miR-223对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

目的 观察miR-223对结肠癌SW480细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 PLL3.7-miR-223和PLL3.7-miR-EV质粒转染SW480细胞,Real-time PCR检测转染24h后miR-223的表达变化,CCK-8试剂盒检测转染12、24、48 h后细胞的增殖能力,流式细胞仪分析转染48 h后细胞周期和凋亡情况,Western blot检测IGF-1R、AKT蛋白表达情况.结果 转染24 h后,Real-time PCR检测结果显示PLL3.7-miR-223转染组miR-223的表达量（6.55±2.04）较PLL3.7-miR-EV（以其miR-223的表达量为1）明显上调（P＜0.01）.与对照EV组相比,SW480细胞在转染miR-223后生长明显受到抑制,细胞周期在G1期发生阻滞[（61.61±4.02）％vs.（35.99±1.62）％],凋亡增加明显[（67.43±4.75）％vs.（44.23±3.11）％],均P＜0.01,并且能够降低生长相关蛋白IGF-1R及细胞凋亡相关蛋白AKT的表达.结论 miR-223可以通过调节IGF-1R和AKT的表达影响结肠癌细胞SW480的增殖、细胞周期和凋亡.     

沉默FRAT1基因对结肠癌HT-29细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨沉默FRAT1基因对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其可能分子机制.方法 将成功转染FRAT1基因RNA干扰序列的人结肠癌HT-29细胞扩大培养,MTT比色法检测细胞增殖,双染流式细胞术检测细胞凋亡率,单染流式细胞术分析细胞周期,免疫荧光法激光共聚焦显微镜下观察β-catenin蛋白变化.结果 转染组细胞较对照组细胞生长明显减缓（P＜0.01）,凋亡率明显增加（P＜0.01）,细胞周期出现G0/G1期阻滞,差异显著（P＜0.01）,胞质β-catenin蛋白表达明显下调.结论 FRAT1基因RNA干扰序列可以有效诱导结肠癌HT-29细胞凋亡和细胞周期阻滞,抑制细胞增殖,其机制可能通过下调β-catenin表达实现.     

衰老关键蛋白3对人结直肠癌SW480细胞增殖及转移的影响

目的探讨衰老关键蛋白3(fibulin 3,FBLN3)在人结直肠癌SW480细胞增殖及转移中的作用。方法人结直肠癌SW480细胞株分为空白组(培养液2mL)、空载组(FBLN3阴性慢病毒+培养液2mL)和FBLN3过表达组(FBLN3过表达慢病毒+培养液2 mL);采用MTT法观察FBLN3对SW480细胞增殖的影响;流式细胞技术检测FBLN3对SW480细胞周期的影响;Transwell实验观察FBLN3对SW480细胞侵袭、转移的影响;Western blot法检测FBLN3对相关蛋白表达的影响。结果 FBLN3过表达组转染后24h(0.386±0.008)、48h(0.535±0.011)、72h(0.467±0.012)吸光度值均低于空白组(0.460±0.011、0.787±0.009、1.031±0.005)和空载组(0.445±0.009、0.750±0.004、0.949±0.014)(P0.05),空白组与空载组比较差异无统计学意义(P0.05);转染48h后FBLN3过表达组G1期细胞比率[(65.02±1.05)%]高于空白组[(47.01±0.90)%]和空载组[(48.25±1.41)%],S期细胞比例[(15.41±1.70)%]低于空白组[(34.90±1.28)%]和空载组[(28.82±2.40)%](P0.05);转染48h后FBLN3过表达组侵袭细胞计数(47±5)和迁移细胞计数(64±10)均低于空白组(106±7、144±9)及空载组(105±12、145±6)(P0.05),空白组与空载组比较差异无统计学意义(P0.05);FBLN3过表达组p-AKT、p-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、Bcl-2及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白表达水平均低于空白组和空载组,凋亡诱导分子Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21蛋白表达均高于空白组和空载组(P0.05)。结论 FBLN3过表达可抑制AKT/mTOR信号通路活化,抑制侵袭转移因子MMP-2、-9,凋亡抑制因子Bcl-2及细胞周期蛋白cyclinD1表达,促进凋亡诱导分子Bax和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21蛋白的表达,导致肿瘤细胞周期G_1期阻滞,抑制SW480细胞的增殖、侵袭及转移,从而抑制结直肠癌发生、发展。     

α-辅肌动蛋白4对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其机制

目的:探讨体外沉默α-辅肌动蛋白4(alpha-actinin-4,ACTN4)基因的表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法:化学合成靶向ACTN4基因的ACTN4-siRNA,体外转染至人卵巢癌细胞株SKOV3和OVCA429中,采用real-time PCR检测ACTN4 mRNA的表达,采用MTT法检测卵巢癌细胞的增殖能力及存活率,采用流式细胞术检测卵巢癌细胞的凋亡情况,采用Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:ACTN4-siRNA转染SKOV3/OVCA429细胞后,ACTN4的mRNA及蛋白的表达均明显下降;细胞增殖能力明显受到抑制。在不同浓度紫杉醇作用下,与转染CtrlsiRNA的对照组相比,ACTN4-siRNA转染组SKOV3/OVCA429的细胞存活率均显著降低,即转染ACTN4-siRNA后的SKOV3/OVCA429细胞对紫杉醇的敏感性明显增加(P0.01)。SKOV3细胞瞬时转染ACTN4-siRNA48 h后,细胞凋亡率[(7.22±0.31)%]明显高于转染Ctrl-siRNA的对照组[(2.07±0.08)%];OVCA429细胞的情况与之一致,转染ACTN4-siRNA后细胞凋亡率为[(23.37±0.18)%],对照组为[(19.49±0.19)%],差异均有统计学意义(P0.05)。转染ACTN4-siRNA后,SKOV3/OVCA429中p-Akt和p-FAK蛋白表达明显减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显减少,而促凋亡蛋白Bid和Bim表达则明显增加。结论:ACTN4可以降低卵巢癌细胞的化疗敏感性,这种作用可能通过抑制细胞凋亡实现。     

超声微泡介导自杀基因对卵巢癌细胞的抗瘤效应

目的探讨超声微泡介导自杀基因对卵巢癌SKOV3细胞抗瘤效应的机制。方法采用最适超声转染参数,以超声介导微泡转染pORF-HSV1TK质粒,将SKOV3细胞分成6组:阴性对照组(C组)、超声辐照组(U组)、脂质体组(L组,阳性对照组)、脂质体+超声辐照组(L+U组)、脂质体+微泡+超声辐照组(L+M+U组)和微泡+超声辐照组(M+U组)。以RT-PCR检测HSV1TK的表达,以MTT测定各组细胞增殖抑制率。光镜下观察各组转染细胞数量、形态变化,以流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率及细胞周期。结果L+M+U组HSV1TK基因表达最强,细胞增殖抑制率明显高于其他组(P均<0.05),且光镜下细胞数量减少最多,形态明显异常;其细胞凋亡率为(49.13±0.82)%,且大多数细胞周期被阻断于G1期(P<0.05)。结论超声介导微泡能增强HSV1TK/GCV系统抑制SKOV3增殖和诱导SKOV3凋亡的作用,且将SKOV3细胞周期阻断在G1期,从而发挥抗瘤效应。     

MicroRNA-29b表达改变对卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨microRNA-29b (miRNA-29b)在卵巢癌细胞中的表达差异及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：采用real-time PCR技术检测人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3及正常人卵巢上皮细胞系IOSE80中miRNA-29b的表达水平;采用转染技术上调SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平;采用CCK-8法检测SKOV-3细胞增殖能力;采用Transwell法检测SKOV-3细胞的侵袭能力;采用Western印迹法检测SKOV-3细胞中蛋白表达水平。结果：与IOSE80细胞相比,人卵巢癌上皮细胞系SKOV-3细胞miRNA-29b的表达下降（P<0.05）。转染miRNA-29b mimic后SKOV-3细胞中miRNA-29b的表达水平增加;从第4天开始,转染miRNA-29b的SKOV3细胞增殖能力下降（P<0.05）。转染miRNA-29b减少了通过聚碳酸酯膜的SKOV3细胞数量,抑制了SKOV3细胞的侵袭能力（P<0.05）;转染miRNA-29b mimic后,卵巢癌细胞SKOV3中抑制凋亡蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达均降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论：miRNA-29b可通过抑制凋亡相关蛋白Bcl-2和侵袭相关蛋白MMP-9的表达来抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭。     

沉默缺氧诱导因子-1α对卵巢癌化疗敏感性的影响

目的观察沉默缺氧诱导因子HIF-1α对卵巢癌细胞化疗敏感性的相关影响并探讨其机理。方法构建HIF-1α基因短发夹RNA真核表达质粒,并转染卵巢癌细胞SKOV3（人卵巢浆液性囊腺癌细胞株）。实验可分为空白组,非特异对照组（转染pNonspecific-siRNA,即SKOV3NS）,目的siRNA组（转染pHIF-siRNA,即SKOV3siRNA）3组,用RT-PCR及Western Blot法分别检测各组HIF-1α基因的mRNA和蛋白的表达水平。细胞经过20μmol/L顺铂作用后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCS）检测细胞凋亡率。结果 SKOV3siRNA转染组HIF-1α基因在mRNA水平和蛋白水平表达均明显降低,SKOV3siRNA组肿瘤细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显增高（P〈0.05）。结论 RNA干扰技术沉默HIF-1α能够有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达,增强其对化疗药物顺铂的敏感性。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对卵巢癌SKOV3细胞增殖凋亡的影响

目的探讨MS-275对卵巢癌SKOV3细胞增殖凋亡的影响及其作用机制。方法 MTT法检测MS-275和顺铂单药及联合用药对SKOV3细胞增殖的影响,并计算半抑制浓度IC50;流式细胞术检测MS-275和顺铂单药及联合用药对SKOV3细胞凋亡的影响;Western-Blot法检测各组BCL2、survivin及p21蛋白的表达。结果 MS-275和顺铂两单药均可抑制SKOV3的增殖,各浓度组具有统计学差异(P0.05),联合用药时可显著降低顺铂半抑制浓度(P0.05);同时两单药组可促进SKOV3细胞凋亡(P0.05),联合用药时凋亡作用更显著(P0.05);MS-275和顺铂可显著抑制SKOV3细胞BCL-2和survivin蛋白的表达,增强p21的表达(P0.05)。结论 MS-275抗SKOV3细胞增殖,促进其凋亡及增强顺铂敏感性的机制可能与抑制HDAC活性,抑制BCL-2和survivin蛋白表达,促进p21蛋白表达有关。     

槲皮素与FSCN1基因siRNA联合对卵巢癌生长抑制及免疫功能的影响研究

目的探讨槲皮素与FSCN1基因siRNA对卵巢癌细胞活力、凋亡及免疫功能的影响及机制。方法人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、NC组(转染阴性对照siRNA)、槲皮素组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染阴性对照siRNA)、si-FSCN1组(细胞转染靶向抑制FSCN1的siRNA)和槲皮素+si-FSCN1组(50μmol/L的槲皮素处理细胞后瞬时转染靶向抑制FSCN1的siRNA),siRNA转染参照Lipofectamine TM 2000说明。各组细胞处理48 h,Western blotting检测FSCN1、β-catenin、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bax和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 SKOV3细胞转染si-FSCN1后FSCN1蛋白表达明显降低,与空白对照组比较差异显著(P0.05)。槲皮素组和si-FSCN1组细胞活力及β-catenin、cyclin D1和VEGF的蛋白表达均显著低于NC组,高于槲皮素+si-FSCN1组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于NC组,低于槲皮素+si-FSCN1组(P0.05)。结论槲皮素或FSCN1基因siRNA均能抑制卵巢癌细胞活力,诱导细胞凋亡,抑制免疫抑制因子VEGF表达,联合使用效果更强,机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

熊果酸对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响

【目的】探讨熊果酸(Ursolic acid,UA)对人卵巢癌 SKOV3细胞增殖与凋亡的影响。【方法】常规培养人卵巢癌 SKOV3细胞,应用 UA 浓度为5、10、20、40和80μmol/L 分别干预12 h、24 h 和48 h,采用 MTT 法检测细胞增殖;采用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,应用 Western blot 技术检测细胞周期相关蛋白 P21、CyclinD1的表达水平。【结果】与空白对照组(0μmol/L UA)比较,40和80μmol/L UA 分别作用 SKOV3细胞12 h、24 h 和48 h 后 OD 值均显著降低(P <0.05);10、20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞早期凋亡率、晚期凋亡率和 G0/G1期比率较对照组升高,20和40μmol/L UA 作用24 h 后 SKOV3细胞周期蛋白 Cyclin D1明显降低而 P21水平显著升高(P <0.05)。【结论】体外实验中,UA 可抑制人卵巢癌 SKOV3细胞增殖和促其凋亡,其机制可能与细胞周期蛋白 Cyclin D1表达降低和 P21表达升高有关。     

RMP通过AMPK通路调节线粒体稳态和氧化应激诱导卵巢癌细胞增殖与凋亡的机制研究

目的 探讨RPB5调节蛋白（RPB5-mediating protein,RMP）对卵巢癌细胞增殖与凋亡的影响以及通过腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine 5’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase,AMPK）通路调节线粒体稳态和氧化应激的作用机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测人输卵管上皮永生化细胞FTE-187与人卵巢癌细胞系SKOV3,A2780和HO8910中RMP基因的表达。以SKOV3细胞作为研究对象,利用siRNA技术敲低SKOV3细胞中RMP的表达,再通过qRT-PCR法验证RNAi效率。通过平板克隆形成实验和流式细胞技术观察敲低RMP表达后对SKOV3细胞增殖能力、周期分布及凋亡能力的影响。通过激光共聚焦显微镜观察敲低RMP表达后SKOV3细胞中线粒体形态的变化。Western blot进一步证实RMP调控线粒体稳态相关蛋白AMPK和p-AMPK以及凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达。采用ROS荧光法检测敲低RMP表达后对SKOV3细胞内ROS水平的影响。结果 RMP在FTE-187细胞中的表达水平...     

Role of TLR4 for paclitaxel chemotherapy in human epithelial ovarian cancer cells

Background  Paclitaxel has been reported to be a ligand to Toll like receptor 4 (TLR4). Myeloid differentiation factor 88(MyD88) was described as a myeloid differentiation primary response gene. TLR4 signalling owns two pathways: MyD88-dependent and MyD88-independent pathways. XIAP is a key member of the inhibitor of apoptosis protein family. Akt is a major downstream target of growth factor receptor tyrosine kinases, which negatively regulates apoptotic pathways through phosphorylation (pAkt). The aim of the present study is to investigate the role of TLR4 in paclitaxel resistance of ovarian cancer cells.
Materials and methods  We reconstructed the RNA interference expression vector, pGenesil-1-U6 specifically targeting TLR4 mRNA, which was stable transfected into the human ovarian cancer cell line SKOV3 (MyD88-positive expression) and A2780 (MyD88-negative expression). Cell proliferation, cell cycle distribution and cell apoptosis were assessed in the cells transfected with scramble control shRNA (SKOV3/shControl, A2780/shControl) and TLR4 shRNA (SKOV3/shTLR4, A2780/shTLR4) to explore the possible functions of TLR4 in ovarian cancer cells growth. The expression of TLR4, MyD88, XIAP, Akt and pAkt was analysed by Western blot analysis.
Results  A knockdown of TLR4 levels down-regulated the expression of XIAP and pAkt. And it restored the inhibitory effect of paclitaxel on cell proliferation and impeding cell cycle progression in SKOV3 cells.
Conclusions  It suggests that TLR4 negatively regulates paclitaxel chemotherapy and MyD88 is an essential downstream factor to TLR4 signalling for this resistance. Knockdown of TLR4 induces paclitaxel chemosensitivity which might depress the Akt pathway. The TLR4-MyD88 signalling represents an important source to promote tumour growth.     

三氧化二砷诱导卵巢癌细胞系SKOV3细胞凋亡的作用和机制

目的观察三氧化二砷(ATO)诱导人卵巢癌细胞系SKOV3细胞的凋亡作用和凋亡通路分子caspase 3、PARP,凋亡相关蛋白p-AKT、AKT蛋白表达的变化。方法分别用不同剂量的三氧化二砷作用人卵巢癌细胞系SKOV3细胞,应用MTT比色法检测培养48 h的细胞存活率,应用流式细胞仪测定培养48 h细胞凋亡的变化,免疫印迹法检测凋亡蛋白caspase 3、PARP和凋亡相关蛋白p-AKT、AKT的表达情况。结果 MTT示三氧化二砷能明显抑制SKOV3细胞增殖;流式细胞术显示三氧化二砷诱导SKOV3细胞凋亡,且具有明显的剂量依赖性;Western blotting检测发现药物能显著下调caspase 3、PARP、p-AKT的表达水平。结论三氧化二砷能显著抑制人卵巢癌细胞系SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡,激活凋亡通路分子caspase 3、PARP,下调p-AKT蛋白表达水平,这可能是三氧化二砷诱导人卵巢癌细胞SKOV3细胞凋亡的作用机制。     

CDCA3在食管癌中的表达及其对食管癌细胞增殖与凋亡的影响

目的研究细胞周期相关因子(CDCA3)在食管癌组织和细胞中的表达及其对食管癌细胞增殖与凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qPCR)检测50例食管癌组织及其配对的癌旁组织中CDCA3 mRNA的表达水平,同时检测CDCA3 mRNA在不同食管癌细胞系(Eca109、Kyse-170、TE1)和人食管鳞状上皮细胞系Het-1A中的表达水平;采用si-CDCA3-1、si-CDCA3-2转染Eca109和TE1细胞,另转染si-NC作为阴性对照,MTS法检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化;Western blot检测CDCA3、CyclinD1和cleaved caspase-3蛋白的表达变化。结果食管癌组织中CDCA3 mRNA的表达高于癌旁组织(P<0.05),Eca109、Kyse-170和TE1细胞中CDCA3 mRNA表达高于人食管鳞状上皮细胞(P<0.05)。沉默CDCA3表达后,Eca109细胞和TE1细胞的增殖率降低,G0/G1期细胞比例增加(P<0.05)。沉默CDCA3表达后,Eca109细胞和TE1细胞的凋亡率增加(P<0.05)。沉默CDCA3表达可降低CyclinD1蛋白表达和增加cleaved caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论CDCA3 mRNA在食管癌组织和细胞系中均高表达,干扰CDCA3的表达可能通过降低CyclinD1蛋白表达抑制细胞增殖,增加cleaved caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡,提示CDCA3可能为食管癌的潜在治疗靶标。     

地塞米松对紫杉醇诱导人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞凋亡的影响

目的：探讨地塞米松预处理对紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡的影响。方法：应用MTT比色法检测地塞米松对紫杉醇抑制细胞增殖的影响,TUNEL法形态学观察细胞凋亡,流式细胞仪PI单染测定地塞米松预处理对紫杉醇诱导人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞凋亡及细胞周期的影响。结果：不同浓度地塞米松对紫杉醇抑制SKOV-3细胞增殖有不同程度的拮抗作用,TUNEL分析表明地塞米松预处理后能抑制紫杉醇诱导SKOV-3细胞凋亡,流式细胞仪PI单染法分析表明,用地塞米松预处理后再用紫杉醇组的细胞凋亡率为（5.55±0.53）%,而单用紫杉醇组细胞凋亡率为（13.90±1.62）%,地塞米松进行预处理组细胞凋亡率明显降低（P〈0.01）,且与细胞周期中G2/M期无关。结论：不同浓度地塞米松对紫杉醇抑制SKOV-3细胞增殖有不同程度的保护作用,地塞米松能够拮抗紫杉醇诱导人卵巢癌细胞株SKOV-3细胞凋亡,且与细胞周期中G2/M期无关。     

茶多酚联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响及机制

目的观察茶多酚(TP)、顺铂(DDP)及二者联合对人卵巢癌细胞SKOV3增殖及凋亡的影响,初步探讨二者联合对SKOV3细胞生长影响的机制。方法人卵巢癌细胞SKOV3经低毒剂量TP、DDP单独或联合作用后,MTT法检测细胞增殖情况,DAPI核染色法荧光显微镜观察细胞凋亡形态变化,AnnexinV-FITC双染流式细胞术分析细胞凋亡,Westernblot方法检测细胞中Akt及p-Akt的表达。结果低毒剂量TP单药组、DDP单药组与联合用药组对细胞的增殖抑制率分别为(11.47±2.07)%、(32.26±4.85)%、(52.62±3.23)%,联合用药组的细胞增殖抑制率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);荧光显微镜下可见低毒剂量TP单药组的细胞核形态及染色与阴性对照组无明显差异,联合用药组细胞核比DDP单药组着色更重,核浓缩、核碎裂现象更加明显,呈现典型的细胞凋亡征象;低毒剂量的TP对细胞的凋亡无明显影响,联合用药组的凋亡率明显高于DDP单药组,差异有统计学意义(P=0.000);各用药组细胞中总的Akt蛋白表达无明显变化,p-Akt蛋白表达降低,其中联合用药组细胞中p-Akt蛋白表达降低最明显,与对照组及单药组比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 TP与DDP联合后可显著增强DDP的抑制细胞增殖、促细胞凋亡效应,可能是通过抑制Akt蛋白的磷酸化来实现的。