黄芪多糖保护糖尿病心肌的初步研究

目的观察黄芪多糖（APS）对糖尿病（DM）仓鼠心肌chymase/ACE-AngⅡ的影响,探讨其对DM心肌病变的干预机制。方法检测APS治疗组和DM对照组仓鼠的血糖、胰岛素、C肽、心肌酶谱、糖化血清蛋白水平,血浆和心肌组织的AngⅡ含量;免疫组化法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原;荧光定量PCR法检测心肌chymase和ACE mRNA表达;放免法检测chymase和ACE活性。结果APS组血糖、糖化血清蛋白、心肌酶谱和心肌AngⅡ水平较DM组显著下降,胰岛素、C肽、血浆AngⅡ水平和DM组无差异;APS组心肌Ⅰ型胶原表达和Ⅰ/Ⅲ型胶原比值较DM组显著下降;APS组chymase mRNA表达和活性均显著低于DM组,ACE基因的表达和活性与DM组无显著性差异。结论APS可以抑制糖尿病心肌中chymanse依赖性AngⅡ的生成,起到对糖尿病心肌病变的保护作用。     

厄贝沙坦抑制肾皮质JAKs-STATs信号通路的实验研究

目的 探讨肾脏Janus激酶/信号转导子/转录激活子(JAKs-STATs)基因表达在高血压肾损害中的作用和血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)的肾脏保护作用.方法 应用病理检查、放射免疫、逆转录-聚合酶链式反应和蛋白印迹杂交等方法,检测自发性高血压大鼠(SHR)应用厄贝沙坦(SHR-Ⅰ组)对肾脏局部血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平、肾皮质组织JAK1,2及STAT1,3 mRNA和蛋白表达.同时设SHR组及对照Wistar-Kyoto(WKY)组.结果 SHR-Ⅰ组肾皮质组织匀浆液Ang Ⅱ水平为(79.4±14.8)pg/mg,SHR组为(83.4±8.2)PS/mg,WKY组为(43.2±13.6)pg/mg(P＞0.05).SHR-Ⅰ组和SHR组肾皮质组织匀浆液Ang Ⅱ水平均比WKY组显著增加(均P＜0.01).SHR-Ⅰ组肾皮质JAK1,2及STAT1,3 mRNA和蛋白表达含量明显比SHR组下降(均P＜0.01),与WKY组相比,差异无统计学意义(均P＞0.05).结论 JAKs-STATs信号通路可能参与了高血压肾脏损害过程,厄贝沙坦肾脏保护作用部分是通过减少肾脏内的JAKs-STATs表达,使JAKs-STATs信号通路受到抑制有关.     

两肾一夹高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2的表达

目的:观察两肾一夹(2K1C)高血压大鼠肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)蛋白和mRNA的表达。方法:30只雄性Wister大鼠随机分为2组,对照组和2K1C高血压组各15只。鼠尾容积法测定术前、术后1周、4周、8周的血压变化。8周后,免疫组化法检测肾脏ACE2蛋白表达,放射免疫分析法测定心肌组织AngⅡ水平,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肾脏ACE2 mRNA表达。结果:①2K1C组术后血压明显高于术前和对照组(P<0.01);②与对照组相比,高血压模型组心肌局部AngⅡ浓度显著升高(P<0.01);③高血压模型组ACE2蛋白和mRNA表达较对照组明显降低(均P<0.05)。结论:2K1C高血压大鼠心肌局部AngⅡ浓度升高,肾脏组织ACE2蛋白和mRNA表达降低,这可能是两肾一夹高血压大鼠血压发生的机理之一     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ及其1型受体mRNA表达的影响

目的研究氯沙坦对实验性糖尿病大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体mRNA表达的影响。方法纯种雄性Wistar大鼠分为3组,A组(n=11)为正常对照组,B组(n=11)为糖尿病为干预组,C组(n=9)为糖尿病大鼠氯沙坦干预组。以链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型。饲养18周后取出肾脏检测AngⅡ水平、AngⅡ1型受体mRNA表达,收集24h尿测定尿白蛋白排泄及肌酐并心脏内取血检测血AngⅡ及肌酐。AngⅡ1型受体mRNA表达采用RT-PCR,以-actin作为内对照。尿白蛋白排泄采用大鼠白蛋白特异的酶免疫分析试剂盒。结果血、肾组织AngⅡ在A、B、C三组间无显著性差异。肾组织AngⅡ1型受体mRNA表达在B组大鼠(0.62±0.17)显著低于A组(1.13±0.82,P<0.01)及C组(1.13±0.62,P<0.01)。尿白蛋白排泄在B组大鼠(2.18±1.98mg/d)显著高于A组(0.41±0.47mg/d,P<0.01)及C组(0.65±0.89mg/d,P<0.01)。结论氯沙坦处理能升高糖尿病大鼠肾组织的AngⅡ1型受体mRNA表达,但不改变血液及肾组织AngⅡ水平。     

盐酸贝那普利对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响

目的: 观察血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats, SHR)肾内肾素-血管紧张素系统(RAS)的影响,探讨盐酸贝那普利抗肾脏纤维化的机制. 方法: 应用病理检查、计算机分析、放射免疫、分光光度法和逆转录-聚合酶链式反应等方法,检测贝那普利组(SHR-B)、SHR组(SHR)及对照Wistar-Kyoto组(WKY)大鼠肾脏间质胶原面积、肾脏血管紧张素转换酶(ACE)活性、肾脏局部血管紧张素II(Ang II)水平及肾脏组织I,III型胶原mRNA表达. 结果: SHR-B组肾脏胶原面积比SHR组明显减少(P＜0.01). SHR-B组肾皮质提取液ACE活性为(28±6)nmol/(min·g),SHR组为(53±8)nmol/(min·g),WKY组为(25±7) nmol/(min·g). SHR-B组肾皮质提取液ACE活性比SHR组明显降低(P＜0.01),但与WKY组相比,无显著差异. SHR-B组肾皮质组织匀浆液Ang II水平为(49±16)ng/g ,SHR组为(83±8) ng/g ,WKY组为(43±14)ng/g. SHR-B组肾皮质组织匀浆液Ang II水平比SHR组明显降低(P＜0.01),但与WKY相比无显著差异(P＞0.05). SHR-B组肾脏组织I型胶原及III型胶原mRNA表达相对含量也均明显低于SHR组(P均＜0.01). 结论: 贝那普利可通过减少肾脏胶原的合成和抑制肾内的RAS而减轻肾脏的纤维化.     

血管紧张素Ⅱ及其2型受体在大鼠肾脏中表达的增龄性变化

目的:阐明血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其2型受体(AT2)在大鼠肾脏增龄过程中的表达变化,探讨AngⅡ及AT2在肾脏衰老过程中的作用机制. 方法:分别观察新生(1 d)、成年(8 wk)及老年(20 mo)3组大鼠肾脏皮质中AT2 mRNA的表达及其增龄性变化,并测定肾皮质中AngⅡ水平. 结果:新生大鼠肾皮质中AT2 mRNA的表达水平较高,而在成年(0.29±0.05)及老年(0.32±0.04)大鼠肾皮质中的表达水平明显低于新生(0.85±0.07)大鼠(P<0.05). AngⅡ水平(ng/g)在新生组(2092±153) 和成年组(2125±107)均明显高于老年组(1876±80,P<0.05). 结论:AT2水平的降低可能参与了肾脏衰老的调控.     

五甲基槲皮素对Ang Ⅱ致心肌肥厚和细胞凋亡的作用

目的 研究五甲基槲皮素(PMQ)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)致大鼠心肌肥厚和细胞凋亡的作用及机制.方法 30只SD大鼠随机分为5组.试验持续21 d.①空白组:每晨生理盐水灌胃;②PMQ组:每晨PMQ 50 mg/kg灌胃;③AngⅡ组:于第15天开始皮下注射AngⅡ 288μg/(kg·d);④PMQ+Ang Ⅱ组:PMQ和AngⅡ处理同前;⑤溶剂+AngⅡ组:每晨溶剂灌胃,AngⅡ处理同前.于第22天处死大鼠.测量心脏指数、左心指数,心肌超氧化物歧化物(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量(real time)PCR检测脑钠素(BNP)mRNA的表达,TUNEL法测心肌凋亡,免疫组化测Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 PMQ能明显抑制Ang Ⅱ所致的心肌肥厚[左心指数,(2.02±0.16)vs(2.34±0.10)mg/g]及BNP mRNA表达上调;抑制心肌细胞凋亡[凋亡指数,(0.72±0.18)vs(1.28±0.27)%]及凋亡相关蛋白Bax表达[平均吸光度(0.037 3±0.007 3)vs(0.054 0±0.006 8)]和Bax/Bcl-2的提高[(0.17±0.03)vs(0.25±0.04)].并降低SOD活力、增加MDA含量.结论 PMQ能对抗AngⅡ引起的心肌肥厚及细胞凋亡.此效应可能与其抗氧化作用有关.     

甘麦大枣汤、四逆散及四君子汤对慢性应激大鼠内源性神经生长因子水平的影响

目的 探讨疏肝、养心、健脾疗法对慢性应激大鼠内源性神经生长因子(NGF)水平的影响.方法 120只SD大鼠分为正常组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、甘麦大枣组、四逆散组和四君子汤组,每组20只.采用长期高压恒流电刺激足底法制作慢性应激动物模型.运用自发活动和穿越实验以及悬尾实验观察大鼠行为学变化.运用放射免疫分析法测定大鼠垂体、下丘脑和血浆中NGF水平.结果 ①与正常组[(1052.64±124.17)mm]比较,两模型组[(809.07±120.39)mm,(809.53±167.77)mm]和四君子汤组[(912.96±114.71)mm]大鼠的自发活动路程明显减少(P<0.01);两个中药组[(995.17±142.8)mm,(1092.58±272.62)mm]明显多于两模型组(P<0.01);②两模型组大鼠的穿越时间[(8.73±3.77)s,(8.07±3.16)s]明显减少(P<0.01);与两模型组比较,三个中药组穿越时间[(13.3±6.15)s,(12.19±5.11)s,(11.7±4.75)s]明显多于两模型组(P<0.01);③两模型组大鼠的站立次数[(4.79±3.47)次,(5.30±3.76)次]明显减少(P<0.01);三个中药组[(7.55±6.56)次,(8.12±4.99)次,(9.51±6.02)次]明显多于两模型组(P<0.05);④两模型组大鼠的悬尾不动时间[(83.42±29.18)s,(85.89±31.10)s]明显增多(P<0.01);与两模型组比较,三个中药组[(117.24±39.46)s,(121.87±39.88)s,(112.21±32.62)s]明显少于两模型组(P<0.01);⑤垂体中,甘麦大枣汤、四逆散以及四君子汤组NGF水平[(115.68±9.64)pg/mg,(209.63±17.44)pg/mg,(171.86±14.32)pg/mg]明显增加(P<0.01);下丘脑,四君子汤组[(12.02±11.43)pg/mg]与正常和模型Ⅱ组[(40.61±39.7)pg/mg,(39.46±31.88)pg/mg]相比NGF水平明显降低(P<0.05),四逆散组和甘麦大枣汤组[(7.53±9.16)pg/mg,(5.01±6.01)pg/mg]与正常组和模型Ⅰ、Ⅱ组相比水平明显降低(P<0.01);血浆中NGF水平,模型Ⅰ、Ⅱ组[(33.27±27.16)pg/ml,(39.46±31.88)Pg/ml]分别与正常组[(97.87±11.58)pg/ml]相比水平明显降低(P<0.05、P<0.01),四君子汤组[(93.57±7.86)pg/ml]NGF水平明显增加(P<0.05),四逆散以及四君子汤组[(90.50±10.35)pg/ml,(89.71±7.25)pg/ml]NGF水平差异无显著性,但有增加的趋势.结论 中药养心安神的甘麦大枣汤、疏肝理气的四逆散以及健脾益气的四君子汤对内源性NGF的水平有调节作用,为中西医结合阐明药物作用和疾病发病机制以及改善慢性应激相关疾病的治疗提供了依据.     

小四五颗粒对糖尿病大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统的影响

[目的]观察中药复方小四五颗粒对糖尿病(DM)模型大鼠肾脏肾素-血管紧张素系统(RAS)的影响。[方法] Wistar大鼠24只,随机分为正常组、模型组和小四五颗粒组(中药组);除正常组外,其他大鼠均腹腔一次性注射链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg复制DM模型;中药组灌胃小四五颗粒1.8 g·kg-1·d-1,其他2组给予等客积生理盐水,连续12周;采用放射免疫法检测肾脏血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,紫外分光光度法检测大鼠肾皮质血管紧张素转化酶(ACE)活性,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测大鼠肾皮质血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)mRNA含量。[结果]模型组肾脏AngⅡ浓度、肾皮质ACE活性均升高,肾皮质AT1 mRNA含量降低,与正常组比较均有显著性差异(P<0.01);中药组肾脏AngⅡ浓度、肾皮质ACE活性均降低,与模型组比较均具有显著性差异(P<0.05),AT1 mRNA含量与模型组比较无显著性差异。[结论]小四五颗粒治疗DM肾损伤的机制可能与其对DM肾脏内RAS活化具有一定调节作用有关。     

缬沙坦对肝硬化患者血清血管紧张素Ⅱ TGF-β1 的影响

目的:探讨缬沙坦对肝硬化患者血清血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)转化生长因子-β1 (TGF-β1 )的影响及意义.方法:40例肝硬化患者被随机分为治疗组和对照组各20例,两组均给予常规治疗,治疗组在常规治疗基础上加用缬沙坦80mg/d,于治疗前及治疗6个月时采用ELISA法检测血清AngⅡ、TGF-β1. 结果:治疗前肝硬化患者血清AngⅡ(167.84±64.81vs 51.13±15.95pg/l)及TGFβ1 (181.12±32.63 vs31.46±10.39μg/l)水平均明显高于健康人,应用缬沙坦治疗后血清AngⅡ(168.67±69.03vs218.46±74.79 pg/l)较治疗前升高,而血清TGFβ1 (182.22±30.60vs121.77±13.84 μg/l)较治疗前下降,差异均有显著性.结论:血管紧张素ⅡⅠ型受体拮抗剂缬沙坦能降低血清TGFβ1 水平,具有一定的抗纤维化作用.     

心钠素对高血压大鼠动脉平滑肌细胞离子泵活性和基因表达的影响

目的 探讨心钠素(ANP)对自发性高血压大鼠(SHR)动脉平滑肌细胞膜(ASMC)Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α,亚单位、Ca+-ATP)酶亚型1(PMCA1)mRNA表达的影响.方法 对SHR大鼠,予不同浓度ANP和血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)干预,通过放射免疫、生化酶学和逆转录-聚合酶链反应等方法,检测ASMC的ANP、AngⅡ含量,ATP酶活性及其mRNA表达变化并设WKY大鼠为对照.结果 SHR大鼠ANP含量比WKY大鼠下降[(7.3±2.4)pg·10-6比(19.3±3.3) Pg·10-6,P＜0.01],Ang Ⅱ含量增加[(57±4)pg·10-6比(44±4) pg·10-6,P＜0.01],Na+,K+-ATP酶、Ca2+-A11)酶活性及Na+,K+-ATP酶α1亚单位、PMCA1 mRNA表达均显著降低[Na+,K+-ATP:(4.3±0.8) μmol·h-1·mg-1比(5.3±1.0) μmol·h-1·mg-1,Ca2+-ATP酶:(3.2±0.7)μmol·h-1·mg-1比(4.5±0.7) μmol·h-1·mg-1,α1亚单位:0.524±0.025比0.704±0.116,PMCA1:0.193±0.030比0.547±0.045](P＜0.05～P＜0.01).ANP可增加SHR大鼠Na+,K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性及Na+,K+-ATP酶α1,亚单位及PMCA1 mRNA表达(均P＜0.01),Ang Ⅱ则抑制Ca2+-ATP酶活性和PMCA1 mRNA表达(P＜0.05～P＜0.01),仅1×10-7 mol/L AngⅡ抑制Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性及其mRNA表达的效应.ANP也能拮抗AngⅡ对WKY大鼠Ca2+-ATP酶活性及PMCA1mRNA表达的效应,对Na+,K+-ATP酶活性及α1亚单位mRNA表达无影响(P＞0.05).结论 高血压大鼠ASMC两种ATP酶活性和基因表达下降与局部ANP和AngⅡ分泌异常有关,ANP能拮抗AngⅡ对两种ATP酶活性和基因表达的效应.     

持续光照对SD大鼠血浆血管紧张素Ⅱ及靶器官损害的影响

目的 利用持续光照处理的不同性别SD大鼠,探讨其血压改变与血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、心脏和肾脏靶器官改变间的关系,以及对肾脏局部血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)表达的影响。方法 41只成年SD大鼠分为持续光照组(雄性、雌性各11只)及正常光照组(雄性9只,雌性10只),持续光照组给予持续40 d不间断光照处理,正常光照组为每日光照-黑暗周期12 h∶12 h。每10天监测并记录大鼠尾动脉血压变化;40 d后取血标本检测血浆AngⅡ水平;收集心脏、肾脏称重并取材,行组织结构测量并采用免疫组织化学染色检测AT1R在肾脏集合管的表达情况。结果 实验第10、20和30天,雄性及雌性持续光照组大鼠尾动脉收缩压均明显高于同性别正常光照组(P<0.05)。雄性持续光照组大鼠血浆AngⅡ水平高于雄性正常光照组,但差异无统计学意义[(296.4±58.9)pg/mL vs.(276.7±54.8)pg/mL,P>0.05];雌性持续光照组大鼠血浆AngⅡ水平明显高于雌性正常光照组[(288.2±98.9)pg/mL vs.(200.8±48.8)pg/mL,P<0.05]。雄性及雌...     

金属硫蛋白对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响

目的:观察抗氧化剂金属硫蛋白(metallothionein,MT)对糖尿病大鼠肾脏氧化应激指标及NADPH氧化酶的影响,探讨MT对糖尿病大鼠肾脏保护作用的可能机制.方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC,n=8)、糖尿病模型组(DM,n=7)以及糖尿病MT治疗组(DM MT,n=8),糖尿病大鼠腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)制备糖尿病大鼠模型,DM MT组大鼠给予10 g/kg体质量MT灌胃.4周后检测各组大鼠24 h尿蛋白(24 h UP)和肾质量/体质量(KW/BW)值,评价肾脏功能,比色法检测肾脏丙二醛(MDA)含量,real-time PCR法检测NADPH氧化酶亚基p47phox、p22phox,蛋白激酶C(PKC)-β和血管紧张素原(Ang)mRNA表达.结果:与NC组相比,DM组24 h UP、KW/BW以及肾皮质MDA水平明显升高(P＜0.05);肾皮质p47phox、p22phox、PKC-β和Ang mRNA表达显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与DM组相比,DM MT组24 h UP、KW/BW以及肾皮质MDA水平降低(P＜0.05),p47phox、PKC-β和Ang mRNA的表达水平降低(P＜0.05),而p22phox无明显改变.结论:MT可能通过降低糖尿病大鼠肾脏氧化应激水平,抑制肾皮质PKC-β、Ang以及NADPH氧化酶亚基的表达,从而发挥肾脏保护作用.     

厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌组织血管紧张素转换酶2表达的影响

目的 探讨厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌组织血管紧张素转换酶2(ACE2)mRNA表达的影响.方法 将30只8周龄雄性Wismr大鼠随机分为正常对照组(Ctrl组,n=7)、糖尿病组(DM组,n=14)和50mg/kg厄贝沙坦干预组(DM+Irb50组,n=9),一次性腹腔注射链脲佐菌素5 mg/kg,72 h后血糖大于16.7 mmol/L纳入糖尿病组,造模成功后4周,灌胃法给予相应剂量厄贝沙坦,继续喂养8周.ELISA测定各组大鼠心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量;实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌组织ACE2 mRNA表达.结果 糖尿病大鼠心肌组织AngⅡ显著升高,厄贝沙坦干预后,AngⅡ水平显著降低(P<0.001).DM+Irb50组大鼠心肌组织ACE2 mRNA表达显著高于正常对照组和DM组(P<0.05).结论 厄贝沙坦可上调心肌组织ACE2 mRNA表达,这可能是其改善心功能的机制之一.     

喹磺环己酮对大鼠糖尿病肾病的作用及对肾脏AngⅡ、VEGF表达的影响

目的研究喹磺环己酮对大鼠糖尿病肾病的作用及对肾脏血管紧张素Ⅱ(angiotensin II,AngⅡ)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法选取40只8周龄SD健康大鼠,随机选取其中10只作为正常组,其余30只建立糖尿病肾病大鼠模型。模型成功后随机将两组糖尿病肾病大鼠分为模型组10只和给药组20只,给药组每5只大鼠注射相同剂量,分别使用5、10、15、30 mg/kg的喹磺环己酮灌胃,对照组和模型组大鼠给予等剂量的生理盐水灌胃。检测给药组、正常组大鼠尿白蛋白排泄率(Uaer)、肾小球滤过率(GFR)。对三组大鼠空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、24 h尿微量白蛋白(24hU-mAlb)、β2微球蛋白(β2-MG)、血尿素氮(BUN)水平进行检测,对大鼠肾脏组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA、凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体(LOX-1)mRNA及AngⅡ、VEGF表达水平,并作组间比较。结果其中剂量为15 mg/kg时大鼠Uaer、GFR水平趋近于正常Uaer、GFR水平,因此认为15 mg/kg为适宜给药剂量,下文研究均以15 mg/kg的剂量进行研究。模型组、给药组大鼠FBG、HbA1c、HOMA-IR、24hU-mAlb、β2-MG、BUN水平均高于正常组(P0.05);模型组、给药组大鼠肾脏组织中MCP-1 mRNA、LOX-1 mRNA、肾脏组织中AngⅡ、VEGF表达水平均高于正常组(P0.05);给药组大鼠FBG、HbA1c、HOMA-IR、24hU-mAlb、β2-MG、BUN水平均低于模型组(P0.05)。给药组大鼠肾脏组织中MCP-1 mRNA、LOX-1 mRNA、AngⅡ、VEGF表达水平均低于模型组,具有统计学差异(P0.05)。结论喹磺环己酮可能是通过抑制糖尿病肾病大鼠肾脏组织中AngⅡ、VEGF的表达,改善大鼠肾功能和肾脏病变,最终起到肾脏保护的效果。     

SHR及SHR伴糖尿病大鼠肾皮质RAS研究

目的观察白发性高血压人鼠(SHR)及伴有糖尿病大鼠(SHR-DM)肾皮质血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)mRNA和血管紧张素转换酶(ACE)mRNA的表达,以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对肾小球系膜细胞增殖的直接作用.方法采用反转录-多聚合链式反应、细胞培养和3H-胸嘧啶核苷掺入技术.结果 1.SHR肾皮质AT1mRNA和ACEmRNA明显高于WKY(WistarKyoto)(P<0.05).2.SHR-DM的AT1mRNA和ACEmRNA与WKY接近,而较SHR明显降低(P<0.01).3.SHR血浆AngⅡ浓度和ACE活性明显低于WKY,SHR-DM与SHR比较血浆AngⅡ存在异常增高.4.AngⅡ对SHR肾小球系膜细胞具有明显刺激增殖的作用,并且呈剂量依赖关系.结论SHR肾皮质局部肾素血管紧张素系统存在过度兴奋状态,AngⅡ有直接参与肾小球结构改变、促进肾小球受损的作用.     

低蛋白饮食对糖尿病肾病大鼠肾脏肥大的影响及其机制探讨

目的:探讨低蛋白饮食对糖尿病肾病大鼠肾脏肥大的影响及其与肾小球周期素激酶抑制剂P27的关系.方法:腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病(DM)模型,分别予正常蛋白(NPD组,n=6)、低蛋白(LPD组,n=6)饮食8周,同时对正常大鼠(正常对照组,n=6)予正常蛋白饮食8周.蛋白印迹方法测定肾小球裂解液P27蛋白水平,ELISA方法测定肾小球裂解液细胞外基质(ECM)蛋白(Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白)和尿白蛋白,氧化酶法测定血糖,溴甲酚绿法测定血白蛋白,采用图像分析系统测定肾小球面积.结果:与正常对照组相比,NPD组和LPD组大鼠肾小球P27水平及ECM蛋白水平均增高,尿白蛋白排泄增多,肾质量/体质量比例增高,肾小球面积增大.同NPD组相比,LPD组大鼠肾小球P27水平降低[(11.1±3.6) vs (19.6±5.1),P<0.01],纤维连接蛋白水平[(9.8±2.9) vs (17.1±3.9)pg/mg, P<0.01]及Ⅳ型胶原水平[(99.6±23.5) vs (150.6±47.1)pg/mg, P<0.01]下降,尿白蛋白排泄减少[(18.13±3.23) vs (40.18±3.79) μg/24 h,P<0.01],大鼠肾质量/体质量比例下降[(12.03±1.85) vs (15.62±2.13),P<0.01],肾小球面积减少[(721±75) vs (815±97)μm2,P<0.01].DM大鼠肾小球P27水平与肾质量/体质量比例呈直线相关.正常对照组、LPD组和NPD组间大鼠血糖水平及血白蛋白水平无明显差别.结论:LPD可能通过降低肾小球P27水平抑制DM肾脏肥大,从而改善糖尿病肾病.     

Rho-Rock通路在血管紧张素Ⅱ诱导肝星状细胞收缩中的作用

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)促进肝星状细胞(HSC)收缩时Rho激酶介导的非Ca2+依赖性信号转导通路的作用机制.方法 采用HSC-T6细胞系,给予AngⅡ 10 μmol/L处理,聚硅酮膜法直观检测HSC的收缩性;蛋白质印迹法检测肌球蛋白轻链(MLC)和磷酸化MLC表达水平.观察ArtsⅡ1型受体阻断剂伊贝沙坦、蛋白激酶C特异性抑制剂stauro、Rho激酶特异性抑制剂Y27632、肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7对磷酸化MLC表达水平的影响;逆转录聚合酶链反应检测Rho-Rock通路RhoA激酶2(Rock2)、RhoAGTP、Rho鸟核苷酸转化因子(RhoGEF)mRNA的表达.结果 AngⅡ可诱导HSC收缩;还可诱导磷酸化MLC蛋白水平的变化,并呈时间依赖性,15 min达到峰值后逐渐减低.AngⅡ+伊贝沙坦组和AngⅡ+Y27632组诱导的MLC蛋白磷酸化水平均低于AngⅡ组(1.12±0.09、1.22±0.10 vs 1.33±0.06,P=0.003);而AngⅡ+ML-7+stauro组磷酸化MLC蛋白水平(1.43±0.09)高于AngⅡ+Y27632组(P=0.003);AngⅡ+Y27632+ML-7+stauro组水平较低(0.64±0.04,P=0.000).Ang Ⅱ组Rock2、RhoAGTP、RhoGEF mRNA的表达均高于相应对照组(0.36±01vs0.12±0.01、0.80±0.01 vB 0.40±0.02、0.65±0.11 vs 0.33±0.09,均P＜0.05),AngⅡ+伊贝沙坦组3种元件的表达均低于Ang Ⅱ组.Ang Ⅱ+Y27632组Rock2与RhoGEFmRNA的表达(0.15±0.01、0.28±0.08)较Ang Ⅱ组低,RhoA GTP的表达(1.14±0.02)则较高.AngⅡ+ML-7+stauro组3种元件的表达均高于对照组,AngⅡ+Y27632+ML-7+stauro 3组3种元件的表达(0.23±0.01、0.83±0.02、0.69±0.08)均高于AngⅡ+ML-7+stauro组(均P＜0.05).结论 Ang Ⅱ可以通过Rho-Rock通路来诱导HSC的收缩.     

ACE2基因过表达对糖尿病心肌病大鼠心功能的影响

目的研究腺病毒为载体的血管紧张素转换酶-2(ACE2)基因转染对大鼠糖尿病心肌病(DCM)的治疗作用。方法采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型，12周后分别将生理盐水、EGFP基因、ACE2基因注入对照组、EGFP组、ACE2组大鼠心脏。转染后10d，实时荧光定量PCR比较各组大鼠ACE2mRNA的表达，转染后30d，超声检测各组大鼠的心脏功能,Masson染色测定心肌胶原含量，酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的水平。结果ACE2组分别与对照组和EGFP组比较，ACE2mRNA的表达明显升高(P<0.05)，心脏收缩和舒张功能明显改善(P<0.05)，心肌胶原和AngⅡ含量明显减少(P<0.01)。结论ACE2基因过表达可以改善糖尿病心肌病大鼠的心功能。     

肾内血管紧张素系统在2型糖尿病大鼠的肾脏发育中异常活化的机制

目的 明确在糖尿病OLETF大鼠模型的肾脏发育中肾内血管紧张素系统(RAS)的活性作用.方法 测定雄性糖尿病OLETF大鼠和正常LETO大鼠出生后第1、5、14天及第4～30周时,肾内血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量和RAS系统各组成成分的mRNA水平.结果 正常LETO大鼠和糖尿病OLETF大鼠中,AngⅡ含量在出生后第1天达到高峰,在断奶期前后(出生后1 d～4周)随着年龄的增长而逐渐下降.在出生后1d～4周龄期间,肾脏AngⅡ的含量和RAS组成成分的基因表达2组动物比较差异无统计学意义(P＞0.05).正常LETO大鼠肾内AngⅡ水平在青春期(7～11周龄)逐渐下降,然而糖尿病OLETF大鼠肾内AngⅡ水平在此期间无下降趋势,包括尿中血管紧张素原排泄率.糖尿病OLETF大鼠肾内血管紧张素原和肾素的mRNA水平明显高于正常LETO大鼠(P＜0.05),2组比较血糖的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 糖尿病OLETF大鼠在青春期缺乏维持肾内低水平AngⅡ的发育缺陷是导致肾内AngⅡ异常升高的重要原因.