不对称二甲基精氨酸对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 观察不对称二甲基精氨酸（ADMA）对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法 THP-1单核细胞给予160nmol/L佛波酯（PMA）孵育48h,诱导分化成巨噬细胞,与80mg/L氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）孵育24h,使巨噬细胞转化为泡沫细胞,用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化.再以不同浓度ADMA（1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L）作用泡沫细胞24h,以20μmol/L ADMA作用泡沫细胞不同时间（0h,6h,12h,24h,48h）,酶比色法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果 ①单核细胞加人PMA诱导48h后,分化为巨噬细胞,再经ox-LDL诱导24h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L,30μmol/L的ADMA作用于,THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞24h后,细胞内胆固醇含量均明显增加（P＜0.01）,③与对照组相比,20μmol/L的ADMA作用于THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞12h,24h,48h,细胞内胆固醇含量均明显增加（P＜0.01）.结论 ①单核细胞株THP-1经PMA诱导后,可分化为巨噬细胞,再经ox-LDL诱导后,可转化为泡沫细胞.②ADMA可以增加THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇的含量.     

人外周血单核细胞源性泡沫细胞模型的建立

目的建立人外周血单核细胞源性泡沫细胞模型，为研究动脉粥样硬化机制及其防治提供新途径。方法采用一次性密度梯度超速离心法从血浆中分离低密度脂蛋白，以Cu^2＋诱导法将其氧化修饰成氧化低密度脂蛋白。采用密度梯度离心法和塑料吸附法从冠心病患者外周血中分离出单核细胞．首先以50nmol／L佛波酯刺激48h使之转化为巨噬细胞，然后与80mg／L氧化低密度脂蛋白共孵育24h，使之转化为泡沫细胞。结果经50nmol／L的佛波酯诱导48h后，光镜下发现单核细胞已转化为典型的巨噬细胞。油红O染色发现，与80mg／L氧化低密度脂蛋白共孵育24h后培养细胞中出现了大量的红染颗粒。高效液相色谱法测定细胞内胆固醇提示细胞内总胆固醇明显增加，其中胆固醇酯含量大于游离胆固醇，符合泡沫细胞的定义。结论直接采用冠心病患者外周血单核细胞成功地建立了泡沫细胞疾病模型，其病理生理学特性接近于体内状况，可为研究动脉粥样硬化机制和药物防治提供一种可靠的病理细胞模型。     

体外氧化修饰高密度脂蛋白对人单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响

目的探讨体外氧化修饰后的高密度脂蛋白（ox-HDL）对人外周血单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇流出的影响。方法采用一次性密度梯度超速离心法从血浆中分离低密度脂蛋白（LDL）及高密度脂蛋白（HDL）,分别以Cu2+诱导法将其氧化修饰成ox-LDL及ox-HDL。采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离出单核细胞,以50nmol/L佛波酯（PMA）刺激48h使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组（ox-LDL组）、阳性对照组（HDL组）及实验组（ox-HDL组）,对照组仅加入终浓度为80mg/L的ox-LDL;HDL组和ox-HDL组分别先加入终浓度均为50mg/L的HDL和ox-HDL共孵育1h后,再分别加入终浓度为80mg/L的ox-LDL,并于实验的0、6、12及24h测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）及蛋白（Pro）含量。观察不同时间点各组细胞内TC/Pro比值的变化,并比较ox-HDL与HDL对细胞内TC/Pro比值影响的时效关系。结果成功地由体外氧化修饰了LDL及HDL并制备出理想的泡沫细胞模型。在实验的6、12及24h,ox-HDL组细胞内TC/Pro比值均较HDL组细胞高,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论体外氧化修饰后的HDL导致其胆固醇逆向转运（RCT）功能与效率的降低。     

黄芪多糖对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响

目的 探讨黄芪多糖(APS)对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量的影响.方法采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,用50 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导,建立泡沫细胞模型.用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化.再以不同浓度APS(0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L)作用泡沫细胞24 h;以100 mg/L APS作用泡沫细胞不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h)后,酶比色法检测泡沫细胞内胆固醇的含量.结果①巨噬细胞经ox-LDL诱导48 h后转化为泡沫细胞.②与对照组相比,10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞24 h后,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).③与对照组相比,100 mg/L的APS作用于巨噬细胞源性泡沫细胞6 h、12 h、24 h、48 h,细胞内胆固醇含量均明显减少(P＜0.01).结论①巨噬细胞经ox-LDL诱导后,有大量泡沫细胞形成.②APS可减少RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞内胆固醇含量.     

白介素-1对单核细胞向泡沫细胞分化过程中ACAT-1蛋白表达和活性的影响

目的探讨白介素-1（IL-1）对单核细胞向泡沫细胞分化过程中脂酰辅酶A-胆固醇酰基转移酶-1（ACAT-1）蛋白表达和活性的影响。方法200nmol／L佛波酯（PMA）诱导THP-1单核细胞48h使其转化为巨噬细胞,流式细胞术检测CDl4的表达;巨噬细胞与80mg／L氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）共孵育24h,使之向泡沫细胞分化,油红O染色观察细胞质内脂质沉积;Westernblot检测各组细胞（单核细胞组、巨噬细胞组、泡沫细胞组、泡沫细胞＋IL-1组、泡沫细胞＋IL-1／Anti-ILl组）ACAT-l的蛋白表达,液相闪烁计数法检测ACAT-1的酶活性。结果单核细胞株THP-1与200nM的PMA共孵育48h后,分化为巨噬细胞,CDld阳性表达率为85．7％;巨噬细胞与Ox-LDL共孵育24h后,油红O染色胞浆内可见大量吞噬的脂质小滴。与单核细胞组相比,巨噬细胞组、泡沫细胞组和泡沫细胞＋IL-1组ACAT-1蛋白表达上调,活性升高（P〈0．05）,泡沫细胞＋IL-1／Anti-ILl组蛋白表达上调及活性升高不明显（P〉0．05）。结论IL-1对单核细胞向泡沫细胞分化过程中ACAT-1蛋白表达及酶活性有上调作用,IL-1单克隆抗体可以拮抗这种效应。     

辛伐他汀对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢和SR-A表达的影响

目的探讨不同浓度辛伐他汀对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇代谢和SR-A表达的影响。方法以50 nmol/L佛波酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导巨噬细胞建立泡沫细胞模型,通过不同浓度辛伐他汀干预后,油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,高效液相色谱检测细胞内游离胆固醇和胆固醇酯含量,W estern b lot检测SR-A蛋白的表达。结果与ox-LDL组比较,辛伐他汀处理组巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内胆固醇酯含量均显著减少（P均〈0.01）,同时SR-A蛋白表达明显下降（P〈0.01）,呈剂量依赖性。结论辛伐他汀可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,可能与辛伐他汀抑制SR-A的表达,从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取有关。     

阿托伐他汀抑制巨噬细胞泡沫化

目的 探讨阿托伐他汀对人外周血单核细胞源性巨噬细胞泡沫化的影响作用,为深入探讨阿托伐他汀的抗动脉粥样硬化(AS)机理提供实验依据.方法 采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离单核细胞,以50 nmol/L佛波酯(PMA)刺激48 h使之转化为巨噬细胞.细胞分为对照组与实验组,以阿托伐他汀干预后分别测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)与蛋白的含量,观察阿托伐他汀对细胞内TC与蛋白比值影响的量效关系和时效关系.结果 成功建立了人单核细胞源性泡沫细胞模型.经不同浓度阿托伐他汀作用后,细胞中TC与蛋白比值随阿托伐他汀浓度的增加而呈剂量依赖性降低(P<0 01),细胞泡沫化程度也随着药物浓度的升高而降低,且在药物浓度一定的情况下,细胞中TC与蛋白比值随阿托伐他汀处理时间的延长而呈时间依赖性降低(P<0 01).结论 实验结果提示阿托伐他汀通过降低细胞内TC的含量,一定程度上减轻巨噬细胞的泡沫化程度,从而发挥抗AS的作用.     

阿托伐他汀抑制巨噬细胞泡沫化

目的探讨阿托伐他汀对人外周血单核细胞源性巨噬细胞泡沫化的影响作用,为深入探讨阿托伐他汀的抗动脉粥样硬化(AS)机理提供实验依据。方法采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离单核细胞,以50 nmol/L 佛波酯(PMA)刺激48 h 使之转化为巨噬细胞。细胞分为对照组与实验组,以阿托伐他汀干预后分别测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)与蛋白的含量,观察阿托伐他汀对细胞内 TC 与蛋白比值影响的量效关系和时效关系。结果成功建立了人单核细胞源性泡沫细胞模型。经不同浓度阿托伐他汀作用后,细胞中 TC 与蛋白比值随阿托伐他汀浓度的增加而呈剂量依赖性降低(P<0.01),细胞泡沫化程度也随着药物浓度的升高而降低,且在药物浓度一定的情况下,细胞中 TC 与蛋白比值随阿托伐他汀处理时间的延长而呈时间依赖性降低(P<0.01)。结论实验结果提示阿托伐他汀通过降低细胞内 TC 的含量,一定程度上减轻巨噬细胞的泡沫化程度,从而发挥抗 AS 的作用。     

罗布麻提取物对ox-LDL诱导U937形成泡沫细胞过程中TNF-α表达的影响

目的探讨罗布麻(AV)提取物对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导U937单核细胞形成泡沫细胞过程中肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响及其抗动脉粥样硬化(AS)的机制。方法利用0.1μmol/L佛波脂(PMA)诱导分化人U937单核细胞分化为巨噬细胞,加入100 mg/L ox-LDL及不同浓度(0.2、0.4、0.8 mg/L)的AV共同孵育24 h,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和RT-PCR方法检测培养细胞上清中TNF-α表达水平。结果 ox-LDL组较正常对照组TNF-α的表达明显增加(P<0.05)。给药各组较ox-LDL组TNF-α明显减少。且随AV浓度的增加TNF-α表达呈逐渐减少的趋势(P<0.05)。结论成功建立体外动AS泡沫细胞模型。TNF-α与炎症反应密切相关,是AS炎症反应中的重要因子,AV通过抑制炎症因子发挥抗动脉粥样硬化作用。     

巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中载脂蛋白E基因表达的变化

研究单核－巨噬细胞源性泡沫细胞形成过程中细胞载脂蛋白E表达的变化,以佛波醇酯（10^-7mol/L)诱导人单核细胞性THP－1细胞分化为巨噬细胞（72h),再以氧化型低密度脂蛋白（50mg/L)刺激巨噬细胞形成泡沫细胞（48h),用逆转录－聚合酶链反应检测这一过程中载脂蛋白E在mRNA水平上的变化。结果显示,单核细胞分化为巨噬细胞的同时伴随着载脂蛋白E表达的增加,巨噬细胞吞噬脂质转化为泡沫细胞后载脂蛋白E的表达进一步增加。