大鼠延髓内雌激素β受体表达变化对延髓神经元结构和功能的影响

目的:研究三羟基异黄酮与17-β雌二醇对大鼠延髓雌激素β受体表达的影响,探讨雌激素作用神经系统的机制。方法:30只去卵巢SD大鼠,随机分为去卵巢组(A组)、雌二醇组(B组)和三羟基异黄酮组(C组),手术后10d起分别皮下注射生理盐水0.1mL/d,17-β雌二醇20μg/(kg·d)、三羟基异黄酮200μg/(kg·d);10只假手术组(D组)大鼠,只切开腹膜不切除卵巢,手术后10d起每只动物皮下注射生理盐水0.1mL/d。各组动物连续用药6周后观察结果。结果:①血清雌二醇的浓度:A组(9.44±6.04)ng/L和C组(7.03±5.65)ng/L显著低于D组(19.41±8.37)ng/L,差异有非常显著性意义(t=2.97,3.77,P<0.01,),B组(15.52±8.54)ng/L与A组比较显著升高(t=2.74,P<0.01),而与D组比较差异无显著性意义。②A组与D组比较大鼠延髓ER-β免疫阳性细胞数量下降、阳性细胞总面积和平均吸光度降低(P<0.01)。切除卵巢后补充17-β雌二醇和三羟基异黄酮的大鼠延髓雌激素β受体表达明显增加,与A组比较延髓雌激素β受体免疫阳性细胞数量增加、阳性细胞总面积和平均吸光度升高(P<0.01),而与D组比较无统计学意义。结论:三羟基异黄酮和17-β雌二醇对延髓ER-β的表达有明显的调节作用,可能通过这一途径影响着延髓神经元的结构和功能。     

雌激素对去卵巢大鼠血清瘦素的影响

目的：探讨雌激素对去卵巢大鼠血清瘦素水平的影响。方法：40只健康雌性未交配6个月龄SD大鼠用去卵巢手术制作动物模型，分为4组：假手术组、雌激素一组、雌激素二组、手术组；去卵巢手术后1周开始雌激素一组皮下注射雌激素20μg／(kg&;#183;d)，共12周，雌激素二组在处死前2d开始皮下注射雌激素40μg／(kg&;#183;d)。动物处死前测量体质量，并留取血清标本，进行血清瘦素水平分柝。结果：血清瘦素水平(μg／L)手术组(8．82&;#177;0.98)和雌激素二组(17．03&;#177;2．70)较假手术组(14.50&;#177;1．71)和雌激素一组(9．66&;#177;1．27)明显增高(t=9．014，811，P均&;lt;0．01)，雌激素二组较手术组明显升高(t=2．494，P&;lt;0.05)，假手术组和雌激素一组之间无明显差异(t=8.11，P&;gt;0.05)。体质量(g)手术组(317&;#177;22)和雌激素二组(369&;#177;77)，假手术组(374&;#177;33)和雌激素一组(309&;#177;31)差异无显著性意义t=0．795，0．439，P均&;gt;0.05)结论：雌激素可以促进去卵巢大鼠瘦素的分泌，卵巢切除术后大鼠血清瘦素水平较假手术组明显升高，可能是体质量增加的结果。     

普萘洛尔对去卵巢大鼠骨密度及血清白细胞介素6的影响

背景：交感神经系统影响骨代谢的具体作用和机制不明确。目的：探讨普萘洛尔对去卵巢大鼠骨密度及对血清白细胞介素6(IL-6)水平的影响，研究β受体阻滞剂对骨质疏松的防治作用及机制。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和千预：本实验在中国中医研究院基础所完成。将50只健康雌性未交配6个月龄SD大鼠随机分为5组：①假手术组。②去卵巢(OVX)后雌激素治疗(O+E)组。③OVX后普萘洛尔治疗(O+P)组。④OVX后雌激素+普萘洛尔治疗(O+E+P)组。⑤OVX后安慰剂(OVX)组。OVX后1周开始经灌胃给予普萘洛尔、皮下注射17β-雌二醇，共12周。动物处死时留取第3-5腰椎、血清标本，进行骨密度分析及血清IL-6水平测定。主要观察指标：各组大鼠椎骨骨密度及血清瘦素水平。结果：O+P，O+P+E，O+E组的骨密度较OVX组明显增高(P&;lt;0．05)，血清IL-6水平OVX组[(336．6&;#177;18．1)ng／L]较假手术组[(208．8&;#177;17．2)ng／L]明显增高(t=16．982，P&;lt;0．01)，O+E组[(252．7&;#177;16．3)ng／L]，O+P组[(274．4士20．0)ng／L1，O+P+E组[(222．9&;#177;16．5)ng／L]均明显低于OVX组[(336．6&;#177;18．1)ng／L](f：11．160，7．783，14．971，P&;lt;0．01)。结论：普萘洛尔能使卵巢切除术后骨质疏松大鼠的骨密度改善，能有效地预防OVX大鼠的骨丢失,同时降低血洁IL-6水平。     

脑卒中患者血浆神经降压素水平及其动态变化

目的：观察脑出血、脑梗死、蛛网膜下腔出血患者血浆神经降压素(neurotensin，NT)水平改变及其动态变化，探讨NT参与各型脑卒中及其伴发病中的病理生理机制及对功能预后评估的意义。方法：2002—03／2003—09，实验在济南长城医院神经内科、山东大学附属第二医院神经内科、山东省立医院、山东大学齐鲁医院神经内科与泰山医学院微循环研究所完成。选择脑卒中138例，其中脑出血组46例，脑梗死组62例，蛛网膜下腔出血组30例。病例依病情轻重、病灶大小、病程、伴发病积分、有无高血压史等分组，选择28例健康查体者作为对照组。用放免法检测血浆NT浓度。结果：脑梗死组NT水平(467．31&;#177;363．42)ng／L显著高于对照组(76．54&;#177;59．53)ng／L(t=4．638，P&;lt;0．0001)，于发病后24．h内显著升高(228．10&;#177;123．13)ng／L，4～7d达高峰(648．01&;#177;337．38)ng／L，8～15d开始下降(525．67&;#177;264．11)ng／L，15d后仍在较高水平(392．57&;#177;262．35)ng／L；重型(762．91&;#177;446．0)ng／L与大灶组(404．39&;#177;206．49)ng／L显著高于轻型(153．86&;#177;130．47)ng／L与小灶组(200．27&;#177;137．64)ng／L(P&;lt;0．01)，伴发病积分≥6分组NT水平(623．11&;#177;377．97)ng／L显著高于&;lt;6分组(236．74&;#177;132．22)ng／L(t=3．506，P&;lt;0．001)，高血糖组NT水平(673．26&;#177;331．00)ng／L显著高于正常血糖组(328．16&;#177;216．69)ng／L(t=3．068，P&;lt;0．01)，有房颤组NT水平(800．36&;#177;308．86)ng／L显著高于无房颤组(395．48&;#177;224．9．2)ng／L(t=2．899，P&;lt;0．01)。脑出血组NT水平(347．13&;#177;200．11)ng／L显著高于对照组(76．54&;#177;59．53)ng／L(t=4．176，P&;lt;0．0001)，24h内显著升高(151．61&;#177;101．57)ng／L，1～3d达高峰(495．83&;#177;224．23)ng／L．8～15d下降(181．85&;#177;102．56)ng／L，15d后仍在较高水平(156．62&;#177;29．46)ng／L；重型(450．90&;#177;242．82)ng／L与大面积组(431．07&;#177;237．82)ng／L显著高于轻型(135．03&;#177;77．26)ng／L与小面积组(216．56&;#177;165．79)ng／L(P&;lt;0．01)；伴发病积分≥6分组NT水平显著高于&;lt;6分组(t=3．208，P&;lt;0．01)；高血糖组NT水平显著高于正常血糖组(t=2．912，P&;lt;0．01)，高血压组NT水平显著高于正常血压组(t=4．319，P&;lt;0．0001)，有消化道出血组NT水平显著高于无消化道出血组(t=3．258，P&;lt;0．01)。蛛网膜下腔出血组NT水平显著高于对照组(t=4．921，P&;lt;0．0001)。结论：NT分泌异常参与了脑梗死、脑出血与蛛网膜下腔出血的病理生理过程。     

雌激素替代疗法对去卵巢大鼠血清一氧化氮及骨显微结构的影响

目的：探讨骨质疏松症及雌激素替代疗法与血清一氧化氮和骨显微结构变化的关系。方法：2002—05／2003—07在郑州大学第一附属医院骨科实验室完成。4月龄雌性大鼠随机分为假手术组和骨质疏松模型组，其中骨质疏松模型组待造模成功1周后，再随机分为骨质疏松组和雌激素替代治疗组。全部大鼠于灌胃给药12周后测量全身骨密度，取血清测量一氧化氮水平及雌激素含量，并做左侧股骨的扫描电镜观察。结果：骨质疏松组血清一氧化氮水平(67．25&;#177;8．28)μmol／L和雌激素含量(34．79&;#177;4．21)μg／L分别低于假手术组[(75．36&;#177;7．49)μmol／L，(66．68&;#177;3．39)μg／L](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；雌激素替代治疗犬鼠骨密度升高，其血清一氧化氮水平(75．22&;#177;7．66)μmol／L和雌激素含量(72．25&;#177;3．52)μg／L高于骨质疏松组(P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。电镜观察雌激素替代治疗组和假手术组在骨小梁数量、连续性等方面均明显优于骨质疏松组。结论：一氧化氮与骨质疏松症的发生有密切关系，雌激素可通过改变血清一氧化氮水平治疗骨质疏松症。     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨矿物质含量及骨密度的影响

目的：探讨大豆异黄酮对去卵巢大鼠股骨的骨矿物质含量及骨密度的影响。方法：实验选用4月龄雌性wistar大鼠70只，按体质量随机分为7组，除对照组外，其他大鼠腹腔手术去除双侧卵巢，建立骨质疏松模型，分别给予不同剂量(高、中、低剂量)的大豆异黄酮，同时设立假手术组、去卵巢对照组和雌激素对照组。实验结束后，取大鼠股骨进行骨重量、骨矿物质含量及骨密度的测定，并作X线片。结果：各组大鼠的股骨长度和重量无显著性差异；去卵巢对照组大鼠股骨中钙和磷的含量[(143．60&;#177;8．80)，(87．94&;#177;7．46)mg／g]与正常对照组[(174．88&;#177;20．01)，(107．97&;#177;9．46)mg／g]相比显著降低(t=14．69，21．07，P&;lt;0．05)；大豆异黄酮剂量组和雌激素组骨钙、骨磷含量与对照组接近。X线片和骨密度测定发现大鼠去除卵巢后，股骨的骨量尤其是股骨干骺端的骨量明显丢失，骨密度显著下降，给予大豆异黄酮和雌激素后骨量丢失得到抑制，骨密度变化不大。结论：大豆异黄酮具有抑制骨量丢失、预防骨质疏松的作用。     

老年脑梗死患者血浆神经肽Y、降钙素基因相关肽水平的动态变化

目的：观察老年脑梗死患者神经肽Y、降钙素基因相关肽(ealeitonin gene—related peptide，CGRP)水平改变及其动态变化，探讨神经肽Y、CGRP参与老年脑梗死的病理生理机制及其临床意义。方法：选择老年脑梗死患者42例，依病情轻重分为轻型12例，中型18例，重型12例。依病灶大小分为大灶组22例，小灶组20例。按病程分为≤24h组19例，1～3d组22例、4～7d组27例、8～15d组21例及&;gt;15d组18例。按伴发病积分分为&;lt;6分组25例与≥6分组17例。按有无高血压史分为有高血压史组18例与无高血压史组24例。选择30例健康老人查体者作为对照组。用放免法检测血浆神经肽Y与CGRP浓度。结果：神经肽Y的变化：老年脑梗死组神经肽Y水平[(590．66&;#177;305．45)ng／t]显著高于对照组[(114．76&;#177;65．92)ng／L](t=5．2846，P&;lt;0．0001)，于发病后24h内[(439．13&;#177;237．80)ng／L]显著升高，1～3d[(668．54&;#177;261．44)ng／L]达高峰，8～15d[(528．59&;#177;215．67)ng／L]开始下降，15d[(372．80&;#177;200．96)ng／L]后仍在较高水平；重型[(698．96&;#177;206．85)ng／L]与大灶组[(769．61&;#177;296．48)ng／L]显著高于轻型[(488．60&;#177;201．75)ng／L]与小灶组[(483．40&;#177;312．31)ng／L](P&;lt;0．01)，发病积分≥6分组[(631．28&;#177;286．86)ng／L]显著高于&;lt;6分组[(573．35&;#177;337．64)ng／L](t=2．9687，P&;lt;0．01)，高血压组[(697．37&;#177;310．33)ng/L]显著高于正常血压组[(457．24&;#177;239．91)ng／L](t=3．6125，P&;lt;0．01)。CGRP的变化：老年脑梗死组CGRP水平[(170．16&;#177;95．48)ng／L]显著低于对照组[(335．70&;#177;198．38)ng／L](t=4．1209，P&;lt;0．0001)，发病24h内[(86．58&;#177;22．74)ng／L]即显著降低，1～3d[(42．66&;#177;20．01)ng／L]与4～7d[(79．01&;#177;29．44)ng／L]进一步降低，8～15d[(211．37&;#177;115．98)ng／L]，开始升高，15d[(319．67&;#177;152．35)ng／L]后逐渐升至正常水平；重型[(44．79&;#177;23．43)ng／L]与大灶组[(98．66&;#177;68．16)ng／L]显著低于轻型[(356．86&;#177;209．61)ng／L]与小灶组[(241．19&;#177;124．48)ng／L](P&;lt;0．001)，伴发病积分≥6分组[(80．41&;#177;48．26)ng／L]显著低于&;lt;6分组[(246．57&;#177;126．37)ng／L](t=3．5491，P&;lt;0．001)，高血压组[(163．36&;#177;79．09)ng／L]显著低于正常血压组[(91．41&;#177;47．46)ng／L](t=3．9671，P&;lt;0．01)。结论：神经肽Y与CBRP分泌异常参与了老年脑梗死的病理生理过程。     

一氧化氮介导雌激素的骨形成增加作用

背景：雌激素的具体骨保护机制目前尚不清楚，一氧化氮可能在雌激素促进骨形成增加中起到一定的作用。目的：探讨雌激素治疗对卵巢切除大鼠血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平的影响。设计：随机对照的试验。单位：上海市杨浦区中心医院骨科和同济医院大学附属协和医院骨科。材料：实验在同济医科大学动物实验中心完成，选用3个月龄清洁级健康雌性SD大鼠36只，体质量220～245g，由同济医科大学动物实验中心提供。干预：12只SD大鼠完整切除双侧卵巢，设为卵巢切除组；另12只暴露双侧卵巢而不予以切除，设为对照组；雌激素治疗组12只切除双侧卵巢后即刻及后每隔2周皮下注射苯甲酸雌二醇125μg。主要观察指标：通过免疫组织化学染色方法检测一氧化氮合成酶在骨组织中的表达，双能X射线测定骨矿密度值，图象分析系统进行骨形态学计量学测量，光密度法测定血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平。结果：卵巢切除导致血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平及骨矿密度值、小梁骨体积等骨形态学计量学参数显著下降。手术后6周，对照组和卵巢切除组平均血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平分别为(22．4&;#177;1.7)，(16．2&;#177;3．7)μmol／L；骨矿密度值分别是(0．245&;#177;0．030)g／cm^2和(0．189&;#177;0．030)g／cm^2；小梁骨体积分别为(31．97&;#177;3．50)％和(17．14&;#177;4．20)％，两组之间差异均有显著性意义(P&;lt;0．01)。雌激素治疗抑制了卵巢切除导致的这些变化，雌激素治疗组平均血浆硝酸盐／亚硝酸盐水平为(21．9&;#177;3．5)μmol／L，骨矿密度值为(0．234&;#177;0．020)g／cm^2。，小梁骨体积为(26．53&;#177;1．63)％，与卵巢切除组比较，均有显著性升高(P&;lt;0．01)；与对照组比较，差异均无显著性意义(P&;gt;0．05)。一氧化氮合成酶免疫活性信号在成骨细胞内测得，雌激素治疗组一氧化氮合成酶信号较卵巢切除组也显著性增强(P&;lt;0．01)。结论：雌激素通过诱导一氧化氮的产生而刺激骨形成，一氧化氮是雌激素诱导骨形成增加的介导剂。     

脉冲电磁场对去势大鼠骨代谢的影响

目的：探讨脉冲电磁场对去势大鼠骨代谢的影响。方法：3月龄SD雌性大鼠50只(体质量200～230g)，随机分为正常对照组、去势对照组、脉冲电磁场组、雌激素组、脉冲电磁场+雌激素组(每组10只)。正常对照组做腹腔开关手术，其余4组做双侧卵巢切除手术。术后3个月双能X线骨密度仪证实骨质疏松模型造模成功，随后对正常对照组和去势对照组大鼠腹部皮下注射生理盐水0．2mL／kg,每2周1次；脉冲电磁场组大鼠选用强度为50Gs、频率为15Hz的脉冲电磁场行全身磁疗(以脊柱为中心)，2h／d，1次／d；雌激素组腹部皮下注射苯甲酸雌二醇0.5mg／kg，1次／2周；脉冲电磁场+雌激素组腹部皮下注射苯甲酸雌二醇0．5mg／kg，每2周1次，同时进行磁疗。各组均于治疗后12周及处死前3d行口饲四环素。于24周末在全麻下将全部大鼠处死，行骨密度、生物力学及组织学切片和骨形态学检查。结果：治疗前后，正常对照组及去势对照组大鼠L2-L4的骨密度无明显变化，而治疗后脉冲电磁场组、雌激素组和脉冲电磁场+雌激素组的BMD(g／cm^2)(分别为：0．142&;#177;0．069，0．145&;#177;0．004，0．144&;#177;0．007)较治疗前(分别为：0．097&;#177;0．010，0．094&;#177;0．010，0．094&;#177;0．010)显著增加(P&;lt;0．05)(t=-17．37，-24．38，-28．52)；治疗后同期各组骨密度比较，大小排序为：正常对照组&;gt;雌激素组&;gt;脉冲电磁场+雌激素组&;gt;脉冲电磁场组&;gt;去势对照组(P&;lt;0．05)；生物力学检测显示：上述各组的最大载荷(N)分别为280．75&;#177;36．3l，107．5l&;#177;24．69，231．44&;#177;37．76，201．32&;#177;30．99和234．54&;#177;16．29，其中各处理组要明显高于去势对照组，且脉冲电磁场组及脉冲电磁场+雌激素组又要高于雌激素组(F=45．4l，P&;lt;0．05)；相应地，各处理组的弹性模量亦高于去势对照组，但仍较正常对照组低(F=34．94)；形态学检查显示各处理组均可见明显的四环素双标记线，而正常对照组、去势对照组不明显；骨组织切片三维重建显示各处理组骨松质的空间结构明显优于去势对照组，但较正常对照组仍略差。结论：脉冲电磁场能对去势大鼠骨代谢产生明显的影响。     

高压氧对创伤性脑水肿脑组织单胺递质变化的影响

目的：探讨高压氧治疗对创伤性脑水肿形成和发展中的中枢单胺神经递质的影响。探讨大鼠颅脑创伤后高压氧对脑水肿及脑组织单胺递质变化的影响。方法：实验于2004-01／04在大坪医院野战外科研究所完成。将大鼠随机分为正常组、脑创伤组和高压氧治疗组，采用BIM—Ⅲ型撞击机撞击大鼠右侧颅顶，复制闭合性颅脑损伤，分别于伤后3，6及24h，应用高效液相法测定脑组织肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)含量及干湿重法测定脑组织含水率。结果：①创伤组伤侧脑组织伤后6h去甲肾上腺素、多巴胺、5-HT显著升高分别为(2946&;#177;686)ng／g，(2341&;#177;542)ng／g，(904&;#177;150)ng／g(P&;lt;0．05)；24hNE达高峰(3523&;#177;1276)ng／g(P&;lt;0．01)，5-HT较6h有所下降(752&;#177;203)ng／g但仍高于对照组(P&;lt;0．05)，多巴胺降至正常水平。脑损伤后伤侧脑组织肾上腺素含量在各时相点均无统计学意义。高压氧组在6h、多巴胺、5．HT显著升高[分别为(2284&;#177;395)ng／g，(758&;#177;142)ng／g，P&;lt;0．Ol，&;lt;0．05)，24h多巴胺低于对照组(1050&;#177;576)ng／g，P&;lt;0．05]；去甲肾上腺素在6h开始升高，24h达高峰[(3061&;#177;939)ng／g，P&;lt;0．05]。②创伤组与高压氧组相比，高压氧组肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺、5-HT含量在各时间点均低于创伤组，仅有多巴胺、5-HT在24h显著低于创伤组[(1050&;#177;576)ng／g，(450&;#177;122)ng／g，P分别&;lt;0．05与&;lt;0．01]。③创伤组与高压氧组脑组织含水率在各时间点较对照组明显升高(78．66&;#177;0．24，78．92&;#177;0．29，79．08&;#177;0．33，P&;lt;0．01)，高压氧组在伤后24h明显低于创伤组(P&;lt;0．01)，而3～6h无明显差别。结论：脑损伤后脑内单胺神经递质的过量释放，是创伤性脑水肿发展的重要因素之一，高压氧治疗能改善脑组织缺氧，降低脑组织中单胺递质的含量，减轻脑水肿。     

雌激素、灯盏花对去势大鼠脑缺血损伤保护作用的叠加实验

目的：探讨去势大鼠局灶脑缺血再灌注后雌激素、灯盏花的叠加保护作用。方法：实验于1998-06／1999-04在华西医科大学的相关实验室进行.雌性SD大鼠进行双侧卵巢切除后2周再采用线栓法制备去势大鼠大脑中动脉缺血(2h)再灌注(70h)模型。50只SD大鼠随机分为雌激素组．灯盏花组、雌激素加灯盏花组、对照组和假手术组。再灌注2h和70h后分别进行神经功能缺损评分。再灌注70h显微镜下观察脑损伤区组织病理学、脑梗死体积比和脑水肿体积F测定血液中一氧化氮、白细胞介素1(IL-1)及肿瘤坏死因子(TNF)水平的变化，采用免疫组织化学方法观察脑内雌激素受体的表达。结果：再灌注70h后，与对照组神经功能缺损评分[(1．7&;#177;0．6)分]相比，雌激素组[(0．3&;#177;0．5)分]、灯盏花组[(0．9&;#177;0．6)分]、雌激素加灯盏花组[(0．2&;#177;0．4)分]明显降低(F=13．488，P&;lt;0．05)；与对照组脑梗死体积比[(31．33&;#177;1．26)％]相比，雌激素组[(12．52&;#177;1．40)％]、灯盏花组[(18．35&;#177;1．10)％]、雌激素加灯盏花组[(11．52&;#177;0．69)％]明显降低(F=612．876，P&;lt;0．01）；与对照组脑水肿体积[(69．77&;#177;3．40)mm^3]相比，雌激素组[(32．59&;#177;2．12)mm^3]、灯盏花组((51．2&;#177;4．37)mm^3)、雌激素加灯盏花组[(30．97&;#177;2．13)mm^3]明显降低(F=334．867，P&;lt;0．01）；与对照组IL-1水平[(0．97&;#177;0．08)μg／L]相比，雌激素组[(0．84&;#177;0．03)μg／L]、灯盏花组[(0．84&;#177;0．06)μg／L]、雌激素加灯盏花合用组[(0．82&;#177;0．02)μg／L]明显降低(F=24．626，P&;lt;0．01）；与对照组TNF水平(171．25&;#177;3．95)μg／L相比，雌激素组[(150．38&;#177;10．85)μg／L]、灯盏花组[(157．13&;#177;11．08)μg／L]、雌激素加灯盏花组[(149．5&;#177;3．95)μg／L]明显降低(F=31．75．P&;lt;0．01）；与对照组血液中一氧化氮浓度[(133．41&;#177;8．45)μmol／L]相比，雌激素组[(64．58&;#177;6．55)μmol／L]、灯盏花组[(78．82&;#177;7．33)μmol／L]、雌激素加灯盏花组[(62．5&;#177;4．77)μmol／L]明显降低(F=249．945，P&;lt;0．01）。结论：雌激素对去势大鼠脑缺血具有明显的脑保护作用，并优于灯盏花，雌激素与灯盏花合用无叠加效应。     

HD02对慢性前脑缺血大鼠神经细胞凋亡的影响

目的：研究HD02在大鼠慢性前脑缺血过程中对神经细胞凋亡的作用。方法：16～18个月SD大鼠64只，雄性，体质量300-350g。利用末端标记法和流式细胞仪，测定HD02干预前后脑缺血大鼠脑组织神经细胞的凋亡情况，并检测Caspase-3免疫阳性细胞、Calcineurin和钙激活中性蛋白酶(Calpain)活性。结果：HD02有减少阳性凋亡细胞出现率[(5．404&;#177;1.38)％与模型对照组(12.72&;#177;3．45)％比较，t=4．84，P&;lt;0．01]及减少Caspase-3免疫阳性细胞表达(HD02组比模型对照组：缺血15d：7．10&;#177;1．90比12．55&;#177;3.30,t=3．86，P&;lt;0．01：缺血30d：4，60&;#177;1．15比9．50&;#177;4．20，t=4．67，P&;lt;0．01)，降低Calcineurin D02组比模型对照组：大脑皮质每克蛋白中含[(38．24&;#177;5．58)比(48．98&;#177;5.04)nmol／s，t=3.64，P&;lt;O．O1]；海马每克蛋白中含[(37．87&;#177;3．38)比(52．58&;#177;4．92)nmol／s，t=3．75，P&;lt;0．O1]和Calpain活性[大脑皮质每毫克蛋白中含(2．96&;#177;O．77)比(4．56&;#177;0．85)A／h，t=3．84，P&;lt;0．05]；海马每毫克蛋白中含[(2．90&;#177;0．28)比(4．91&;#177;0．94)A／h，t=3．97，P&;lt;0，01]的作用。结果：HD02有一定的抗神经细胞凋亡的作用．     

中药复方护脑素在大鼠急性脑缺血模型中的作用机制

目的 研究以麻黄、山栀子、黄连、厚朴、白术、桂枝、三七为主要成分的中药复方护脑素改善脑部微循环及脑保护的作用机制。方法 将Wistar大鼠随机分成3组，模型组(结扎两侧颈总动脉)、护脑素组(颈总动脉结扎前半小时腹腔灌注护脑素混悬液)和假手术组，每组l0只。用组织血流量仪测定各组手术前后局部脑血流量(r-CBF)，用硝酸还原法测定血浆一氧化氮(NO)，用放射免疫分析法检测血浆内皮素1(ET-1)。手术后2h将大鼠处死，取出脑组织，测定脑匀浆中NO与ET-1含量。结果 ①rCBF值：模型组为(202&;#177;38)mL／(min&;#183;kg)，显著低于假手术组(635&;#177;81)mL／(min&;#183;kg)(t=15．34，P&;lt;0．001)和护脑素组(267&;#177;47)mL／(min&;#183;kg)(t=3．33，P&;lt;0．05)。②护脑素组血浆NO(2．6&;#177;0．5)mol／L高于模型组(2．1&;#177;0．8)mol／L(t=4．23，P&;lt;0．05)。模型组血浆ET-1(540．0&;#177;101．0)ng／L高于假手术组(349．0&;#177;26．0)ng／L，(t=6．14，P&;lt;0．05)和护脑素组(427．0&;#177;83．0)ng／L，(t=2．73，P&;lt;0．05)。③模型组组织匀浆中NO(406．0&;#177;163．5)mol／L和ET-1(11．4&;#177;2．0)ng／L分别高于假手术组的(177．4&;#177;63．3)mol／L，(8．1&;#177;1．5)ng／L。(t=4．13，4．04，P&;lt;0．005)和护脑素组的(207．2&;#177;113．4)mol／L，(8．3&;#177;1．7)ng／L(t=3．16，3．64，P&;lt;0．005)。结论 护脑素在急性脑缺血模型中可通过NO、ET-1的参与，改善脑部微循环。保护缺血区脑组织。     

睡眠剥夺对大鼠胃排空及胃肠激素的影响

目的：探讨睡眠剥夺对大鼠胃排空及胃肠激素的影响。方法：接随机数字法将SD大鼠分为：单独笼养组，睡眠剥夺1d组，3d组，5d组，7d组和对照组，各组8只。采用小站台水环境法建立大鼠睡眠剥夺模型。用放射性核素^99Tc^m灌胃测定大鼠胃液体排空率，用放射免疫法测定胃黏膜中胃泌素、胃动素、生长抑素水平。结果：睡眠剥夺条件下可导致胃排空障碍，大鼠睡眠剥夺3d，5d，7d组胃排空率分别为(72&;#177;4)％，(71&;#177;5)％，(70&;#177;6)％。分别与单独笼养组、对照组及睡眠剥夺1d组比较均明显降低(t=2．763-3．684，P均&;lt;0．01)。同时胃肠激素水平发生改变，在睡眠剥夺3d，5d，7d大鼠胃黏膜中胃泌素含量分别为(268&;#177;118)，(306&;#177;151)，(405&;#177;164)ng／L分别与单独笼养组、对照组及睡眠剥夺1d组比较均明显升高(t=2．104-4．787，P&;lt;0．05-0．01)。胃动素含量分别为(51&;#177;32)，(43&;#177;28)，(36&;#177;20)ng／L，分别与单独笼养组、对照组及睡眠剥夺1d组比较均明显降低(t=2．054-3.062，P&;lt;0．05—0．01)。生长抑素水平分别为(219&;#177;110)，(260&;#177;78)，(236&;#177;88)ng／L，分别与单独笼养组、对照组及睡眠剥夺1d组比较均明显升高(t=2．023-3．120，P&;lt;0．05-0．01)。结论：睡眠剥夺可导致胃排空障碍和胃粘膜中胃泌素、胃动素、生长抑素含量发生变化。     

旋转磁场作用对大鼠骨钙代谢的影响

背景：已有研究证明旋转磁场干预能使大鼠骨密度显著增加，并且能维持相当长的一段时间而不下降，且与性激素无关。目的：研究旋转磁场对大鼠骨钙含量的影响，以及与血清骨碱性磷酸酶(bone—specific alkaline phosphatase，BAP)和尿脱氧吡啶交联(deoxypyridinoline crosslinks，DPD)的相关性。设计：以实验动物为对象的随机对照实验。单位：一所大学生命科学院。材料：实验于2004—03／10在深圳市微生物基因工程重点实验室完成。健康成年SD大鼠90只，雌性60只，体质量(259&;#177;70)g．雄性30只，体质量(351&;#177;104)g。按雌雄随机分9组，雌性假手术组、去卵巢常钙对照组、去卵巢低钙对照组，去卵巢低钙实验组、去卵巢常钙实验组、去卵巢低钙中药实验组、雄性对照组、雄性低钙实验组、雄性常钙实验组。每组10只。干预：雌性大鼠除假手术组以外均切除卵巢，去卵巢对照组单纯去卵巢，去卵巢实验组手术15d体内残存雌激素代谢尽后，开始旋转磁场处理15d，1次／d，2h／次。雄性大鼠除对照组外均行磁场处理15d，1次／d，2h／次。分别给予常钙(含钙0．26％的食物)、低钙(含钙0．1％的食物)和辅以中药(补骨脂、黄芪、淫羊藿、肉苁蓉免煎粉剂等)饲料饲养。旋转磁场处理后，继续饲养15d，处死后取其股骨测量各组大鼠骨钙含量，取血清测量BAP含量，取尿液测DPD含量。主要观察指标：各组大鼠骨钙含量及血清BAP和DPD变化。结果：纳入90只大鼠，实验过程中死亡4只，进入结果分析86只。①经旋转磁场处理后大鼠骨钙含量增高：去卵巢低钙中药实验组及去卵巢低钙对照组分别为(0．226&;#177;0．015)，(0．206&;#177;0．015)g／g，两组比较t=4．63，P&;lt;0．05；雄性常钙实验组及雄性对照组分别为(0．206&;#177;0．031)，(0．199&;#177;0．014)g／g，两组比较t=4．21，P&;lt;0．05。②经旋转磁场处理后大鼠血中BAP含量增高：去卵巢常钙实验组及去卵巢常钙对照组分别为(20．52&;#177;1．78)，(15．68&;#177;3．68)U／L，两组比较t=4．76，P&;lt;0．05；雄性低钙实验组及雄性对照组分别为(17．69&;#177;3．78)，(8．53&;#177;2．54)U／L，两组比较t=4．59，P&;lt;0．05。③经旋转磁场处理后实验组大鼠尿中DPD下降：去卵巢低钙中药实验组及去卵巢低钙对照组分别为(86．97&;#177;37．19)，(401．57&;#177;79．34)nmol／L，两组比较t=7．45，P&;lt;0．01；雄性常钙实验组及雄性对照组分别为(97．87&;#177;31．97)，(168．71&;#177;53．19)nmol／L，两组比较t=8．31，P&;lt;0．01。结论：磁场能够在短时间内(15d)有效的促进大鼠的骨钙含量增加，且增加与血BAP升高及尿DPD下降成正相关。     

大鼠异体肢体移植后存活时间与FK506和FTY720的联合免疫抑制作用

目的：观察联合应用小剂量免疫抑制剂FK506和FTY720对大鼠同种异体肢体移植术后急性移植排斥反应的发生和延长移植肢体存活时间的作用。方法：实验于2003-06／2004-10在哈尔滨医科大学附属第一医院实验动物中心完成。选择雄性Wistar大鼠为供体、SD大鼠为受体，以FK506和FTY720为免疫抑制剂，进行了140例异体肢体移植动物实验。对照组为术后不用药组，实验组根据用药剂量和药物不同分为6组：FK5061mg／(kg&;#183;d)组，FK5062mg／(kg&;#183;d)组，FTY7200．03mg／(kg&;#183;d)组，FTY7200，1mg／(kg&;#183;d)组，FTY7200．5mg／(kg&;#183;d)组，小剂量联合用药组FK506[mg／(kg&;#183;d)]+FTY720[1mg／(kg&;#183;d)]。各组用药时间均为术前1d开始，直至肢体坏死。术后通过观察大鼠伤口情况、异体移植肢体的血运变化，判定各组移植肢体急性排斥反应的发生时间和移植肢体存活时间(以在移植肢体皮肤出现红斑水肿持续24h视为急性排斥反应的发生时间，以皮肤脱落或出现干性坏疽为移植肢体坏死标准为)；对照组于术后第5天、各实验组于术后第10天切取皮肤，进行组织病理学检查，按B&;#252;ttemeyer肢体移植组织排斥反应分级标准进行分级(0级为无排斥，1级为轻度排斥，2级为中度排斥，3级为重度排斥)，计算平均排斥反应级别。结果：每组纳入结果分析的动物均为20只。①排斥反应出现时间和移植肢体存活时间：各用药组均长于对照组(t=2．89～4．18．P&;lt;0．01)；小剂量联合用药组明显长于其他用药组(t=4．04～5．79，P&;lt;0．01)。②移植肢体皮肤组织平均排斥反应分级：各用药组均低于对照组(1．87&;#177;0．42，1．31&;#177;0．31，2．21&;#177;0．36，1．69&;#177;0．33，1．34&;#177;0．28，0．35&;#177;0．24和2．86&;#177;0．38；t=2．74～4．74，P&;lt;0．05)，小剂量联合用药组明显低于其他用药组(t=3．75～5．12，P&;lt;0．01)。结论：①单独口服FK506或FTY720能使移植肢体存活时间不同程度地较对照组延长。②给予FK506和FTY720进行联合免疫抑制时，应用的剂量较小，所产生的副作用也较轻时，仍可使移植肢体存活时间明显延长。     

雌激素、促性腺激素与大鼠成骨细胞雌激素受体β的表达

目的：观察不同剂量雌激素，卵泡雌激素及黄体生成素对大鼠成骨细胞雌激素受体β表达的影响。方法：实验于2004-02／08在哈尔滨医科大学第二临床医学院科研中心完成。①取三四个月龄雌性Wistar大鼠28只用于大鼠成骨细胞体外培养。采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞。观察其形态、改良钙钴法碱性磷酸酶染色，培养上清碱性磷酸酶、骨钙素测定来鉴定成骨细胞。②取2代培养的成骨细胞用无血清培养基培养24h，分为10组：对照组，1&;#215;10^10，1&;#215;10^-8，1&;#215;10^-6mol/L 17β-雌二醇组，10，100，1000U／L黄体生成素组，1&;#215;10^-7,1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-5g／L卵泡刺激素组。每组3个孔。对照组加入基础培养基，其他各组分别加入相应终浓度药物，培养24-48h。大鼠成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测应用免疫组织化学法测定，以细胞浆有棕黄色颗粒沉积为阳性。成骨细胞雌激素受体β表达检测应用半定量免疫印渍酶促底物染色法以及化学发光法，以A值越高，说明雌激素受体β表达越多。结果：①成骨细胞形态及特征性鉴定：成骨细胞随培养时间的延长，细胞呈指数增长，分泌碱性磷酸酶和骨钙素，碱性磷酸酶染色阳性率为90％，表现出旺盛的分泌功能。②成骨细胞雌激素受体表达阳性细胞数检测结果：不同剂量卵泡刺激素组和黄体生成素组对雌激素受体表达无明显影响；雌激素1&;#215;10^-8mol／L组和1&;#215;10^-6mol/L组显著高于对照组[(90．95&;#177;5．89)，(95．12&;#177;6．17)，(81．44&;#177;5.37)个数／100个细胞，τ=2．95，P&;lt;0．05；τ=3．50,P&;lt;0．01]。③成骨细胞雌激素受体β表达结果：不同剂量卵泡刺激素及黄体生成素对雌激素受体β的表达无明显影响；随雌激素浓度的增加成骨细胞雌激素受体β表达呈上升趋势。结论：雌激素能促进成骨细胞雌激素受体β的表达，且表现出剂量依赖性。而黄体生成素、卵泡刺激素对雌激素受体β表达无直接影响。     

骨髓间质干细胞对血管性痴呆大鼠BDNF和NGF的影响

目的：观察静脉注射骨髓间质干细胞(marrow stromal cell，MSC)对血管性痴呆(vascular dementia，VD)大鼠脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达的影响。方法：体外分离培养、扩增成年大鼠MSC。利用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型，利用穿梭箱、水迷宫试验、ELISA方法检测注射MSC后30,60dVD大鼠认知功能以及脑组织BDNF和NGF含量变化。结果：与正常对照组相比，VD大鼠主动回避反应、游泳时间、错误次数和盲端时间，在造模后30和60d差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。静脉注射MSC后30和60d，VD大鼠认知功能显著改善。造模后30，60d大鼠脑BDNF含量[(96&;#177;27)，(108&;#177;26)ng／g]，NGF含量[(73&;#177;22)，(89&;#177;24)ng／g]较对照组显著增高[(51&;#177;13)ng／g，(36&;#177;11)ng／g]。P&;lt;0．01；注射MSC后30，60d大鼠脑BDNF含量[(180&;#177;46)，(185&;#177;5)ng／g]，NGF含量[(115&;#177;29)，(108&;#177;34)ng／g]较模型组显著升高。结论：静脉注射MSC可显著改善VD大鼠认知功能，增加VD大鼠脑组织BDNF和NGF含量。     

金雀异黄酮对去卵巢大鼠基底前脑一氧化氮合酶神经元的影响

目的：研究去卵巢及金雀异黄酮(genistein，GS)治疗后基底前脑一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)阳性神经元数目变化，探讨GS改善去卵巢大鼠学习记忆能力的可能机制，为使用GS防治绝经后老年性痴呆提供理论依据。方法：实验于2003—03／2004-01在中山大学人体解剖学教研室脑研究室进行。将36只3月龄雌性SD大鼠分为假手术组、去卵巢对照组、苯甲酸雌二醇组及金雀异黄酮组，每组9只，分别进行干预。术后8周取脑切片，进行NADPH-d组化方法染色，计数分析基底前脑各区NOS阳性神经元数目。结果：各组大鼠基底前脑内侧隔核NOS阳性神经元数目差异无显著性意义(P&;gt;0．05)；去卵巢对照组斜角带核垂直支及水平支的NOS阳性神经元数目分别为(33．13&;#177;9．80)个和(48．55&;#177;6．60)个，均高于假手术组、苯甲酸雌二醇组及金雀异黄酮组(P&;lt;0．01)，金雀异黄酮组斜角带核垂直支及水平支的NOS阳性神经元数目与假手术组、苯甲酸雌二醇组相比差异均无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：去卵巢之后大鼠基底前脑一氧化氮增加，产生神经元的毒性作用，使中枢神经系统退行性变导致大鼠学习记能力下降；GS能减少基底前脑一氧化氮水平，有望替代雌激素用于防治疗女性绝经期后中枢神经系统退行性疾病。     

雌激素对去卵巢大鼠中缝核簇5-羟色胺能神经元的影响

目的：通过观察雌二醇对去卵巢大鼠中缝核簇5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)免疫阳性物质表达的影响，探讨围绝经期潮热发病机制。方法：实验于2003—09／2004—01在解放军第四军医大学神经生物研究所形态学实验室完成。成年雌性SD大鼠18只，解放军第四军医大学实验动物中心提供，体质量200—250g。清洁级动物，许可证号为SCXK(军)2002—005。采用酶联免疫吸附试验测定血清激素水平，用免疫组织化学方法和图像分析技术观察大鼠中缝核簇5-HT样阳性物质的表达。结果：5-HT样阳性反应产物在大鼠中缝背核、中缝正中核表达较多，去卵巢组大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性细胞数(82．5&;#177;17．7)及吸光度(5．12&;#177;0.46)都低于假去势组(164．1&;#177;15．4，5．90&;#177;0．51)(P&;lt;0．05)，去卵巢雌激素组大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性神经元(149．5&;#177;13．4)及吸光度(5．80&;#177;0．41)都与假去势组类似，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：雌激素可改变大鼠中缝背核、中缝正中核5-HT样阳性物质表达，从而影响其神经元的功能，导致绝经期潮热发生。