射频治疗对荷H22肝癌小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响

背景与目的:射频治疗(radiofrequencytherapy)不同于手术之处在于治疗后的肿瘤组织仍留于体内,这种差别对机体细胞免疫功能的影响有待深入研究。本研究目的是评价射频治疗荷H22肝癌小鼠后脾淋巴细胞增殖活性、细胞毒作用及Th1/Th2细胞因子漂移状况的变化。方法:24只BALB/c小鼠随机分为射频治疗组、手术治疗组、荷瘤对照组及正常对照组4组。MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖活性,双色流式细胞技术检测脾淋巴细胞细胞毒作用,双抗体夹心ELISA法测定脾细胞培养上清中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-10细胞因子浓度,半定量RT-PCR测定脾细胞IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10mRNA相对含量。结果:射频治疗组小鼠脾淋巴细胞增殖活性和细胞毒作用显著高于正常对照组、手术治疗组及荷瘤对照组(P<0.05)。射频治疗组IL-2和IFN-γ浓度及mRNA表达水平显著高于其他3组(P<0.05),IL-4和IL-10浓度及mRNA表达水平显著低于其他3组(P<0.05)。手术治疗组IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10浓度及mRNA表达水平与正常对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:射频治疗能够促进荷H22肝癌小鼠脾淋巴细胞活化、增殖,增强对同源肿瘤细胞的杀伤作用。射频治疗可以促进Th1类细胞因子IL-2和IFN-γ的表达。     

绿茶对微囊藻毒素LR诱导肝细胞凋亡、Bcl-2表达及骨髓嗜多染红细胞微核的影响

背景与目的:研究绿茶(green tea,GT)对微囊藻毒素LR(MC-LR)诱导肝细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达及微核发生的影响以探讨毒性拮抗机制.材料与方法:雄性小鼠50只随机分为5组,分别为空白对照、MC-LR染毒组、GT高低剂量拮抗组和环磷酰胺对照组.实验第1 d起GT高、低剂量拮抗组小鼠每日分别给予12 g/L和2 g/L两种浓度的GT自由饮用,连续18 d.自第6 d开始,染毒小鼠每日给予MC-LR 10 μg/kg腹腔注射1次,空白对照给予DMSO腹腔注射,连续13 d.环磷酰胺对照组以50 mg/kg剂量间隔24 h两次给药后6 h取材.小鼠处死后采用免疫组化和计数法对肝细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达以及骨髓嗜多染红细胞(PCEs)微核发生率进行检测和分析.结果:(1)MC-LR染毒明显诱导小鼠肝细胞凋亡增加.高剂量GT处理后明显抑制MC-LR染毒所致小鼠肝细胞凋亡的发生(P＜0.05);(2)单纯MC-LR染毒肝细胞Bcl-2表达未见明显变化,GT各剂量组小鼠肝脏Bcl-2的表达明显增加,与MC-LR染毒组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).(3)GT拮抗组小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率(PCEs-MN)与MC-LR染毒对照和空白对照相比,其差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:GT能上调抑癌基因Bcl-2的表达,抑制细胞凋亡.MC-LR染毒及GT拮抗对微核发生均未有显著影响.     

化学合成P6对小鼠正常淋巴细胞损伤作用及其机制的观察

目的:在证实化学合成2'-氧-甲基鸟嘌呤核苷(P6)具有抑制肿瘤细胞增殖及诱导肿瘤细胞凋亡作用的基础上,观察其对正常免疫细胞的损伤作用.方法:Balb/c小鼠断颈处死后.制备脾脏T淋巴细胞并分为对照组、50μtg/mL P6组、100μtg/mL P6组及150 μg/mL P6组.采用细胞形态学观察、MTT实验、流式细胞术等方法检测P6对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术、RT-PCR技术检测P6对细胞的凋亡诱导作用.结果:形态学观察表明,P6作用72 h后,小鼠淋巴细胞的活化程度和密度随P6浓度的增高逐渐降低;MTT检测表明,与空白对照组相比,P6各浓度组均可抑制活化小鼠淋巴细胞的增殖(P<0.05),该抑制作用具有剂量依赖性;流式细胞术检测细胞周期发现,与空白对照组相比,P6各浓度组G1、G2期细胞减少,S、sub-G1期(凋亡峰)细胞增多(P<0.05),呈剂量依赖性.表明P6可抑制淋巴细胞增殖,使其阻滞于细胞周期中的S期,并促进其凋亡.RT-PCR法检测淋巴细胞促凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bc1-2的表达发现,P6可促进Bax mRNA的表达,并抑制Bc1-2 mR-NA的表达.结论:化学合成P6除抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡以外,同样具有抑制正常免疫细胞增殖及促进凋亡的作用.P6作为新的抗肿瘤药其药效及毒副反应尚需进一步研究.     

雪灵芝提取物对H22肝癌荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的 探讨雪灵芝水提物（arenaria kansuensis aqueous extract, AKAE）对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法 建立小鼠肝癌H22实体瘤模型,将小鼠随机分为5组：对照组、环磷酰胺组、AKAE高、中、低剂量组,各组连续给药10 d。断头处死小鼠,称重胸腺和脾脏并计算胸腺、脾脏指数;MTT法检测荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性及CTL细胞杀伤活性;采用双抗体夹心ELISA法检测H22荷瘤小鼠血清中IL-2、IFN-γ水平。结果 AKAE处理各组小鼠后,AKAE高、中、低剂量组胸腺指数分别为（21.39±14.3）mg/g、（17.52±7.7）mg/g、（30.57±10.2）mg/g;脾脏指数分别为（38.34±12.7）mg/g、（50.38±29.2）mg/g、（61.63±35.2）mg/g,各剂量组与环磷酰胺组比较具有显著差异,AKAE低剂量组与对照组比较差异具有统计学意义（P＝0.013）;AKAE高剂量组脾淋巴细胞增殖刺激指数（SI）与AKAE低剂量组比较差异具有统计学意义（P＝0.019）,而各组CTL杀伤活性无明显差异;AKAE高剂量组IL-2水平较对照组有所升高,而AKAE低剂量组IFN-γ水平明显升高（P＝0.015）。结论 AKAE可以促进H22荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖及Th1型细胞因子的表达。     

IFN-γ和IL-4对乳腺癌细胞MCF-7生长及雌激素受体亚型影响的观察

目的:探讨干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)对人乳腺癌细胞株MCF-7的生长特性及雌激素受体(ER)亚型表达的影响。方法:以不同浓度IFN-γ(50、100和150μg/L)或IL-4(5、10和25μg/L)分别作用MCF-7细胞24、48、72和96h,MTT法检测细胞的增殖水平。选择100μg/L IFN-γ或10μg/L IL-4作用细胞96h(M/IFN-γ或M/IL-4),蛋白质印迹法检测ERα和ERβ的蛋白表达,流式细胞术分析细胞周期,RT-PCR检测凋亡抑制基因mRNA表达。结果:与对照组相比,IFN-γ作用96h后,细胞增殖活性受到抑制(100μg/L组P=0.000,150μg/L组P=0.003),G0～G1期细胞比例增多(P=0.003),S期减少(P=0.005),ERβ蛋白表达水平增加,P=0.038。IL-4作用96h后,细胞增殖活性增强(10μg/L组P=0.006,25μg/L组P=0.002),G0～G1期细胞比例减少(P=0.008),S期增多(P=0.007),ERβ蛋白表达水平减少(P=0.021),凋亡抑制基因的表达水平增加,P值分别为0.002、0.000和0.004。结论:辅助性T淋巴细胞1型(Th1)类细胞因子IFN-γ和Th2类细胞因子IL-4可分别促进或抑制ERβ表达,进而抑制或促进肿瘤细胞生长;Th1/Th2偏移对乳腺癌细胞生长特性的作用,可能与改变ER亚型表达比例有关。     

微囊藻毒素LR对大鼠卵巢颗粒细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的：研究微囊藻毒素LR(MC-LR)对大鼠卵巢颗粒细胞的氧化损伤和致凋亡作用。方法：分别以10、20、30μg/mL的MC-LR对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞染毒48h,测定细胞内活性氧(ROS)含量、细胞培养液超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、卵巢颗粒细胞凋亡率和凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA的表达水平。结果：与对照组比较,随着MC-LR剂量升高,染毒组细胞内ROS升高(rs=0.925,P<0.01);细胞培养液中T-SOD活性降低(rs= -0.865,P<0.05);MDA含量升高(rs=0.811,P<0.01)。卵巢颗粒细胞凋亡率随MC-LR剂量的升高而升高(P<0.05);凋亡相关基因BaxmRNA的表达量随MC-LR剂量的升高而升高(rs=0.972, P<0.01),但Bcl-2mRNA的表达量随MC-LR剂量的升高而降低(rs= -0.972,P<0.01)。结论：MC-LR对大鼠卵巢颗粒细胞具有氧化损伤作用,并能引起卵巢颗粒细胞凋亡和凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA表达的改变。     

痰热清注射液缓解Lewis肺癌模型小鼠化疗后的免疫抑制

目的：研究痰热清注射液对Lewis肺癌化疗模型小鼠免疫抑制作用的影响,以探讨其对荷肺癌小鼠的免疫调节作用。方法：构建C57 BL /6小鼠Lewis肺癌模型, 40只模型小鼠随机分为模型对照组、痰热清组、化疗组、痰热清联合化疗组及正常对照组,每组8只。治疗后摘小鼠眼球取血,取脾脏、外周血和胸腺,并分离腹腔巨噬细胞（Mφ）,检测各组小鼠胸腺指数及外周血淋巴细胞数量,MTT法检测各组小鼠脾T、B淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测胸腺细胞的凋率和外周血内CD3+、CD3-NK1.1+细胞及CD3+NK1.1+细胞比例,RT-PCR检测胸腺组织 Bcl-2和Fas mRNA表达水平,乳酸脱氢酶（LDH）释放法和ELISA法检测Mφ的杀伤活性及及其分泌IL-12能力,免疫透射比浊法检测小鼠外周血清中IgG及补体C3的含量。结果：痰热清联合化疗组小鼠的胸腺指数、外周血淋巴细胞计数及T、B细胞增殖活性均明显高于单独化疗组（ P <0.01）,同时胸腺细胞的凋亡水平明显低于单独化疗组（ P <0.01）。痰热清联合化疗组小鼠外周血CD3+T细胞、CD3-NK11+细胞及CD3+NK1.1+细胞比例均明显高于化疗组 ( P <0.01)。与化疗组相比,痰热清联合化疗组小鼠胸腺组织 Bcl-2 mRNA 水平明显增高,而 Fas mRNA水平明显减低(均 P <0.01)。痰热清组小鼠Mφ杀伤活性及分泌IL-12水平均明显高于化疗组(均 P <0.01) ,同时外周血IgG及补体C3含量明显高于化疗组(均 P <0.01)。结论：痰热清注射液对肺癌化疗小鼠的免疫系统有明显保护作用,其对抗肿瘤免疫力有明显的促进作用。     

电针刺对Lewis肺癌化疗小鼠脾脏T淋巴细胞免疫功能的影响

目的探讨电针刺“足三里”穴对Lewis肺癌化疗小鼠脾脏T淋巴细胞免疫功能的影响。方法 采用MTT法检测Lewis肺癌化疗小鼠脾脏T细胞增殖能力;ELISA和PCR法检测脾脏T细胞IL-2及IFN-γ蛋白和mRNA表达。120只移植性Lewis肺癌小鼠随机分为:M组、H组、E组和HE组。治疗3个疗程后分别检测上述各项免疫指标。结果 与M组比较, H组移植性Lewis肺癌小鼠脾脏T淋巴细胞增殖能力、T细胞IL-2及IFN-γ蛋白和mRNA表达明显降低(P＜0.01);与H组比较, HE组电针刺“足三里”穴可明显增加化疗小鼠脾脏T淋巴细胞增殖能力, 增加IL-2及IFN-γ蛋白和mRNA表达(P＜0.01)。结论 电针刺“足三里”穴可显著提高移植性Lewis肺癌化疗小鼠脾脏T淋巴细胞免疫功能, 发挥良好的免疫调节作用。     

慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及小鼠前胃癌移植瘤生长的影响

背景与目的:近年来心理社会因素在肿瘤发生发展中的作用越来越受到关注,但其具体作用机制尚不清楚。本研究旨在探讨慢性束缚应激对昆明小鼠脾淋巴细胞免疫功能及其小鼠前胃癌(mouse forestomach carcinoma,MFC)移植瘤生长的影响,为研究心理社会因素促进肿瘤发生发展的机制提供一些依据。方法:将60只昆明小鼠按完全随机设计分为正常饲养组、单纯肿瘤组、单纯束缚组及肿瘤加束缚组,每组15只,对单纯束缚组和肿瘤加束缚组小鼠建立慢性束缚应激模型,单纯肿瘤组及肿瘤加束缚组小鼠于实验第4周时建立MFC移植瘤模型,种瘤后10d处死全部小鼠,测量移植瘤体重量,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖及对MFC细胞的生长抑制能力,酶连免疫吸附试验(enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)检测脾淋巴细胞产生IL-2的能力。结果:单纯肿瘤组瘤重(1.39±0.39)g,肿瘤加束缚组瘤重(2.10±0.52)g,与单纯肿瘤组相比,肿瘤加束缚组的MFC移植瘤生长较快,肿瘤增长率达51.08%(P<0.01);正常饲养组、单纯肿瘤组、单纯束缚组和肿瘤加束缚组小鼠的脾T淋巴细胞刺激指数分别为1.77±0.22、1.70±0.17、1.69±0.18、1.22±0.15,脾B淋巴细胞刺激指数分别为1.73±0.14、1.65±0.17、1.64±0.21、1.33±0.11,效靶比在5∶1和10∶1时小鼠脾细胞对MFC细胞的生长抑制率分别为(23.01±4.76)%、(19.47±3.70)%、(16.81±3.68)%、(7.14±5.00)%和(33.03±3.91)%、(28.34±4.58)%、(24.94±2.97)%、(13.49±7.94)%,脾细胞培养上清中IL-2含量分别为(260.03±14.96)pg/mL、(239.78±10.93)pg/mL、(238.11±13.50)pg/mL、(186.34±10.42)pg/mL,两因素方差分析显示慢性束缚应激和移植瘤均使小鼠脾淋巴细胞增殖能力、对MFC细胞的生长抑制能力及产生IL-2的能力减弱,并且两者具有交互效应,其中以慢性束缚应激的影响程度较大(P<0.01)。结论:慢性束缚应激可通过削弱小鼠的免疫功能促进MFC移植瘤生长。     

乳腺癌髓系来源抑制细胞中IDO对T淋巴细胞免疫抑制作用初探

  目的   检测乳腺癌患者肿瘤原位组织的一群髓系来源抑制细胞（MDSCs）中吲哚胺2,3双加氧酶（indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO）的表达情况,探讨IDO对MDSCs介导T淋巴细胞免疫抑制作用的影响。   方法   收集30例乳腺癌患者的肿瘤组织和外周血及30例健康供者外周血,将肿瘤组织制成单细胞悬液,采用免疫磁珠技术分选肿瘤单细胞悬液中CD33+ MDSCs和健康供者外周血中的CD33+细胞,应用Western blot和PCR方法检测MDSCs中IDO的表达情况。将肿瘤组织来源MDSCs和异体T淋巴细胞按照1:1比例混合培养3天,在加用和不加IDO特异性抑制剂1-MT条件下,利用Annexin-V凋亡试剂盒检测各组T淋巴细胞凋亡率,利用ELISA法检测各组T淋巴细胞分泌的细胞因子量。   结果   Western blot和PCR检测发现MDSCs中IDO过表达。T细胞单独培养时凋亡率为（2.40±0.66）%,MDSCs和T细胞共孵育组中T细胞凋亡率为（12.30±0.80）%,比T细胞单独培养时显著升高（P < 0.05）,在共孵育过程中加用1-MT组的T细胞凋亡率为（3.30±0.58）%,与不加1-MT组比较差异具有统计学意义（P < 0.05）。细胞因子检测的结果发现MDSCs促进T淋巴细胞TGF-β、IL-10的释放,抑制IFN-γ的分泌,而对IL-4和IL-12的分泌影响并不明显,而加用1-MT后MDSCs和T淋巴细胞共孵育组中TGF-β、IL-10的分泌水平与未加1-MT组相比显著降低,IFN-γ的分泌显著增加（P < 0.05）。   结论   在乳腺癌患者中,原位肿瘤组织来源的MDSCs对T细胞具有明显的免疫抑制作用;IDO在此群细胞中有过表达,MDSCs发挥免疫抑制作用与IDO密切相关。      

Tumor Cell Death via Apoptosis and Improvement of Activated Lymphocyte Cytokine Secretion by Extracts from Euphorbia Hebecarpa and Euphorbia Petiolata

Background: Immunomodulatory materials from natural herbs and the characterization of their immune enhancementeffects may have tremendous potential as cancer treatment. The aim of the present study was to investigate theapoptosis-inducing activities of Euphorbia hebecarpa Boiss and Euphorbia petiolata Banks & Sol. plant extracts andtheir effects on cytokine secretion by lymphocytes. Materials and Methods: We assessed the apoptosis-inducingeffect of the plants’ hexane extracts on previously determined sensitive cell lines (HeLa for E. hebecarpa and K562for E. petiolata) by flow cytometry and measurement of caspase 3 activation. The apoptosis-related gene expressionswere examined by real-time PCR. The effects of the extracts on lymphocyte proliferation and cytokine secretion wereexamined. Results: Flow cytometry analysis showed that the inhibitory effect of the extracts on tumor cell growthwas due to cell apoptosis. The plant extracts at the 100 μg/ml dose induced apoptosis in HeLa (98.5 ± 0.1%) and K562(57.7 ± 1.9%) cells. The extracts increased caspase 3 activation (≈2-fold>control). Real-time PCR showed Fas and Baxgene upregulation and Bcl-2 downregulation, which resulted in an increased Bax/Bcl-2 expression ratio. The extractsincreased lymphocyte proliferation and increased levels of IFN-γ production in the presence and absence of mitogen(p < 0.05). They significantly increased IL-4 and decreased IL-10 secretion by mitogen-stimulated lymphocytes.E. hebecarpa also increased IL-17 release. Conclusion: These results have shown that both extracts possess antitumoractivity by inducing apoptosis, possibly through both intrinsic and extrinsic pathways. In addition, they induced secretionof different T helper subset related cytokines that are effective in the immune response against cancer.     

香加皮水提物对小鼠淋巴细胞免疫调节作用的初步研究

目的：研究中药香加皮水提取物（cortex periplocae extract,CPE）对小鼠免疫功能的调节作用。方法：无菌分离小鼠淋巴细胞,与不同浓度CPE（250、125、64、32、16、8μg/ml）共同培养一定时间后,采用MTT法测定其对刀豆素A（ConA）诱导的小鼠淋巴细胞转化能力的影响,采用LDH酶释放法测定对NK细胞杀伤活性的影响;采用对肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）敏感的L929细胞,使用生物法测定CPE对单核细胞产生TNF-α的影响。各实验均设对照组。结果：CPE在8-64μg/ml的浓度范围内可不同程度的提高小鼠体外淋巴细胞转化率和NK细胞杀伤活性,以及促进单核细胞分泌TNF-α,与对照组比较差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。结论：一定剂量的CPE可以提高小鼠淋巴细胞的免疫功能,从而发挥抗肿瘤作用。     

微囊藻毒素-LR所致神经小胶质细胞BV-2的炎性反应

目的:通过检测微囊藻毒素-LR(MC-LR)对BV-2细胞内一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS),以及培养上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)表达的影响,为进一步探讨MC-LR引起中枢神经系统免疫反应奠定基础。方法:用MC-LR刺激BV-2细胞建立炎症模型,以四甲基噻唑蓝(MTT)法测定MC-LR对细胞的毒性作用;采用硝酸还原酶法检测BV-2细胞中NO的表达量;NOS分型法检测NOS的表达水平;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测TNF-α和IL-6炎症因子的产生情况。结果:MC-LR染毒24 h后,染毒浓度在0～128 μg/L范围内,随着剂量的增加,细胞活性呈下降趋势(r=-0.609,P<0.05),其半数有效浓度(EC50)为22.49 μg/L。当染毒浓度≥5.0 μg/L时,细胞分泌的IL-6和NOS的含量明显增加,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05);10.0 μg/L染毒后TNF-α和NO含量明显增加,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:MC-LR诱导BV-2细胞产生大量的炎性细胞因子NO、NOS、IL-6及TNF-α,引起神经系统的炎症反应。     

香加皮提取物抗肿瘤活性的研究

背景与目的： 研究中药香加皮提取物的抗肿瘤活性,探讨其抗肿瘤机制。 材料与方法： 采用噻唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium bromide, MTT)法观察香加皮醇提物和水提物对MCF-7、TE-13、QG56、SMMC7721、T24、Hela、K562等肿瘤细胞增殖的抑制作用,应用流式细胞术检测肿瘤细胞的周期变化和对凋亡的影响。 结果： 香加皮醇提物和水提物均能明显抑制多种肿瘤细胞的增殖,呈浓度依赖性;醇提物的抑瘤作用(IC50<10 μg/ml)强于水提物(IC50<40 μg/ml),并且差异具有统计学意义(P<0.05)。香加皮醇提物可将MCF-7细胞阻滞于G0/G1期,并呈时间依赖性地诱导MCF-7细胞发生凋亡。10 μg/ml香加皮醇提物作用MCF-7细胞24 h,与对照组相比,G0/G1期细胞显著增多,作用48 h,凋亡率从对照组的0.70％±0.13％升高到13.54％±2.12％,两者之间的差异有统计学意义(P<0.05)。 结论： 香加皮提取物对体外肿瘤细胞的增殖具有显著的抑制作用,醇提物强于水提物,其抗瘤机制可能与阻滞肿瘤细胞周期和诱导凋亡有关。     

The Inhibition Effect of Triptolide on Human Endometrial Carcinoma Cell Line HEC-1B: a in vitro and in vivo Studies

Background: To investigate the inhibitory effect and the underlying mechanism of triptolide on culturedhuman endometrial carcinoma HEC-1B cells and corresponding xenograft. Materials and Methods: For in vitrostudies, the inhibition effect of proliferation on HEC-1B cell by triptolide was determined by MTT assay; cellcycle and apoptosis of the triptolide-treated and untreated cells were detected by flow cytometry. For in vivostudies, a xenograft tumor model of human endometrial carcinoma was established using HEC-1B cells, thenthe tumor-bearing mice were treated with high, medium, and low-dose (8 μg, 4 μg and 2 μg/day) triptolide orcisplatin at 40 μg/day or normal saline as control. The mice were treated for 10-15 days, during which body weightof the mice and volume of the xenograft were weighted. Then expression of Bcl-2 and vascular endothelial growthfactor (VEGF) was analyzed by SABC immunohistochemistry. Results: Cell growth was significantly inhibitedby triptolide as observed by an inverted phase contrast microscope; the results of MTT assay indicated thattriptolide inhibits HEC-1B cell proliferation in a dose and time-dependent manner; flow cytometry showed thatlow concentration (5 ng/ml) of triptolide induces cell cycle arrest of HEC-1B cells mainly at S phase, while higherconcentration (40 or 80 ng/ml) induced cell cycle arrest of HEC-1B cells mainly at G2/M phase, and apoptosisof the cells was also induced. High-dose triptolide showed a similar tumor-inhibitory effect as cisplatin (-50%);high-dose triptolide significantly inhibited Bcl-2 and VEGF expression in the xenograft model compared tonormal saline control (P<0.05). Conclusions: triptolide inhibits HEC-1B cell growth both in vitro and in mousexenograft model. Cell cycle of the tumor cells was arrested at S and G2/M phase, and the mechanism may involveinduction of tumor cell apoptosis and inhibition of tumor angiogenesis.     

微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞凋亡及对Caspase-3和Caspase-9蛋白表达的影响

目的：研究微囊藻毒素-LR对人正常食管上皮细胞活力及凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9表达的影响,为探讨其诱导凋亡的途径提供依据。方法：分别用不同浓度（1、3.75、7.5、15、30、50 μg/mL）微囊藻毒素-LR处理人正常食管上皮HEEC细胞24 h,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力,计算半数抑制浓度（IC₅₀）以确定后续实验的MC-LR浓度。进一步用0、6、12、24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞,采用PI-Annexin V双染法检测细胞凋亡,Western blot检测Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达水平。结果：与对照组比较,3.75~50 μg/mL的微囊藻毒素-LR均可使人正常食管上皮细胞活力降低（P均 < 0.01）,测定得出IC₅₀为24 μg/mL。因此,选择6、12和24 μg/mL的MC-LR用于后续实验。用6~24 μg/mL微囊藻毒素-LR处理细胞24 h后,细胞凋亡率升高（P < 0.05或P < 0.01）,Caspase-3和Caspase-9蛋白表达增加（P均 < 0.01）。结论：微囊藻毒素-LR可以诱导人正常食管上皮细胞凋亡,且可能与细胞凋亡相关的信号分子Caspase-3和Caspase-9的激活有关。     

沉默TIPE2基因对T细胞共培养肺腺癌细胞LA795的免疫杀伤作用

目的 利用特异性小干扰RNA（small interfering RNA, siRNA）技术沉默T细胞TIPE2基因表达,体外观察转染T细胞对肺腺癌细胞LA795的免疫杀伤作用。方法 磁珠分选小鼠脾脏T细胞,筛选并验证能有效沉默T淋巴细胞TIPE2基因的siRNA序列,转染48 h后,利用酶联免疫吸附法（ELISA）比较各分组细胞上清液中IFN-γ分泌水平;转染72 h后,观察对比单纯T细胞（空白组）、阴性对照T细胞（阴性对照组）及转染T细胞（实验组）与小鼠肺腺癌细胞LA795共培养时肿瘤杀伤率。结果 我们筛选出一条能有效抑制TIPE2基因表达的siRNA序列,细胞转染率79.63%,蛋白表达抑制率达到79%,转染48 h后,检测实验组、阴性对照组、空白组细胞因子IFN-γ分泌水平分别为（678.96±26.91）pg/ml、（401.69±13.67）pg/ml、（387.03±15.14）pg/ml（P<0.001）;转染72 h后,与空白组及阴性对照组T细胞相比,在不同的效靶比水平（20:1、40:1、80:1）,转染T细胞杀瘤活性均更高。当效靶比为80:1时,实验组肿瘤细胞杀伤率达到（47.91±3.25）%。结论 利用特异性siRNA技术能有效沉默TIPE2基因,并促进抗肿瘤活性细胞因子IFN-γ分泌,增强T细胞对小鼠肺腺癌细胞LA795的体外免疫杀伤作用。     

Lysis of Fresh Human Tumor Cells by Autologous Peripheral Blood Lymphocytes and Tumor-infiltrating Lymphocytes Activated hy PSK

The protein-bound polysaccharide PSK was tested for the ability to induce in vitro autologous tumor killing (ATK) activity in human cancer patients. Peripheral blood lymphocytes (PBL) and tumor-infiltrating lymphocytes (TIL) demonstrated various levels of cytotoxicity against autologous, freshly isolated tumor cells. When PBL and TIL were cultured overnight with PSK, ATK activity was induced in previously non-reactive cases and augmented in previously reactive samples. The PSK effect was observed with PSK concentrations of 10–100 μg/ml that could be obtained in the blood of cancer patients who received standard oral administration of PSK. The manifestation of PSK-induced ATK required active cell metabolism and RNA and protein syntheses, but not DNA synthesis of lymphocytes. PSK-induced enhancement of ATK was not abrogated by monoclonal antibodies (mAb) directed against interferon (IFN)α or IFNγ-. In addition, mAb that neutralized interleukin-2 (IL-2) or mAb reactive with α-chain or β -chain of IL-2 receptors (IL-2R) had no effect on PSK-induced ATK activity. Supernatants from PSK-stimulated lymphocyte cultures did not induce ATK. Cell fractiona-tion experiments revealed that CD3^-CD16⁺ large granular lymphocytes (LGL) and/or CD3⁺CD16^- T lymphocytes were responsible for both spontaneous and PSK-induced ATK. PSK-activated LGL, but not T lymphocytes expressed lysis of fresh allogeneic tumor cells. These results indicate that PSK activates PBL and TIL to exhibit ATK independently of IL-2/IL-2R systems.     

环氧合酶-2抑制剂对白血病细胞HL-60的化疗增敏作用及机制

 目的　观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60的化疗增敏作用,并对其机制进行初步探讨。方法　MTT法评估塞来昔布、多柔比星及二者联合对HL-60细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的表达;Western blotting检测Survivin蛋白的表达。结果　多柔比星联合塞来昔布5和10 μmol／L对HL-60细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0.25及0.16 μg／ml,明显低于多柔比星单用的IC50（0.48 μg／ml）;多柔比星0.10 μg／ml联合10 μmol／L塞来昔布下调Survivin基因mRNA及蛋白的表达;联合塞来昔布5和10 μmol／L的凋亡率[分别为（13.07±1.66）%及（22.36±1.84）%]较多柔比星0.10 μg／ml单用[（5.72±1.25）%]明显增加（P＜0.01）。结论　COX-2抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60具有明显的化疗增敏作用,其初步机制涉及下调Survivin的表达,增加细胞凋亡。