外周血甲胎蛋白mRNA对肝癌诊断价值的探讨

目的 探讨外周血甲胎蛋白(AFP)基因在原发性肝癌(HCC)早期诊断和鉴别诊断中的临床价值.方法 从肝病患者外周血中制备RNA,以巢式聚合酶链反应(RT.PCR)扩增AFP基因.测定20份肝癌、癌周和远癌组织中总RNA浓度.结果 远癌和癌周组织RNA浓度明显高于癌灶组织(P<0.05),癌组织中AFP基因检出率均为100%;肝癌患者外周血中AFP基因的检出率为53.7%,明显高于肝硬化、慢性肝炎、急性肝炎和肝外肿瘤组患者(P<0.01);在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期肝癌中,AFP基因阳性率分别为33.3%、26.3%和71.8%;肝内有无转移的肝癌组间存在明显差异(P<0.05),尤其在伴有肝外远处转移的肝癌中,AFP基因全数阳性(100%);在AFP<200 ng/ml肝癌中,AFP基因阳性率为50.0%;与肝癌大小间未见统计学差异(P0.05).结论 分析外周血中AFP基因有助于肝癌的诊断、肝癌远处转移判别及肝癌术后复发的监测.     

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和甲胎蛋白联合检测对原发性肝癌的诊断价值

目的通过联合检测磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）、甲胎蛋白（AFP）在原发性肝癌患者血清及组织中的表达情况,探讨对原发性肝癌的诊断价值。方法分别采用ELISA和免疫组织化学法检测57例肝癌、74例肝炎后肝硬化患者和47例正常血清和肝组织GPC3、AFP表达水平,根据不同临床病理指标进行分组比较。结果 （1）肝癌患者、肝炎后肝硬化及正常对照者血清中GPC3水平分别为（212.6±137.5）、（60.9±27.8）、（39.5±18.7）ng/ml;肝癌患者血清GPC3浓度显著高于正常及肝炎后肝硬化患者（t=4.503,P〈0.05;t=6.045,P〈0.05）;血清GPC3、AFP联合检测原发性肝癌的敏感性和特异性为84.2%和95.7%,均显著高于任一单项检测（t=4.132,P〈0.05;t=6.514,P〈0.05）;（2）GPC3在肝癌组织表达高于癌旁和正常肝组织（t=3.724,P〈0.05;t=15.799,P〈0.05）;GPC3与肿瘤大小、肿瘤数目、HBsAg及AFP水平无明显相关,而与病理分级和临床分期有关;（3）AFP阳性肝癌血清GPC3阳性率为91.4%,而在AFP阴性肝癌中GPC3阳性率为59.1%。结论 GPC3联合AFP检测有助于提高原发性肝癌的确诊率,检测GPC3有助于提高AFP阴性患者肝癌的确诊率。     

ras基因联合血清APF水平与肝癌转移关系的研究

目的 探讨ras基因及AFP水平与肝癌病程的关系。方法 测定50例病理检查确诊的肝癌患者血清AFP水平,并检测其手术切除肝癌组织中ras的表达,分析ras基因及血清AFP联合检测与肝癌有无远处转移及术后复发的关系。结果（1）ras在肝癌组织中阳性表达率为64．0％,ras表达与肿瘤大小、有无肝内转移密切相关（P〈0．05）。ras阳性、阴性表达病例3年复发率分别为65．6％、33．3％。（2）高血清AFP水平且ras阳性病例组3年复发率为76．2％,而低血清AFP且ras阳性病例组3年复发率45．5％,差异显著（P〈0．05）。结论 联合ras基因及血清AFP检测可作为判断肝癌术后复发的有效指标,多因素分析更有价值。     

eIF4E在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨eIF4E在肝癌发生发展过程中的作用。方法采用免疫组织化学S-P法检测62份肝癌组织及癌旁硬化肝组织、15份正常肝组织中eIF4E蛋白的表达情况,并分析eIF4E表达与肝癌临床病理特征的关系。结果肝癌组织中eIF4E阳性表达率显著高于癌旁硬化肝组织及正常肝组织(χ2=29.37,P<0.001),其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小及包膜的完整程度无关,与肝癌分化程度、临床分期及有无门静脉癌栓有关。结论 eIF4E蛋白表达随肝癌分化程度降低而增高;eIF4E在肝癌的发生发展过程中可能起非常重要的作用。     

GP73在原发性肝癌组织中的表达及意义

目的探讨高尔基体糖蛋白73(GP73)表达诊断肝癌的价值。方法采用免疫组织化学染色SP法检测60份肝癌组织、癌旁组织及24份正常肝组织中GP73表达;分析GP73表达与肝癌临床病理特征的关系。结果肝癌组织、癌旁组织GP73阳性率显著高于正常肝组织(P<0.05)。GP73表达与Child-Pugh分级呈正相关(P<0.05),在肝外转移和HBV感染中表达亦显著增强(P<0.05),与性别、年龄、AFP、肿瘤大小、肝硬化和门脉癌栓无明显相关性。结论 GP73与肝癌的发生发展有关。     

原发性肝癌患者肝动脉结扎加栓塞前后入肝血流量的变化

作者观察了41例原发性肝癌患者肝动脉结扎加栓塞前后的入肝血流量、肝功能和血中AFP浓度变化。结果:原发性肝癌患者的肝固有动脉和门静脉血流量均高于对照组;肝固有动脉结扎加栓塞后门静脉血流量明显增加,肝功能变化和AFP下降显著;一侧肝动脉结扎加栓塞后肝固有动脉血流量仅减少四分之一,门静脉血流量有所增加,对肝功能的影响不明显,AFP的下降也明显差于上组。提示了肝癌的血供特点和肝动脉阻断后经门静脉化疗的必要性。     

补肾方对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌的预防作用

目的:研究补肾方对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌的预防作用。方法:以100ppmDEN饮水法诱发大鼠肝癌为模型,同时中药组予补肾方水煎剂灌胃,分别于诱癌12周末和18周末分批处死大鼠,观察大鼠肝脏病理形态学改变、肝组织γ-GT和AFP阳性表达以及血清丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)和白蛋白(Alb)含量变化。结果:中药组肝癌发生率较低;肝细胞增生灶和癌灶形成数目、面积较小;肝组织γ-GT阳性灶和AFP阳性细胞均明显比模型组少(P<0.001);血清ALT、ALP含量有不同程度降低,Alb含量较高。结论:补肾方对DEN诱发大鼠肝癌前病变和肝癌形成具有一定的抑制和延缓作用,但并不能完全阻断肝癌的形成。     

大鼠肝癌发生过程中α-SMA及AFP动态变化

目的 研究大鼠肝癌进展过程中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和甲胎蛋白(AFP)的变化.方法 选取大鼠65只,对照组21只饮用灭菌食用水,实验组35只,饮用灭菌食用水配置的二乙基亚硝胺建立肝癌模型,同时另9只作为实验备用组处理同实验组.在第6、8、10、12、14、16、18周取肝组织,称取肝重并染色观察大鼠肝癌模型的进展,同时测定肝癌组织中α-SMA的量及血清中AFP的含量.结果 成功建立了大鼠肝癌模型,实验中出现实验大鼠死亡2例,死亡率5.71％,死亡大鼠用实验备用组大鼠补充继续试验.对照组大鼠肝脏重量少量增加,实验组大鼠肝重量明显增加,从第10周开始明显比对照组重(P＜0.05).免疫组化显示随着实验时间的增加,大鼠肝癌模型逐渐进展到肝癌晚期,大鼠肝脏组织中α-SMA的表达量逐渐增加,血清中AFP的含量也逐渐增加.结论 大鼠肝癌发生过程中大鼠肝癌组织中α-SMA及血清AFP含量逐渐增加,因此α-SMA及AFP可作为临床诊断原发性肝癌的主要指标.     

肝癌组织RhoC蛋白表达与微血管密度的关系

目的:探讨RhoC蛋白表达和肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma,HCC)临床病理的关系及其和微血管生成之间的联系．方法:应用免疫组织化学法,检测49例HCC、 22例肝癌转移灶组织、9例正常肝组织内 RhoC蛋白表达和微血管密度(microvessel density,MVD),并将检测结果与患者的临床资料进行统计分析．结果:RhoC蛋白在9例正常肝组织中有1例呈阳性表达,占11．1％,而在49例HCC中有36 例阳性表达,占73．5％,22例肝癌转移灶中有 18例呈阳性表达,占81．8％,正常肝组织组与另两组比较有显著性差异(P<0．01);RhoC蛋白表达强度与年龄、性别、肝癌大小、AFP 表达量、HBsAg是否阳性及有无包膜无关 (P>0．05),而与肝癌分化程度、有无侵袭转移有显著关系(X2=8．037,P=0．005;X2=7．335, P=0．007)．肝癌、肝癌转移灶中MVD显著高于正常肝组织(H=4．564,P<0．01;H=4．442． P<0．01)．RhoC阳性表达的肝癌MVD值为93．3 ±25．0／mm3,阴性表达的肝癌MVD值为55．7 ±23．4／mm3,前者明显高于后者(t=4．715, P<0．01)．结论:RhoC在HCC组织中的表达上调与其血管生成和侵袭转移有关．     

B7-H1及其受体PD-1分子在原发性肝-癌组织中的表达及临床意义

目的:分析B7-H1和PD-1分子在原发性肝癌组织中的表达,并探讨其在肝癌发生过程中的临床意义.方法:采用免疫组织化学染色和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测42例原发性肝癌组织及对应的癌旁正常肝组织中B7-H1蛋白和mRNA表达,分析B7-H1分子与肝癌分化程度、有无侵袭转移的关系.分离肝组织内淋巴细胞.流式细胞仪分析PD-1分子在T细胞表面表达,以及B7-H1信号对肝癌组织内T细胞功能的影响.结果:原发性肝癌组织中B7-H1蛋白及mRNA表达水平均比癌旁组织和正常组织显著升高(85.71%vs 28.57%,7.14%:0.73±0.21vs0.35±0.12,0.23±0.07,均P<0.05),B7-H1阳性细胞与癌组织分化程度、有无侵袭转移相关(x2=7.876,8.492,均P<0.05),但与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿块类型及AFP水平无相关关系.肝癌组织中T细胞表达PD-1水平比癌旁对照显著上高(20.15%±3.47%vs2.67%±0.53%,P<0.001).结论:肝癌中B7-H1分子表达可能抑制肝癌组织内T细胞功能,促进肝癌细胞逃避免疫监控,阻断肝癌细胞表面B7-H1/PD-1信号传导,可能成为肝癌免疫治疗的新途径.     

胰岛素样生长因子Ⅱ在乙型肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌中的表达:它与HBVX基因表达的关系

为研究胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝癌发生与 HBV 持续感染中是否起有重要作用,作者对419例乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者的肝组织标本及两个 HCC 细胞株采用免疫组化和电镜技术进行染色,观察 IGF-Ⅱ和 HBV x 基因的表达及两者之间的关系。结果表明:两个 HCC 细胞株能够表达IGF-Ⅱ,并且表达 IGF-Ⅲ的细胞也大量地表达HBxAg 和 AFP。肝结构正常者及急性肝炎患者的肝组织中无 IGF-Ⅱ阳性的细胞,随着病理改变从 CPH 到癌组织周围组织(PCLT)的发展,IGF-Ⅱ阳性肝细胞的数量     

肝癌组织及外周血单核细胞端粒酶异常对肝癌诊断价值的研究

目的探讨肝癌组织及外周血单核细胞中端粒酶表达对肝癌诊断的临床价值。方法以0.05%2-乙基氨基芴(2-FAA)饲料饲养SD大鼠诱发肝癌发生,在肝细胞癌变过程中观察端粒酶的动态变化及与总RNA的关系。并从人肝癌和非癌组织中制备总RNA,采用端粒重复扩增法-ELISA分析肝组织及外周血单核细胞端粒酶活性及其对肝癌的诊断与鉴别价值。结果经大鼠诱癌后,在肝细胞经细胞变性、癌前病变和肝癌形成的过程中,肝内总RNA和端粒酶显著表达,并呈正相关关系(r=0.83,P<0.01);在人肝癌组端粒酶活性明显高于它的非癌组织,而总RNA则是非癌组明显高于癌组;外周血单核细胞中,癌组端粒酶活性明显高于肝硬化组、慢性肝炎组及正常对照(P<0.01);外周血AFP浓度与单核细胞端粒酶活性联合分析,对肝癌具有互补诊断价值。结论肝癌发生过程中端粒酶表达异常,外周血中端粒酶活性检测有助于肝癌的诊断及预后观察。     

原发性肝癌患者血清表皮生长因子与甲胎蛋白的相关研究

研究表皮生长因子 (EGF)在原发性肝癌患者中的含量变化及与甲胎蛋白的相关关系 ,以探讨表皮生长因子在原发性肝癌发生、发展过程中的作用和意义。采用放射免疫方法测定 30例原发性肝癌患者和 4 8例健康体检人群的血清表皮生长因子和甲胎蛋白 (AFP)。结果发现原发性肝癌组患者EGF含量明显低于健康对照组且有显著性差异 ;经相关分析血清EGF与AFP含量间无相关性关系 (r =0 16 4 3,P >0 0 5 )。表明EGF含量变化在肝癌早期诊断方面有一定的临床价值 ,同时与AFP无相关关系 ,也说明了两者在肝癌发生机制中的不同作用     

HS-GGT和AFP-mRNA联合分析在肝癌诊断中的临床价值

目的　探讨肝癌特异性γ 谷氨酰转移酶 (HS GGT)和AFP mRNA联合分析在肝癌诊断中的临床价值。方法　从肝癌患者外周血有核细胞中提取总RNA ,以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增分析AFP mMNA ,同时定量分析患者血HS GGT水平 ,比较它们在肝癌诊断中的临床价值。结果　所设计RT PCR扩增AFP基因片段大小为 15 9bp ,肝癌患者外周血AFP mRNA阳性率为60 3 % ,显著高于急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝外肿瘤及正常对照组 (P <0 0 1)。另外 ,AFP mRNA阳性率 ,在AFP浓度低于 5 0ng/ml肝癌组中为 5 7 1% ,在伴肝外转移的肝癌组中全数阳性。AFP mRNA阳性与肿瘤大小间无明显相关性 ,与HS GGT联合分析诊断肝癌的总阳性率达 93 6% 结论　HS GGT定量和外周血AFP mRNA分析有助于肝癌诊断、远处转移或术后复发的监测     

外周血甲胎蛋白mRNA定量与裸鼠肝癌术后复发转移的关系

目的 研究外周血中胎蛋白信使核糖核酸(AFP mRNA)水平与原发性肝癌根治性切除术后复发转移的关系。方法 裸鼠肝内原位接种裸鼠人肝癌转移模型LCI-D20肿瘤组织,接种后第10天切除移植瘤,切除后第2天用不同剂量干扰素α-1b(IFNα-1b )治疗,治疗35 d后取外周血1 ml,用TaqMan实时定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测AFP mRNA水平,同时观察肿瘤复发转移情况。结果 对照组裸鼠术后肝内复发率和肺转移率均为100%(12/12),外周血AFP mRNA阳性率为100%。小剂量IFNα-1b治疗组肝内复发率62.5%(5/8),复发瘤体积小于对照组(25 mm~3±2mm~3对1143mm~3±3mm~3,t=9.27,P＜0.01),无肺转移,外周血AFP mRNA阳性率87.5%(7/8),水平低于对照组[(85±6)copies/μg对(955±2)copies/μg,t＝4.33,P＜0.01)。大剂量IFNα-1b治疗组肝内复发率为12.5%(1/8),体积仅0.5mm~,无肺转移,外周血AFP mRNA均阴性(x~2=11.67,P＜0.01)。结论 外周血AFP mRNA可作反映肝癌复发转移的敏感指标,TaqMan实时定量RT-PCR技术检测循环血肝癌细胞灵敏、简便、精确度高。     

microRNA-145在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

[目的]探讨肝细胞肝癌中microRNA-145(miR-145)水平的变化及其临床意义。[方法]采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测30例肝癌组织、癌旁组织及3例正常肝组织中miR-145表达量,以及Hep G2肝癌细胞、L-O2胎肝细胞中miR-145表达量并计算miR-145相对表达量。结合采集组织的性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度等临床病理参数分析miR-145表达水平有无明显差异。[结果]肝癌组织中miR-145表达明显低于正常肝组织,差异有统计学意义(P0.05),癌旁组织与正常肝组织及肝癌组织之间表达差异无统计学意义(均P0.05),Hep G2细胞中miR-145表达明显低于L-O2细胞,差异有统计学意义(P0.05)。miR-145在肝癌中的表达异常与性别、年龄、淋巴结转移、肿瘤大小、HBV感染、AFP浓度无相关,差异无统计学意义。[结论]miR-145在肝癌患者中低表达,在肿瘤发生发展过程中可能担任了抑癌基因的角色,对肝细胞肝癌的临床诊断有意义。     

ATRA、OMT干预下大鼠肝癌变进程中Axin、Gsk-3β、Survivin表达动态变化研究

[目的]观察ATRA联合OMT干预方式在肝癌大鼠病变进程中对Axin、Gsk-3β、Survivin因子的影响及该干预方式在肝癌疾病治疗中的临床价值。[方法]实验中采用DENA作为诱癌剂制备肝癌模型,选取的120只实验SD大鼠将其平均分为诱癌组、干预组及对照组,通过采取病理切片、免疫组化方式观察不同时期3组大鼠的Axin、Gsk-3β、Survivin因子的表达情况。[结果]诱癌大鼠的Axin阳性细胞到后期Axin阳性细胞降低最低点,在诱癌进程中诱癌组大鼠的Axin阳性细胞面积、着色深度等均明显弱于干预组,Axin阳性表达率差异性显著(P0.05);诱癌大鼠的Gsk-3β阳性细胞到13~18周降低最低点,诱癌组大鼠在癌变过程中Gsk-3β阳性细胞均出现明显减少,部分细胞质逐步转移至细胞核,在中、后期诱癌组大鼠肝脏组织中的Gsk-3β阳性细胞下降幅度明显大于干预组(P0.05),相同时期诱癌组的Gsk-3β阳性细胞面积明显小于干预组;诱癌大鼠肝组织中的Survivin阳性细胞表达在后期达到最高值,在肝癌病变进程中干预组大鼠的Survivin阳性细胞却明显低于诱癌组(P0.05)。[结论]通过给予肝癌大鼠实施ATRA联合OMT干预方式,干预组大鼠病变进程中对Axin、Gsk-3β、Survivin因子表达呈一定规律性变化,肝癌病变进程明显滞后,为临床探讨肝癌发病进程及临床治疗提供参考。     

肝细胞肝癌中SALL4蛋白表达及其临床病理意义

目的探讨婆罗双树样基因4(SALL4)在肝细胞癌(HCC)发生和进展中的作用。方法应用蛋白免疫印迹方法检测30例HCC患者手术切除的癌组织和癌旁组织中SALL4蛋白表达情况。结果 90%肝癌组织中SALL4的蛋白表达显著高于癌旁组织;肝癌组织中SALL4蛋白表达水平与性别、年龄、肿瘤大小、乙肝、病理分级、肿瘤包膜和门脉癌栓差异均无显著性,而与甲胎蛋白(AFP)有关。结论 SALL4蛋白高表达可能增加肝癌细胞的增殖,促进肝癌的进展。     

B超引导下自动活检枪肝穿对AFP阴性肝占位性病变的诊断

为了评价B超引导下自动活检枪肝穿对AFP阴性肝占位性病变的定性诊断价值,作者对52例AFP阴性肝占位性病变患者行B超引导下自动活检枪肝穿,组织病理学检查。结果,52例AFP阴性肝占位性病变中,经病理学证实,原发性肝癌23例(44.2%),其余病例亦各获得正确诊断。超声引导下自动活检枪肝穿刺对肝脏占位病变定性诊断安全、准确,具有很高的临床应用价值,可作为肝占位性病变的确诊技术。     

肝癌组织甲胎蛋白表达特点及其基因片段的扩增分析

目的探讨肝癌组织甲胎蛋白(AFP)表达的病理学特点及其基因分析的临床价值。方法以免疫组织化学法研究AFP在肝癌及癌周组织中的胞内分布及其表达;并从肝癌的癌灶、癌旁组织中制备总RNA,以巢式聚合酶链反应(nested_PCR)扩增不同癌组织AFP_mRNA片段,以探讨AFP表达的临床病理学特征及其AFP_mRNA分析的应用价值。结果肝癌细胞及癌旁肝细胞的胞浆中,均可见AFP阳性的棕黄色颗粒,癌组织中AFP阳性表达率为73.3%,癌旁组织中为40.0%,中、低分化组肝癌中AFP的表达阳性率明显高于高分化组肝癌(P<0.05),且癌旁组织中AFP的表达强度明显低于肝癌的癌灶组织。肝癌组织、癌周组织的总RNA表达水平存在差别,癌组织中AFP_mRNA片段扩增全数阳性(100%),显著高于癌周组织(P<0.01)。结论肝癌不同组织中AFP表达存在差异,AFP_mRNA分析有助于肝癌的早期发现和诊断。