慢性高原病患者骨髓间充质干细胞的体外扩增及鉴定

目的探讨慢性高原病（chronic mountain sickness,CMS）患者骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSCs）的体外培养方法、生物功能及分子生物学特征。方法采用密度梯度离心和贴壁筛选法对15例CMS患者（CMS组）和15例正常人（对照组）骨髓MSCs进行分离培养,于倒置显微镜下观察MSCs形态,用流式细胞仪行细胞表面抗原检测,检测MSCs生长情况,测定生长曲线。结果采用密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞（BMMNC）后培养,骨髓MSC均分离培养成功,贴壁细胞呈梭形;两组骨髓MSCs均表达CD29、CD105和CD13,不表达CD45、CD4、CD8、CD14、CD3、CD34、HLA—DR和CD20。CMS组MSCs增殖能力高于对照组（P〈0．01）,但传代率低于对照组（P〈0．05）,对P3代细胞生长曲线进行观察发现CMS骨髓MSCs生长较对照组活跃。结论CMS患者骨髓MSCs在体外可有效分离培养,所培养扩增的细胞成分单一,CMS患者骨髓MSCs具有其特有的生物学特性。     

CD45RA和CD45RO在寻常型银屑病皮损中的表达的研究

目的：观察寻常型银屑病患者皮损中CD45RA和CD45RO的表达情况,探讨寻常型银屑病的发病机制。方法：免疫组化检测30例寻常型银屑病患者皮损中CD45RA和CD45RO的表达,取10例正常人的躯干皮肤做正常对照。结果：寻常型银屑病患者皮损中CD45RO的表达明显高于对照组（P〈0．01）,CD45RA的表达和对照组比较无统计学意义（P〉0．05）。结论：寻常型银屑病患者皮损真皮中浸润的淋巴细胞以记忆性T淋巴细胞为主,推测细胞免疫在寻常型银屑病的发病中起重要作用。     

银屑病患者皮损中细胞衰老、增殖和凋亡检测

目的：探讨银屑病患者皮损中细胞增殖、衰老和凋亡的变化。方法：应用组织化学、免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶（TDT）介导的d-UTP－生物素缺口末端标记（TUNEL）等技术原位检测了20例银屑病患者（试验组）皮损和10例正常人（对照组）皮肤细胞中与衰老细胞相关的β－半乳糖苷酶（SA－β－Gal)、增殖细胞核抗原（PCNA）和凋亡细胞。结果：银屑病皮损中衰老细胞、增殖细胞和凋亡细胞数均比正常人皮肤增多，试验组与对照组阳性率分别为55％／10％、80％／30％、70％／20％，经χ^2检验，P＜0．05，差异有统计学意义。结论：衰老细胞与凋亡细胞的增加共同对银屑病增殖代谢加快起到部分代偿作用。     

热休克蛋白60在银屑病、慢性湿疹中的表达研究

目的：观察银屑病患者及慢性湿疹患者皮损表皮细胞中热休克蛋白（HsP60）的表达情况。方法：通过免疫组织化学（SABC）方法及原位杂交技术检测了33例银屑病皮损及28例慢性湿疹皮损表皮组织中HSP60蛋白及其mRNA的表达,并与16例正常皮肤组织作对照。结果：HSP60蛋白在正常人及慢性湿疹患者皮损表皮细胞中表达很弱或无表达,两者问差异无统计学意义（P〉0．05）;在银屑病患者皮损表皮细胞中表达增强,与正常对照组及慢性湿疹患者皮损表皮相比,差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）。HSP60mRNA与HSP60蛋白表达部位较一致。结论：HSP60在不同皮肤疾病的发病机制中发挥着不同作用。     

PUVA治疗银屑病Caspase3、bcl-2和PCNA在皮损组织中的表达

目的探讨银屑病经光化学疗法（PUVA）治疗后细胞增殖和凋亡相关指标表达的趋势。方法应用免疫组化技术检测30例寻常型银屑病经PUVA治疗前后及10例正常皮肤中PCNA、Bcl-2、Caspase3的表达。结果在正常表皮中Bcl-2和PCNA在基底层阳性表达，但在寻常型银屑病皮损中Bcl-2表达明显低于正常皮肤组，皮损经PUVA治疗后的表达恢复，有显著性统计学意义（P〈0．01）；PCNA在银屑病皮损为角质形成细胞广泛阳性表达，皮损经PUVA治疗后表达恢复，治疗前后有显著性统计学意义（P〈0．01）；Caspase3在寻常型银屑病皮损与正常皮肤的表达无显著性统计学意义（P〉0．05），皮损处与经PUVA治疗后皮肤的表达相比有显著性统计学意义（P〈0．01）。结论银屑病经PUvA后，Caspase3表达增加，PCNA、Bcl-2、表达恢复正常。     

银屑病皮损血管内皮细胞CD105的表达

目的 探讨转化生长因子β的结合蛋白CD105在银屑病皮损血管内皮细胞的表达及其作用。方法 采用免疫组化方法检测TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ和CD105在银屑病皮损及正常对照皮肤的血管内皮细胞的表达。结果 与正常皮肤相同,TGF-β1、TGF-βRⅠ在银屑病皮损血管内皮细胞均无明显表达;TGF-βRⅡ在银屑病皮损和正常皮肤的血管内皮细胞均有明显表达,但两者差异无显著性;CD105在银屑病皮损血管内皮细胞的表达明显强于正常皮肤,差异有显著性（P〈0．01）。结论 CD105在银屑病皮损血管内皮细胞的表达明显上调可能与银屑病真皮浅层血管增生、炎症细胞浸润的病理机制有关。     

IL-15在寻常型银屑病患者皮损中的表达

目的从mRNA及蛋白质水平研究白介素15（IL-15）在寻常型银屑病患者皮损及非皮损皮肤中的表达,探讨其在银屑病发病中的作用。方法采用RT-PCR和免疫组化法对28例寻常型银屑病患者皮损及非皮损皮肤中IL-15的表达情况进行了检测,同时以10例正常人皮肤作为对照。结果2种IL-15前体蛋白的mRNA在所有皮肤标本中都有表达,银屑病皮损中IL-15 mRNA的表达明显高于非皮损处皮肤（P〈0．001）和正常人皮肤（P〈0．001）,非皮损皮肤的表达与正常人皮肤相比差异无显著性（P〉0．05）。免疫组化结果显示：IL-15低表达于非皮损和正常皮肤的基底细胞层,而在银屑病皮损处高表达,且表达范围可达表皮全层及真皮乳头层。皮损处IL-15的表达明显高于非皮损（P〈0．001）和正常皮肤（P〈0．001）,非皮损与正常皮肤之间的表达无显著性差异（P〉0．05）。结论寻常型银屑病的皮损中高表达IL-15,在疾病的发生中可能起一定的作用。     

乙型肝炎患者CD4＋CD25＋调节性T细胞检测及意义

目的探讨CD4＋CD25＋调节性T细胞在乙型肝炎患者发病机制中的作用。方法利用免疫荧光法检测20例携带者、10例慢性乙型肝炎、5例慢性重症乙型肝炎患者的CD4＋CD25＋调节性T细胞水平,分析与HBV基因型的关系。结果（1）重型乙型肝炎组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率为（2．52±0．94）％,较慢性乙型肝炎组的（5．25±2．17）％差异有统计学意义（P〈0．05）,比乙肝病毒携带者组及健康对照组则差异有统计学意义（P均〈0．01）;（2）慢性乙型肝炎组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率与无症状乙肝病毒携带者组及健康对照组相比,差异具有统计学意义（P〈0．05）;（3）乙肝病毒携带者组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率为（8．51±2．82）％,与健康对照组的（8．51±2．82）％比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（4）HBV基因型C型组外周血CD4＋CD25＋调节性T细胞的百分率为（6．42±2．36）％,较HBV基因型B型组的（7．64±2．87）％稍为下降,但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论CD4＋CD25＋调节性T细胞能抑制T细胞对乙肝病毒的免疫反应,从而抑制乙型肝炎的发生;CD4＋CD25＋调节性T细胞的水平与病情轻重有一定的关系。     

类风湿关节炎RF阳性与阴性患者Foxp3表达的差异

目的 研究类风湿关节（rheumatoid arthritis,RA）患者类风湿因子（rheumatoid factor,RF）阳性及阴性之间是否存在CD4＋CD25＋调节性T细胞Foxp3表达的差异。方法RA患者43例．根据RF测定分为RF阳性组和RF阴性组,健康体检者18例为健康对照组。采用流式细胞仪检测RA患者及健康对照组外周血CD4℃D25＋T细胞及CD4＋CD25＋Foxp3＋T细胞的表达。结果RF阴性组CD4＋CD25＋Foxp3＋／CD4＋T细胞为（2．58±1．68）,与对照组（4．23±2．19）相比,差异有统计学意义（P〈0．05）;RF阳性组CD4＋CD25＋Foxp3＋／CD4＋T细胞为（1．25±1．1）,与对照组（4．23±2．19）相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;RF阴性组与RF阳性组之间CD4＋CD25＋Foxp3＋／CD4＋T细胞存在明显差异（P〈0．05）。结论RF阳性与阴性RA患者之间存在调节性T细胞Foxp3表达差异,RF阳性与阴性患者之间存在免疫应答的不同,可能与CD4＋CD25＋调节性T细胞的功能有关。     

CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭中作用

目的：探讨CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞在HBV感染所致慢加急性肝衰竭发病过程中的表达。方法：采用流式细胞仪检测36例慢加急性肝衰竭患者、38例慢性乙型肝炎患者、40例无症状乙肝病毒携带者及40例健康对照者外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞水平,并追踪慢加急性肝衰竭组患者转归,评价好转组与未恢复组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞百分率差异。结果：慢加急性肝衰竭组、慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组及健康对照组外周血CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞分别为（5．14±1．03）％、（9．86±1．72）％、（7．93±1．67）％及（7．06±1．61）％,慢加急肝衰竭组外周血Treg细胞百分率显著低于慢性乙型肝炎组、无症状乙肝病毒携带组和健康对照组（P〈0．01）。慢性乙型肝炎组外周血Treg百分率明显高于慢加急肝衰竭组及健康对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）,而无症状乙肝病毒携带组与健康对照组外周血Treg百分率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。各组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞的百分率与患者血清HBVDNA呈正相关。慢加急性肝衰竭好转组与未恢复组CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞水平比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：慢加急性肝衰竭患者发病可能与CD4^＋CD25^＋Foxp^3＋Treg细胞表达过低有关,Treg细胞表达水平不能预示慢加急性肝衰竭患者预后。     

窄谱中波紫外线联合阿维 A 对寻常型银屑病患者 T 淋巴细胞免疫功能影响的探讨

目的探讨窄谱中波紫外线联合阿维A对寻常型银屑病患者T淋巴细胞免疫功能的影响。方法选择2011年1月-2014年1月在潮州市潮安区庵埠华侨医院住院治疗的80例寻常型银屑病患者,分为观察组和对照组,每组各40例。对照组采用传统窄谱中波紫外线照射,观察组联合阿维A胶囊口服,比较两组治疗8周后的疗效以及两组患者治疗前后PASI评分、两组患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋）的变化情况。结果治疗8周后,观察组的总有效率达95．0％,明显高于对照组（77．5％）,差异有统计学意义（P〈0．05）。观察组与对照组PASI评分均较治疗前降低,且观察组治疗后的PASI评分明显低于对照组,差异均有统计学意义（P〈0．05）。对照组患者的CD4＋水平治疗后较治疗前无明显变化．观察组患者的CD4＋水平治疗后较治疗前明显升高,且观察组患者治疗后的CD＋水平明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。对照组患者的CD8＋水平治疗后较治疗前无显著变化,观察组患者的CD8＋水平治疗后较治疗前明显降低。且观察组患者治疗后的CD8＋水平明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。观察组和对照组患者的CD4＋／CD8＋治疗后较治疗前明显提高,且治疗后观察组明显高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论窄谱中波紫外线联合阿维A可以提高寻常型银屑病的疗效,其作用机制可能与通过改变T淋巴细胞免疫功能的失衡状态而发挥作用密切相关。     

寻常型银屑病患者皮损中HBD-2、IL-1β和NF-κBp65表达的研究

目的：探讨HBD-2、IL-1β和NF-κBp65在寻常型银屑病皮损中的表达及其在银屑病中的作用机制。方法：采用SP免疫组化法检测45例银屑病患者皮损区、非皮损区及15例正常人皮肤中HBD-2、IL-1β和NF-κBp65的表达,对其在皮损中的表达进行相关性分析,并将结果与PASI评分进行相关性分析。结果：银屑病患者皮损区HBD-2、IL-1β、NF-κBp65的表达比非皮损区、正常人皮肤明显上调,非皮损区HBD-2、IL-1β的表达也高于正常人皮肤,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。银屑病患者皮损中HBD-2、IL-1β和NF-κBp65的表达水平与PASI评分之间均存在正相关（r=0．867、0．865、0．821,均P〈0．05）。银屑病患者皮损中HBD-2与IL-1β、HBD-2与NF-κBp65、IL-1β与NF-κBp65表达水平之间均存在正相关（r=0．869、0．740、0．814,均P〈0．05）。结论：HBD-2、IL-1β、NF-κBp65在寻常型银屑病皮损中的表达均升高．可能共同参与银屑病的发病过程。     

CD 13/APN expression in peripheral blood lymphocytes and skin lesions in patients with advanced psoriasis vulgaris

Objective： To observe the expression of CD13/APN in peripheral blood lymphocytes and skin lesions of patients with advanced psoriasis vulgaris, and discuss its effect on the pathogenesis of psoriasis. Methods： CD 13 expression in peripheral blood lymphocytes and skin lesions was detected by flow cytometry and imrnunohistochemical technique, respectively. Results were compared with those of healthy controls. Results： CD 13 expression was significantly higher in peripheral blood lymphocytes of patients with advanced psoriasis vulgaris than in that of healthy controls, and in skin lesions than in healthy skin tissues. The expression was mainly in the suprabasal layers of skin lesions, and positively correlated to PASI （R 0.78029）. Conclusion： The significantly higher expression of CD13 in peripheral blood lymphocytes and skin lesions of the patients with advanced psoriasis vulgaris probably is related to immunological abnormality, blood vessel abnormality and proliferation of keratinocyte in the pathogenic course of psoriasis. It may be a novel and effective way to treat psoriasis with specific CD13 inhibitors.     

系统性红斑狼疮患者Fas和CD40L表达的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者凋亡调节蛋白受体Fas及共刺激分子CD40L的表达情况及其相互之间的调节。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测SLE患者和正常人血清sFas和sCD40L的水平并分析两者之间的相关性;同时分离10例SLE患者和10例正常对照的外周血淋巴细胞：①将细胞培养48 h后,采用流式细胞仪检测T细胞亚群表面Fas及CD40L的表达情况;②在培养过程中分别加入抗FasL抗体阻断Fas信号及抗CD40L抗体阻断CD40L信号后,观察T细胞亚群表面CD40L及Fas的表达。结果①SLE患者血清sFas和sCD40L平均水平分别为4.18μg/L和5.87μg/L,显著高于正常对照组2.27μg/L和2.31μg/L,且SLE患者血清sFas活动期高于稳定期（P〈0.01或P〈0.05）;sFas、sCD40L水平与SLEDAI（疾病活动指数）之间存在一定的正相关性（r=0.688,r=0.253,P均〈0.05）,但sFas与sCD40L水平之间未显示明显相关（r=0.201,P〉0.05）。②经细胞培养后,SLE患者CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面Fas表达增加,与正常对照组比较,差异有显著性（P〈0.01或P〈0.05）;SLE患者CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面CD40L表达增加,与正常对照组比较,差异有显著性（P均〈0.05）。③SLE患者CD4（＋）及CD8（＋）T细胞上Fas与CD40L表达均呈正相关关系（r=0.311和r=0.517,P均〈0.05）。④加入抗FasL抗体阻断后,CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面CD40L表达下降,与阻断前比较,差异有显著性（P〈0.05）;加入抗CD40L抗体阻断后,CD4（＋）和CD8（＋）T细胞表面Fas表达与阻断前比较差异无显著性（P〉0.05）。结论SLE患者血清sFas和sCD40L水平升高且呈正相关关系;T细胞亚群表面Fas及CD40L高表达且呈正相关关系;T细胞上Fas的表达调控CD40L的表达。说明凋亡调节蛋白Fas及共刺激分子CD40L可能共同参与SLE的发病过程。     

寻常型银屑病血热证患者外周血Th17细胞活化和增殖相关因子的表达

目的探讨Th17细胞活化和增殖相关因子在寻常型银屑病血热证发病机制中的作用以及寻常型银屑病血热证的物质基础与辨证依据。方法收集我院皮肤科门诊寻常型银屑病血热证患者12例为观察组,11例正常人为对照组。通过多色流式细胞术检测两组外周血Th17细胞活化相关因子HLA—DR、增殖因子Ki-67表达水平。结果观察组外周血Th17细胞活化因子HLA—DR的表达及增殖因子Ki-67的表达均高于对照组（P〈0．05）;但活化因子HLA—DR及增殖因子Ki-67与银屑病的病情及严重程度指数（PASI）评分均无相关性（r1=-0．021,r2=0．098,均P〉0．05）。结论Th17细胞活化因子HLA—DR和增殖因子Ki-67在银屑病血热证患者外周血中表达上调,提示银屑病血热证患者外周血Th17细胞处于高活化状态且增殖活跃,二者可能间接参与了银屑病血热证的发病过程,是银屑病血热证新的物质基础与辨证依据。     

银屑病患者白介素8的观察

对４３例银屑病患者，应用ＥＬＩＳＡ法检测了白介素８（ＩＬ－８）的血清含量，同时对其中１２例患者，应用免疫用化技术，观察了ＩＬ－８在其皮损及非皮损区的染色强度。结果表明，银屑病患者血清ＩＬ－８含量明显高于正常人，增高程度与银屑病面积严重程度系数积分相关；皮损处ＩＬ－８染色强度高于非皮损区和正常人皮肤。提示ＩＬ－８在银屑病的发生发展上具有一定作用。     

寻常性银屑病患者外周血Th1和Th17细胞亚群的研究

目的检测寻常性银屑病患者外周血中Th极化细胞Th1和Th17细胞数量和比例的变化,探讨其在银屑病发病机制中的作用。方法选择30例寻常性银屑病患者,采用流式细胞术(FCM)检测寻常性银屑病患者外周血中CD4+T细胞上IFN-γ+IL-17-(Th1)、IL-17+IFN-γ-(Th17)的表达,并与健康对照组比较,分析寻常性银屑病严重指数PASI和Th极化细胞表达量、Th1/Th17比值之间的关系。结果寻常性银屑病患者PBMC中IFN-γ+Th1细胞的数量、IL-17+Th17细胞的数量均高于健康对照组(P<0.01);Th1/Th17比值低于健康对照组(P<0.01),Th17细胞的数量与PASI呈正相关(P<0.01,r=0.726),Th1/Th17细胞比值与PASI指数呈负相关(P<0.01,r=0.573)。结论寻常性银屑病患者外周血存在Th1/Th17细胞失衡现象,Th1/Th17比值变化可能参与银屑病患者的免疫学发病机制。