姜酮在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的保护作用及机制研究

目的 观察并探究姜酮(zingerone, ZO)在博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化中的疗效及潜在分子机制。方法 将40只雄性C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为4组,依次为:对照组、模型组、低剂量ZO治疗组和高剂量ZO治疗组。给予小鼠单次气管内注射BLM (5mg/kg)建立肺纤维化模型。低剂量ZO治疗组和高剂量ZO治疗组小鼠给予不同浓度ZO灌胃处理。HE染色及Masson染色观察肺病理损伤及纤维化状况;试剂盒检测肺组织氧化应激水平;碱水裂解法检测肺组织羟脯氨酸的含量;Western blot法检测肺组织中collagen Ⅰ、α-SMA及NRF2的蛋白表达状况。结果 与对照组比较,模型组小鼠出现了明显的肺病理损伤及纤维化,同时氧化应激明显升高而NRF2蛋白表达明显降低;ZO预处理可明显减轻BLM所致的小鼠肺纤维化和氧化应激,同时上调NRF2蛋白表达。结论 姜酮具有减轻博来霉素小鼠肺纤维化的潜力,其机制与NRF2的激活有关。     

IL-27在博来霉素诱导肺纤维化模型中的保护作用

［摘要］目的　探讨IL-27在博来霉素诱导肺纤维化模型中的作用．方法　将80只C57BL/6小鼠随机分为正常组（A组）、BLM模型组（B组）、BLM＋IL-27组（C组）、BLM＋抗IL-27组（D组）,每组各20只．观察A、B组小鼠肺组织IL-27、IL-27R mRNA表达．各组分别于7 d、28 d各处死小鼠5只,获取肺组织,病理学方法观察各组小鼠肺组织肺泡炎症和肺纤维化程度,测定肺组织羟脯氨酸含量,观察各组小鼠生存情况．结果（1）IL-27、IL-27R mRNA在肺纤维化形成中明显升高（P＜0.05）;（2）病理结果提示:7 d D组肺泡炎和肺纤维化程度最重,C组最轻（P＜0.05）;28 d D组肺纤维化程度较B组加重, C组最轻（P＜0.05）;（3）羟脯氨酸含量变化:7 d,28 dD组肺组织羟脯氨酸含量最高,C组含量最少（P＜0.05）;（4）各组小鼠在28 d时A组无小鼠死亡,C组死亡率低于B组,D组死亡率高于B组（P＜0.05）．结论　IL-27抑制博来霉素诱导肺纤维化的形成,提高了小鼠的生存率．     

博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的建立方法及比较

目的:采用不同方法诱导博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化的模型,探讨符合人类肺纤维化病程的动物模型。方法:分别经气管、腹腔给予BLM致大鼠肺纤维化模型,于第1、14、28天处死,取肺组织制备病理切片,行HE染色后评价两种动物模型各时间段肺组织形态学变化,测量肺泡壁和胸膜厚度;测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)含量,对两种模型进行评价。结果:(1)气管内、腹腔内给药均可建立肺纤维化动物模型,但时间长短不一;(2)气管内给药大鼠肺内病灶分布以末梢细支气管为主,早期的肺内炎症变化较重,而腹腔内给药大鼠病灶分布以胸膜下、肺组织内为主,炎症反应相对较轻;(3)腹腔内给药大鼠第28天肺组织匀浆HYP含量明显高于气管内给药(P<0.05)。结论:腹腔内给药建立的大鼠肺纤维化模型可能较近似于人类特发性肺纤维化的病程及病理改变。     

中和白细胞介素 17 对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用

目的??初步探讨中和白细胞介素 17（IL-17）对博来霉素（BLM）诱导小鼠肺纤维化形成过程的 干预作用及其机制。方法??96 只小鼠随机分为 4 组,即抗体干预组、同型抗体对照组（IgG2A 组） 、博来霉素 组（BLM 组） 、正常对照组（NC 组） 。气管内注射 BLM 使小鼠急性肺损伤诱导肺纤维化形成, NC 组则给予 等量生理盐水。复制模型后第 4、9、14、19 和 22 天抗体干预组小鼠尾静脉注射 IL-17A 中和抗体, IgG2A 组 注射同型抗体 IgG2A; BLM 组和 NC 组则注射等量生理盐水。在培养的第 7、 14 和 28 天将 4 组小鼠分批处死, 取气管肺泡灌洗液（BALF）涂片进行细胞计数, ELISA 法检测 IL-1β、 IL-10、 IL-17A、 IFN-γ 含量的变化; 检测小鼠肺组织羟脯氨酸（HYP） 、丙二醛（MDA）及活性氧（ROS）等生化指标,并评价各组小鼠肺组织 的纤维化程度。结果??抗体干预组与 BLM 组比较,BALF 中细胞总数、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞的 个数, IL-1β、IL-10、IFN-γ 的含量, 以及 HYP、MDA、ROS 的含量在各个时间点均降低（ P <0.05） ; 而 IgG2A 组上述指标在各个时间点与 BLM 组比较,差异无统计学意义（ P >0.05） 。结论??中和 IL-17A 对 BLM 所致的实验性小鼠肺纤维化模型具有一定的防治作用, 有利于延缓肺纤维化的进程。     

依那普利对博来霉素致大鼠肺纤维化的影响

目的探讨依那普利对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和肺纤维化的影响。方法 60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量依那普利组、中剂量依那普利组、高剂量依那普利组和泼尼松对照组,每组10只。博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型。对各组大鼠进行肺泡炎、肺纤维化半定量评分,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(INF-γ)、白细胞介素(IL)-1、IL-2、IL-4和IL-6含量,肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)含量,BALF和血清中间质金属蛋白酶(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的浓度,以及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)m-RNA的表达。结果依那普利剂量依赖性地降低博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺纤维化评分和肺泡炎评分(P<0.05);降低大鼠BALF中TGF-β1、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6的含量(P<0.05),并升高INF-γ含量(P<0.05);升高肺组织中SOD含量(P<0.05),并降低MDA和HYP含量(P<0.05);降低血清及BLAF中MMP-9、TMP-1的含量,降低MMP-9/TMP-1值(P<0.05);降低肺组织TNF-αm-RNA的表达(P<0.05)。结论依那普利可以有效抑制博来霉素诱导的大鼠肺纤维化。     

气管内注射博来霉素致小鼠肺纤维化造模方式改良

目的探讨手术显微镜下气管内注射博来霉素制作肺纤维化模型的效果。方法选择健康成年清洁级雌性8周龄C57BL/6小鼠30只,采用随机数字表法将其分为对照组和观察组,每组15只。对照组小鼠在直视下行气管内注射博来霉素,观察组小鼠在手术显微镜下行气管内注射博来霉素造模,观察术后12 h内各组小鼠死亡情况及术后1周体质量变化;术后28 d每组随机选取8只小鼠,取小鼠肺组织制备石蜡切片并进行苏木精-伊红染色、Masson染色,评价各组小鼠肺泡炎及肺纤维化程度。结果术后12 h内观察组小鼠死亡率显著低于对照组(P<0.05)。术后1周内观察组小鼠体质量下降显著低于对照组(P<0.05)。观察组小鼠肺泡炎及肺纤维化评分均显著高于对照组(P<0.05)。结论手术显微镜下行气管内注射博来霉素制备肺纤维化模型对小鼠损伤小,造模效果好,是一种有效的肺纤维化模型制备手段。     

不同剂量博来霉素滴鼻诱导C57BL/6 小鼠 肺纤维化模型的研究

目的 探讨以鼻腔滴注博来霉素（BLM）的方式诱导C57BL/6 小鼠肺纤维化模型的最佳方法。 方法 7 ～ 8 周龄雄性小鼠30 只,分为0.10 u BLM 组、0.25 u BLM 组、0.40 u BLM 组,每组8 只,麻醉后分 别一次性滴鼻0.10、0.25 及0.40 u BLM ;对照组6 只,给予等体积的磷酸盐缓冲液。观察并记录小鼠体重变 化与生存率,实验结束后处死小鼠。用甲醛固定肺组织,苏木精- 伊红染色评价肺组织炎症变化;Masson 染 色评价肺纤维化变化。结果 给药后小鼠体重逐渐下降,并在第8 和9 天再次上升,第14 天逐渐趋近于对照组, 第28 天BLM 组所有小鼠肺部组织产生纤维化。各组肺纤维化评分比较,差异无统计学意义（P >0.05）。但 给药0.25 与0.40 u BLM 的小鼠死亡率高,个体间差异较大,不利于实验样本的收集与数据的统计分析。 结论 0.10 u BLM 滴鼻给药是复制C57BL/6 小鼠肺纤维化模型便捷、理想的实验方法。     

血管紧张素转化酶抑制剂对博来霉素诱导肺纤维化大鼠肺功能改变的影响

目的探讨血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）对博来霉素诱导肺纤维化大鼠肺功能改变的影响。方法在博来霉素诱导肺纤维化大鼠模型的基础上,采用卡托普利对肺纤维化大鼠进行干预。检测大鼠肺泡炎、肺纤维化半定量评分,支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子-B1（TGF-B1）、干扰素1（INF-1）、白细胞介素（IL）-1、IL-2、IL-4、IL-5水平,肺组织匀浆中过氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）及肺组织羟脯氨酸（HYP）水平,BALF和血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-1）水平,并在显微镜下观察大鼠肺组织形态学改变。结果卡托普利可显著减轻博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺纤维化评分,升高BALF中TGF-p。水平,并降低INF-γ,IL-1、IL-2、IL4、IL-5水平;肺组织匀浆SOD水平升高,MDA及HYP水平降低;血清及BALF中MMP-9、TIMP-1均呈降低趋势,镜下观察肺纤维化明显减轻。结论卡托普利对博来霉素诱导肺纤维化大鼠的肺功能下降有明显的抑制作用。     

康复新液对博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型的治疗作用

目的 探讨康复新液对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化(PF)模型大鼠的治疗作用以及可能的机制。 方法 Wistar大鼠48 只,雌雄各半,随机分为对照组、模型组及模型鼠康复新液治疗组(康复新液组)和地塞米松阳性对照组(DXM组); 用BLM 5 mg/kg气管内一次性滴注复制模型。鉴定模型成功后,使用康复新液和DXM进行灌胃治疗。康复新液组康复新液治疗剂量为5 mL·kg^-1·d^-1,DXM组的DXM治疗剂量为0.25 mL·kg^-1·d^-1,灌注周期为21 d。治疗后取大鼠肺组织,行H-E和马松染色,显微镜下观察; 采用PCR方法检测肺组织中层连结蛋白(LN)、纤维连结蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达情况,采用WB方法检测肺组织中LN,FN及α-SMA的表达情况。 结果 显微镜下可见模型组肺组织纤维化较对照组明显,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有上升; 使用康复新液和DXM治疗后,镜下可见康复新液组和DXM组的肺组织纤维化较模型组明显改善,LN,FN及α-SMA蛋白的mRNA水平及蛋白表达均有下降。 结论 康复新液可减轻BLM诱导的大鼠PF,其作用与其下调肺组织LN,FN及α-SMA蛋白表达有关。     

维生素D3对博来霉素诱发小鼠肺纤维化的影响

目的 探讨维生素D3( VitD3)对博来霉素( BLM)诱发小鼠肺纤维化的保护作用及其机制.方法 96 只成年C57BL/6J雄性小鼠(8周,24～26 g)随机分为如下8组:生理盐水对照组(对照组),单纯维生素D3组(VitD3组),博来霉素组(BLM 1 d、7 d和21 d组),维生素D3+博来霉素组(VitD3+ BLM 1 d、7 d和21 d组). BLM组经气管单次给予BLM,剂量为3 mg/kg,VitD3+BLM组:在BLM(3 mg/kg)处理前 30 min 及处理后每 24 h 经腹腔给予一次 1, 25 (OH)2D3,剂量为1 μg/kg,对照组和VitD3组给予等量的生理盐水或1,25(OH)2D3,小鼠分别于BLM或生理盐水处理后1 d、7 d和21 d剖杀并取肺组织.用HE染色法检测肺病理改变,用免疫组化检测肺3-硝基酪氨酸水平,RT-PCR检测肺氧化及抗氧化酶 mRNA 水平.结果 HE 染色提示BLM处理引起肺组织破坏及间质纤维化,1,25(OH)2D3显著减轻BLM诱导的肺组织破坏及间质纤维化. RT-PCR提示BLM引起肺组织氧化酶基因表达上调( P＜0.05),抗氧化酶基因表达下调(P＜0.05). 1,25(OH)2D3处理显著抑制BLM引起的肺脏氧化酶基因表达上调及抗氧化酶基因下调(P＜0.05).免疫组化结果提示,1,25(OH)2D3明显减少BLM所致肺3-硝基酪氨酸残留.结论 维生素D3 可能通过抗肺氧化应激作用减轻BLM诱发的肺组织破坏及间质纤维化.     

颗粒蛋白前体在博来霉素致肺纤维化小鼠中的表达

目的：探讨颗粒蛋白前体（PGRN）在博来霉素致肺纤维化小鼠肺组织中的表达。方法：选取C57BL/6小鼠36只,随机分为3组,博来霉素模型组向气管内灌注博来霉素（5 mg/kg）后第14、28天分批处死小鼠,生理盐水对照组注入等量的生理盐水。肺组织采用HE染色和Masson染色观察小鼠肺组织炎症和纤维化情况,以免疫组化法检测PGRN在肺组织中的分布和表达,蛋白印迹法检测PGRN在小鼠肺组织中的蛋白表达水平。结果：光镜下观察发现,生理盐水对照组小鼠肺组织结构完整,少量炎症细胞浸润;博来霉素组小鼠肺组织结构破坏,炎症细胞浸润,呈弥漫性肺纤维化改变。免疫组化检测可见博来霉素组小鼠PGRN在肺泡巨噬细胞和肺泡上皮细胞中的阳性率明显高于生理盐水对照组,肺组织中PGRN蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：PGRN可能参与了博来霉素致小鼠肺纤维化的过程。     

肺功能检查在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化中的实验研究

目的由于条件限制,在许多大鼠疾病模型中无法检测肺功能的变化情况,检测肺纤维化大鼠的肺功能对实验动物的肺功能应用具有重要意义。方法 12只健康SD大鼠,随机分成正常对照组和博来霉素组,气管注射博来霉素(5 mg/kg)复制大鼠肺纤维化模型。于第28日腹主动脉放血法处死,比较两组体质量及肺质量,计算肺系数,检测两组大鼠肺功能和肺组织中羟脯氨酸的含量。结果与正常对照组比较,博来霉素组大鼠肺系数明显升高,博来霉素组羟脯氨酸的含量明显升高,同时HE和MASSON病理染色提示大鼠肺纤维化模型复制成功。大鼠肺功能检查结果:用力肺活量(forced vital capacity, FVC)、50%肺活量的呼气流速(forced expiratory flow,FEF)、最大呼气流量(peak expiratory flow,PEF)均较正常对照组明显降低,且具有统计学意义,另外,博来霉素组FEV0.1/FVC较正常对照组升高。结论大鼠肺纤维化模型中肺功能检测技术基本成熟,可以进一步扩大样本量进行研究。     

博来霉素致肺纤维化大鼠形态学变化的实验研究

目的　观察博来霉素 (Bleomycin ,BLM)致大鼠肺纤维化模型的形态学及胶原含量的变化 ,探讨其发生机制。方法　健康SD大鼠 ,BLM 5mg (kg·bw)复制大鼠肺纤维化模型 ,于 1、3、7、14、2 8d ,观察肺纤维化形成的病理变化和肺匀浆羟脯氨酸 (HYP)的含量变化。结果　光镜所见 :给予BLM后 1- 7d肺部病变以肺泡炎为主 ,14d以后则进入慢性纤维化阶段。电镜所见 :模型组 3- 7dⅠ型细胞受损 ;Ⅱ型细胞增生 ,其内板层小体明显增多 ,线粒体嵴消失甚至出现空泡样变 ;14 - 2 8dⅡ型细胞数目减少 ,纤维组织增生。模型组肺组织匀浆HYP含量于 7d开始明显增加 ,2 8d达高峰。结论　博来霉素诱发大鼠肺纤维化早期以肺泡炎为主 ,7d开始出现肺纤维化 ,2 8d肺纤维化为主要病变     

不同剂量博莱霉素诱导 KM 小鼠肺纤维化模型的比较

目的：研究不同剂量博莱霉素（ BLM）诱导KM小鼠肺纤维化模型的病理变化,系统性分析KM小鼠肺组织不同时间点炎症反应、死亡率、转化生长因子－β1（ TGF－β1）和诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）表达水平与肺纤维化的关系。方法 KM小鼠随机分为假手术组和模型低（2.5 mg／kg）、中（5 mg／kg）、高剂量（10 mg／kg）组。模型组小鼠气管内一次性滴注BLM,假手术组予等量生理盐水,分别于第7、14、28天取材,做肺组织HE、Masson染色,免疫组化法测TGF－β1,硝酸酶还原法测iNOs。结果各组均在手术过程中出现死亡,小鼠死亡高峰出现在8～14 d,总死亡率高剂量组明显高于中、低剂量组。 HE和Masson染色结果显示,模型低、中、高剂量组均导致了肺组织炎症反应,14 d炎症反应最强烈,中、高剂量比低剂量更明显,且两组在14 d开始出现肺纤维组织增生,高剂量比中剂量明显,28 d均出现典型肺纤维化,而低剂量组始终未见明显纤维化。模型组TGF－β1和iNOS均高表达,且中、高剂量组明显高于低剂量组。结论2.5 mg／kg BLM不能有效诱导KM小鼠肺纤维化,5 mg／kg和10 mg／kg均可诱导肺纤维化,但是10 mg／kg造模小鼠死亡率高,适合于短期造模,若需要典型的肺纤维化模型以5 mg／kg 28 d天取材较好;TGF－β1和iNOS水平与肺纤维程度有关。     

益气化纤汤对博来霉素A5诱导的大鼠肺纤维化的影响

目的：研究益气化纤汤对博莱霉素A5（BLMA5）诱导的大鼠肺间质纤维化的治疗作用。方法：利用博莱霉素气管内注射制作大鼠肺纤维化模型。90只健康雄性SD大鼠被随机分为正常组、模型组、强的松组和小、大剂量益气化纤汤组。在同样条件下，药物灌胃饲养28d后，断颈处死。取双肺标本进行病理切片、测定转化生长因子（TGF-β1）表达和羟脯氨酸（HYP）含量。结果：从病理切片、肺组织中TGF-β1表达和肺组织匀浆中羟脯氨酸的含量方面来看，药物治疗各组的肺纤维化均比模型组轻。结论：益气化纤汤对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化有一定的治疗作用，其作用机制可能通过抑制TGF-β1生成实现。     

胚胎干细胞治疗博来霉素诱导的小鼠肺纤维化的研究

 目的 研究静脉注射胚胎干细胞（ESC）对肺纤维化小鼠的治疗作用。方法 气管内滴注博来霉素8.5mg/kg制作C57/BL6雌性小鼠的肺纤维化模型。治疗组(n=20)静脉注射S8小鼠ESC，对照组(n=10)注射生理盐水。治疗组又分为单次治疗(n=10)和重复治疗(n=10)，两者均在造模后1h静脉注射ESC，重复治疗组在造模后3d再次静脉注射ESC。记录小鼠的生存时间，测定小鼠肺组织的羟脯氨酸含量，肺脏病理学观察炎症状态。利用秩和检验统计3组小鼠生存时间，方差分析3组小鼠肺羟脯氨酸含量的差异。结果 接受干细胞治疗后，肺纤维化模型小鼠的生存时间(d)延长，重复治疗组更加明显（对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为7.8±2.8、8.4±3.8、13.5±5.6，P<0.01）；肺羟脯氨酸含量(μg/mL)降低 [对照组、单次治疗组、重复治疗组分别为（8.59±1.14）、（8.23±1.09）、（5.51±0.39），P<0.01）]；肺脏病理检查显示肺组织炎症程度降低，结构破坏减轻。结论 静脉注射胚胎干细胞可以减轻博来霉素诱导的小鼠肺部炎症和肺纤维化，延长肺纤维化小鼠的生存时间。     

Prominin-1/CD133＋肺上皮祖细胞抑制博来霉素诱导的肺纤维化

博来霉素诱导的肺损伤小鼠模型为研究特发性肺纤维化及预后不良的进行性间质性肺疾病提供了一条有效的途径。瑞士学者Germano D等发现以祖细胞为基础的治疗策略联合其抗炎作用在整体肺纤维化中发挥组织修复的保护作用。该研究发表于Am J Respir Crit Care Med上。