MiR-197-3p/STAMP2对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡及炎症应激的影响

目的 探究miR-197-3p/前列腺六次跨膜蛋白（Six transmembrane protein of prostate,STAMP）2对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡和炎症应答。 方法 用ox-LDL处理HUVEC复制内皮细胞损伤模型;RT-PCR检测miR-197-3p和STAMP2表达;ELISA检测细胞凋亡;Western blot用于检测STAMP2,Bax和Bcl-2的蛋白水平;ELISA检测HUVECs中细胞间黏附分子（ICAM）-1,血管内皮细胞黏附分子（VCAM）-1和E选择素（E-selectin）的表达水平;生物信息学预测miR-197-3p的靶基因;并采用双萤光素酶报告系统、qRT-PCR及Western blot验证miR-197-3p与STAMP2的靶向调控关系。 结果 ox-LDL能明显上调miR-197-3p的表达（P<0.05）,同时降低STAMP2的表达（P<0.05）,且呈时间依赖性;下调miR-197-3p能够显著抑制ox-LDL诱导的细胞凋亡（P<0.05）,同时降低促凋亡蛋白Bax并增加抑凋亡蛋白Bcl-2（P<0.05）;抑制miR-197-3p明显降低ox-LDL诱导的炎症因子的表达（P<0.05）;此外,生物信息学预测提示STAMP2是miR-197-3p的靶基因,而且qRT-PCR及Western blot结果显示抑制miR-197-3p明显上调STAMP2 mRNA和蛋白水平（P<0.05）,从而证实miR-197-3p能够靶向调控STAMP2。 结论 MiR-197-3p可以通过靶向调控STAMP2从而调节ox-LDL诱导的HUVECs凋亡及炎症应答,为动脉粥样硬化的靶向治疗提供理论基础。     

TGF-β1/Smad3参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达

目的探讨转化生长因子β1/Smad(TGF-β1/Smad)信号通路参与氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的分子机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,加入ox-LDL(0.1 g/L)刺激细胞,用Western blot检测TGF-β1、Smad3磷酸化、VCAM-1和ICAM-1的表达。结果 ox-LDL明显增加人脐静脉内皮细胞VCAM-1和ICAM-1的表达(P<0.05)。ox-LDL激活人脐静脉内皮细胞TGF-β1/Smad信号通路,TGF-β1表达明显增加,Smad3磷酸化明显增强。细胞核提取物分析表明,磷酸化的Smad3在细胞核表达增加。特异性Smad3磷酸化抑制剂SIS3以浓度依赖方式抑制ox-LDL刺激的Smad3磷酸化(P<0.05),且VCAM-1和ICAM-1的表达增加(P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路参与调节氧化型低密度脂蛋白刺激的内皮细胞炎症蛋白表达,抑制Smad3磷酸化反而增加炎症蛋白表达,提示TGF-β1/Smad3通道活化具有抑制ox-LDL刺激的内皮细胞炎症蛋白表达的影响。     

β-细辛醚对ox-LDL诱导的内皮细胞黏附分子表达的干预作用

目的 通过研究石菖蒲有效成份β-细辛醚对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的内皮细胞表面黏附分子表达的干预作用，探讨β-细辛醚抗动脉粥样硬化（AS）的作用及其机制。方法 采用流式细胞术和特异性标记单克隆抗体，测定内皮细胞表面细胞间黏附分子-1（ICAM-1，CD54）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1，CD106）、E-选择素（CD62E）和P-选择素（CD62P）的表达率。结果 ox-LDL诱导模型组VCAM-1、ICAM-1、CD62P、CD62E表达明显增高，与正常组比较有显著差异（P〈0.001）,β-细辛醚及维生素C能降低内皮细胞表面黏附分子的表达，与模型组比较有统计意义（P 〈0.05-0.001）。结论 ox-LDL促进内皮细胞表面黏附分子表达，β-细辛醚对ox-LDL有明显的干预作用，能抑制ox-LDL诱导的内皮细胞表面黏附分子表达，有效地保护人内皮细胞免受ox-LDL所致毒性损伤。     

铁蛋白、氧化低密度脂蛋白与2型糖尿病内皮依赖性血管舒张功能的关系

目的探索血清铁蛋白（SF）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）与2型糖尿病（T2DM）早期血管内皮舒张功能的关系。方法选择50例无大血管并发症的T2DM患者（DM组）,34例年龄、性别相匹配健康个体作为对照（Nc）组。高分辨血管外超声法检测肱动脉血流介导的内皮依赖性血管舒张功能（FMD）和硝酸甘油介导的内皮非依赖性血管舒张功能（NMD）,检测ox-LDL、SF。结果与NC组比较,DM组SF、ox-LDL明显升高（P〈O．01）,而FMD、NMD明显下降（P〈0．01）。分别以FMD、NMD为因变量进行多元线性回归分析,提示SF、ox-LDL与FMD明显相关（P〈0．05）,而与NMD无明显相关（P〉0．05）。结论SF、ox-LDL在2型糖尿病早期可能参与了血管内皮依赖性舒张功能受损。     

川芎嗪对氧化低密度脂蛋白诱导内皮细胞炎症反应的影响

目的探讨川芎嗪对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞炎症反应的影响及其分子机制。方法体外培养的人冠状动脉内皮细胞,随机分为正常对照组(无干预)、ox-LDL组(50mg/Lox-LDL)、川芎嗪组(1、10、100μmol/L川芎嗪+50mg/Lox-LDL),观察川芎嗪对细胞间黏附分子1(ICAM-1)和环氧酶2基因和蛋白表达的影响;进一步检测与其耦联的p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和核转录因子κB(NF-κB)信号通路活化的影响。结果与ox-LDL组比较,川芎嗪(10、100μmol/L)降低ICAM-1的基因表达(1.49±0.26、1.81±0.05比2.36±0.34,P<0.01),抑制环氧酶2的蛋白表达(0.21±0.03、0.13±0.04比0.48±0.01,P<0.05);川芎嗪(1、10μmol/L)降低ICAM-1的蛋白表达(0.16±0.03、0.14±0.02比0.87±0.05),抑制上述黏附分子和炎症因子耦联的信号分子p38MAPK的磷酸化激活(0.30±0.10、0.12±0.06比0.66±0.15),抑制信号分子NF-κB蛋白(0.32±0.08、0.20±0.11比0.62±0.10)表达水平的升高(均P<0.01)。结论川芎嗪具有对抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症和黏附反应,并抑制MAPK和NF-κB信号通路的激活。     

CSE/H2S通过KLF6拮抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应

目的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导内皮细胞炎症反应,促进单核巨噬细胞黏附是动脉粥样硬化发生的重要病理生理机制。硫化氢(H_2S)是新型气体信号分子,可拮抗动脉粥样硬化并抑制内皮细胞炎症反应。本研究以Krüppel样因子(KLF)家族为切入点,探究KLF6在H_2S拮抗ox-LDL诱导内皮细胞炎症反应中的调节机制。方法以人主动脉内皮细胞(HAEC)为研究对象,观察ox-LDL对HAEC内源性胱硫醚γ裂解酶(CSE)/H_2S系统及内皮细胞炎症反应的影响。实时定量PCR检测外源性给予H_2S供体或过表达CSE对KLF家族及炎症因子表达的改变,进一步采用siRNA干扰KLF6观察其对内皮细胞炎症反应、单核细胞黏附的影响。同时采用染色质免疫共沉淀(Ch IP)技术观察H_2S供体对KLF6转录活性的影响。结果 Western blot检测及H_2S荧光探针细胞内染色发现,ox-LDL可以呈时间及剂量依赖性下调CSE表达以及内皮细胞H_2S的产生。实时定量PCR检测发现,ox-LDL抑制KLF6表达而上调KLF10表达,H_2S处理后则上调KLF6表达,抑制KLF10表达。Western blot证实Na HS或过表达CSE均可显著上调KLF6蛋白表达。Na HS处理显著抑制ox-LDL诱导的内皮细胞炎症因子ICAM-1、VCAM-1的表达水平和单核细胞对内皮细胞的黏附,敲低KLF6则阻断Na HS的抑炎效应。Ch IP结果也显示,oxLDL促进KLF6与CXCL2、IL-8以及自噬基因ATG7启动子区的结合,Na HS处理或过表达CSE均可显著抑制KLF6的DNA结合活性。结论 ox-LDL下调内皮细胞CSE/H_2S系统,H_2S供体或增加内源性CSE可通过KLF6这一转录因子拮抗ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应。     

辛伐他汀通过抑制TLR4信号通路调节血管平滑肌细胞炎症因子的表达

目的通过检测血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）及相关炎症信号分子的表达,探讨辛伐他汀在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导VSMC炎症反应中的作用和机制。方法体外培养大鼠VSMC,经Toll样受体4（TLR4）阻断剂抗TLR4抗体及辛伐他汀预处理,使用ox-LDL进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测TLR4mRNA的表达,通过酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-6及TNF-α的水平。结果ox-LDL可以增加VSMC对IL-6及TNF-α的表达,预先经TLR4阻断剂干预后,IL-6及TNF-α的表达明显下调,与未阻断剂组相比,差异皆有统计学意义（P<0.01）;不同浓度的辛伐他汀可以剂量依赖性的抑制TLR4mRNA的表达（P<0.01）,同时也可以剂量依赖性的抑制IL-6及TNF-α的表达（P<0.05）;预先经TLR4阻断剂干预后,辛伐他汀可以显著地抑制TLR4mRNA、IL-6及TNF-α的表达,与辛伐他汀组比较,差异有统计学意义（P<0.01）。结论辛伐他汀对ox-LDL诱导的VSMC炎症因子的表达具有抑制作用,可以通过抑制TLR4的表达,进而抑制ox-LDL-TLR4信号通路而发挥作用。     

芥菜籽提取物具有抗氧化及下调巨噬细胞清道夫受体CD36表达的功能

目的探讨分化抑制因子1(Id1)蛋白是否参与氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)调控的血管新生,并阐明Id1参与血管新生的机制。方法通过体外内皮细胞管腔形成和大鼠胸腹主动脉血管环实验来研究低密度脂蛋白对血管新生的调控作用,West-ern blot分析ox-LDL对Id1表达的影响,免疫荧光检测ox-LDL对Id1分布的调控。并通过信号通路抑制剂来分析Id1受ox-LDL调控的分子机制。结果低浓度的ox-LDL促进血管新生,而高浓度的ox-LDL抑制血管新生。ox-LDL上调内皮细胞Id1蛋白的表达,当ox-LDL浓度为5 mg/L时,Id1蛋白的表达显著上调,并且随着ox-LDL浓度增加,Id1蛋白表达继续上调,但相互之间并没有显著差异。高浓度的ox-LDL显著上调Id1蛋白的表达而抑制血管新生。我们进一步研究ox-LDL对内皮细胞Id1分布的影响,发现低浓度的ox-LDL促进Id1蛋白出核,而高浓度的ox-LDL抑制Id1蛋白出核。通过使用蛋白出核抑制剂lyptomycin B,我们发现ox-LDL调控Id1蛋白出核受CRM1/exportin信号控制。进一步通过使用PKA抑制剂H89和PI3K抑制剂LY2...     

RNA干扰LOX-1表达对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制

目的 构建血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1（LOX-1）基因的RNA干扰慢病毒载体并转染人脐静脉内皮细胞。观察干扰LOX-1表达后对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导内皮细胞损伤的保护机制。方法 针对已经筛选确定的小干扰RNA有效干扰序列,合成慢病毒LV-si-OLR1最佳干扰序列,测定滴度。转染人脐静脉内皮细胞96 h后,通过荧光显微镜观察转染效率,逆转录聚合酶链反应和Western blot检测LOX-1的抑制效率。转染72 h后加入150 mg/L ox-LDL处理24 h;噻唑蓝比色法检测细胞存活率;硝酸还原酶法检测各组内皮细胞培养液一氧化氮（NO）的含量;Western blot检测各组细胞间黏附分子1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、RhoA、Rho激酶1（ROCK1）、Rho激酶2（ROCK2）的表达。结果 测序结果证实,靶向人LOX-1的干扰慢病毒载体构建成功,包装后慢病毒滴度为6×10¹¹ TU/L。转染组与未转染组比较,LOX-1 mRNA与蛋白的表达明显减少（P<0.01）。与正常对照组相比,ox-LDL处理组能明显减低内皮细胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表达（P<0.05）;与ox-LDL处理组相比,干扰LOX-1表达后对ox-LDL诱导的内皮细胞存活率、NO生成量减低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表达增高均有明显抑制作用（P<0.05）。结论 干扰LOX-1表达,对ox-LDL诱导内皮细胞引起的ICAM-1、MCP-1高表达和RhoA/Rho激酶信号通路的激活及细胞存活率、NO生成量的减低均有明显抑制作用,起到对内皮细胞损伤的保护作用。本研究为LOX-1作为靶基因治疗动脉粥样硬化提供了实验依据。     

Let-7f靶向抑制A20表达在血管内皮细胞炎症反应中的作用研究

目的观察let-7f在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导血管内皮细胞炎症反应过程中的变化规律,探讨let-7f参与动脉粥样硬化起始发病过程的分子机制。方法采用双抗体夹心ELISA方法观察不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时细胞间粘附分子1(ICAM-1)的表达变化情况,RT-qPCR检测不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时let-7f的表达变化规律,Western blot法分析不同剂量ox-LDL处理血管内皮细胞时核因子κB(NF-κB)的核移位情况和ox-LDL对人脐静脉内皮细胞A20表达及NF-κB通路活化的影响,双荧光素酶报告实验检测let-7f与A20基因的3’-UTR靶向结合,Western blot法检测let-7f对A20表达的调控。结果 20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞培养液中ICAM-1的含量明显升高,血管内皮细胞let-7f的表达明显上调(均为P0.05),且随着ox-LDL作用剂量的增加,ICAM-1与let-7f的表达变化均呈现明显的剂量效应关系。此外,20μg/ml ox-LDL可导致血管内皮细胞NF-κB向核内移位,随着ox-LDL作用剂量的增加核内NF-κB明显增多(P0.05)。100μg/ml ox-LDL作用于血管内皮细胞,可引起A20下调,IKK被磷酸化,并进一步导致NF-κB磷酸化增多,而let-7f能够与A20基因的3’-UTR靶向结合并明显抑制其表达。结论 Let-7f可能通过调控NF-κB信号传导通路的活化参与血管内皮细胞的炎症反应过程,提示let-7f可能成为动脉粥样硬化早期预防和治疗的新靶点。     

氧化低密度脂蛋白通过血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1诱导血管内皮细胞粘附分子的表达

目的探讨血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）在氧化低密度脂蛋白（ox—LDL）诱导血管内皮细胞粘附分子表达中的作用。方法用不同浓度ox-LDL培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,用RrealtimeRT—PCR测定LOX-1 mRNA的表达;RT—PCR测定细胞间粘附分子1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子1（VCAM-1）以及E选择素的mRNA表达;用Westernblot测定LOX-1、ICAM-1、VCAM-1以及E选择素蛋白的表达,观察ox-LDL对血管内皮细胞粘附分子表达的影响。HUVECs预先用聚肌苷酸[poly（I）]和爱兰苔胶处理,再用ox—LDL培养,再分别测定上述粘附分子的表达水平,比较加入LOX-1阻断剂前后粘附分子表达的变化。结果ox-LDL各剂量组皆可上调LOX-1、ICAM-1、E选择素的mRNA和蛋白表达（P〈0．01）,在10～50μm/ml剂量范围内呈现明显的剂量一效应关系（P〈0．01）,但ox—LDL对VCAM-1的表达没影响。HUVECs预先与250μg／ml的poly（Ⅰ）或爱兰苔胶作用2h,然后加入50μg/ml的ox—LDL作用24h。poly（Ⅰ）和爱兰苔胶都能抑制ox—LDL诱导的LOX-1、ICAM-1和E选择素的mRNA和蛋白表达水平,与未阻断组相比,差异皆有统计学意义（P〈0．01）。结论ox—LDL可以上调血管内皮细胞粘附分子的表达,LOX-1受体阻断剂可以部分阻断ox—LDL的上调作用,ox-LDL诱导血管内皮细胞粘附分子的表过是通过LOX-1介导的。     

川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养人冠状动脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度川芎嗪为1μmol/L组、10μmol/L组、100μmol/L组。用RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因和蛋白表达;采用免疫荧光法观察NF-κB p65蛋白的核转位。结果与对照组比较,ox-LDL组MCP-1、ICAM-1基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,10μmol/L组、100μmol/L组MCP-1、ICAM-1基因表达明显降低(P<0.01),1μmol/L组、10μmol/L组MCP-1、ICAM-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。免疫荧光显示,1μmol/L组、10μmol/L组可抑制NF-κB p65亚基的核转位。结论川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

辛伐他汀对细胞分化抗原40配体介导的内皮细胞激活影响的实验研究

目的研究在人脐静脉内皮细胞中3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶对细胞分化抗原40（CD40）／细胞分化抗原40配体（CD40L）系统介导的内皮细胞激活的影响。方法采用人脐静脉内皮细胞株ECV-304,CD40L干预,使之与其表面的CD40作用而使其激活,即血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达上调和淋巴细胞与内皮细胞黏附功能增强。再用不同浓度辛伐他汀或辛伐他汀（5μmol／L）＋甲羟戊酸干预,流式细胞术和逆转录聚合酶链反应检测干预前后VCAM-1的表达,流式细胞术检测CD40L介导的淋巴细胞与内皮细胞黏附功能。结果辛伐他汀可下调CD40L介导的VCAM-1的表达,并呈一定的剂量依赖性。甲羟戊酸（400μmol／L）抑制了辛伐他汀（5μmol／L）对VCAM-1表达的下调作用。辛伐他汀可显著降低CD40L介导的淋巴细胞与内皮细胞的黏附功能。结论他汀类药物的抗炎作用与抑制CD40／CD40L系统有关,可能是通过抑制HMG-CoA还原酶而发挥作用的。     

5-脂氧合酶激活蛋白在介导细胞因子诱导血管内皮细胞黏附分子表达中的作用

目的研究5-脂氧合酶激活蛋白（FLAP）在细胞因子诱导血管内皮细胞表达黏附分子中的介导作用,以及MK886对血管内皮细胞表达黏附分子的抑制作用。方法分离并原代培养人脐静脉血管内皮细胞,用FLAP微小强有力RNA（small interfering RNA,siRNA）抑制FLAP的表达,或用MK886抑制FLAP的活性,采用肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）刺激血管内皮细胞,通过Western杂交和酶联免疫吸附检测血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、细胞间黏附分子- 1（ICAM-1）和E选择素的表达。结果人脐静脉血管内皮细胞能表达低水平的黏附分子,在细胞因子的刺激下黏附分子的表达水平提高。FLAP表达抑制后,细胞因子诱导黏附分子表达的作用降低。细胞因子刺激12 h后,同未处理细胞表达的黏附分子比较,不同黏附分子表达分别增加了6～51倍;用不同浓度MK886处理后,细胞表达的黏附分子水平明显下降,并呈MK886剂量依赖性。结论FLAP介导了细胞因子诱导血管内皮细胞表达黏附分子的作用,MK886具有抑制血管内皮细胞表达黏附分子的作用。     

高游离脂肪酸血症致血管内皮功能紊乱与NADPH氧化酶表达增强有关

目的研究高游离脂肪酸（HFFA）血症致血管内皮细胞功能紊乱是否与全身氧化应激增强以及血管局部烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶p47-phox亚基表达增强有关。方法正常6周龄雄性SD大鼠分为对照组（NC组,静脉输注生理盐水）,HFFA组（输注脂肪乳及肝素）,以及还原型谷胱甘肽（GSH）干预组（HFFA＋GSH组,同时输注脂肪乳、肝素及GSH）。输液前后测血浆FFA水平及GSH／GSSG比值。输液后行超声多普勒检测股动脉内皮依赖性血管舒张功能（EDV）与非内皮依赖性血管舒张（NEDV）功能,实时荧光定量RT-PCR检测胸主动脉NADPH氧化酶p-47phox的mRNA水平,Western blot检测内皮细胞及平滑肌细胞p-47phox蛋白的表达。结果与NC组相比,HFFA组血浆FFA水平明显增高（P〈0．05）,GSH／GSSG比值下降（P〈0．05）,EDV明显降低（P〈0．01）;HF—FA＋GSH组血浆GSH／GSSG比值介于HFFA组与NC组之问,EDV较HFFA组明显改善（P〈0．05）;NADPH氧化酶p-47phox mRNA及蛋白水平HFFA组较NC组明显增加,该增加趋势在HFFA＋GSH组中受到明显抑制;p-47phox mRNA和蛋白水平与血浆GSH／GSSG比值呈正相关关系。结论外源性升高血浆FFA水平能诱导机体氧化应激,促进血管局部NADPH氧化酶p-47phox亚基基因的转录与翻译,加重血管局部氧化应激损伤。阻断HFFA血症导致的氧化应激能抑制主动脉NADPH氧化酶表达,部分恢复EDV,提示HFFA血症致血管内皮细胞功能受损与全身及血管局部氧化应激增强有关。     

瑞舒伐他汀对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1/S1P/NF-κB信号通路的影响

目的探讨经氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激后,人脐静脉内皮细胞鞘氨醇激酶(Sphk)1、1-磷酸鞘氨醇(S1P)、基质金属蛋白酶(MMP)-3、核转录因子(NF)-κB p65表达的变化及瑞舒伐他汀(Rt)对ox-LDL诱导的内皮细胞损伤中Sphk1-S1P信号通路的影响。方法实验分为空白对照组,ox-LDL(50μg/ml)处理组,Rt(0.1、1、10μg/ml)干预组,RT-PCR检测细胞Sphk1、S1P、MMP-3因子水平;Western印迹检测细胞NF-κB p65蛋白表达;观察药物干预后细胞Sphk1、S1P、MMP-3、NF-κB p65因子的变化。MTT检测细胞增殖活性。结果 ox-LDL处理组细胞Sphk1、S1P、NF-κB p65、MMP-3的表达均显著高于空白对照组(P<0.05),Rt各干预组较ox-LDL处理组降低(P<0.05)。ox-LDL处理组细胞增殖明显受抑制,Rt各干预组细胞增殖率均较ox-LDL处理组显著上升(P<0.001)。结论 Sphk1-S1P信号传导通路的激活,导致下游炎症因子NF-κB p65、MMP-3的高表达,参与ox-LDL诱导的内皮细胞损伤过程,Rt可能通过抑制Sphk1/S1P信号传导通路介导的与炎症有关的血管损伤,延缓动脉粥样硬化的进程。     

脂质运载蛋白2促进胶原沉积和炎症反应参与川崎病导致心肌损伤的实验研究

目的 探讨脂质运载蛋白（Lcn）2在川崎病(KD)时心肌损伤的作用和相关机制。 方法 将40只（1月龄）SD大鼠随机分为对照组和干酪乳杆菌细胞壁成分（LCWE）模型组。建立KD大鼠模型4周后酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测KD大鼠血浆和心肌组织匀浆中Lcn 2的含量；心脏超声检测大鼠心脏收缩舒张功能；Masson染色评估心肌胶原产生的程度；荧光实时定量PCR法检测心肌组织中白介素（IL）-6、CD3、CD45和胶原蛋白（Collagen）I的mRNA表达；Western blot方法检测心肌组织中核因子（NF）-кB和其抑制蛋白IкB的磷酸化水平和Collagen I的蛋白表达变化。采用IкB的抑制剂BAY 11-7082（2.5 μmol/L）处理可有效抑制Collagen I的表达。 结果 LCWE注射28 d后，成功诱导KD大鼠冠状动脉损伤（P<0.05）。在此基础上发现，KD大鼠心脏左室舒张末期内径（LVIDd）增加，左室射血分数（LVEF）降低（P<0.05）。Masson染色显示KD大鼠心肌出现一定程度心肌纤维化和胶原沉积。心肌中的IL-6、CD3和CD45等炎症相关分子的mRNA表达水平显著升高（P<0.05）。KD大鼠心脏组织和循环中Lcn 2水平升高（P<0.05）。给予心肌成纤维细胞Lcn 2（10 ng/ml）处理48 h，心肌成纤维细胞Collagen I 的mRNA和蛋白表达水平均升高（P<0.05）。并且Lcn 2处理可显著上调心肌成纤维细胞NF-кB和IкB的磷酸化水平。采用IкB的抑制剂BAY 11-7082（2.5 μmol/L）处理可有效抑制Lcn 2对Collagen I蛋白的上调作用。 结论 KD状态下Lcn 2显著升高，Lcn 2通过激活NF-кB信号途径诱发心肌成纤维细胞胶原合成增加和产生炎症反应，进而造成心肌损伤。     

辛伐他汀对内皮细胞PD-L1表达的影响

目的研究辛伐他汀对受氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）干预的人脐静脉内皮细胞程序性死亡配体1（PD-L1）表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用50 mg/L ox-LDL含或不含5μmol/L辛伐他汀共同孵育温育人脐静脉内皮细胞12 h,RT-PCR及流式细胞术分别检测人脐静脉内皮细胞PD-L1 mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组比较,ox-LDL刺激人脐静脉内皮细胞PD-L1表达明显升高（P〈0.01）;预先给予辛伐他汀可明显抑制ox-LDL诱导的PD-L1表达,与单纯ox-LDL组比较具有统计学差异（P〈0.05）。结论PD-L1参与了辛伐他汀的免疫抑制作用。     

ox-LDL对血管内皮细胞促聚集和促黏附相关分子表达的影响

目的　观察血管内皮细胞在不同浓度的氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导及诱导不同时间后内皮细胞促聚集和促黏附活性的动态改变及可能机制。方法　将人脐静脉内皮细胞（HUVEC）株接种在6孔培养板,分别加入不同浓度的ox-LDL（50、100和200　mg/L）并孵育不同时间（12、24和48　h）。放射免疫法测定细胞上清液中前列环素（PGI2）和血栓素A2　（TXA2）含量;Western　blot检测HUVEC中组织因子（TF）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）的表达。结果　量效关系显示,ox-LDL预处理HUVEC　24　h后,ox-LDL呈浓度依赖性促进HUVEC聚集,表现为PGI2/TXA2比值显著下降（P<0.05或P<0.01）;时效关系显示类似的结果,但以24　h作用最为显著;同时,TF的表达随浓度的升高呈升高趋势。此外,ox-LDL还促进HUVEC黏附,表现为ICAM-1和VCAM-1呈浓度依赖性升高。结论　ox-LDL可增强HUVEC促聚集和促黏附活性,其机制可能与其分泌的PGI2/TXA2下降及上调TF、ICAM-　1和VCAM-　1的表达有关。     

内含子源性miRNA通过转录因子AP1调节内皮型一氧化氮合酶表达及血管内皮细胞增殖作用

目的　前期工作发现,内皮型一氧化氮合酶（eNOS）第4内含子的27碱基重复子产生相应27-nt　miRNA,并对eNOS的转录和表达有负反馈调节作用。进一步探讨该内含子源性27-nt　miRNA对内皮型一氧化氮合酶基因调节的分子机制及血管内皮细胞增殖相关转录因子AP1的作用机制。方法　应用MTT法检测人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖抑制率;细胞划痕实验检测HUVEC迁移能力;免疫组织化学方法检测内皮细胞中eNOS和AP1蛋白表达水平;进一步用Western　Blot检测27-nt　miRNA表达相关情况及细胞核转录因子eNOS表达情况。结果　27-nt　miRNA对HUVEC增殖具有强烈抑制作用　（P<0.05）;27-nt　miRNA对HUVEC迁移具有显著抑制作用（P<0.05）;27-nt　miRNA显著降低eNOS和AP1蛋白表达（P<0.05）;27-nt　miRNA通过负调控AP1降低eNOS蛋白表达（P<0.05）。结论　27-nt　miRNA显著抑制eNOS和AP1蛋白表达,AP1在27-nt　miRNA对eNOS表达调节中起重要作用。