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1.
目的:观察PeroxiredoxinⅡmRNA在小鼠卵巢各级卵泡和MII卵中的分布,为了解PeroxiredoxinⅡ在卵母细胞发育及成熟过程 中的功能意义提供形态学依据.方法:原位杂交方法.结果:在小鼠卵巢内,原始卵泡的初级卵母细胞未检到PeroxiredoxinⅡ mRNA的杂交信号,初级卵泡的初级卵母细胞可检到杂交信号,次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的信号明显增强.离开卵巢的 GV卵也能检到较强的杂交信号,排到输卵管的次级卵母细胞(MII卵)杂交信号与GV卵相比明显减弱.从原始卵泡到近成熟卵 泡周围的卵泡细胞均可检到杂交信号,其信号强度在卵泡发育成熟过程中未见有明显变化.卵母细胞和卵泡细胞的Peroxiredoxin ⅡmRNA杂交信号均分布在胞质.结论:提示PeroxiredoxinⅡ可能参与了卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节.  相似文献   

2.
目的:探讨小鼠体内成熟与卵泡体外培养两种情况下卵泡的雌激素受体α亚型和β亚型的分布及表达.方法:采用兔抗小鼠ERα、ERβ多克隆抗体分别对性成熟小鼠卵巢和性未成熟小鼠窦前卵泡体外培养后免疫组化染色,检测雌激素受体两种亚型的分布,并对各级卵泡的染色强度进行定量分析.结果:性成熟小鼠卵巢的免疫组化染色显示膜细胞和间质细胞ERα的染色阳性,ERβ染色为阴性;原始卵泡的颗粒细胞ERβ、ERα染色均为阴性,从初级卵泡开始至成熟卵泡的颗粒细胞ERβ的染色呈阳性,ERα染色为阴性.其中ERβ的表达水平在小窦状卵泡的颗粒细胞最高,大窦状卵泡的颗粒细胞染色次之,成熟卵泡的颗粒细胞染色下降.性成熟小鼠卵巢各级卵泡的颗粒细胞ERβ的免疫染色强度显示:除初级卵泡与小窦前卵泡之间颗粒细胞上的ERβ染色无差异外,其余各组卵泡之间颗粒细胞上ERβ的染色强度都具有显著差异(P<0.01).各级卵泡的卵母细胞两种ER亚型的染色都呈阳性.性未成熟小鼠各级卵泡的颗粒细胞、卵母细胞染色结果和染色强度定量分析结果分别同性成熟小鼠免疫组化染色和染色强度定量分析结果.结论:雌激素受体β亚型在卵泡发育中起主要作用.体内成熟和体外培养两种情况下卵泡两种雌激素受体的表达相似.  相似文献   

3.
目的:检测小鼠各期卵母细胞中血清和糖皮质激素诱导蛋白激酶3 (SGK3) mRNA和蛋白的表达及其亚细胞定位,为阐明SGK3对小鼠卵母细胞周期变化的调控作用机制提供依据。方法:通过超排卵技术收集小鼠生发泡(GV)期、生发泡破裂(GVBD)期、第1次减数分裂(MⅠ)期卵母细胞和第2次减数分裂(MⅡ)期卵母细胞,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)和Western blotting法检测各期小鼠卵母细胞中SGK3 mRNA和蛋白表达水平,收集GV、GVBD和MⅠ期卵母细胞后采用Western blotting法检测小鼠各期卵母细胞中Cdc25B-Ser30的磷酸化表达情况,免疫荧光法观察小鼠各期卵母细胞中SGK3亚细胞定位情况。结果:在小鼠各期卵母细胞中均有SGK3mRNA和蛋白表达。与GV期比较,GVBD和MⅡ期卵母细胞中SGK3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01);与GVBD期比较,MⅠ期卵母细胞中SGK3 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.01),MⅡ期卵母细胞中SGK3 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01);与MⅠ期比较,MⅡ期卵母细胞中SG...  相似文献   

4.
不同直径山羊卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的研究山羊卵巢表面不同直径卵泡卵母细胞的发育特征及体外发育能力,优化山羊早期胚胎体外生产系统。方法收集繁殖期和非繁殖期山羊卵巢,采集表面直径小于1.5 mm、1.5-2.5 mm、2.5-3.5 mm和大于3.5 mm4种卵泡卵母细胞,以Hoechst33342染色检查核发育阶段;同时,利用体外培养方法观察不同直径卵泡卵母细胞的成熟、受精和早期胚胎发育能力。结果直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞主要处于GVI期;1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞以GVⅠ、GVⅡ和GVⅢ期为主;2.5-3.5 mm卵泡卵母细胞在GVⅡ到GVⅣ期间平均分布;大于3.5mm卵泡卵母细胞主要为GVⅢ到GVBD期。体外培养实验发现,直径小于1.5 mm卵泡卵母细胞仅有个别能完成成熟和卵裂;大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,能完成成熟和受精,但1.5-2.5 mm卵泡卵母细胞的受精卵通常阻滞于4-8细胞期;当卵泡直径大于2.5 mm时,卵母细胞才能较好地支持胚胎继续发育,其桑/囊胚的比例达到30%以上。卵泡卵母细胞的发育特征和体外发育能力与动物所处的繁殖季节无关。结论山羊卵巢上直径大于1.5 mm卵泡卵母细胞具有核成熟能力,大于2.5 mm卵泡卵母细胞能支持早期胚胎继续发育。  相似文献   

5.
Cyclin G1在小鼠卵巢的表达及其与卵泡发育的关系   总被引:4,自引:1,他引:3  
目的观察细胞周期素G1(Cyclin G1)在小鼠卵巢中各级卵泡的表达及其与卵泡发育的关系。方法性成熟前小鼠用孕马血清促性腺激素(PMSG)刺激卵泡生长,用绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激卵泡排卵及向黄体转化。于给药后不同时间取出卵巢,用免疫组化方法检测不同发育阶段卵泡Cyclin G1蛋白的表达和分布;用细胞免疫荧光方法检测不同成熟阶段的卵细胞中Cyclin G1蛋白表达。结果免疫组化染色结果显示,颗粒细胞中Cyclin G1的表达水平随卵泡发育成熟而逐渐增强,且一直定位在胞核;Cyclin G1在各个时期卵泡的卵母细胞中均有表达。该表达的定位与卵泡生长发育的不同阶段有关。随着卵泡的发育,Cyclin G1在卵母细胞的表达由胞核转至胞浆。至排卵前卵泡颗粒细胞,Cyclin G1表达水平减弱,当颗粒细胞分化为黄体细胞后表达水平进一步减弱。闭锁卵泡中Cyclin G1的表达水平很弱。细胞免疫荧光染色结果显示,处于生发泡时期(GV)卵母细胞仅有较弱的Cyclin G1表达,当卵母细胞生发泡破裂(GVBD)后,该表达增强;与处于第二次减数分裂中期(MⅡ)的卵母细胞相比,受精卵的Cyclin G1表达明显增强。结论Cyclin G1在小鼠卵泡发育及卵母细胞成熟过程中的表达具有时空特异性,可能作为细胞周期的正调节因子参与了卵泡生长发育和卵母细胞成熟过程的调控。  相似文献   

6.
目的:探讨培养液中添加17β-雌二醇(17β-E2)对小鼠生殖泡期(GV)带卵丘细胞卵母细胞体外成熟、受精及其胚胎发育的影响.方法:小鼠生殖泡期卵母细胞随机分为2组:对照组(n=61,TCM199基础培养液加体积分数10%胎牛血清加75 U/L 卵泡刺激素加0.5 kU/L 人绒毛膜促性腺激素加0.05 g/L青霉素加0.075 g/L链霉素)和17β-E2组(n=66,对照组液加1 mg/L 17β-E2),培养后对成熟的卵母细胞行胞浆内单精子显微注射,观察受精及胚胎发育情况.结果:17β-E2组卵母细胞的桑葚胚、囊胚形成率均高于对照组(P均<0.05).结论:成熟培养液中加入17β-E2有助于小鼠未成熟有卵丘细胞卵母细胞的体外成熟及受精后胚胎发育.  相似文献   

7.
目的 探讨cGMP特异性结合的磷酸二酯酶5(PDE5)在小鼠卵巢内的定位和表达情况.方法 应用免疫组织化学对小鼠卵巢切片进行染色,检测PDE5在卵巢内不同部位的表达情况.利用Western blot检测PDE5在小鼠不同组织和细胞内的表达情况.结果 PDE5在小鼠卵巢的黄体细胞(CL)和卵泡膜细胞(TC)上有强表达,卵母细胞(Oos)上以及大有腔卵泡的卵丘细胞(CCs)也有表达,而在小卵泡的颗粒细胞上没有表达.结论 揭示了PDE5在小鼠卵巢内的表达情况,为进一步研究PDE5对卵巢功能的调节提供了生理学基础.  相似文献   

8.
应用免疫细胞化学LSAB法和孕酮受体抗体研究了雌性小鼠生殖系统、垂体和大脑中孕酮受体的分布及其与胚泡植入的关系。结果:孕酮受体主要分布于子宫和阴道,输卵管中含量极少。它们均位于细胞核内,胞质为阴性。卵巢、垂体和大脑未见阳性反应细胞。孕酮受体在子宫内膜表面上皮和间质中的含量变化与胚泡植入平行发展。结果提示:子宫内膜在为胚泡植入做准备的过程中与孕酮受体的关系密切。  相似文献   

9.
目的探讨CD44和间α胰蛋白酶抑制剂(ITI)在小鼠卵丘-卵母细胞复合体的表达及两者的相关性.方法应用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光双重染色技术观察小鼠卵丘-卵母细胞复合体中CD44和ITI的分布.结果ITI在小鼠卵丘细胞外基质之间呈阳性表达,CD44存在于卵丘细胞膜表面.结论CD44和ITI的阳性表达可能在卵丘-卵母细胞复合体成熟中起重要作用.  相似文献   

10.
目的: 研究在人卵子发生过程中PTEN基因与卵母细胞的关系.方法: EnVision免疫组化染色方法检测人卵巢组织中卵母细胞PTEN与PCNA的表达;原位杂交法检测人卵巢组织中卵母细胞PTEN mRNA表达.结果: 8/10例人卵巢的卵母细胞表达PTEN蛋白,10/10例卵母细胞表达PCNA,同时人卵巢次级卵泡内层卵泡膜细胞(theca interna)也表达PTEN,但卵巢的颗粒细胞、卵泡细胞和间质细胞大多不表达或弱表达PTEN与PCNA.PTEN mRNA表达结果基本与 PTEN蛋白一致,7/10例人卵巢的卵母细胞表达PTENmRNA,卵巢的卵泡细胞和间质细胞大多不表达或弱表达PTENmRNA.结论: PTEN的表达可能与卵母细胞的生长、成熟和变大有关.  相似文献   

11.
层粘连蛋白在小鼠胚胎早期发育期间的表达与分布   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:研究发育不同阶段早期小鼠胚胎中层粘连蛋白(1aminin,LN)的表达与分布变化,以进一步探讨LN与胚胎细胞分化及着床的关系.方法:取植入前发育不同阶段的单个小鼠胚卵,应用免疫荧光间接法和酶免疫组织化学ABC等方法观察早期胚胎中LN的表达时间、强弱及分布状况.结果:从原核期、Ⅱ细胞期至Ⅷ细胞期胚,卵裂球内均可见LN强免疫荧光或棕色LN阳性反应颗粒,卵裂球外间质中LN则为阴性反应.到桑椹胚期,卵裂球内及间质中同时出现LN阳性反应物质.早期胚泡中LN主要分布在内细胞团,滋养层细胞间质中也有分布.晚期胚泡滋养层细胞内LN表达增强,细胞间质中转为阴性,近内细胞团侧的滋养层与内细胞团处,均表达出LN强阳性反应.结论:早期小鼠胚胎的卵裂球中含有LN;桑椹胚期LN在细胞间质中出现;胚泡侵入子宫内膜期间近内细胞团侧的滋养层细胞及内细胞团中的LN含量增加;小鼠早期胚胎中LN与其发育及粘附着床正相关.  相似文献   

12.
改进的核移植方法完成小鼠卵丘细胞重组胚的早期发育   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的建立一种快速、简便、有效且损伤小的核移植方法,研究来源于小鼠体细胞重组胚的早期发育。方法用尖锐的去核针在MⅡ期卵母细胞透明带上切开一个25mm左右的小口,首先将第一极体挑出.再轻轻地挤压和负压吸引卵母细胞,去除包含有MⅡ期染色体.纺锤体复合体的最少量细胞质。随后,将直径为10~12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核.卵母细胞复合体。用电融合的方法诱导复合体融合.并对重组胚激活。体外培养72h.对重组胚发育到2细胞、4~8细胞和桑椹胚期等各阶段进行观察和计数。结果完成一个MⅡ期卵母细胞去核的平均时间为15s;Hoechst 33342染色证明可以完全去除MⅡ期卵母细胞细胞核;去核成功率为95.5%,注核成功率为76.7%,供体核.卵母细胞复合体融合和重组胚原核形成率分别为68.2%和62.2%;重组胚体外培养72h内发育到2细胞、4-8细胞和桑椹胚期的比率分别为57.5%、39.1%和27.6%;用2个微卫星位点D7Mit22和D4Mit204引物,扩增不同发育阶段重组胚的DNA片段,表明重组胚来源于供体卵丘细胞。结论应用改进的核移植方法,不仅可以有效地去除卵母细胞细胞核,去核成功率高,而且操作简便,去核迅速,对卵母细胞损伤小.是研究小鼠体细胞核移植的一种简便可行的新方法。  相似文献   

13.
不同核移植方法对小鼠体细胞核移植效率的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:研究不同核移植方法对小鼠体细胞核移植效率的影响,建立一种简单有效的核移植方法.方法:以小鼠卵丘细胞作为体细胞核移植的供核细胞,采用4种去核方法(盲吸法、蔗糖辅助去核法、化学去核法、荧光染色去核法)研究卵母细胞去核率的差异,并比较胞质内注射法和反向核移植法应用于小鼠体细胞核移植的效果.结果:荧光染色法的去核率(88%)显著高于其他试验组(P<0.05),但囊胚率和囊胚细胞数与蔗糖辅助去核法无明显差异(P>0.05);胞质内注射法构建重构胚的效率与反向核移植法相似(P>0.05),但胞质内注射法的囊胚率和囊胚细胞数较反向核移植高(P<0.05).结论:荧光染色去核法和胞质内注射法构建体细胞核移植胚胎效率较高,可维持胚胎早期发育.  相似文献   

14.
改进的核移植方法完成小鼠卵丘细胞重组胚的早期发育   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的建立一种快速、简便、有效且损伤小的核移植方法,研究来源于小鼠体细胞重组胚的早期发育。方法用尖锐的去核针在MⅡ期卵母细胞透明带上切开一个25mm左右的小口,首先将第一极体挑出,再轻轻地挤压和负压吸引卵母细胞,去除包含有MⅡ期染色体-纺锤体复合体的最少量细胞质。随后,将直径为10~12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核-卵母细胞复合体。用电融合的方法诱导复合体融合,并对重组胚激活。体外培养72h,对重组胚发育到2细胞、4~8细胞和桑椹胚期等各阶段进行观察和计数。结果完成一个MⅡ期卵母细胞去核的平均时间为15s;Hoechst33342染色证明可以完全去除MⅡ期卵母细胞细胞核;去核成功率为95.5%,注核成功率为76.7%,供体核-卵母细胞复合体融合和重组胚原核形成率分别为68.2%和62.2%;重组胚体外培养72h内发育到2细胞、4~8细胞和桑椹胚期的比率分别为57.5%、39.1%和27.6%;用2个微卫星位点D7Mit22和D4Mit204引物,扩增不同发育阶段重组胚的DNA片段,表明重组胚来源于供体卵丘细胞。结论应用改进的核移植方法,不仅可以有效地去除卵母细胞细胞核,去核成功率高,而且操作简便,去核迅速,对卵母细胞损伤小,是研究小鼠体细胞核移植的一种简便可行的新方法。  相似文献   

15.
[目的]观察小鼠卵丘细胞核移植到体内成熟卵浆构成的重构卵的发育.[方法]昆明小鼠超排后获取体内成熟卵母细胞及卵丘细胞.成熟卵子去核后用将卵丘细胞核与精子直接注入,观察其受精和胚胎发育情况.[结果]卵子去核存活率为75.9%(362/477),注核存活率为39.8%(143/359),D1存活率为38.4%(138/359).39.9%(57/143)重构卵子成功排出一个极体并形成两原核,其卵裂率为80.7%(46/57).大部分重构胚发育到2~3细胞停滞,其中2个分裂至4细胞,无囊胚形成.[结论]将小鼠卵丘细胞核、精子同时移植到小鼠的体内成熟卵浆中,可以诱导极体排出,形成2原核 1极体的重构胚胎.重构胚胎大部分发育到2~3细胞即发生停滞,最多到达4细胞期,发育潜能差.  相似文献   

16.
目的 探讨他克莫司结合蛋白38(Fkbp38)在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全(POI)的机制。方法 采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠,并应用PCR鉴定小鼠基因型,然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平,明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6(PS6)活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl2-Associated X(BAX)表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果 卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降,性激素水平紊乱,卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少(P<0.05),引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后,mTOR信号通路激活,颗粒细胞凋亡增加,卵母细胞内BAX蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高(P<0.05)。结论 Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用,其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。  相似文献   

17.
目的 探讨卵丘颗粒细胞高尔基磷酸化蛋白-3(GOLPH3)表达对单精子卵胞浆内注射(ICSI)助孕结局的影响.方法 收集2012年4月~2014年6月,因男性不育症行ICSI助孕的119例女性患者的卵丘颗粒细胞,采用细胞免疫化学,Western bloting方法检测颗粒细胞GOLPH3蛋白的表达,采用real-time荧光定量PCR方法检测GOLPH3基因表达.比较分析ICSI妊娠组与非妊娠组病例卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率差异,并分析它们与ICSI实验室结局各项指标:穿卵泡数、获卵数、获卵率;受精数、受精率;卵裂数、卵裂率;优质胚胎数、囊胚形成数及囊胚冷冻数之间的相关关系.结果 对119份卵丘颗粒细胞涂片进行免疫细胞化学分析GOLPH3的表达,结果发现GOLPH3主要表达在细胞质中,妊娠组与未妊娠组卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率与表达强度组间差异均有统计学意义(P均<0.05).卵丘颗粒细胞GOLPH3表达率与ICSI实验室结局指标:穿卵泡数,Ⅲ级OCCs数,ICSI卵子数,受精数,卵裂数,平均优质胚胎数,平均囊胚数,优质囊胚数,平均冷冻胚胎数等呈显著正相关关系(P均<0.01).Real-Time PCR,Western blot检测妊娠组与未妊娠组颗粒细胞GOLPH3蛋白与基因表达组间差异也均有统计学意义(P均<0.05).结论 GOLPH3在卵丘颗粒细胞的表达,可能影响卵母细胞的成熟,卵子的发育能力,进而与ICSI助孕结局有关.  相似文献   

18.
目的 探讨淫羊藿甙对早期卵泡发育和卵母细胞凋亡的影响.方法 用淫羊藿甙对受孕11.5 d大鼠灌胃[100mg/(kg·d)]直至生产,分别取淫羊藿甙灌胃组(试验组)和空白对照组中出生2 d、4 d、8 d龄新生大鼠卵巢,用苏木素-伊红(hematoxylin-eoxin,HE)染色观察不同发育阶段卵泡比例,TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)荧光染色检测卵巢内卵母细胞凋亡变化,免疫组化染色观测caspase-3的定位和表达水平.结果 在试验组新生大鼠,2d龄卵巢卵母细胞巢内卵母细胞比例增高,原始卵泡比例下降;4 d龄卵巢中原始卵泡比例显著增高,发育卵泡比例降低;8d龄卵巢各不同发育阶段卵泡比例与对照组相一致;试验组2d卵巢内TUNEL阳性率降低;Caspase-3主要在卵母细胞巢和原始卵泡的卵母细胞中表达,2 d卵巢表达水平高于4 d卵巢.结论 淫羊藿甙能延缓新生大鼠卵母细胞巢破裂,抑制原始卵泡的发育启动,减少卵泡的消耗;能降低2 d龄卵巢卵母细胞的凋亡率,抑制卵母细胞凋亡,增加原始卵泡池的储备量.  相似文献   

19.
酪氨酸蛋白激酶受体B在人卵泡中的表达及意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨酪氨酸蛋白激酶受体B(tyrosine kinase receptor B, TrkB)在人卵泡中的表达及意义。方法用免疫细胞化学方法检测TrkB在超促排卵妇女壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、未受精或未成熟卵母细胞中的表达,并用Western免疫印迹方法检测TrkB在壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞中的表达水平。结果壁层颗粒细胞、卵丘颗粒细胞、卵母细胞均有TrkB表达。壁层颗粒细胞表达量高于卵丘颗粒细胞。结论脑源性神经营养因子在人卵巢可能通过与TrkB结合,参与颗粒细胞功能的完成和卵母细胞发育的调控。  相似文献   

20.
目的研究电脉冲对不同卵龄小鼠MⅡ期卵母细胞电激活影响,寻找小鼠体细胞克隆避免电激活的适宜卵龄的卵母细胞。方法在180V/mm,9s,1个电脉冲(1p)下,比较了注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后13,16h卵母细胞经体外培养(IVC)4h的激活率、碎裂+死亡率。结果hCG后13h和16h的MⅡ期卵母细胞相比,激活率分别是6.2%和29.5%,两者间差异有极显著性意义(P〈0.01)。碎裂+死亡率两组间没有显著性差异。结论注射hCG后13h的卵母细胞为适宜的小鼠核移植的受体细胞,在一定程度上可以有效的避免电激活重构胚。  相似文献   

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