乳腺癌患者骨髓GalNAcT mRNA的检测及其临床意义

目的：研究乳腺癌患者骨髓β1，4-N-乙酰半乳糖胺转移酶（GalNAcT）mRNA的表达，探讨其作为乳腺癌骨髓微转移检测指标对临床的应用价值。方法：对40例乳腺癌患者的骨髓及外周血采用巢式RT—PCR方法检测GalNAcT mRNA表达，同时以免疫组化的方法检测骨髓标本中细胞角蛋白（cytokeratin，CK）的表达。结果：40例患者骨髓中GalNAcT mRNA阳性表达17例（42．5％），外周血阳性表达7例（17．5％）；10例血液系统良性疾病患者骨髓和15例健康志愿者外周血中GaINAcT mRNA均为阴性。免疫组化结果显示：40例乳腺癌骨髓中有11例（27．5％）CK阳性，其GalNAcT mRNA都阳性；有6例（15．0％）CK阴性而GalNAcT mRNA阳性。结论：RT—PCR和免疫组化都是检测乳腺癌患者骨髓微转移的可靠的方法，但前者的敏感性高于后者。GalNAcT mRNA可作为一种新的肿瘤标志物来检测乳腺癌患者骨髓微转移。     

检测CK19 mRNA、CEA mRNA诊断非小细胞肺癌外周血微转移

目的 探讨检测细胞角蛋白(cytokeratin 19，CK19)mRNA、癌胚抗原(cancer embryonic antigen，CEA)mRNA诊断非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者外周血微转移的临床意义。方法 应用RT-PCR法检测35例NSCLC患者外周血中的CK19mRNA、CEAmRNA，并以20例良性病变、20例健康人作对照。结果 35例NSCLC患者外周血CK19mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为40％和57％，两者均阳性者40％，两者均阴性者43％；肺良性疾病患者20例，CK19mRNA阳性2例(10％)，无CEAmRNA阳性者；20例健康对照2个指标检测结果均为阴性。随访发现CK-19mRNA阳性、CEAmRNA阳性和二者均阴性患者的远处转移率分别为50％、56％和27％。结论CEAmRNA和CK19mRNA是检测肺癌患者外周血微转移的良好标志物，检测外周血微转移有助于预测肺癌患者预后。     

实时荧光定量RT-PCR检测肺癌、癌旁组织及外周血中CK19 mRNA的表达及临床意义

目的 探讨角蛋白CK19在肺癌患者癌和癌旁组织及外周血循环细胞中的表达特点及其临床意义。方法 采用实时荧光定量RT-PCR的方法对62例肺癌患者癌和癌旁组织内CK19mRNA表达进行检测，并与其对应的外周血中的CK19 mRNA表达结果进行比较。结果 62例肺癌患者的癌和癌旁组织和外周血中CK19mRNA均有表达（分别为61．2％、32．2％、40．3％），而肺癌组织中CK19mRNA水平明显高于癌旁组织，两者差异显著（P〈0．05）。外周血中CK19mRNA的表达与临床分期和病理类型无关；却与肺癌组织中CK19mRNA的高表达水平及淋巴结是否转移密切相关；健康对照组则无阳性。结论 实时荧光定量RT-PCR方法检测肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达有较高的敏感性和特异性，且操作方便，在肿瘤微转移的诊断监测方面有一定的应用价值。     

非小细胞肺癌患者淋巴结、外周血及骨髓微转移分子诊断在肺癌外科治疗中的作用

目的 探讨检测肺癌患者区域淋巴结、外周血和骨髓中微转移在肺癌外科治疗中的临床意义,以及区域淋巴结、外周血和骨髓肺癌微转移三者之间的相关性。方法 应用巢式RT－PCR技术,对29例肺癌患者和11例肺良性病变患者的淋巴结、外周血和骨髓中CK19基因mRNA表达进行联合检测。结果 本实验建立的巢式RT－PCR技术的敏感性可达到10^-6。术前10例患者检测到外周血微转移,6例患者检测到骨髓肺癌微转移,101枚纵隔淋巴结中55枚检测到肺癌微转移。肺癌患者淋巴结、外周血和骨髓中微转移阳性检出率分别为54．5％、34．5％和20．7％,三者之间存在显著正相关（P＜0．05）,外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P－TNM分期均存在密切关系（P＜0．05或P＜0．01）。结论 RT－PCR法是一种特异性,敏感性均较高的肿瘤微转移检测方法;检测CK19 mRNA表达应用于肺癌微转移的分子诊断有助于选择外科手术适应证,并具有广阔的临床应用前景。     

巢式PCR检测CK19 mRNA和LUNX mRNA诊断肺癌淋巴结微转移

目的：探讨非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）淋巴结微转移的基因诊断方法，并分析CK19 mRNA、LUNX mRNA作为肺癌微转移检测分子标记物的可行性。方法：采用巢式RT—PCR技术检测39例NSCLC患者的149枚淋巴结和20例肺良性病变患者的47枚淋巴结中的细胞角蛋白19（CK19 mRNA）、肺特异性X蛋白（LUNX mRNA）的表达。结果：39例NSCLN患者的149枚淋巴结中，46枚（30．9％）淋巴结存在CK19 mRNA阳性表达，56枚（37．6％）存在LUNX mRNA阳性表达，常规病理组织学检出20枚（13．4％）有癌转移，巢式RT—PCR方法和常规病理方法比较差异有统计学意义（P〈0．01）；20例肺良性病变患者的47枚淋巴结中CK19 mRNA和LUNX mRNA表达均为阴性，与肺癌组比较均有统计学意义（P〈0．01）。淋巴结微转移与病理类型、细胞分化程度和临床分期有密切关系（P〈0．05）。结论：CK19 mRNA、LUNX mRNA可作为检测NSCLC患者淋巴结微转移的分子标记物，联合检测可能有助于早期诊断肺癌转移，从而指导临床个体化治疗。     

实时荧光定量RT—PCR检测NSCLC患者外周血CK19mRNA和LUNXmRNA实验研究

[目的]应用实时荧光定量RT—PCR检测非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血CK19mRNA和LUNXmRNA,探讨其诊断NSCLC外周血微转移的临床意义。[方法]选取初治NSCLC患者40例及健康志愿者50例,用实时荧光定量RT—PCR检测外周血CK19mRNA和LUNXmRNA相对定量分析结果。[结果]（1）肺癌组与健康对照组的CK19mRNA阳性表达率及相对表达量均有显著差异;肺癌组阳性表达率与原发肿瘤部位、原发肿瘤大小、临床分期、分化程度及病理类型无相关性,其相对表达量鳞癌患者高于腺癌患者（P〈0．05）。（2）肺癌组与健康对照组的LUNXmRNA阳性表达率有显著差异,其表达与临床病理特征无相关性。[结论]CK19mRNA和LUNXmRNA作为实时荧光定量RT—PCR法检测NSCLC外周血微转移的分子标志物,具有一定临床应用价值。     

肺腺癌组织中VEGF mRNA的表达与外周血微转移的关系研究

目的：探讨肺腺癌组织中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）mRNA的表达和外周血微转移的关系.方法：应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）方法,检测33例肺腺癌组织中VEGF mRNA的表达.以CK19为标志物,以RT PCR检测33例肺腺癌患者和10位正常人外周血的微转移.结果：33例肺腺癌患者中,VEGF mRNA的阳性率为78.79%（26/33）,外周血CK19的阳性率为57.58%（19/33）,10位正常人外周血的CK19的阳性率为0.肺癌组织中,VEGF mRNA的表达和腺癌的淋巴结转移及病理分期密切相关,P值分别为0.002和0.008;VEGF mRNA阳性表达组和VEGF mRNA阴性表达组的CK19的阳性率差异有统计学意义,P=0.009.结论：肺腺癌患者组织中的VEGF mRNA表达和淋巴结及血行转移关系密切,联合检测肺腺癌组织中的VEGFmRNA的表达和外周血微转移不仅能够评估肺癌侵袭转移的程度,而且对正确评价肺癌的病理分期、预后及制定合理的治疗方案有重要意义.     

检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的临床意义

目的探讨检测肺癌患者外周血和骨髓微转移的特异性、敏感性及临床意义。方法应用巢式RT-PCR技术,检测59例肺癌患者、11例肺部良性病变患者和20例健康人外周血、骨髓中CK19 mRNA表达。结果巢式RT-PCR检测技术的敏感性达到10-6。59例肺癌患者中,20例检测出外周血微转移,13例检测出骨髓微转移,其阳性检出率分别为33.9％(20/59)和22.0％(13/59),二者有显著正相关(P<0.05)。肺癌患者外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及P-TNM分期均存在密切关系(P<0.05或P<0.01)。肺良性病变患者、健康人外周血和骨髓中均未检测出CK19 mRNA表达。结论肺癌患者外周血和骨髓中均存在用常规方法检测不出的微转移;应用巢式RT-PCR技术检测肺癌患者外周血和骨髓中CK19 mRNA表达,对肺癌微转移的分子诊断具有重要的理论意义和临床应用前景。     

检测CK19 mRNA和MUC1 mRNA诊断非小细胞肺癌淋巴结微转移

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)淋巴结微转移的基因诊断方法，并分析CK19mRNA、MUC1mRNA作为肺癌微转移检测分子标志物的可行性。方法应用巢式逆转录聚合酶链反应(nestedRT-PCR)，对31例NSCLC的119枚淋巴结中的粘蛋白1(MUC1)mRNA、角蛋白19(CK19)mRNA表达情况进行检测；对照组为10例肺良性病变患者的35枚淋巴结。结果 31例NSCLC患者的119枚淋巴结中，66枚(55.5％)淋巴结存在CK19mRNA阳性表达，65枚(54.5％)存在MUC1mRNA阳性表达；肺良性病变患者35枚淋巴结中CK19mRNA和MUC1mRNA表达均为阴性，与肺癌组比较均有显著性差异。结论 MUC1、CK19基因均可作为RT-PcR法检测NSCLC患者淋巴结微转移的分子标志物，两者联合检测可能有助于早期诊断肺癌转移。     

肺癌患者三种微转移标志物临床意义的比较研究

目的评价肺癌患者外周血LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA诊断微转移的特异性、敏感性,探索肺癌患者微转移的早期诊断.方法以肺部良性疾病30例、健康人10例的外周血为对照,以LUNX mRNA 、CK19 mRNA、CEA mRNA的表达为指标,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测48例肺癌患者外周血、手术切除区域44个淋巴结的微转移,并根据淋巴结病理切片、临床分期、随访过程中复发转移率评价微转移的临床意义.结果①LUNX mRNA、CK19 mRNA、CEA mRNA在肺癌组织的表达率均为100%(35/35).②48例肺癌患者外周血中LUNX mRNA阳性30例(62.5%),CK19 mRNA阳性24例(50.0%),CEA mRNA阳性32例(66.7%);44枚肺癌患者手术切除的区域淋巴结,LUNX mRNA阳性16枚(36.4%),CK19 mRNA阳性12枚(27.3%),CEA mRNA阳性18枚(40.9%).③30例肺部良性疾病患者外周血中,CK19 mRNA表达阳性2例(6.7%),LUNX mRNA或CEA mRNA表达均阴性;10例健康人外周血和11枚取自肺良性疾病患者的淋巴结,3个指标检测结果均为阴性.④44枚肺癌区域淋巴结中,普通病理组织学检出6枚(13.6%)有癌转移,阳性率明显低于RT-PCR检测结果(P<0.05).⑤3种微转移指标的阳性率均随TNM分期的增加而升高(P=0.01).⑥随访发现外周血微转移阳性患者的复发率高于阴性患者.结论 LUNX mRNA、CK19 mRNA 、CEA mRNA有可能成为监测肺癌微转移的分子标志.     

肺癌患者外周血癌胚抗原 mRNA和细胞角蛋白19 mRNA的联合检测

目的　观察肺癌患者外周血循环细胞中癌胚抗原 (CEA)mRNA和细胞角蛋白 19(CK19)mRNA的表达情况 ,并探讨CEAmRNA和CK19mRNA联合检测的临床意义。方法　用RT PCR方法 ,分别检测 5 0例肺癌患者、2 5例肺部良性疾病患者和 37例健康志愿者外周血中CEAmRNA和CK19mRNA的表达 ,并对CEAmRNA和CK19mRNA联合检测与单项检测的阳性率进行比较 ,分析联合检测对肺癌诊断的灵敏度与特异性。结果　 5 0例肺癌患者中 ,CEAmRNA阳性表达率为 6 0 .0 % (30 / 5 0 ) ,CK19mRNA阳性表达率为 38.0 % (19/ 5 0 ) ,两者联合检测阳性率为 82 .0 % (41/ 5 0 )。联合检测与单项检测相比 ,能显著提高诊断灵敏度 ,且并不影响特异性。联合检测与单项检测相比 ,灵敏度差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,特异度差异无显著性 (P >0 .0 5 )。同时 ,肺癌患者的联合检测阳性率亦均显著高于肺部良性疾病组 (2 5例 ,阳性率 2 8.0 % )和健康对照组 (37例 ,阳性率 8.1% ;P <0 .0 0 1)。结论　外周血循环细胞中CEAmRNA和CK19mRNA的联合检测可提高肺癌细胞向外周血播散的检出率 ;随访并扩大样本含量有助于探讨其在检测微转移中的意义     

三种标志物对监测肺癌患者血液微转移的评价

 目的　了解检测外周血液癌胚抗原mRNA（CEA mRNA）、细胞角蛋白19 mRNA（CK19 mRNA）和端粒酶在监测肺癌血液转移中的应用价值。方法　外周血液标本应用反转录-套式-聚合酶链反应检测103例肺癌患者（肺癌组）、57例非癌性肺部疾病患者（非肿瘤组）及36例健康志愿者（健康组）CEA mRNA和CK19 mRNA,端粒重复序列扩增-微孔板杂交-酶联免疫分析检测端粒酶。结果　肺癌组血液三种肿瘤标志物的阳性率显著高于非肿瘤组和健康组（P＜0.001）,CEA mRNA和端粒酶的敏感度显著高于CK19 mRNA（P＜0.01）,TNM Ⅲ、Ⅳ期的阳性率显著高于Ⅰ期（P＜0.05）。结论　检测血液CEA mRNA、CK19 mRNA和端粒酶有助于发现肺癌血液扩散,其中CEA mRNA和端粒酶的价值高于CK19 mRNA,联合检测可进一步提高敏感度。     

CK20m RNA在大肠癌病人外周血中的表达及其临床意义

目的：以CK20mRNA作为靶产物,检测大肠癌病人外周血中的癌细胞即微转移。并探讨其存在的临床意义。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）。检测20例健康志愿者和47例大肠癌患者外周血中CK20mRNA的表达。同时检测20例大肠癌新鲜组织标本中CK20mRNA的表达。结果：20例大肠癌组织标本均扩增出370bp的条带。结肠腺癌HT-29细胞系作为阳性对照亦扩增出370bp的条带,20例正常人外周血中CK20mRNA表达均阴性。全组47例大肠癌病人,19例外周血中表达CK20mRNA,总阳性率为40.4%(19/47),CK20mRNA的表达与肿瘤Dukes分期,最大直径,肝转移有关,结论：CK20mRNA可作为检测大肠癌病人外周血中微转移的良好指标;外周血中CK20mRNA的检测有助于识别出具有复发或远处转移倾向的高危大肠癌病人。