC的预后不良;有可能存在HBx蛋白下调Caveolin-1表达的机制.     

Expression of β-catenin protein in hepatocellular carcinoma and its relationship with alpha-fetoprotein

This study aimed to investigate the expression of β-catenin in hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and its relationship with α-fetoprotein (AFP) in HCC. Immunohistochemistry was used to determine the expression of β-catenin in normal liver tissues (n=10), liver cirrhosis tissues (n=20), and primary HCC tissues (n=60). The relationship between β-catenin expression and clinical parameters of HCC was investigated. Real-time PCR and Western blotting were used to detect the mRNA and protein expression levels of β-catenin in the liver cancer cell line SMMC-7721 transfected with a plasmid encoding AFP, and also the mRNA and protein expression levels of β-catenin were measured in the liver cancer cell line Huh7 before and after the transfection with AFP shRNA plasmids. The results showed that β-catenin was only expressed on the cell membrane in normal liver tissues. Its localization to the cytoplasm and nucleus of cells was observed in a small proportion of cirrhotic tissues or adjacent HCC tissues, and such ectopic expression of β-catenin was predominant in HCC tissues. The abnormal expression of β-catenin was correlated with serum AFP levels, cancer cell differentiation and vascular invasion (P<0.05). Additionally, the increased expression of AFP resulted in the upregulation of β-catenin mRNA and protein levels, while knockdown of AFP with AFP shRNA led to significantly decreased β-catenin mRNA and protein levels (P<0.05). It was suggested that the abnormal expression of β-catenin is implicated in hepatic carcinogenesis and development. AFP can lead to increased expression of β-catenin, which may account for the poor prognosis of AFP-associated HCC patients.     

肝癌组织中nm23-H1、PTEN的表达及其临床病理的意义

目的探讨nm23-H1、PTEN在肝细胞癌中的表达及其与患者的临床病理特点的关系。方法应用免疫组化S-P方法,检测50例肝癌组织中nm23-H1、PTEN的表达,分析其与临床病理之间的关系。结果 nm23-H1、PTEN蛋白阳性表达为棕黄色,定位于细胞浆。10例正常肝组织和50例癌旁肝组织均可见阳性表达。肝癌组织nm23-H1、PTEN阳性率表达分别为60%（30/50）、54%（27/50）,明显低于癌旁肝细胞阳性率表达100%（50/50,P〈0.001,P〈0.001）。nm23-H1和PTEN表达与肝癌病理分级、临床分期、肝内转移密切相关,而与患者性别、年龄、肝癌癌灶大小、肝包膜有无、甲胎蛋白水平无明显相关性。结论肝癌组织中nm23-H1、PTEN表达减低与肝癌发生发展有相关性。检测nm23-H1、PTEN两种蛋白在肝癌组织中的表达能反映肝癌的恶性程度及侵袭转移能力。     

TP、VEGF在原发性肝细胞癌中的表达及与肝癌血管生成的相关性研究

目的检测原发性肝细胞癌（HCC）肝组织中胸苷磷酸化酶（TP）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达水平,井对肝癌组织中TP和VEGF的表达与肝癌血管生成进行相关性分析。方法应用免疫组织化学方法检测72例肝癌组织及19例正常肝组织中的TP、VEGF表达及微血管密度（MVD）均值,并分析其与HCC病理学分级和临床分期的相关性。结果肝癌组织TP、VEGF阳性表达率及MVD均值明显高于正常肝组织（P〈0．05）,且TP、VEGF的表达与肝癌病理分级、肿瘤包膜是否完整、肿瘤大小、有无门静脉癌栓明显相关（P〈0．05）;但与性别、年龄、AFP、是否肝硬化、child肝功能分级无关（P〉0．05）。结论TP、VEGF的表达与肝癌血管生成呈正相关,TP、VEGF在肝癌血管生成中具有协同作用。     

肝癌组织GP73过表达及血GP73异常对肝癌的诊断价值

目的：分析肝癌（HCC）组织及外周血高尔基体糖蛋白-73（GP73）表达对肝癌的诊断价值。方法：以Western Blot法检测肝癌组织GP73表达;收集肝病患者外周血标本,以酶联免疫吸附法检测GP73水平。结果：肝癌、癌旁组织GP73均有表达,但癌组织GP73蛋白条带灰度均值为480.7,明显高于癌旁（209.0,t=6.453,P〈0.001）。外周血GP73水平,正常对照组（28.83±21.00）ng/mL,慢性肝炎组（49.86±40.46）ng/mL,肝硬化组（62.30±56.30）ng/mL和肝癌组（87.25±78.41）ng/mL,肝癌组明显高于对照组和良性肝病各组（P〈0.05）;肝癌患者血GP73表达与HBV感染、伴肝外转移密切相关（P〈0.05）,与血AFP呈显著正相关（r=0.961,P〈0.05）;经临床综合评价,受试者工作特征曲线下面积AFP为0.877,GP73为0.931,且两者对肝癌具有互补诊断价值。结论：GP73过表达与肝癌发展密切相关,它的定量检测有助于肝癌的诊断与鉴别。     

蛋白激酶PRKX在肝癌组织中的表达及意义

目的 研究PRKX在肝癌组织中的表达和临床意义. 方法 收集36例肝癌患者肝癌组织(肝癌组)和癌旁肝组织(对照组).分别采用RT-PCR和Western blot的方法检测PRKX mRNA和蛋白在肝癌组和对照组中的表达. 结果 RT-PCR和Western blot结果显示,PRKX mRNA和蛋白在人肝组织有表达,且在肝癌组的表达显著高于对照组(mRNA肝癌组／mRNA对照组=1.48;蛋白肝癌组／蛋白对照组=1.14). 结论 PRKX在肝癌组织表达高于癌旁肝组织,可能与肝癌发生、发展相关.     

STAT3基因在人肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC7721和肝癌组织中的表达及意义

目的：探讨STAT3基因异常活化在人原发性肝癌发生、发展中的作用及可能的机制。方法：应用免疫组化染色法、RT-PCR和Western blotting法检测人肝癌细胞株HepG2、Bel7402、SMMC7721和肝癌组织中STAT3基因的mRNA和蛋白水平表达。 结果：肝癌细胞株SMMC7721、Bel7402和HepG2中均有STAT3基因的高表达,3种肝癌细胞间表达量比较差异无显著性（P>0.05）。原发性肝癌组织和癌旁组织中均有STAT3的mRNA及蛋白水平的高表达,与正常肝组织比较差异有显著性（P<0.05）,而肝癌组织与癌旁组织比较差异无显著性（P>0.05）。肝癌组织中VEGF、survivin和c-myc 的mRNA表达上调,p53的mRNA表达下调。结论：STAT3
的异常活化可能发生在癌变的早期,在肝癌的形成和发展中可能起重要的促进作用。     

MT1G 在中晚期肝细胞癌组织中的甲基化状态 及对索拉非尼治疗预后的预测价值

目的 探讨MT1G 在中晚期肝细胞癌组织中的表达和甲基化状态,以及对索拉非尼治疗预后的 预测价值。方法 调取西安交通大学第一附属医院病理室保存的2016 年11 月—2018 年5 月行肝切除术的 86 例中晚期肝细胞癌患者的病理组织蜡块。分别采用免疫组织化学法和甲基化特异性聚合酶链反应（MSP） 检测肝细胞癌组织中MT1G 蛋白的表达和甲基化状态,并分析其与患者临床病理特征的关系。所有患者术 后接受索拉非尼治疗,随访患者停药时间和总生存期。结果 肝细胞癌组织样本MT1G 蛋白阳性表达率低 于癌旁组织[34.88% VS 66.28%],且MT1G 基因启动子甲基化率高于癌旁组织[60.46% VS 37.21%]（P <0.05）。 MT1G 蛋白阳性表达率与MT1G 基因启动子甲基化率呈负相关（r =-0.787,P =0.000）。肝细胞癌组织 MT1G 蛋白表达与肿瘤Child-Pugh 分级、BCLC 分期、术前血清甲胎蛋白水平有关（P <0.05）。MT1G 蛋白 阳性表达患者中位停药时间为15.0 个月,短于MT1G 蛋白阴性表达患者20.0 个月（P <0.05）。MT1G 蛋白阳 性表达患者与阴性表达患者中位生存时间[20.0 个月 VS 25.0 个月] 和总生存率[43.33% VS 60.71%] 比较,差 异无统计学意义（P >0.05）。结论 MT1G 蛋白在中晚期肝细胞癌组织中表达降低,可能与MT1G 基因启动 子过度甲基化有关。而且MT1G 阳性表达预示中晚期肝细胞癌患者接受索拉非尼治疗预后不良。     

Mcl-1在肝硬化和肝癌组织中的表达及临床意义

目的：分析髓样细胞白血病-1（Mcl-1）在原发性肝癌（HCC）和肝硬化（LC）组织中的表达及其临床意义.方法：免疫组化法分别检测50例HCC、50例LC和50例对照组肝组织中Mcl-1的表达,并分析其与肝癌临床病理学特征的相关性.结果：与对照组比较,Mcl-1在LC和HCC组中的表达增强（P＜0.05）;肝癌组织中Mcl-1的表达与肿瘤直径、Edmonson grade分级、肝内外转移、复发、静脉浸润相关（P＜0.05）;Mcl-1高表达患者与低表达患者生存时间差异有统计学意义（P＜0.05）;多因素分析显示,Mcl-1表达、肿瘤大小和血清AFP值分别是影响肝癌预后的独立因素.结论：Mcl-1的过表达可能与HCC的发生、发展有关.Mcl-1表达影响肝癌患者预后.     

肝细胞癌组织中ZEB-1的表达及意义

目的 探讨ZEB-1在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学SP法和蛋白质印迹分析法检测ZEB-1在62例HCC组织、48例相应癌旁肝硬化组织和10例正常肝组织中的表达,并分析其与HCC临床病理特征的关系.结果 免疫组化结果显示ZEB-1在HCC组织及癌旁肝硬化组织中呈阳性表达,阳性率分别为93.5％(58/62)和83.3(40/48).蛋白质印迹分析显示ZEB-1蛋白在HCC组织中的表达高于相应癌旁肝硬化组织和正常肝组织(P＜0.05).ZEB-1在HCC组织中的表达与临床分期、肿瘤分化程度、有无发生转移、有无门脉癌栓及有无术后复发等因素相关(P＜0.05),与肿瘤直径、肿瘤数目、血清AFP水平等因素无关(P＞0.05).结论 ZEB-1的高表达与肝癌的发生、发展密切相关,并且有可能参与HCC细胞的上皮间质转化而促进肝癌的侵袭和转移.