p21WAF1基因对人胰腺癌细胞系BxPC-3增殖的抑制作用

目的: 探讨p21WAF1( p21)基因转染对人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖的影响.方法: 根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组, p21转染组、空载体转染组和未转染组. 应用RT-PCR和Western blot方法检测转染细胞的p21基因表达变化; 流式细胞仪分析细胞周期变化, 用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响.结果: p21转染组细胞存在p21 mRNA高表达和P21蛋白高表达; p21转染组细胞生长速度低于对照空载体转染组和未转染组; 流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使BxPC-3细胞发生G1/S阻滞, G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(59.887%±3.700% vs 47.443%±6.354%, 49.223%±2.226%, P<0.05), S期显著低于空载体组和未转染组(21.277%±2.080%v s 35.247%±3.966%, 36.013%±1.540%,P<0.01), 并出现亚G1峰(凋亡峰). 透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论: p21基因转染可以抑制人胰腺癌细胞系BxPC-3细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.     

PEG10基因RNA干扰对人肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响

目的研究PEG10基因RNA干扰对肝癌细胞系Hep3B体外增殖的影响。方法psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞,MTT法检测细胞体外增殖速度,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果psiRNA-PEG10真核表达载体转染Hep3B细胞后,明显沉默了Hep3B mRNA和蛋白的表达,转染后48 h抑制效率最高。Hep3B细胞体外增殖受到抑制（P〈0.05）,流式细胞仪分析结果显示大量Hep3B细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察到凋亡细胞形态。结论PEG10基因RNA干扰在体外可明显沉默肝癌细胞内PEG10基因的表达,抑制肝癌细胞的生长,诱导细胞凋亡。     

抗增殖蛋白过表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响*

目的 探讨抗增殖蛋白（PHB）过表达对人肝癌细胞系HepG₂细胞增殖和凋亡的影响。方法 在已构建的PHB真核表达质粒pEGFP-N1-PHB瞬时转染HepG₂细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测HepG₂细胞增殖;使用流式细胞仪检测HepG₂细胞周期和凋亡。结果 转染pEGFP-N1-PHB细胞增殖明显低于pEGFP-N1空载转染细胞或未转染细胞（P<0.05）;在转染后48 h,转染组G2/M期细胞比例为（27.84±0.47）%,显著高于空载转染组的（17.21±0.64）%或未转染组的（22.67±0.33）%（P<0.001）;转染组细胞凋亡率为（31.72±0.35）%,显著高于空载转染组的（18.66±0.56）%或未转染组的（13.47±0.94）%（P<0.001）。结论 PHB过表达可抑制人肝癌HepG₂细胞增殖,诱导细胞进入G2/M期后被阻滞,并诱导细胞凋亡。     

p21WAF1基因对人食管鳞癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨p21WAF1( p21)基因转染对食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖的影响.方法:根据转染质粒的不同和是否进行质粒转染分为3组.p21转染组:用脂质体Lipofectamine2000介导将pCDNA3.1(+)- p21质粒转染入EC109细胞; 空载体转染组:同样方法将pCDNA3.1(+)-neo质粒转染入EC109细胞; 未转染组:未转染的EC109细胞.应用RTPCR、Western blot分别检测p21基因mRNA、P21蛋白变化; 流式细胞仪分析细胞周期变化,应用MTT、流式细胞仪和透射电镜检测转染外源p21基因对EC109细胞增殖和凋亡的影响.结果:p21转染细胞中p21 mRNA和P21蛋白高表达; p21转染组EC109细胞生长速度低于空载体组和未转染组; 流式细胞仪观察到P21蛋白高表达使EC109细胞发生G1/S阻滞,G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组(63.120%±2.893% vs 41.380%±6.536%,42.173%±5.301%,均P<0.01),S期比例显著低于空载体组和未转染组(18.923%±3.084%vs 22.573%±5.463%,26.867%±2.922%,均P<0.01),并出现亚G1峰(凋亡峰).透射电镜亦发现p21转染组发生细胞凋亡.结论:p21基因转染可以抑制人食管鳞癌细胞系EC109细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡.     

沉默FABP-5基因对人肝癌HepG2细胞的影响

目的:研究RNA干扰技术的重组慢病毒载体沉默人肝癌Hep G2细胞中表皮脂肪酸结合蛋白-5(fatty acid binding protein-5,FABP-5)基因对其增殖、凋亡和侵袭力的影响及作用机制.方法:构建3个靶向FABP-5基因sh RNA载体,并筛选出最有效的靶点.将Hep G2细胞分为3组:实验组用FABP-5基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-sh RNA-FABP-5)感染HepG2细胞;阴性对照组用空载慢病毒颗粒(LV-sh RNANC组)感染Hep G2;空白对照组正常培养.应用RT-PCR、实时荧光定量PCR检测FABP-5基因m RNA的表达;Western blot技术检测各组细胞FABP-5蛋白的相对表达;MTT法测定细胞体外增殖能力;Giemsa染色法检测细胞的克隆形成;细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力;流式细胞技术(flow cytometry,FCM)检测各组细胞增殖和凋亡的变化情况.结果:通过测序验证构建的FABP-5-shRNA表达载体,感染人肝癌HepG2细胞,荧光显微镜观察到细胞感染率90%.Real-time PCR和Western blot结果得出:相比空白对照组和阴性对照组,实验组的3种靶点FABP-5-sh RNA干扰序列中,LV-sh RNA-FABP-5(1)靶点中FABP-5表达的敲减率最高(P0.05),筛选出此组为最佳靶点;MTT法结果提示:实验组细胞490 n m处的吸光度(A)值在转染后第1-5天时均低于阴性对照组、空白对照组,差别有统计学意义(P0.05).Giemsa染色法结果显示:稳定转染Hep G2细胞后细胞的增殖能力明显下降(P0.05);细胞侵袭小室实验显示:与空白对照和阴性对照组相比,实验组细胞的侵袭力明显受到抑制(P0.05);流式细胞技术检测发现实验组的细胞相对于阴性对照组出现了明显的凋亡(P0.05).实验组较阴性对照组、空白对照组G2/M期延长,G1期缩短,差别具有统计学意义(P0.05).结论:人肝癌Hep G2细胞中沉默FABP-5基因可以有效抑制其表达,能够降低肝癌细胞的侵袭力,抑制肝癌细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G2/M期,使其凋亡显著增加.     

15-LOX-1基因表达对胃癌细胞增殖的抑制作用

目的研究15-LOX-1基因对人胃癌细胞增殖的影响。方法通过脂质体介导瞬时转染15-LOX-1基因于培养的胃癌细胞株（AGS）中，以转染空载体pcDNA3．1（＋）的细胞及未转染质粒的细胞作为对照；用RT—PCR和Westernblot检测人胃癌细胞的15-LOX-1mRNA及蛋白表达；倒置显微镜观察转染前后AGS形态变化；用MTT法比较转染前后AGS的增殖水平，流式细胞术检测转染后AGS细胞周期的变化。结果胃癌细胞系巾未检测到15-LOX—1mRNA和蛋白的表达，转染后的AGS表达有15-LOX—1的mRNA及蛋白。转染重组质粒绀细胞增殖显著低于未转染组及空质粒转染组（P〈0．05），转染后AGS细胞G0／G1期细胞明显增加，S期细胞明显减少，与未转染组及空质粒转染组相比均有显著性差异（P〈0．05）。结论15-LOX-1基因能抑制胃癌细胞的增殖，为进一步探讨胃痛的发病机制及治疗提供实验依据。     

HBV X基因转染对HepG2肝癌细胞凋亡的影响及其机制

目的:研究HBV X基因转染对HepG2肝癌细胞凋亡及凋亡相关因子表达的影响.方法:用脂质体转染法将HBx真核表达载体pcDNA3/HBx瞬时转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pcDNA3的细胞为对照.RT-PCR法检测HBx基因的表达;MTT法检测各组细胞的增殖活性;TUNEL法检测各组的凋亡情况.β-actin为内参,半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-xL、c-myc的表达量变化.结果:pcDNA3-X转染HepG2细胞后,RT-PCR扩增出HBV X片段,空质粒组及正常对照组均未扩增出相应片段.HepG2细胞转染HBx基因后,相对于对照组细胞增殖能力明显下降,凋亡增多,差异有显著性意义(P＜0.01);转染HBx的细胞Bax、Bcl-xL、c-myc mRNA相对表达量较转染空质粒组和未转染质粒组明显增高,差异有显著性意义(P＜0.05).结论:成功将HBx基因转染入HepG2细胞,并在细胞中表达,转染HBx基因可同时上调Bax、Bcl-xL、c-myc mRNA表达,促进HepG2细胞凋亡,抑制增殖.     

HBV X基因与肝细胞恶性转化相关性的初步研究

目的研究HBVX基因对L02肝细胞生物学特性的影响，初步探讨HBVX基因在肝细胞恶性转化中的作用，为进一步研究HBx致原发性肝细胞癌（HCC）的机制及HCC新的防治策略奠定基础。方法．构建稳定表达HBx的转基因细胞株L02／HBx，运用倒置相差显微镜、四唑盐（MTT）比色试验、流式细胞仪观察和检测L02／HBx在形态学、增殖、凋亡和细胞周期等方面的变化。结果成功构建L02／HBx，观察发现细胞形态发生明显改变，MTT检测结果表明L02／HBx生长速度加快但经阿霉素（ADM）处理后凋亡速度加快。流式细胞仪（FCM）检测结果显示，与对照组细胞相比，L02／HBx凋亡率及G1期细胞比例降低，S期细胞所占比例增高，二倍体细胞比例降低，非整倍体细胞比例增高。经阿霉素处理后，L02／HBx细胞的凋亡率大大增加，G1期细胞的比例仍比对照组低，S期细胞的比例亦比对照组高，二倍体细胞的比例显著降低，非整倍体细胞的比例明显增加。结论HBx能引起细胞增殖失控而导致恶性转化，在凋亡因子的作用下，HBx抑制损伤DNA的修复而促进细胞凋亡，并可能引起细胞的变异而导致恶变。     

缝隙连接蛋白26基因修饰对人高转移性肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的探讨缝隙连接蛋白(Cx)26基因对人高转移性肝癌细胞株(HCCLM3)细胞增殖和侵袭能力的影响。方法采用慢病毒载体(LV)转染法将载体LV-Cx26转染高转移性HCCLM3细胞为研究组,仅转染空载体LV-NC-Cx26为对照组,未转染的HCCLM3细胞为空白组。RTPCR和Western印迹测定转染后Cx26 mRNA和蛋白表达;划痕荷载染料传输实验检测细胞通讯功能;流式细胞术检测细胞周期并通过CCK-8增殖实验、Transwell细胞侵袭实验检测细胞增殖、侵袭能力。结果研究组Cx26 mRNA和蛋白表达量均明显高于对照组和空白组(P<0.05)。研究组转染慢病毒载体LV-Cx26后的细胞通讯功能明显强于对照组、空白组,即划痕细胞中的荧光染料可传递到相邻的3~4列细胞。研究组G0/G1期细胞数明显多于对照组和空白组,S期细胞数明显少于对照组和空白组(P<0.05)。M期三组细胞数无统计学差异(P>0.05)。CCK-8法检测显示,72 h起研究组细胞增殖速度明显低于同期对照组和空白组(P<0.05);对照组和空白组各时间点细胞增殖情况无统计学差异(P>0.05)。Transwell细胞侵袭实验显示,研究组穿膜细胞数明显少于对照组和空白组(P<0.05)。结论转染Cx26基因可有效抑制HCCLM3细胞的增殖和侵袭能力,降低恶性生物学特征,可成为晚期肝癌治疗的新思路。     

胰岛素对人肝癌HepG2细胞的侵袭特性及增殖能力的影响

目的探讨不同浓度胰岛素对肝癌细胞系Hep G2侵袭特性及体外增殖能力的影响及其可能机制。方法将人肝癌细胞系Hep G2细胞培养于不同胰岛素浓度的高糖培养基中,应用预铺Matrigel基质胶的Transwell小室检测不同胰岛素浓度对Hep G2细胞侵袭能力的影响;应用PI单染流式细胞仪技术检测不同浓度胰岛素对Hep G2细胞周期的影响;运用CCK-8方法检测不同浓度胰岛素对Hep G2细胞增殖能力的影响;同时应用RT-PCR检测不同胰岛素浓度培养的Hep G2细胞中MMP-2、、MMP-9转录水平的变化。结果在一定浓度范围内,Hep G2细胞的侵袭能力与胰岛素浓度成正相关(P0.05);在一定浓度范围内,高浓度胰岛素能促进Hep G2细胞的体外增殖能力,并加快Hep G2细胞G0/G1至S期转换,加快细胞周期的进展(P0.05);在一定浓度范围内,Hep G2细胞MMP-2、MMP-9转录水平与胰岛素浓度成正相关(P0.05)。结论在一定浓度范围内,胰岛素可能通过上调基质金属蛋白酶表达水平促进Hep G2的侵袭能力,并通过驱动Hep G2细胞G0/G1至S期转换促进Hep G2细胞的增殖能力。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.