新生大鼠心肌细胞内Ca2+的空间分布及调控的离体研究

采用激光扫描共聚焦显微镜、荧光分光光度计和荧光显微镜,观察培养的大鼠心肌细胞和离体细胞核的Ca2+信号变化.结果:培养的心肌细胞内Ca2+荧光分布不均匀,即核的荧光强度显著高于胞浆;β-受体激动剂异丙肾上腺素(10-6mol/L)使核钙浓度[(Ca2+)n]增加程度显著大于胞浆钙浓度[(Ca2+)c],β-受体阻滞剂心得安(10-3mol/L)浓度显著降低细胞核/胞浆游离钙梯度;P物质(10-6mol/L)作用下,[(Ca2+)n]增加2.17倍,而[(Ca2+)c]仅增加91.45%(P<0.05),[(Ca2+)n]/[(Ca2+)c]大幅度上升.心肌细胞经钙泵抑制剂thapsigargin和EGTA刺激后,可见核膜腔存在钙库.正常心肌细胞存在小幅度的钙震荡,分别加入去甲肾上腺素(10-5mol/L)、AngⅡ(10-6mol/L)和ATP(3×10-3mol/L),均使心肌细胞胞浆Ca2+和核Ca2+震荡幅度明显升高(P<0.01),NO-供体硝普钠(10-5mol/L)和KCI(20mmol/L)使钙的周期性震荡消失.IP3和Ryanodine分别使核Ca2+短暂升高1.68倍和1.93倍(P<0.001),而Thapsigargin预处理心肌细胞核,均能显著的阻断IP3和Ryanodine的致核Ca2+升高作用(P<0.05),荧光染色观察可见IP3受体染色主要位于核内膜,而钙泵和ryanodine受体染色主要位于核外膜.结论:心肌细胞核是细胞内的钙库之一,心肌细胞核也存在Ca2+震荡,并受多种因素影响.心肌细胞核膜上存在Ca2+-ATPase、RyR和IP3受体等核Ca2+摄取和释放系统.核Ca2+释放的前提条件是首先存在核Ca2+摄取.     

钙通道阻滞剂对胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响

目的　观察硝苯地平 ( Nif)对五肽胃泌素促人结肠癌细胞增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法　采用流式细胞仪检测细胞内游离钙离子浓度水平 (〔 Ca2 +〕i) ,结合 MTT比色法测定细胞增殖情况。结果　 2 .5× 10 - 6mol/ L的五肽胃泌素 ( PG)作用于 HT2 9细胞后 ,可引起〔 Ca2 +〕i 水平迅速升高 ( P<0 .0 1)。 10 - 5 mol/ L的 Nif可使 PG引起的〔 Ca2 +〕i 水平升高幅度明显降低 ( P<0 .0 1) ,同时 10 - 5～ 10 - 6mol/ L 的 Nif可以抑制 PG促 HT2 9细胞增殖的作用 ( P<0 .0 5 )。结论　 Nif通过抑制胞外 Ca2 +内流 ,阻止〔 Ca2 +〕i 水平升高 ,是其抑制 PG促 HT2 9细胞增殖的一个主要机制     

丙泊酚对新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响

目的　观察不同浓度丙泊酚对氯化钾和咖啡因诱发的新生和成年大鼠心肌细胞钙离子移动的影响 ,探讨其心肌抑制作用的可能机制。方法　用Fluo 3AM钙荧光指示剂染色培养的新生大鼠或急性分离的成年大鼠心肌细胞 ,在激光共聚焦显微镜下动态观察使用丙泊酚前及丙泊酚 (5 0 ,2 5 0 μmol/L)预处理后 ,氯化钾和咖啡因诱发的细胞内钙离子浓度的变化。结果　丙泊酚 5 0 μmol/L使氯化钾诱发的新生或成年大鼠心肌细胞内钙荧光强度的峰值下降 ,较对照组有明显差异 (P <0 .0 1 ) ,对新生大鼠心肌细胞的抑制作用较成年大鼠明显。丙泊酚 2 5 0 μmol/L使细胞内钙荧光强度峰值进一步降低。但两种浓度的丙泊酚对咖啡因诱发的两种心肌细胞钙荧光强度的升高均无明显影响 (P >0 .0 5 )。结论　丙泊酚浓度依赖地降低心肌细胞内钙离子浓度 ,与其抑制细胞外钙内流有关 ,它对新生大鼠心肌细胞的抑制作用更强。提示临床上使用丙泊酚作为麻醉剂 ,尤其对小儿麻醉时应有足够重视。     

柴胡皂苷元D对C6大鼠神经胶质瘤细胞内游离Ca2+浓度的影响

目的探讨柴胡皂苷元D (Saikogenin D, SGD)对C6大鼠神经胶质瘤细胞内游离Ca2 浓度[Ca2 ]i的影响.方法采用 Fura-2/AM荧光指示剂测定SGD引起的C6大鼠神经胶质瘤细胞[Ca2 ]i变化.结果 SGD(1×10-5～1×10-4 mol/L)剂量依赖性地升高[Ca2 ]i,其EC50为3.5×10-5 mol/L.SGD的升高[Ca2 ]i作用被Thapsigargin显著降低.2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB, 1×10-4 mol/L) 和 U73122 (2×10-6 mol/L)显著降低组胺的升高[Ca2 ]i作用,但对SGD的升高[Ca2 ]i作用无影响.咖啡因和阿诺碱不影响SGD升高[Ca2 ]i.结论 SGD通过独立于肌醇三磷酸(IP3)受体系统和阿诺碱受体系统的机制,引起细胞内钙释放,导致[Ca2 ]i升高.     

尾加压素Ⅱ对乳鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞内游离钙的影响

目的 观察尾加压素Ⅱ(UⅡ)对肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和对系膜细胞内游离钙的影响,为防治糖尿病肾病系膜细胞增殖病变提供理论依据.方法 以培养的SD乳鼠肾小球系膜细胞为实验模型,用UⅡ刺激GMCs,应用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞增殖,用Fluo3/AM荧光标记细胞内游离钙离子,激光共聚焦显微技术动态测定GMCs内游离钙浓度变化.结果 ①在10-10～10-7 mol/L范围内,随着UⅡ作用浓度的增加,MTT光吸收值逐渐升高.②UⅡ激发GMCs内[Ca2 ];升高作用分2个时相,即瞬时峰值升高和缓慢持久升高,对峰值升高呈剂量依赖方式,在10-10～10-7 mol/L范围内引起峰值升高,且随着剂量增加,幅度增大.结论 UⅡ可以诱导GMCs的增殖,可能与细胞内钙离子浓度的升高有关,且UⅡ对GMCs内[Ca2 ];浓度影响有2个时相.提示UⅡ在糖尿病肾病系膜细胞增殖的发病学中可能发挥重要作用.     

突触前细胞内钙的释放能增强Mossy Fiber-CA3突触间的突触传递

本文研究了在2周左右的大鼠海马脑片上,突触前细胞内钙的释放和突触后对刺激mossy fiber传导通路的反应的相关性.用膜片钳全细胞电压钳的方法 记录了海马CA3区的锥体细胞的兴奋性突触后电流.记录电极的电极内液含有较高浓度的BAPTA以中和细胞内升高的钙浓度.刺激电极放置在mossy fiber的传导通路上,分别给予20,50,100 Hz的频率刺激.实验结果表明,在2周左右的大鼠海马脑片上,ryanodine在10和50 μmol/L浓度时都降低了兴奋性突触后电流的幅度和曲线下面积.另一个药物cyclopiazonic acid(CPA)在30 μmol/L浓度时降低了100 Hz 10个突触串刺激的兴奋性突触后电流的幅度和曲线下面积.用光学方法测量突触前细胞内钙离子水平的实验结果显示,在脑片灌流液中分别加入10和50 μmol/L浓度的ryanodine以及30 μmol/L浓度的CPA都能减小串刺激引起的细胞内钙的反应.电生理学和光学实验结果显示突触前细胞内钙的释放能够影响mossy fiber末端的神经介质的释放.     

三氧化二砷对海马神经元细胞内钙离子浓度的影响

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对海马神经元细胞内钙离子([Ca2 ]i)浓度的影响与其神经毒性的可能机制.方法 用激光共聚焦显微镜结合Fluo-3-AM观察As2O3对大鼠原代培养的海马神经元[Ca2 ]i的影响.结果 有钙液中10 μmol/L、100 μmol/L As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.24±0.09和0.41±0.08.20 μmol/L的维拉帕米不能阻断10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.无钙液中10 μmol/L、100 μmol/Ls2O3升高海马神经元[Ca2 ]i与对照组相比[Ca2 ]i分别提高了0.12±0.06和0.30±0.07.100 μmol/L 2-APB阻断了10 μmol/L As2O3升高[Ca2 ]i作用.结论 As2O3可以升高海马神经元[Ca2 ]i,IP3信号转导途径可能参与As2O3升高海马神经元[Ca2 ]i.     

K物质对大鼠心肌细胞收缩的影响及其信号传导通路的探讨

目的　研究K物质引起大鼠心肌细胞收缩的信号传导通路。方法　应用钙离子荧光指示剂Fluo 3AM负载原代培养的大鼠心肌细胞 ,通过流式细胞仪检测心肌细胞内游离钙离子浓度 ( [Ca2 + ]i)变化 ;分别应用磷脂酶C抑制剂 新霉素 ,三磷酸肌醇受体拮抗剂 肝素阻断肌醇磷脂 钙信号系统 ,观察二者对K物质诱导的 [Ca2 + ]i变化的影响。结果　SK( 1.78× 10 -5mol/L)能升高 [Ca2 + ]i,新霉素、肝素均可阻断SK诱导的 [Ca2 + ]i升高的效应。结论　SK可升高心肌细胞[Ca2 + ]i,其作用与肌醇磷脂 钙信号系统有关     

吗啡对大鼠培养海马神经元钙离子作用机制的研究

目的 研究吗啡对海马神经元游离子浓度([Ca^2 ]i)影响的机制，探索吗啡成瘾的神经生物学机制及对吗啡成瘾可能的治疗途径。方法 运用新型荧光探针Fluo-4 , 利用激光共聚焦显微镜研究吗啡对大鼠培养海马神经元[Ca^2 ]i作用机制。结果 10μmol/L吗啡急性刺激引起海马神经元[Ca^2 ]i升高，μ阿片受体选择性拮抗剂CTOP（1μmol/L）不能阻断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，δ2阿片受体选择性拮抗剂Naltrindole(1μmol/L）阻断了吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i反应，特异性的内质网钙泵抑制剂Thapsigargin(TG,1μmol/L）预处理海马神经元组断吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加，L－钙通道阻断剂Verapamil(20μmol/L）预处理海马神经元不能完全抑制吗啡引起的细胞内[Ca^2 ]i增加；100μmol/L吗啡长时程（24h）作用于海马神经元，细胞内[Ca^2 ]i升高，加入10μmol/L纳络酮急性戒断后，不能阻断细胞内[Ca^2 ]i升高，反而引起[Ca^2 ]i异常升高。结论 吗啡急性刺激引起的海马神经元内钙增加主要来源于δ2阿片受体介导的IP3敏感的钙库释放。     

KCl和Iso对培养乳鼠单个心肌细胞游离钙浓度影响的研究

目的　测定培养大鼠乳鼠心肌细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i) ,观察KCl、异丙肾上腺素 (Iso)对心肌细胞 [Ca2 + ]i的影响 ,初步探讨其作用机制。方法　采用Fura - 2作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的心肌细胞 ,结合阳离子测定系统检测心肌细胞 [Ca2 + ]i。结果　静息时 ,心肌细胞 [Ca2 + ]i为 83 3±11 6 7nmol/L ,30mmol/L、 5 0mmol/L、 70mmol/LKCl使心肌细胞 [Ca2 + ]i升高 ,且呈剂量依赖性 ;同时10 μmol/L异丙肾上腺素使心肌细胞 [Ca2 + ]i升高。结论　Fura - 2 /AM结合阳离子测定系统可以精确的反映细胞内游离钙离子浓度 ,KCl、异丙肾上腺素升高心肌细胞 [Ca2 + ]i的作用机制不同。     

氟化钠、亚砷酸钠对大鼠肝细胞增殖的影响

目的研究氟化钠(NaF)和亚砷酸钠(NaAsO2)单独及联合作用对大鼠BRL-3A细胞增殖的影响。方法设NaF(1.0×10-5～1.0×10-1)mol/L、NaAsO2(1.0×10-7～1.0×10-3)mol/L不同浓度组(组间10倍差),分别作用于大鼠肝细胞,采用MTT法测定OD值,观察其对细胞增殖的影响。NaF在1.0×10-3mol/L与NaAsO2在1.0×10-6mol/L、1.0×10-5mol/L、1.0×10-4mol/L浓度下,两者联合作用于大鼠肝细胞时,采用2×2的析因试验分析其对细胞增殖的影响。结果氟、砷单独作用对肝细胞增殖的抑制率均随染毒剂量的增大而逐渐升高,而联合组在NaF为1.0×10-3mol/L与NaAsO2为1.0×10-6mol/L、1.0×10-5mol/L、1.0×10-4mol/L浓度时,其抑制率均明显低于单独组,边际轮廊均数图显示两线段交叉,两毒物的联合作用呈拮抗作用。结论氟、砷化合物对大鼠肝细胞增殖呈抑制作用,两者联合作用时表现为拮抗作用。     

M_3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响

目的研究M3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响。方法采用钙荧光染料Fluo-3/AM负载心肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)上测定细胞[Ca2+]i的变化。结果胆碱不影响静息状态下的细胞[Ca2+]i,对咖啡因和三磷酸肌醇(IP3)介导的细胞内钙的释放均无作用。5.0 mmol/L胆碱可以抑制KCl除极诱导的心肌[Ca2+]i的升高幅度,2.0 nmol/L 4-DAMP可以阻断这一作用。结论 M3受体激动剂胆碱通过阻断心肌细胞膜电压依赖性钙通道降低心肌细胞[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用。     

精氨酸酶对异丙肾上腺素诱导心肌细胞内钙浓度的影响

目的 探讨精氨酸酶对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞内游离钙浓度变化的影响及其机制.方法 培养乳鼠心肌细胞,分别给予精氨酸酶抑制剂S-(2-boronoethyl)-L-cysteine(BEC)及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)抑制剂vinyl-L-N-5-(1-imino-3-butenyl)-L-ornithine(L-VNIO),钙离子荧光指示剂Fluo-3/AM及激光共聚焦显微镜(LSCM)检测ISO诱导的心肌细胞内游离钙浓度的变化.结果 BEC明显升高心肌中NO浓度和ISO诱导的心肌细胞内钙离子浓度.L-VNIO可以逆转这一过程.结论抑制精氨酸酶能够通过nNOS/NO途径升高ISO诱导的心肌细胞内钙浓度.     

毛冬青甲素对兔心肌钙离子内外流的影响

本实验用~(45)Ca示踪法研究了毛冬青甲素对兔心肌钙离子内外流的影响。结果发现:毛冬青甲素(10~(-5)mol/L)对心肌钙离子内流具有明显促进作用(P<0.05)。这种作用可被钙拮抗剂硝苯吡啶(1.4×10~(-6)mol/L)所抑制(P<0.05),但不被酚妥拉明或普萘洛尔(均10~(-5)mol/L)所阻滞,提示药物的作用可能和α—或β—肾上腺素能受体无关。同时,药物明显增加心肌细胞内的钙离子外流。研究结果提示,毛冬青甲素所具有的正性肌力作用可能是由于药物加快了细胞钙的转运速率所致。     

丹红注射液抗H9c2细胞凋亡的作用机制研究

[目的]从线粒体损伤角度研究丹红注射对异丙肾上腺素（ISO）诱导的心肌细胞H9c2凋亡的影响。[方法]培养H9c2细胞,分为对照组、10 μmol/L ISO模型组,10 μmol/L ISO和20、200 μL/L丹红注射液组。按相应给药时间后采用流式细胞术检测细胞凋亡,明确药物对细胞凋亡的作用。活细胞荧光成像仪检测细胞线粒体膜电位变化、激光共聚焦检测细胞内活性氧簇（ROS）的产生、Fluo-3 AM ester荧光染料染色检测细胞内钙离子浓度研究丹红注射液抗心肌细胞凋亡的相关作用机制。[结果]与对照组（1.33%±0.42%）相比,ISO显著上升细胞凋亡率（5.13%±0.15%）（P<0.01）;与ISO组比较,20、200 μL/L丹红注射液后,细胞凋亡率分别下降为（4.23%±0.15%）和（2.37%±0.38%）。与对照组相比,给予ISO后细胞内线粒体膜电位去极化程度显著增加,为对照的（151.76%±16.01%）（P<0.01）,20、200 μL/L丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内线粒体膜去极化,分别为对照的（121.07%±11.53%）和（117.15%±12.91%）。此外,丹红注射液显著抑制ISO诱导的细胞内ROS浓度及钙离子浓度的升高,差异具有统计学意义。[结论]丹红注射液可通过抑制ISO引起的细胞内线粒体膜电位去极化、降低细胞内ROS和钙离子浓度而发挥其抗H9c2细胞凋亡作用。     

木犀草素调控内质网应激-线粒体凋亡通路在脂毒性心肌损伤中的作用

目的 探讨木犀草素(LU)对H9c2心肌细胞的保护作用及与内质网应激-线粒体凋亡通路的关系。方法 使用棕榈酸(PA)建立H9c2心肌细胞脂毒性损伤的模型,将实验组分为正常组、模型组及木犀草素组(15μmol/L)。采用CCK8法测定体外培养的细胞增殖水平,利用试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,使用DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位变化,Annexin V-FITC/PI测定细胞凋亡程度,Westren blot法检测细胞在内质网应激-线粒体凋亡通路中相关基因的表达。结果 用PA(0.2mmol/L)直接刺激24h,可明显降低H9c2心肌细胞增殖率,增加细胞氧化应激水平,降低线粒体膜电位,使p-PERK、p-IRE1、GRP78、CHOP、Bax、caspase-3蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达降低,但使用木犀草素处理后,明显逆转了以上结果,降低了PA诱导的H9c2心肌细胞氧化应激水平,减轻细胞凋亡程度,逆转了在PA影响下细胞内内质网应激-线粒体凋亡通路相关蛋白的表达。结论 木犀草素可减轻PA诱导的脂毒性心肌...     

调控ERK1/2通路在H2S保护心肌细胞对抗阿霉素损伤中的作用

【目的】探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在阿霉素心肌毒性中的作用及硫化氢(H2S)是否通过调控ERK1/2通路抑制阿霉素的心肌毒性。【方法】应用阿霉素处理H9c2心肌细胞建立心肌细胞毒性损伤模型;CCK-8比色法测定细胞存活率;蛋白印迹法(Western blot)检测ERK1/2蛋白的表达水平;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相测定细胞内的活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照相检测线粒体膜电位(MMP)。【结果】5μmol/L阿霉素呈时间依赖性地上调磷酸化(p)ERK1/2表达水平;硫氢化钠(NaHS,为H2S的供体)预处理心肌细胞30 min明显地抑制阿霉素对p-ERK1/2表达的上调作用;400μmol/L NaHS和10μmol/L PD-98059(ERK1/2抑制剂)预处理30 min,均能对抗阿霉素引起的心肌细胞损伤,分别使H9c2的存活率增加,胞内ROS堆积和MMP丢失均减少。【结论】ERK1/2通路介导阿霉素的心肌毒性作用;通过抑制ERK1/2通路可能是H2S保护心肌细胞对抗阿霉素心肌毒性的作用机制之一。     

大黄素对豚鼠单个心室肌细胞胞浆游离钙浓度的影响

目的　研究大黄素 (Emodin)对豚鼠心室肌细胞内游离钙浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法　酶解法分离单个豚鼠心肌细胞 ,用与钙离子特异性结合的Fluo 3 Am标记细胞内游离钙离子 ,应用激光扫描共聚焦显微镜实时监测钙荧光强度 (FluorescentIntensity ,FI)的变化 ,以平均荧光强度代表 [Ca2 + ]i。结果　在静息状态下 ,大黄素 1～10 0 μmol L对 [Ca2 + ]i 均无影响 ;大黄素 1μmol L对KCl 6 0mmol L诱导的外钙内流引起的胞浆钙升高有促进作用 ,平均荧光强度由 1876 .7± 5 5 1.3增加至 2 90 4 .8± 739.1(n =8,P <0 .0 5 ) ;10 μmol L对其无影响 ;10 0 μmol L则表现为抑制作用 ,平均荧光强度降至 12 14 .1± 334.8(n =8,P <0 .0 5 )。结论　大黄素低浓度 (1μmol L)对KCl诱导的细胞内钙增高有促进作用 ;高浓度 (10 0 μmol L)则表现为抑制作用。因此 ,大黄素对心肌细胞内钙具有双向调节作用     

15-KETE对大鼠肺动脉平滑肌细胞钾离子通道的作用

目的观察15-酮基二十碳四烯酸(15-ketoeicosatetraenoic acid,15-KETE)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)膜电压门控钾离子通道(Kv)的作用,探讨其收缩肺动脉的离子通道机制。方法采用急性酶分离法(胶原酶Ⅰ型和弹性酶)获得健康成年SD大鼠单个PASMC,应用全细胞膜片钳记录方法,研究15-KETE对膜电位(Em)、膜电容(Cm)、电压门控钾电流(Ikv)的影响。结果①高浓度15-KETE(1×10-7mol/L、1×10-6mol/L)可引起PASMCs去极化,并且在细胞内钙被BAPTA缓冲后,15-KETE仍可引起PASMCs去极化,15-KETE对PASMC的膜电容无影响;②15-KETE(1×10-8~1×10-6mol/L)对Ikv的影响呈浓度依赖性和可逆性;③细胞内钙离子在生理浓度时([Ca2 ]i=75 nmol/L),15-KETE(1×10-6mol/L)对Ikv峰电流的抑制率显著高于细胞内无钙离子时。结论15-KETE可浓度依赖性的抑制Ikv,使常氧大鼠PASMCs去极化;细胞内钙离子加强了15-KETE对Ikv峰电流的抑制作用。     

2-NBDG检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力的研究

目的评估荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl)amino]-2-deoxyglucose,2-NBDG)作为光学探针检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力。方法间接免疫荧光法测定H9c2心肌细胞葡萄糖转运体(GLUT-1、GLUT-4)的表达。用不同浓度2-NBDG和不同孵育时间处理H9c2心肌细胞,探讨其量效-时效关系,荧光酶标仪测定2-NBDG孵育H9c2细胞的最适浓度和时间。以2-NBDG最适浓度孵育H9c2心肌细胞,同时用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞内荧光强度差异,观察心肌细胞摄取2-NBDG情况。使用竞争性抑制剂D型葡萄糖(D-Glu)与2-NBDG共同孵育H9c2心肌细胞,观察D-Glu对2-NBDG的竞争性抑制情况。结果间接免疫荧光法显示H9c2心肌细胞高表达GLUT-1、GLUT-4。2-NBDG孵育H9c2心肌细胞的最适浓度和时间分别为100μmol/L和30 min。共聚焦成像和流式细胞仪均显示H9c2心肌细胞能有效摄取2-NBDG,加入D-Glu后使心肌细胞内荧光信号强度分别降低27.0%和46.7%(P<0.01)。运用2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取的方法,证实胰岛素能促进H9c2心肌细胞葡萄糖的摄取。结论 2-NBDG能迅速被高表达GLUT-1、GLUT-4的H9c2心肌细胞摄取并滞留于细胞内,且可以被D-Glu竞争性抑制,表明2-NBDG可作为一个方便且敏感的探针,用于检测细胞葡萄糖摄取的能力。