miR-34a通过调控Sirt1/FoxO1通路影响血管内皮细胞凋亡

目的 探讨microRNA-34a(miR-34a)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人主动脉内皮细胞(HAEC)凋亡的影响及作用机制.方法 ox-LDL处理HAEC,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-34a的表达水平.Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)和Caspase-3活...     

白杨素通过调控SNHG9/miR-184对IL-1β诱导的软骨细胞损伤的保护作用

目的 探讨白杨素对白细胞介素(IL)-1β诱导的软骨细胞损伤的影响及可能机制。方法 体外培养人软骨细胞,不同浓度(20、40、60μg/L)的白杨素与10 ng/ml的IL-1β共同干预软骨细胞24 h后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测细胞中裂解的半胱氨酸蛋白水解酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中IL-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,RT-聚合酶链反应(qPCR)检测细胞中小核仁RNA宿主基因(SNHG)9和miR-184表达。转染SNHG9过表达载体或小干扰RNA至软骨细胞后,用10 ng/ml的IL-1β干预24 h或60μg/L白杨素与10 ng/ml IL-1β共同干预24 h,上述相同方法检测细胞增殖、凋亡、Cleaved-caspase3蛋白表达及细胞培养上清中IL-8、IL-6、TNF-α水平。双荧光素酶报告基因实验验证SNHG9和miR-184靶向关系。结果 20、40、60μg/L的白杨素显著提高了IL-1β诱导的软骨细胞光密度(OD)值(P<...     

消退素E1对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究消退素E1是否对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞损伤有保护作用,并探讨其分子机制.方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)随机分成6组,分别用生理盐水、消退素E1、PI3K抑制剂wortmanin、氧化型低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白+消退素E1、氧化型低密度脂蛋白+消退素E1+ PI3K抑制剂wortmanin处理人脐静脉内皮细胞48 h.随后用噻唑蓝法分析内皮细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、酶联免疫法分析细胞上清中肿瘤坏死因子-α( TNF-α)含量,酶标仪测量细胞内半胱天冬蛋白酶(caspase)3、9的活性,免疫印迹法检测激活的AKT和血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1( LOX-1)的表达.结果 氧化型低密度脂蛋白组细胞活力显著低于生理盐水组(P＜0.01),细胞凋亡率、TNF-α含量、caspase3和9活性,LOX-1蛋白的表达均显著高于生理盐水组(P均＜0.01).氧化型低密度脂蛋白+消退素E1组细胞凋亡率、TNF-α含量、caspase3和9活性,LOX-1蛋白的表达均显著低于氧化型低密度脂蛋白组(P＜0.01),细胞活力和激活的AKT均显著高于氧化型低密度脂蛋白组(P均＜0.01).氧化型低密度脂蛋白+消退素E1+ PI3K抑制剂wortmanin组的细胞活力和细胞凋亡率、TNF-α含量、caspase3和9活性,LOX-1蛋白的表达均显著高于氧化型低密度脂蛋白+消退素E1组(P＜0.05).结论 消退素E1能有效地抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞凋亡,此作用可能通过PI3 K/Akt信号通路介导.     

miR-24对氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞炎症损伤的影响

目的 探讨microRNA-24(miR-24)对氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症损伤的影响及潜在分子机制.方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测HUVECs的增殖;Transwell试验检测HUVECs的迁移能力;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-24...     

miR-30a在血管紧张素II诱导的心肌肥厚中的作用

【】目的 研究miR-30a是否介导了血管紧张素II(AngII)诱导的心肌肥厚。方法 用Real-time PCR观察AngII刺激后心肌细胞miR-30a的变化和肥厚基因的表达,用激光共聚焦观察AngII刺激后心肌细胞大小的变化。通过对miR-30a过表达或者抑制miR-30a活性后,观察心肌细胞肥厚基因表达和心肌细胞大小的变化。结果 AngII刺激心肌细胞后,心肌细胞miR-30a表达量下调至刺激前的32.9%。AngII miR-30a mimics组心肌细胞肥厚基因ANP和β-MHC表达分别是negative control组的51.7%和53.5%。AngII miR-30a inhibitors组心肌细胞肥厚基因ANP和β-MHC表达分别是AngII negative control组的1.88倍和1.64倍。激光共聚焦检测形态学的改变,AngII刺激心肌细胞使心肌细胞面积增加至刺激前的2.95倍。与negative control组比较,AngII miR-30a mimics组心肌细胞面积减少至57.8%,AngII miR-30a inhibitors组心肌细胞面积增加至1.50倍。结论miR-30a下调可介导AngII诱导的心肌肥厚。     

miR-34a靶向CD44对肺癌细胞干细胞表型的影响

目的探讨肺癌干细胞中miR-34a靶向CD44对干细胞表型的影响。方法利用免疫磁珠法分选CD44~+的肺癌干细胞;TargetScan预测靶向CD44的潜在miRNAs;双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a对CD44靶向调控作用;qPCR检测miR-34a表达;Western印迹检测细胞CD44蛋白表达;干细胞成球实验检测干细胞成球能力;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与NC组比较,miR-34a组CD44-WT、CD44-Mut活性均显著降低(均P0.05);miR-34a组CD44 mRNA和蛋白表达及干细胞成球数、侵袭细胞数均显著低于NC组(均P0.05);与对照组比较,siRNA组干细胞成球数、侵袭细胞数均显著降低(均P0.05)。结论 miR-34a靶向调节CD44抑制肺癌干细胞成球和侵袭能力,miR-34a可能是治疗肺癌的潜在靶标。     

miR-24对氧化低密度脂蛋白胆固醇诱导的人脐静脉内皮细胞自噬的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-24对氧化低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的调控作用及相关分子机制.方法 将HUVECs随机分为正常组,ox-LDL组,阴性对照组,anti-miR-24组,miR-24组.正常组细胞正常培养,ox-LDL组细胞用100μg/ml ox-LDL...     

miR-34a介导的阿魏酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨不同剂量阿魏酸对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用及机制.方法 皮下接种Hela细胞,建立人宫颈癌裸鼠移植瘤模型,成功后随机分为模型组(注射生理盐水组)、阿魏酸低剂量组〔25 mg·(kg·d)〕、中剂量组〔50 mg/(kg·d)〕和高剂量组〔100 mg/(kg·d)〕各5只.腹腔注射给药,连续处理28 d...     

氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤的条件培养基对血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）损伤血管内皮细胞（VEC）的条件培养基对血管平滑肌细胞（VSMC）生长状态的影响。方法在培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞上，分别采用MTT染色法、流式细胞术及增殖细胞核抗原免疫组化方法等，检测OX—LDL诱导VEC损伤的条件培养基对VSMC生长率、细胞周期及PCNA表达的影响。结果OX—LDL可呈浓度依赖性损伤VEC的形态、减少上清液中NO含量、升高上清液中ET-1含量。终浓度为1001μg,／ml的ox-LDL与VEC共同孵育24h制备的条件培养基，能明显促进VSMC生长、提高PCNA表达及增加细胞周期S期细胞数。结论血管内皮细胞受到OX—LDL损伤时，制备的条件培养基能促进血管平滑肌细胞增殖，这可能是氧化低密度脂蛋白致动脉粥样硬化形成的原因之一。     

斑蝥酸钠维生素B6注射液联合SOX方案对晚期胃癌患者miR-18a、miR-34a及免疫细胞计数的影响

目的 探讨斑蝥酸钠维生素B6注射液联合SOX方案(替吉奥+奥沙利铂)对晚期胃癌患者微小RNA-18a(miR-18a)、miR-34a及免疫细胞计数的影响.方法 选取2019年1月至2020年8月深圳市中西医结合医院68例晚期胃癌患者作为研究对象,开展前瞻性研究,依据治疗方案不同分为对照组和观察组,各34例.对照组予以...     

miR-20a-5p通过靶向MRTFA缓解ox-LDL诱导的内皮细胞损伤

目的探讨miR-20a-5p是否可通过靶向心肌素相关转录因子A(MRTFA)缓解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法 RT-qPCR检测miR-20a-5p在不同剂量不同时间oxLDL诱导的HUVEC中的表达; MTT法、流式细胞术和Western blot检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL诱导HUVEC增殖和凋亡的影响;乳酸脱氢酶(LDH)测试盒测定过表达miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC中LDH释放的影响; ELISA法检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL处理的HUVEC中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和丙二醛(MDA)的影响;荧光素酶报告和Western blot实验验证miR-20a-5p与MRTFA的靶向关系。结果 miR-20a-5p的表达随着ox-LDL诱导时间和剂量的增加而逐渐下降;过表达miR-20a-5p可部分逆转ox-LDL诱导对HUVEC增殖和凋亡的影响;上调miR-20a-5p可部分修复ox-LDL诱导对HUVEC氧化应激损伤; MRTFA是miR-20a-5p的靶基因;在ox-LDL诱导HUVEC中,MRTFA过表达可逆转miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC细胞增殖和凋亡、氧化应激损伤指标的影响。结论 miR-20a-5p靶向MRTFA修复ox-LDL诱导的HUVEC损伤。     

miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制

目的研究miR-206对血管内皮细胞增殖的影响及其机制,为临床动脉硬化疾病提供新的诊疗方向。方法收集临床病理首次确诊为糖尿病下肢动脉粥样硬化病变的患者病变处动脉内皮组织和正常内皮组织,qPCR检测miR-206的表达;而后通过基础实验研究将HUVEC分为未转染组、miR-206-mimics组和miR-206-inhibitor组,观察转染效率;三组细胞均采用CCK8检测细胞增殖情况,Transwell进行迁移能力评估,流式细胞仪检测细胞周期情况,Western blot检测Cx43表达情况。结果糖尿病动脉硬化患者下肢动脉(均为胫腓动脉)病变处内皮细胞miR-206的mRNA表达较正常组织内皮细胞明显增加(P0.05);HUVEC转染miR-206-mimics后,miR-206表达显著升高(P0.05),转染miR-206-inhibitor后,miR-206表达明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics 24 h后,细胞增殖率相比于未转染组和miR-206-inhibitor组要明显降低(P0.05);在HUVEC转染miR-206-mimics后,细胞迁移能力明显降低(P0.05),细胞周期在G2期发生阻滞,而HUVEC转染miR-206-inhibitor后细胞迁移能力提高(P0.05);miR-206-mimics组细胞Cx43表达明显降低,而miR-206-inhibitor组细胞Cx43表达明显增加。结论 miR-206可以抑制血管内皮细胞的增殖,将内皮细胞阻滞在有丝分裂G2期,并且抑制内皮细胞迁移,其对内皮细胞增殖的影响可能是通过调节Cx43表达来实现的。     

非小细胞肺癌组织miR-34a的表达及其对H1299细胞增殖的影响

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中miR-34a的表达情况及其对NSCLC细胞系H1299增殖的影响。方法 RT-PCR方法检测miR-34a在NSCLC组织和NSCLC细胞系H1299中的表达情况。克隆形成实验及MTT增殖实验检测miR-34a对NSCLC细胞系H1299增殖能力的影响;生物信息学方法预测miR-34a可能的功能性靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的功能性靶基因。Western印迹检测miR-34a对预测靶基因表达的影响。结果相比正常组织而言,NSCLC组织和细胞系H1299中miR-34a表达均显著下降(P0.05);转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05),而转染miR-34a抑制剂可增加NSCLC细胞系H1299的增殖能力(P0.05)。生物信息学预测显示Notch1是miR-34a可能的功能性靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miR-34a可显著抑制NSCLC细胞系H1299中Notch1的表达。结论 miR-34a可通过调节Notch1的表达,进而抑制NSCLC细胞的增殖。     

基于AMPK/mTOR信号通路探究下调miR-34a对非酒精性脂肪肝大鼠的干预效果

目的 基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探究下调miR-34a对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的干预效果。方法 43只雄性SD大鼠随机选取10只作为空白组,其余33只建立NAFLD模型,成功建模30只分为模型组、上调miR-34a组、下调miR-34a组各10只,将10μl miR-34a过表达慢病毒悬液、miR-34a沉默慢病毒悬液分别转染于上调miR-34a组、下调miR-34a组,其余两组进行同剂量蒸馏水干预,干预4 w后,进行葡萄糖耐受实验(OGTT),采集血清,检测血脂及胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),解剖肝脏、胰腺进行脏器系数计算,检测肝组织中miR-34a表达,苏木素-伊红(HE)染色进行肝组织病理学观察,检测AMPK/mTOR通路蛋白相对表达量。结果 与模型组相比,上调miR-34a组miR-34a表达量、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖、曲线下面积(AUC)、肝脏系数、脂肪变性、小叶内炎症、气球样变积分、胰腺系数、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR、mTOR表...     

川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨川芎嗪对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及其分子机制。方法体外培养人冠状动脉内皮细胞,并随机分为对照组、ox-LDL组、不同浓度川芎嗪为1μmol/L组、10μmol/L组、100μmol/L组。用RT-PCR及Western blot法检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因和蛋白表达;采用免疫荧光法观察NF-κB p65蛋白的核转位。结果与对照组比较,ox-LDL组MCP-1、ICAM-1基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与ox-LDL组比较,10μmol/L组、100μmol/L组MCP-1、ICAM-1基因表达明显降低(P<0.01),1μmol/L组、10μmol/L组MCP-1、ICAM-1蛋白表达明显降低(P<0.01)。免疫荧光显示,1μmol/L组、10μmol/L组可抑制NF-κB p65亚基的核转位。结论川芎嗪对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用。     

血管紧张素Ⅱ与氧化修饰低密度脂蛋白的关系及对动脉粥样硬化的影响

肾素 -血管紧张素系统 (RAS)是重要的体液调节系统 ,对血压和机体内环境的稳定起重要作用 ,它不仅存在于循环中 ,而且存在于许多组织如肾、脑、心血管中 ,通过自分泌和旁分泌发挥作用。血管紧张素 (Ang )是该系统的重要生物活性肽 ,它通过受体介导途径 ,产生如收缩血管 ,增加心肌收缩力 ,刺激醛固酮分泌 ,儿茶酚胺释放等目前已经广为人知的生物学效应。近年来 ,人们越来越关注 Ang 在动脉粥样硬化形成的病理上所扮演的重要角色。已经有研究证明Ang 能诱导原癌基因 c- fos,c- myc,c- jun和一些生长因子基因的表达 ,从而引起血管平滑肌细…     

血管紧张素II和缬沙坦对人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

目的　研究血管紧张素II(AngII)和AngIII型受体 (AT1)拮抗剂缬沙坦对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体 (LOX 1)基因转录和蛋白表达的影响 ,以进一步探讨AngII和LOX 1在动脉粥样硬化 (AS)中的地位和相互关系 ,以及缬沙坦可能的抗AS作用。方法　将不同浓度AngII(1× 10 -5～ 1× 10 -10 mol/L)与HUVECs共孵育 2 4h ,以及将 1× 10 -6mol/L浓度的AngII与HUVECs作用不同时间 (0、3、6、12、2 4、36、4 8h)后 ,用细胞酶联免疫法和半定量RT PCR分别检测LOX 1蛋白和mRNA表达的情况 ,并观察缬沙坦对此的影响。结果　AngII呈浓度依赖方式诱导HUVECsLOX 1蛋白和mRNA表达增加 ;10 -6mol/L的AngII作用 3h ,内皮细胞LOX 1蛋白和mRNA表达即有显著增高 (P <0 0 0 1) ;随着时间延长 ,LOX 1蛋白和mRNA表达量逐渐增加 ,至 2 4～ 36h达最高峰。缬沙坦可显著抑制AngII诱导的HUVECsLOX 1表达 ,使LOX 1表达接近于正常水平。结论AngII能明显增强HUVECs表达LOX 1,并呈浓度和时间依赖性 ,这可能是AngII促进动脉粥样硬化发生、发展的机制之一 ;此作用可被AT1拮抗剂缬沙坦阻断 ,从而产生可能的抗AS作用。     

miR-132在动脉粥样硬化中的表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响

目的探讨miR-132在动脉粥样硬化表达及对缺氧诱导的血管内皮细胞增殖凋亡的影响。方法 RT-PCR检测动脉粥样硬化中miR-132的表达;空转染组、阴性对照组和miR-132抑制剂组转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),转染48 h后RT-PCR检测各组细胞中miR-132 mRNA表达;后续实验分为正常培养组、缺氧组、缺氧+miR-132抑制剂组,各组细胞培养48 h后,CCK8及流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况;Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)3、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果 miR-132在动脉硬化组中的表达显著高于对照组(P0.05);转染组miR-132 mRNA表达显著低于空转染组(P0.05);缺氧组和缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达均显著低于正常培养组(P0.05),细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于正常培养组(P0.05),缺氧+miR-132抑制剂组OD_(490)值及PI3K、p-AKT蛋白表达显著高于缺氧组,细胞凋亡率及Cleaved Caspase3蛋白表达显著低于缺氧组(P0.05)。结论 miR-132在动脉粥样硬化中高表达,抑制其表达可促进血管内皮细胞增殖及降低细胞的凋亡,其机制与激活PI3K/AKT信号通路有关。     

lncRNA BDNF-AS靶向miR-375调控氧化型低密度脂蛋白诱导的动脉粥样硬化模型细胞损伤实验研究

目的 探讨长链非编码RNA脑源性神经营养因子反义因子（lncRNA BDNF-AS）对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的动脉粥样硬化模型细胞损伤的影响及其对miR-375的靶向调控作用。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,分别将lncRNA BDNF-AS小分子干扰RNA与miR-375寡核苷酸模拟物及其阴性对照、lncRNA BDNF-AS小分子干扰RNA si-lncRNA BDNF-AS与miR-375特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照、si-lncRNA BDNF-AS与miR-375特异性寡核苷酸抑制剂转染至HUVECs,并用ox-LDL处理24 h;仅使用ox-LDL处理的细胞为ox-LDL组,正常细胞为Con组。采用qRT-PCR法检测lncRNA BDNF-AS、miR-375的表达量;利用试剂盒检测丙二醛（MDA）的含量与超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测lncRNA BDNF-AS、miR-375的靶向关系。结果与Con组比较,ox-LDL组lncRNA BDNF-AS的表达水平升高（t...     

氧化型脂蛋白(a)对人脐静脉血管内皮细胞P选择素表达的影响

目的探讨氧化修饰的脂蛋白(a)[Ox-Lp(a)]能否诱导人脐静脉内皮细胞表达P选择素,以阐明其在动脉粥样硬化发生中的作用.方法在内皮细胞培养基中分别加入天然脂蛋白(a)[n-Lp(a)]与ox-Lp(a)及天然与氧化的低密度脂蛋白(n-LDL、ox-LDL).用细胞酶联免疫检测P选择素蛋白的表达,用单核细胞黏附率试验检测单核细胞黏附,并用Northern杂交检测P选择素mRNA的表达.结果ox-Lp(a)呈剂量依赖性增加内皮细胞P选择素蛋白表达,10nmol/L及20nmol/LOx-Lp(a)分别使P选择素表达明显增加到(145±10)%及(202±22)%.同时观察到Ox-Lp(a)促使单核细胞黏附率增加,并且黏附率与加入的Ox-Lp(a)浓度呈正相关.四种脂蛋白的作用进行比较显示Ox-Lp(a)的作用最强,10nmol/Ln-LDL、n-Lp(a)、ox-LDL、ox-Lp(a)分别使P选择素表达增加到(105±7)%、(127±9)%、(176±19)%、(245±22)%.Northernblot结果显示Ox-Lp(a)能促使P选择素mRNA表达明显增加.结论Ox-Lp(a)能诱导内皮细胞表达P选择素增强,这可能与脂蛋白(a)致动脉粥样硬化作用机制有关.