紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的 观察紫杉醇对胃癌细胞株BGC-823的体外诱导凋亡及对细胞周期的影响，探讨其治疗胃癌的作用机制。方法 利用流式细胞仪观察不同时间细胞的凋亡率以及细胞周期的变化。结果 紫杉醇诱导细胞凋亡，其凋亡率随时间的增加而增加，0，12，24，48小时细胞凋亡率分别为2．8％，6．0％，14．3％，16．0%；细胞周期也随着时间的不同而变化，与对照组相比，S期细胞减少，G2／M期细胞增多。结论 紫杉醇诱导细胞凋亡，有时间依赖性，其诱导凋亡的机制可能是通过G2／M期阻滞实现的。     

紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

~~紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究@罗执芬$郑州大学第一附属医院肿瘤科!河南郑州450052 @周云$郑州大学第一附属医院肿瘤科!河南郑州450052 @樊青霞$郑州大学第一附属医院肿瘤科!河南郑州450052~~~~~~     

膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系

背景与目的：线粒体介导的细胞凋亡大部分与细胞周期相关,但膜受体介导的细胞凋亡是否与细胞周期有关尚不清楚。本研究旨在观察膜受体介导的人类细胞凋亡与细胞周期特异性,阐明膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系。方法：用肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体分别处理指数生长期的Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用Annexin V／PI和API等方法,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期特异性。结果：处于静止期的外周血淋巴细胞对凋亡诱导剂不敏感,凋亡率是6％-8％。Molt-4、Jurkat细胞以及加入植物血凝素刺激的外周血淋巴细胞经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后出现了明显的细胞凋亡．凋亡率是15％-28％。膜受体介导的细胞凋亡主要发生在细胞周期的早G1期。结论：膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期相关,具有细胞周期特异性。     

紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

 目的　探讨紫杉醇对胃癌细胞的诱导凋亡作用及其诱导的胃癌细胞凋亡的周期时相性。方法　用Sub-G1法检测紫杉醇诱导胃癌细胞MKN-28的凋亡,API法检测紫杉醇诱导胃癌细胞凋亡的周期时相性,并分选后激光共聚焦显微镜技术（PSC）观察形态学,MTT法检测紫杉醇对临床胃癌组织细胞的敏感性。结果　Sub-G1法结果显示紫杉醇能诱导胃癌细胞的凋亡,紫杉醇（浓度10 mg／L）诱导胃癌细胞凋亡在10 h后达到高峰;API法检测结果显示紫杉醇诱导胃癌细胞发生凋亡的时相在G2／M期,PSC形态学观察到G2／M期凋亡特征;MTT法结果显示紫杉醇诱导的20例临床胃癌组织标本中,有16例抑制率大于50 %。结论　紫杉醇能诱导胃癌细胞发生凋亡,相对较敏感,其诱导的胃癌细胞凋亡具有周期时相性。     

紫杉醇诱导黑色素瘤A375细胞凋亡的分子机制

目的:探索紫杉醇对A375细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇对细胞增殖能力及细胞生长的影响;流式细胞仪分析及细胞形态学观察检测细胞周期和细胞凋亡;Westernblot方法检测bcl2、Bax和Caspase3蛋白表达。结果:0.001～1.000μmol/L紫杉醇以时间和剂量依赖方式抑制A375细胞生长和诱导细胞凋亡,0.000～1.000μmol/L紫杉醇作用24h时,早期细胞凋亡率由(0.5±0.1)%增至(32.4±1.1)%,P<0.05,0.100μmol/L紫杉醇作用24和48h时,早期细胞凋亡率由(20.9±0.9)%增至(52.6±1.0)%,t=28.89,P=0.001;不同浓度紫杉醇诱导A375细胞凋亡的机制不同,0.001μmol/L时不影响细胞周期,0.010μmol/L时使G0/G1期细胞含量明显减少,0.100和1.000μmol/L时使细胞发生G2/M期阻滞。紫杉醇作用24h后,Caspase3被激活,同时bcl2和Bax蛋白表达分别被下调和上调。结论:紫杉醇可诱导A375细胞凋亡,bcl2/Bax蛋白比值的下降及Caspase3的激活参与了该细胞凋亡过程,但高浓度紫杉醇通过作用微管,低浓度紫杉醇则通过尚不清楚途径实现细胞凋亡过程。     

高三尖杉酯碱诱导原代白血病细胞凋亡及临床意义

目的研究高三尖杉酯碱(HHT)对原代急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性非淋巴细胞白血病(ANLL)细胞的促凋亡作用及临床意义。方法以20例急性白血病(AL)患者(ALL 7例,ANLL 13例)为研究对象,DNA片段原位末端标记(TUNEL)方法检测凋亡细胞。结果HHT体外处理后ANLL和ALL细胞均出现典型凋亡细胞。HHT对ALL和ANLL细胞促凋亡作用差异无显著性[TUNEL阳性率(17.34±9.60)%对(26.64±20.67)%,P>0.05]。与柔红霉素(DNR)比较,HHT对ALL细胞促凋亡作用较弱[TUNEL阳性率(17.34±9.60)%对(31.64±18.84)%,P<0.05]。联合应用HHT和阿糖胞苷(A ra-C)处理原代ALL细胞,TUNEL阳性细胞率高于单用HHT处理(P<0.001)。体外HA联合处理TUNEL阳性细胞率≥39.6%组,CR率80.0%,TUNEL阳性细胞率<39.6%组,CR率25.0%。结论HHT对原代ALL和ANLL细胞均有促凋亡作用。     

Caspase-3抑制剂减弱紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡

目的 通过阻断Caspase途径，观察其对紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的影响，研究Caspase途径在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡中的作用机制。方法 采用MTT法、DNA凋亡梯状条带法及流式细胞仪法检测。用100μmol／L Caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)预处理乳腺癌Bcap37细胞3小时后，加入不同浓度的紫杉醇，观察紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的变化。结果 DEVD-CHO能减弱由紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡。蛋白免疫印迹实验表明DE-VD-CHO能抑制由紫杉醇所诱导的PARP、原Caspase-3裂解。结论 在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡过程中，Caspase途径起着重要的作用，能阻断该途径减弱紫杉醇所诱导的肿瘤细胞凋亡。     

咖啡因对喜树碱诱导Molt-4细胞凋亡的影响

背景与目的:有报道认为咖啡因(caffeine)可以作用于细胞周期检测点,从而影响细胞周期的进程,而这种效应对于肿瘤细胞凋亡的影响尚存在争议。本研究探讨咖啡因对喜树碱诱导Molt-4细胞凋亡的作用及其对细胞周期检测点的效应。方法:用喜树碱诱导细胞凋亡,以咖啡因作为干扰细胞周期检测点的因素。用API法(AnnexinⅤ-propidiumiodide,AnnexinⅤ/PI)及亚G1峰法对细胞凋亡率以及凋亡发生的周期特异性进行检测分析。结果:2.0～20.0mmol/L的咖啡因对处于对数生长期Molt-4细胞增殖没有影响。喜树碱能诱导Molt-4细胞产生以S期细胞为主的细胞周期特异性凋亡,0.15μmol/L喜树碱作用4、6h,细胞凋亡率分别为(23.69±2.26)%、(36.99±1.42)%;10.0mmol/L咖啡因能显著抑制这种细胞凋亡,与0.15μmol/L喜树碱联合作用4、6h后,细胞凋亡率分别下降至(4.79±0.64)%和(2.69±0.56)%。去除咖啡因后,凋亡细胞明显增多,去除4、6h后细胞凋亡率升至(46.23±0.21)%和(55.81±0.41)%,且仍以S期细胞为主。结论:咖啡因可以抑制喜树碱诱导细胞凋亡。作为影响细胞周期检测点的药物,咖啡因可以明显屏蔽检测点对损伤细胞的监督,抑制细胞凋亡,但其作用是一过性的、可以逆转的。     

Paclitaxel induced apoptosis in breast cancer cells requires cell cycle transit but not Cdc2 activity

Purpose Paclitaxel (PTX) is a widely used chemotherapy agent and may cause cell death by apoptosis subsequent to microtubule (MT) disruption. In this paper, we have investigated whether cell cycle transit and or Cdc2 (Cdk1) activity is required for the apoptosis induced by PTX.Methods Cell cycle was analyzed by flow cytometry, Cdc2 was assayed bio chemically. Cdc2 activity was decreased by siRNA and dominant negative (dn) Cdc2 expression. Cells were arrested by chemical or biological inhibitors in a G₁or S phase. Apoptosis was measured by DNA fragmentation and examination of nuclei by microscopy. JNK and AKT activations were assessed as well.Results Cell cycle inhibition was highly effective in decreasing PTX induced apoptosis. MT morphology was not altered by these inhibitors. PTX induced JNK activity or AKT mediated BAD phosphorylation was unaffected by cell cycle inhibitors. Abrogation of Cdc 2 activity was without effect on PTX induced apoptosis.Conclusions While cell cycle transit is required for PTX induced apoptosis; Cdc2 activity is not required.     

油茶皂苷体外诱导人白血病Jurkat细胞凋亡及其可能机制

目的:探讨油茶皂苷在体外诱导人白血病Jurkat细胞的凋亡及其可能机制。方法:将不同浓度的油茶皂苷作用于人白血病Jurkat细胞,应用细胞计数法检测其对细胞增殖的影响,FCM检测细胞周期分布和细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]、p-Bcl-2、Bcl-2、Bax和caspase-9蛋白的表达。结果:1～16μg/mL油茶皂苷可抑制Jurkat细胞的增殖,呈剂量依赖性。1～4μg/mL油茶皂苷作用Jurkat细胞24h后,G0/G1期和G2/M期细胞比率下降,S期细胞比率上升,细胞凋亡率随着油茶皂苷浓度的增加而上升;Jurkat细胞中,p-Bcl-2和Bcl-2蛋白的表达水平下调,caspase-3、PARP和caspase-9蛋白的表达水平上调,Bax蛋白的表达水平无明显变化。结论:油茶皂苷能抑制人白血病Jurkat细胞增殖和诱导其凋亡,其作用机制可能与细胞凋亡的线粒体途径有关。     

Lycorine induces apoptosis and down-regulation of Mcl-1 in human leukemia cells

Lycorine is an alkaloid isolated from the bulb of the Amaryllidaceae Lycoris. Here, we report that treatment with lycorine resulted in survival inhibition and apoptosis induction in human leukemia cell lines. Lycorine induced apoptosis in human leukemia cells via intrinsic mitochondria pathway and caused a rapid-turnover of protein level of Mcl-1 which occurred before caspases activation. Furthermore, pronounced apoptosis accompanied by the down-regulation of Mcl-1 was also observed in blasts from patients with acute myeloid leukemia. Our findings suggest that lycorine may be a good candidate therapeutic agent against leukemia in worth of further evaluation.     

黄芪总苷诱导人白血病NB4细胞凋亡的机制

目的 研究黄芪总苷(TA)对体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖及凋亡机制的影响.方法 将不同浓度的TA与NB4细胞共培养48 h,采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒8(CCK-8)检测细胞生长抑制率,以流式细胞仪检测细胞凋亡率及凋亡过程中细胞内核因子κB(NF-κB)和蛋白激酶B(PKB,又称Akt)蛋白浓度的变化.结果 200、400、600、800 ms/L TA均可抑制NB4细胞生长,抑制率分别为(14.54±3.20)%、(24.79±3.98)%、(57.28±4.71)%和(88.28±4.65)%,呈浓度依赖性增加(P<0.05).200、400、600、800 mg/L TA组的细胞凋亡率分别为(10.03±3.31)%、(14.87±3.65)%、(23.45±1.90)%和(25.26 4-2.07)%,与对照组[(1.80±1.24)%]相比,差异均有统计学意义(P<0.05),且200、400、600 ms/L TA组的细胞凋亡率呈浓度依赖性增加(P<0.05);800 mg/L TA组的细胞凋亡率增加不明显,与600 ms/L TA组相比,差异无统计学意义(P>0.05),但出现了大量的坏死细胞,坏死率达(45.65±3.16)%.细胞凋亡过程中伴随NF-κB蛋白表达下降,不同浓度TA组与对照组差异均有统计学意义(P<0.05),而Akt蛋白的表达无明显变化(P>0.05).结论 黄芪总苷可以抑制NB4细胞增殖,并可以通过不依赖Akt的NF-κB信号通路来诱导NB4细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the effect of total astragalosides (TA) on proliferation and apoptosis in human leukemia NB4 cells in vitro. Methods The NB4 cells were treated with TA at different concentrations for 48 h in culture. Growth inhibition rates were measured by CCK-8 method. Flow cytometry was used to explore the cell apoptosis and the activity of NF-κB and Akt during apoptosis. Results TA at different concentrations (200, 400, 600, 800 mg/L) inhibited proliferation of NB4 cells in a dose-dependent manner ( P < 0. 05), and the inhibitory rates of TA on NB4 cells were (14. 54 ± 3. 20) % , (24.79 ±3.98)%, (57.28 ±4.71)% and (88.28 ±4.65)% , respectively. In terms of the induction of apoptosis, there was a significant difference between the TA group and blank control [(1.80±1.24)%, P<0.05]. At TA doses of 200, 400 and 600 mg/L, the apoptotic rates of NB4 cells were ( 10. 03 ± 3.31)% , (14.87 ±3.65)% , (23.45 ± 1.90) % , respectively. Besides, TA induced apoptosis of NB4 cells in a dose-dependent manner in the groups of 200 mg/L, 400 mg/L, 600 mg/L (P<0.05). But there was no significant difference in apoptotic rates between the groups of 800 mg/L and 600 mg/L [(23.45 ±1.90)%, P> 0.05]. In the group of 800 mg/L, the necrotic cells increased highly and the necrotic rate reached (45.65 ± 3.16)%. After TA treatment of NB4 cells at different concentrations (200, 400, 600 mg/L), the expression of NF-kB protein was significantly decreased compared with that of the blank control (9. 79 ±0. 95, P<0.05), while Akt protein was not significantly decreased (P>0.05). Conclusion TA can inhibit the growth of NB4 cells and induce apoptosis in NB4 cells through an Akt-independent NF-kB signaling pathway.     

超声体外诱导白血病细胞K562凋亡的研究

 目的 研究超声对诱导白血病细胞K562凋亡的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法 以人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562为研究对象,用频率为1.8 MHz的超声波辐照白血病细胞K562,用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 超声辐照K562细胞后24 h,8 mV×5 min组及8 mV×10 min组细胞凋亡率分别为2.3 %和8.28 %;10 mV×5 min及10 mV×10 min组细胞凋亡率分别为9.36 %和21.46 %。电压为7mV时,超声辐照K562细胞后0.5 h,1 h,3 h,5 h细胞凋亡率分别为1.9 %,3.6 %,5.7 %,7.7 %。同时光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 超声可以诱导白血病K562细胞凋亡。     

甲异靛诱导白血病细胞HL-60凋亡及机制探讨

背景与目的:甲异靛可有效治疗慢性粒细胞白血病,但其抗白血病的机制尚不清楚。本研究拟观察甲异靛诱导急性白血病细胞株HL-60细胞凋亡的作用及促凋亡机制。方法:用台盼蓝拒染实验观察甲异靛对HL-60细胞增殖抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带;荧光显微镜观察细胞形态学的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和Fas蛋白的表达;免疫蛋白印迹法分析caspase-9、caspase-8、caspase-3、PARP、bcl-2、bax和胞浆细胞色素c的含量。结果:甲异靛可抑制HL-60细胞增殖和诱导其凋亡。20μmol/L甲异靛处理HL-60细胞12～48h可明显抑制HL-60细胞增殖;20μmol/L甲异靛作用于HL-60细胞1h,凋亡百分比为(3.70±0.56)%,当延长至3h、6h和12h凋亡细胞比例分别上升至(19.80±1.13)%、(29.20±2.69)%和(47.05±7.70)%,较阴性对照组[(2.65±0.78)%]明显增高(P<0.05)。HL-60细胞经甲异靛处理3h后出现细胞核染色质浓集和DNA梯形条带。甲异靛处理HL-60细胞1h后死亡受体Fas阳性率由(9.35±0.21)%升高到(21.30±1.27)%(P<0.05)。甲异靛可活化HL-60细胞的caspase-8、caspase-9、caspase-3和PARP,降低抗凋亡蛋白bcl-2的表达和上调促凋亡蛋白bax,并升高细胞浆中细胞色素c的浓度。caspase-3抑制剂(z-DEVD-fmk)可以减少甲异靛对HL-60细胞的增殖抑制,降低细胞凋亡率。100μmol/Lz-DEVD-fmk预处理HL-60细胞后再加入20μmol/L甲异靛,5h后凋亡率为(16.5±5.5)%,甲异靛组为(29.8±5.4)%(P<0.05);12h后计数,抑制剂加甲异靛组活细胞高达(3.57±0.18)×105/ml,甲异靛组活细胞仅为(1.80±0.14)×105/ml(P<0.05)。结论:甲异靛可诱导HL-60细胞凋亡,其机制与caspases和bcl-2家族蛋白的调节有关。     

榄香烯联合紫杉醇诱导肺癌细胞凋亡和调控细胞周期的体外研究

目的：观察榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞的诱导凋亡和周期调控作用。方法：榄香烯和紫杉醇单独及联合作用于肺癌A549细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期,免疫印迹法检测蛋白的表达。结果：榄香烯（20μg/ml、80μg/ml）和紫杉醇（2μg/ml）两种药物联合作用A549细胞时,产生协同的增殖抑制作用。榄香烯只诱导A549细胞少量凋亡,紫杉醇使细胞阻滞在G2/M期。榄香烯和紫杉醇联合应用时,细胞凋亡率提高,并检测到PARP的裂解。榄香烯没明显改变survivin的表达,紫杉醇能上调survivin表达。低浓度榄香烯和紫杉醇联合后survivin仍高表达,而高浓度榄香烯和紫杉醇联合后,sur-vivin表达明显下调。结论：榄香烯和紫杉醇对肺癌A549细胞有诱导凋亡和调控细胞周期的作用。