临床分离病原菌NDM-1基因的筛查

目的检测68株鲍曼不动杆菌复合群、89株铜绿假单胞菌、154株大肠埃希菌和51株肺炎克雷伯菌新德里金属蛋白酶(new Delhi metallo-beta-lactamase,NDM-1)基因,了解本院NDM-1基因的流行情况。方法细菌鉴定和亚胺培南抗菌药物敏感性检验,采用梅里埃公司的VITEK-2 Compact全自动微生物分析仪及GN鉴定卡和AST-GN13药敏卡。VITEK-2 Compact鉴定为鲍曼不动杆菌复合群的细菌通过聚合酶链反应(PCR)检测OXA-51基因区分鲍曼不动杆菌和复合群其他细菌,并采用PCR方法检测所有菌株的NDM-1碳青酶烯酶基因。结果 58株鲍曼不动杆菌复合群细菌OXA-51基因阳性,鉴定为鲍曼不动杆菌;10株OXA-51基因阴性,为复合群其他细菌。未检出NDM-1基因。结论暂未发现产NDM-1超级细菌在本院流行。     

119例疑似非输血感染者抗-HCV与HCVRNA检测结果比较与分析

目的对119例疑似医源性非输血感染丙肝患者的血液进行HCV检测。方法采用2种第3代酶免抗-HCV试剂检测,并同时进行单人份核酸HCV RNA检测。结果 119例疑似HCV血液用万泰酶免试剂检出抗-HCV(+)68例,阳性率为57.14%;丽珠酶免试剂检出抗-HCV(+)61例,阳性率为51.26%。酶免双试剂检出抗-HCV(+)61例,反应符合率为89.70%。万泰酶免抗-HCV(+)最小S/CO值是0.79,最大S/CO值是21.43,平均S/CO值是7.95,中位数是6.23;丽珠酶免抗-HCV(+)最小S/CO值是0.66,最大S/CO值是17.65,平均S/CO值是4.23,中位数是2.87。浩源核酸试剂检出HCV RNA(+)98例,阳性率为82.35%。万泰酶免抗-HCV(+)和浩源核酸HCV RNA(+)63例,丽珠酶免抗-HCV(+)和浩源核酸HCV RNA(+)56例。万泰和丽珠酶免试剂检出灰区的样本,浩源核酸试剂检测全部是阳性。5例酶免双试剂抗-HCV(+),核酸是HCV RNA(-)。结论酶免和核酸方法检测HCV结果存在差异,联合应用酶免和核酸方法筛查血液传染性疾病更能保证输血安全。     

运用23S rDNA芯片技术进行食源性感染常见致病菌的快速鉴定

[目的]应用23S rDNA芯片技术，建立食源性感染常见致病菌的快速鉴定方法。[方法]利用带正电荷尼龙膜为芯片载体，合成寡核苷酸探针，点样于载体制成寡核苷酸芯片，对食源性感染常见致病菌23S rDNA基因片段扩增产物进行杂交检测。[结果]获得扩增食源性感染常见致病菌23S rDNA基因片段的特异性引物，并在同一条件下扩增出14种细菌目标片段。在均一的杂交条件下与寡核苷酸芯片杂交，用地高辛酶联免疫法进行显色。结果表明，10种细菌杂交结果显示很好的灵敏度和特异性，4种细菌由于探针因素或杂交条件不合适未能显示预期的种(属)杂交结果。对于食源性感染模拟标本，本方法也可以获得预期的结果。[结论]建立的23S rDNA芯片技术在食源性感染常见致病菌鉴定上快速准确的优点，为食源性感染的诊治与预防提供了有效的技术手段和方法依据。     

产新德里金属β-内酰胺酶型细菌的研究进展

新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)是近来发现的由新的超级耐药基因编码的一种耐药酶.编码该酶的基冈位于质粒等町移动遗传因子上,使得该类酶基因可在细菌间广泛传播.产此类酶的细菌对几乎所有现存的抗生素耐药.此文就NDM-1的流行病学特征、分子生物学特性和耐药机制等作了综述.     

产新德里金属β-内酰胺酶型细菌的研究进展

新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)是近来发现的由新的超级耐药基因编码的一种耐药酶.编码该酶的基冈位于质粒等町移动遗传因子上,使得该类酶基因可在细菌间广泛传播.产此类酶的细菌对几乎所有现存的抗生素耐药.此文就NDM-1的流行病学特征、分子生物学特性和耐药机制等作了综述.     

肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药机制的研究

摘要:目的　研究肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类抗菌药物耐药机制,为临床治疗耐碳青霉烯类抗菌药物肺炎克雷伯菌感染及院内感染控制提供分子生物学依据。方法　采用西门子Microscan Walkaway 40 plus全自动微生物鉴定及药敏分析仪对肺炎克雷伯菌进行鉴定及药敏试验。采用PCR及琼脂糖凝胶电泳对耐药基因进行初筛及确证,将PCR扩增产物进行测序并使用Basic Local Alignment Search Tool（BLAST）分析,判断细菌耐药基因是否发生变异。结果　分离到的2株肺炎克雷伯菌对临床常用抗菌药物敏感性较差。PCR结果显示碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌耐药基因新德里金属β-内酰胺酶1（New Delhi Metallo-β-lactamase 1,NDM-1）均为阳性,测序未发现NDM-1耐药基因发生突变。BLAST比对显示本次试验中检出的NDM-1耐药基因与Genebank公布的NDM-1耐药基因NC_023914.1同源性为100%。结论　分离到的2株碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌均为产NDM-1病原菌,NDM-1基因序列测序未发现突变位点。     

产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶细菌的实验室检测方法

2010年8月以来,产Ⅰ型新德里金属β-内酰胺酶(NDM-1)细菌引起广泛关注。本文就产NDM-1细菌的实验室表型筛查、表型确证试验、基因确证检测等检测方法等做一综述,以期为实验室开展产NDM-1细菌的检测提供方法依据。     

基于微流控纸芯片的病原体检测方法研究进展

正病原体的快速检测和准确鉴定在临床实验室检测、食品工业和环境监测方面至关重要,现有的细菌培养、核酸扩增和酶联免疫等病原体诊断方法或耗时费力,或需要复杂的仪器设备,不适合现场即时检测,因此,目前亟需一种快速有效检测病原体的新方法。微流控纸芯片逐渐成为检测病原体感染的新工具,纸基微流控芯片(paper-based microfluidics)或     

幽门螺杆菌热休克蛋白A核酸疫苗的构建

目的 构建幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A (HspA)亚单位核酸疫苗,为进一步研制Hp核酸多价疫苗提供技术平台.方法 以PMD-HspA为模板,扩增、纯化Hp hspA基因,插入到真核表达载体PcDNA3中,转化大肠埃希菌DH5a,经氨苄西林抗性筛选阳性克隆,得到重组核酸疫苗pcDNA3-HspA,用特异性PCR方法和小提质粒酶切电泳鉴定重组质粒,同时将pcDNA3-HspA进行测序,进一步确定是否构建成功及鉴定构建过程中是否发生基因突变.结果 PCR鉴定结果显示,扩增产物为0.36 kb的目的基因;酶切鉴定结果显示,得到5.45 kb克隆载体片段和0.36 kb的目的基因片段;重组质粒pcDNA3-HspA测序,得到基因全长357 bp目的基因片段,与克隆质粒测序图比较,无基因变异.结论 成功构建了Hp单价核酸疫苗pcDNA3-HspA,为研制Hp核酸多价疫苗奠定基础.     

苦参提取物杀菌效果分析

目的以苦参为植物源,利用丙酮热回流法提取其活性成分,加入乳化剂TX-10,制备植物源消毒剂,并对其杀菌活性进行测定。方法杀菌活性测定采用悬液定量杀菌试验、模拟空气现场消毒和物体表面消毒的方法。结果悬液定量杀菌试验结果表明,低浓度组(消毒剂浓度为40 g/L)作用30 min对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌的杀灭率≥99.9%;空气消毒实验结果表明,用消毒剂浓度15 g/L按30 mL/m³超低容量喷雾消毒空气60 min,自然菌的消亡率为93.10%~95.06%;物体表面消毒结果表明,用消毒剂浓度30 g/L按100 mL/m³容量消毒桌面30 min,对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的杀灭率≥99.9%。结论苦参提取物加入乳化剂TX-10配成植物源消毒剂,对细菌繁殖体有良好的杀灭效果,对空气自然菌和物体表面消毒效果能达到规定的消毒要求。     

萃取和保存条件对人外周血细胞RNA提取效果的影响

目的比较不同处理和保存条件下外周血RNA提取效果,找出最优的提取方案。方法外周全血去除血浆后,经氯仿萃取两次,加入不同体积比的RNAiso Plus试剂,对RNA进行提取。在此基础上,比较不同保存条件对RNA提取效果的影响,保存条件分别为:4℃保存24 h、72 h、10 d,-80℃保存10 d、30 d。通过紫外分光光度法测定RNA纯度和浓度,比较RNA提取效果,找出最优提取方案。结果与氯仿萃取一次相比,氯仿萃取两次提取的RNA纯度和浓度均升高,差异有统计学意义(P0.05);血细胞与RNAiso plus试剂体积比为1∶1时提取效果最好;4℃保存10 d内的RNA提取效果优于其他保存条件。结论血细胞经氯仿萃取两次提取效果更好;加入等体积的RNAiso plus试剂提取效果最好;血细胞可在4℃稳定保存长达10 d,其RNA不被降解。     

萃取技术的发展与应用

利用物质在互不相溶的两种溶剂中溶解度的不同而进行分离的方法称之为萃取。在近十几年中,随着生命科学、生物工程、合成药学、环境科学、食品工程的迅速发展,分析对象不断增加,对复杂基体中的各组分的分离与检验成为突出问题。对样品的预处理的要求也越来越高,如采用不正确的样品预处理方法,将导致定性、定量的错误、仪器寿命的缩短等严重后果。目前常用的传统萃取方法有很多不足,如需大量试剂,试验成本过高,样品处理步骤复杂,浪费时间、人力,样品回收率、精密度不理想,且样品易损失等问题。随着问题的出现也相应出现解决问题的方法：固相萃取、固相微萃取、超临界萃取、微波萃取等新技术应运而生,本文简要介绍上述几种新型萃取技术的发展与应用。     

事件相关电位特征提取方法研究

事件相关电位特征提取分析在大脑认知的神经生理基础和临床应用研究中起着重要的作用。基于事件相关电位特征分布的先验知识,提出了一种结合小波多尺度分辨和径向基神经网络进行事件相关电位提取的方法。应用径向基神经网络从脑电信号的小波多尺度分解系数中提取与低频响应相关的成分,实施重构完成事件相关电位特征提取。结果表明该方法具有较强的稳健性。     

Single data extraction generated more errors than double data extraction in systematic reviews

BACKGROUND AND OBJECTIVE: To conduct a pilot study to compare the frequency of errors that accompany single vs. double data extraction, compare the estimate of treatment effect derived from these methods, and compare the time requirements for these methods. METHODS: Reviewers were randomized to the role of data extractor or data verifier, and were blind to the study hypothesis. The frequency of errors associated with each method of data extraction was compared using the McNemar test. The data set for each method was used to calculate an efficacy estimate by each method, using standard meta-analytic techniques. The time requirement for each method was compared using a paired t-test. RESULTS: Single data extraction resulted in more errors than double data extraction (relative difference: 21.7%, P = .019). There was no substantial difference between methods in effect estimates for most outcomes. The average time spent for single data extraction was less than the average time for double data extraction (relative difference: 36.1%, P = .003). CONCLUSION: In the case that single data extraction is used in systematic reviews, reviewers and readers need to be mindful of the possibility for more errors and the potential impact these errors may have on effect estimates.     

CT图像中轮廓特征的提取

本文在分析CT图片的特点的基础上，采用经典的Roberts算子对其进行边缘检测。并对其进行了阈值分割，细化，最后采用轮廓跟踪的方法。在VC6.0的基础上设计了具有选择性的提取出CT图片的外部或内部软组织轮廓的方法。