清胰汤对大鼠急性胰腺炎肺损伤时SP-A表达的影响

目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤(ALI)时肺表面活性蛋白A(SP-A)的表达及其在ALI发病中的作用,并观察清胰汤对SP-A表达和病情转归的影响.方法:采用胆胰管内逆行注入1.5%去氧胆酸钠建立大鼠SAP时ALI模型.将SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)和清胰汤组(n=10).假手术组仅行剖腹术,翻动胰腺.清胰汤组在建立SAP模型后30 min和12 h清胰汤ig(10 mL/kg).各组大鼠在术后24 h测PaO_2和血淀粉酶.应用逆转录聚合酶链式反应(RT- PCR)检测肺SP-A mRNA的表达强度,Western- blot观察SP-A表达,并观察胰、肺病理变化及肺泡Ⅱ型上皮细胞的电镜下变化.结果:模型组血淀粉酶(7144.19 U/L±727.91 U/L)显著高于清胰汤组(4283.51 U/L±527.52 U/L)和假手术组(1193.41 U/L±192.54 U/L,P<0.01).模型组PaO_2显著低于假手术组和清胰汤组(79.24±5.84 vs 96.78±3.81.79.24±5.84 vs 88.16±5.07,P<0.01).清胰汤组肺SP-A mRNA表达显著高于模型组(P<0.01),肺SP-A蛋白的表达显著高于模型组,SP-A mRNA的表达与肺损伤的程度呈负相关.清胰汤组胰、肺病理及电镜改变较模型组减轻.结论:SAP时肺泡Ⅱ型上皮细胞功能受损,SP-A mRNA表达降低导致急性肺损伤的机制之一.清胰汤能保护肺泡Ⅱ型上皮细胞功能,恢复SP-A mRNA正常表达,维持肺泡功能,从而对肺组织起保护作用.     

油酸致急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道的变化

目的 探讨油酸诱导的急性肺损伤时肺泡液体的清除能力,以及肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道的变化.方法 采用随机数字表法将44只雄性SD大鼠分为对照组和急性肺损伤组,每组22只大鼠.建立油酸肺损伤模型,急性分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞的超微结构变化.每组均取8只大鼠进行逆转录(RT)-聚合酶链反应,检测肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基mRNA的表达,7只大鼠用重力法测定血管外肺水含量,7只大鼠用于肺组织病理学检杳.组间比较采用独立样本t检验和析因分析法,样本间两两比较采用q检验.结果 急性肺损伤组大鼠肺损伤评分为(7.6±0.8)分,血管外肺水为(0.80±0.17)ml,均显著高于对照组[(1.1±0.2)分和(0.52±0.10)ml],差异有统计学意义(t=-20.859,P＜0.01)电镜下肺泡Ⅱ型上皮细胞出现细胞变性、凋亡,板层小体排空等变化.RT-PCR显示肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道亚基表达以α-亚基为多,急性肺损伤组肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道α、β、γ亚基mRNA表达分别为(51±9)%、(13±7)%和(31±15)%,明显低于对照组[(82±7)%、(25±4)%和(40±17)%],差异有统计学意义(t值为3.01～7.61,P＜0.05和P＜0.01).结论 急性肺损伤状态下,肺水的清除能力降低,肺泡Ⅱ型上皮细胞钠通道α、β和γ哑基表达均显著下降,钠通道转运功能受损.     

MMP-9和紧密连接蛋白Occludin在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺部的表达

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-9和紧密连接蛋白Occludin在慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺部的表达。方法 Wistar大鼠30只随机分为COPD组和对照组,采用单纯被动吸烟法建立COPD大鼠模型,以酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组大鼠血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中MMP-9水平。采用免疫组化染色(SABC)法测定两组大鼠肺部组织Occludin的表达。结果 COPD组血清及BALF MMP-9的水平均显著高于对照组血清中MMP-9的水平(P<0.05);COPD组BALF中MMP-9水平显著高于对照组BALF(P<0.05);Occludin在COPD组大鼠肺泡上皮细胞表达显著少于对照组(P=0.000)。结论 MMP-9参与了COPD的发病过程,COPD大鼠肺泡上皮屏障功能与Occludin蛋白表达的数量及改变的一系列变化有关。     

PM2.5激活内质网应激诱导肺组织细胞凋亡对慢性阻塞性肺疾病大鼠的影响

目的：探讨PM2.5的暴露是否激活内质网应激诱导肺组织细胞凋亡及其对 COPD大鼠的影响。方法将40只健康的雄性 SD 大鼠[体质量为(200±20)g]按随机数字表法分为对照组(N组)、PM2.5组(P组)、COPD模型组(C组)、COPD+PM2.5组(C+P 组)。采取熏烟联合两次气管内注入脂多糖(LPS)(200μg/100μl)法建造 COPD大鼠模型,C+P 组在构建 COPD模型基础上给予气管内注入PM2.5混悬液(5 mg/kg,体积0.25 ml/kg),P 组大鼠给予气管内注入等量PM2.5混悬液,N组给予气管内滴注相同体积生理盐水。模型建立结束后,检测各组大鼠的肺功能;行 HE染色,观察各组肺组织病理学改变;TUNEL法测定肺结构细胞的凋亡程度;免疫组织化学检测肺组织中 GRP78、ATF6和CHOP蛋白的表达;Real-time RT-PCR检测CHOP mRNA表达水平。结果①肺功能：C+P组 FEV0.3/FVC (%)、呼气峰流速均较其余3组显著降低(P<0.05),C组与 P 组及 N 组比较明显下降(P <0.05),而 P 组与 N 组比较结果尚不能认为差异有统计学意义(P >0.05)。②HE染色：N组大鼠肺组织结构正常;P 组肺组织结构基本比较完整,肺泡间隔破坏不明显,与 N组比较,支气管管壁周围有明显的炎性细胞浸润;C 组肺组织结构不完整,破坏明显,肺泡壁变薄、断裂,肺泡腔扩大,有的融合成肺大疱,支气管黏膜上皮细胞坏死、部分脱落,管壁周围有大量的炎性细胞浸润;C+P 组肺组织结构破坏程度较 C 组更加严重。③肺组织细胞凋亡：P 组、C组、C+P组细胞凋亡率均较 N 组升高(P <0.05),其中 C 组凋亡率明显高于 P 组(P <0.05), C+P组较C组进一步升高(P<0.05)。④免疫组织化学：GRP78、ATF6和CHOP均主要表达于支气管上皮细胞、肺泡上皮细胞及血管内皮细胞,而前两者主要表达于胞浆内,后者主要表达于胞核内。N组肺组织中 GRP78、ATF6和CHOP蛋白均无明显表达或极少量表达,而在 P 组、C组及 C+P组这三种蛋白的表达均较 N组升高(P<0.05),其中 C组较 P 组均显著升高(P <0.05),C+P组较C组均进一步升高(P <0.05)。⑤Real-time RT-PCR 结果：P 组、C 组及 C+P 组 CHOP mRNA表达含量均较 N组增高(P<0.05),其中C组较P组明显增高(P<0.05),C+P组较C组则进一步增高(P<0.05)。结论 PM2.5暴露可激活内质网应激途径诱导肺组织细胞凋亡,从而促进COPD加重和发展。     

慢性阻塞性肺疾病肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡的实验研究

目的 研究COPD患者及烟雾暴露COPD大鼠肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡的相互关系及其与肺功能和肺气肿的相关性.方法 采用烟雾暴露法建立COPD大鼠模型.分别采集COPD患者(13例)和对照患者(12例)及烟雾暴露80 d大鼠(11只)和对照大鼠(12只)的肺组织标本,用HE染色评估肺部病理改变,用平均内衬间隔(MLI)与平均肺泡数(MAN)评估大鼠肺气肿程度;用原位末端标记法对肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡进行定量检测,分析这两种细胞凋亡的相关性,及其与肺功能和肺气肿指标的相关性.正态分布的计量资料以x±s表示,采用两独立样本的t检验进行分析;非正态分布的计量资料以中位数(四分位间距)表示,采用两个独立样本比较的Wilcoxon秩和检验;采用Spearman秩相关进行相关分析.结果 COPD患者和大鼠均出现明显肺气肿病理改变.COPD患者肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡指数[(13.2±2.6)%和(28.9±3.1)%]明显高于对照患者[(5.6±1.5)%和(5.8±1.2)%].COPD患者肺泡上皮细胞凋亡指数[(28.9±3.1)%]明显高于肺血管内皮细胞凋亡指数[(13.2±2.6)%],二者间呈正相关(r=0.60,P<0.05);COPD患者肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞的凋亡指数与FEV.占预计值%呈负相关(r值分别为-0.83和-0.69,均P<0.05),与FEV1/FVC呈负相关(r值分别为-0.95和-0.71,均P<0.05),与残气容积/肺总量呈正相关(r值分别为0.93和0.70,均P<0.05).COPD大鼠肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡指数[(4.1±0.4)%和(10.0±1.0)%]明显高于对照大鼠[(0.2±0.1)%和(2.1±0.4)%],COPD大鼠肺组织MLI与肺泡上皮细胞凋亡指数呈正相关(r=0.59,P<0.05),MAN与肺泡上皮细胞凋亡指数呈负相关(r=-0.81,P<0.05).结论 COPD患者和大鼠肺内存在异常的细胞凋亡现象,其肺泡上皮细胞凋亡较肺血管内皮细胞凋亡更为明显,且二者呈正相关;COPD患者和大鼠肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞的凋亡与其肺功能及肺气肿的改变明显相关,推测肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞凋亡可能参与COPD的发病过程.     

神经生长因子及其酪氨酸激酶A受体在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺泡巨噬细胞中的表达

目的 观察神经生长因子(NGF)及其酪氨酸激酶A(TrkA)受体在COPD大鼠肺泡巨噬细胞的表达变化.方法 40只雄性SD大鼠,随机分为对照组和COPD组,每组20只.采用6个月单纯烟熏法建立COPD大鼠模型,并检测肺功能,HE染色观察肺组织病理变化.从支气管肺泡灌洗液中分离纯化出肺泡巨噬细胞,用酶联免疫吸附法测定肺泡巨噬细胞培养液的上清液中NGF蛋白表达,激光共聚焦法鉴定肺泡巨噬细胞以及半定量检测肺泡巨噬细胞的TrkA蛋白表达.实时荧光定量PCR法检测肺泡巨噬细胞的NGF mRNA及TrkA mRNA表达.两组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用t检验.结果 COPD组大鼠肺顺应性为(0.15 ±0.03) ml/cm H2O(1 cm H2O =0.098kPa),每分通气量为(0.045±0.004)L,均显著低于对照组的(0.42±0.05) ml/cm H2O和(0.102±0.010)L,差异均有统计学意义(t值分别为9.46和12.99,均P＜0.01)；气道阻力为(0.038±0.004)cm H20·L-1·S-1,显著高于对照组的(0.016±0.002)cm H2O·L-1·s-1,差异有统计学意义(t=11.55,P＜0.01).肺组织病理显示,COPD组大鼠肺泡壁变薄,肺泡间隔破裂,肺泡腔不规则扩大,部分融合形成肺大疱,肺气肿形成.COPD组NGF蛋白表达量为(3.79±1.52) ng/L,显著高于对照组的(0.94±0.27) ng/L,差异有统计学意义(t=4.13,P ＜0.05).COPD组TrkA蛋白平均荧光强度值(19.5±1.5)显著高于对照组(11.2±1.9),差异有统计学意义(t=7.95,P＜0.05).COPD组NGF和TrkA的mRNA表达量(24.8±6.0和9.0±3.3)显著高于对照组(1.0±0.2和1.0±0.4),差异均有统计学意义(t值分别为8.48和5.16,均P＜0.05).结论 COPD组肺泡巨噬细胞高表达NGF及其TrkA受体,提示NGF及其TrkA受体可能介导肺泡巨噬细胞参与COPD的发病过程.     

氨溴索对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道重塑的干预研究

目的 探讨转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型肺内表达与气道重塑的关系以及氨溴索的干预作用.方法 气管内注入脂多糖以及熏香烟法建立大鼠COPD模型,干预组于模型建立后腹腔注射氨溴索溶液.观察病理特点,测定血气以及支气管肺组织匀浆羟脯氨酸含量,检测支气管管壁厚度和内周长,用原位杂交法检测TGF-β1基因表达的相对含量.结果 与对照组比较,模型组支气管肺组织羟脯氨酸含量显著增高(P<0.01).支气管管壁厚度显著增加(P<0.01),TGF-β1在支气管肺组织的表达增强(P<0.01),且TGF-β1基因表达的相对含量与支气管管壁厚度以及肺组织羟脯氨酸含量呈显著正相关(r=0.949,P<0.01;r=0.932,P<0.01).与模型组比较,氨溴索干预组支气管肺组织羟脯氨酸含量、支气管管壁厚度、TGF-β1在支气管肺组织的表达强度有减少趋势.结论 TGF-β1在气道重塑中起重要作用.应用氨溴索可以明显抑制COPD气道炎症及其气道重塑.     

胆红素干预对肺气肿大鼠模型层黏连蛋白和表皮生长因子表达的影响

目的　观察胆红素干预对肺气肿大鼠模型肺组织和肺泡Ⅱ型上皮细胞 (ATⅡ )层黏连蛋白(Ln)及表皮生长因子(EGF)表达的影响。方法　健康Wistar大鼠 36只,随机分为 3组,每组 12只。(1)A组:健康对照组; (2)B组:制作肺气肿模型; (3)C组:制作肺气肿模型,每日烟雾暴露前给予间接胆红素灌胃 20mg/kg一次,灌入液量为 1 8~2ml/次。6个月末时处死大鼠,行ATⅡ的分离、纯化和培养。用放射免疫测定法测ATⅡ培养上清液中Ln的含量。间接免疫荧光法和免疫组化法测肺组织Ln及EGF的表达。结果　ATⅡ培养上清液中Ln含量及肺组织Ln免疫荧光表达B组高于A组(均P<0 05);C组低于B组 (均P<0 05),但仍高于A组。肺组织EGF的表达B组高于A组(P<0 05);C组低于B组(P<0 05),但仍高于A组。结论　胆红素通过下调Ln及EGF在ATⅡ与肺组织中的表达,对肺气肿形成过程中细胞外基质的重塑有一定的影响。     

痰热清对慢性阻塞性肺疾病大鼠支气管上皮多药耐药相关蛋白1表达的影响

目的观察痰热清对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠支气管上皮多药耐药相关蛋白(MRP)1 mRNA的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为COPD模型组、痰热清组和正常对照组,每组10只。除正常对照组,其余两组采用气管注脂多糖加熏香烟方法制备COPD模型,RT-PCR技术分析MRP1 mRNA基因表达。结果 COPD模型组和痰热清组大鼠支气管上皮细胞中MRP1的表达减少(P<0.01)。与模型组比较,痰热清组大鼠支气管上皮细胞中MRP1的表达增高(P<0.05)。结论痰热清注射液可能通过增高大鼠支气管上皮细胞中MRP1的表达而有效减轻COPD气道炎症,达到延缓COPD肺功能恶化和改善症状的效应。     

川芎嗪对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺泡中肿瘤坏死因子-α的影响

目的 探讨川芎嗪对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺泡中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 24只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(对照组)、COPD模型组(模型组)、川芎嗪治疗组(川芎嗪组)每组8只.采用熏吸香烟并经气管内注入脂多糖(LPS)法建立大鼠COPD模型,川芎嗪组于COPD模型开始建立后第8天起每天腹腔注射川芎嗪注射液80 mg/kg,至第28天.观察各组气道炎症病理特点,肺平均内衬间隔(MLI)和平均肺泡数(MAN),计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、多形核中性粒细胞(PMN)数及TNF-α浓度.结果 川芎嗪组肺组织形态学改变较模型组减轻;MLI较模型组降低,较对照组增高,而MAN与之相反,差异显著(均P＜0.05).川芎嗪组BALF中白细胞总数、PMN数及TNF-α浓度较模型组下降,差异非常显著(P＜0.01);较对照组略升高,差异不显著(P＞0.05). 结论川芎嗪可降低COPD大鼠BALF中TNF-α浓度,抑制炎症细胞生成,对COPD大鼠气道炎症具有明显的抑制作用.     

肺泡表面活性物质相关蛋白A在慢性心源性肺水肿大鼠肺组织中的表达

目的观察慢性心源性肺水肿大鼠肺组织病理形态学改变,研究其肺泡表面活性物质相关蛋白A及肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1、IL-6的表达,阐述它们在慢性心源性肺水肿发病机制中的作用。方法 14只自发性高血压大鼠高脂饮食饲养1年,建立慢性心源性肺水肿模型,14只血压正常大鼠以正常饮食饲养1年,为正常对照组,分别以免疫组织化学染色检测各组大鼠肺组织中SP-A的表达。RT-PCR法检测各组大鼠肺组织SP-A mRNA的表达,ELISA法检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1、IL-6的水平。结果试验组肺组织中SP-A mRNA的表达较对照组明显上调(P<0.05),肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1、IL-6水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。SP-A mRNA表达与支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1、IL-6的水平呈显著正相关(r=0.612、r=0.702、r=0.824,P<0.05)。结论慢性心源性肺水肿大鼠的肺组织中SP-A mRNA的表达较对照组明显上调,且与支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1、IL-6的水平呈显著正相关。SP-A及TNF-α、IL-1、IL-6均与慢性心源性肺水肿的发生发展过程密切相关,但因果关系不明。     

慢性阻塞性肺病大鼠血红素加氧酶-1表达及其临床意义

目的探讨血红素加氧酶(HO)-1在慢性阻塞性肺病(COPD)大鼠肺组织中的表达及其临床意义。方法 Wistar健康雄性大鼠60只随机分为模型组、药物干预组、生理盐水对照组各10只,分别给予烟熏配合脂多糖造模,烟熏配合脂多糖造模+大蒜素6.17 mg/kg灌胃,正常喂养等干预措施,5 w后进行肺功能测定,包括动脉血氧分压(Pa O2)、二氧化碳分压(Pa CO2)、氧合指数(Pa O2/Fi O2)。同时光镜下观察肺脏的形态,采用RT-PCR法检测各组HO-1 m RNA的表达。结果与生理盐水对照组比较,模型组3 s用力呼气容积(FEV)3.0/用力肺活量(FVC)、呼气峰流速(PEF)、Pa O2、Pa O2/Fi O2、HO-1蛋白及基因表达下降显著(P<0.01),Pa CO2升高显著(P<0.01)。与模型组比较,药物干预组FEV3.0/FVC、PEF、Pa O2、Pa O2/Fi O2、HO-1蛋白及基因表达升高显著(P<0.01),Pa CO2下降显著(P<0.01)。各组光镜下肝脏显示:生理盐水对照组肺结构清晰,肺泡间毛细血管轻度扩张,部分支气管旁间质存在少许淋巴细胞浸润;模型组肺组织结构模糊,肺泡间毛细血管扩张明显并伴有出血,见大小不一凝固性肺坏死灶;药物干预组肺组织结构尚清,少量毛细血管扩张充血,肺泡腔内存在少许水肿液。结论 HO-1可能在COPD的发病过程中起保护作用,大蒜素改善COPD大鼠肺功能结构。     

芪丹颗粒对博莱霉素致肺损伤大鼠肺组织FasL、caspase-3表达的影响

目的 探讨芪丹颗粒对博莱霉素所致肺损伤大鼠肺泡上皮细胞增殖的影响.方法 将105只SD大鼠随机分成4组.模型组、芪丹颗粒组(芪丹组)、氢化可的松琥珀酸钠组(氢可组)各30只,气管内灌注博莱霉素A5诱导肺纤维化,次日芪丹组每日给予芪丹颗粒3 125 mg/kg灌胃,氢可组腹腔注射氢化可的松25 mg/kg,对照组气管内灌注和灌胃均用生理盐水,分别于造模第7、14、28天处死大鼠(对照组5只,余组各10只)取肺组织,HE染色观察肺泡炎及纤维化程度,免疫组化法检测石蜡切片中FasL及caspase-3的表达.结果 芪丹组较氢可组及模型组肺纤维化及肺泡炎程度轻.FasL、caspase-3表达芪丹组较对照组、模型组、氢可组均有不同程度降低.FasL与caspase-3表达呈正相关(r=0.817,P<0.01).结论 芪丹颗粒可减轻博莱霉素A5诱导的肺纤维化大鼠的肺纤维化及肺泡炎,减少FasL与caspase-3的表达.其机制可能与减少肺泡上皮细胞凋亡有关.     

辛伐他汀对慢性阻塞性肺病大鼠血浆及肺泡灌洗液中5-羟色胺表达的影响

目的观察5-羟色胺(HT)在吸烟诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠血浆及肺泡灌洗液中的表达,探讨5-HT在COPD发病中的作用及辛伐他汀对其影响。方法 1采用烟熏法建立COPD大鼠模型。将30只大鼠随机分为三组:对照组、烟雾暴露组、辛伐他汀组各10只。自烟雾暴露之日起辛伐他汀组给予辛伐他汀(5 mg/kg),于烟雾暴露前灌胃,每日一次。16 w后,测量体重、肺动脉压(PAP)、肺功能,并对肺组织病理形态学进行观察。2采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测5-HT在COPD大鼠血浆及肺泡灌洗液中的含量,观察辛伐他汀对其表达的影响。结果 1三组实验前体重无明显差异(P>0.05)。实验结束时,烟雾暴露组体重较对照组明显下降(P<0.01);辛伐他汀组体重较烟雾暴露组升高(P<0.05)。2与对照组比较,烟雾暴露组平均内衬间隔(MLI)明显增加(P<0.01),平均肺泡数(MAN)明显降低(P<0.01);辛伐他汀治疗后MLI降低(P<0.05),MAN增加(P<0.01)。3相对于对照组,烟雾暴露组动态肺顺应性(Cdy)、用力呼气容积(FEV)0.3/用力呼气量(FVC)明显下降(P<0.05),呼气相气道相应阻力(Re)、吸气相气道相应阻力(Ri)升高(P<0.05);辛伐他汀组治疗后Re、Ri、FEV0.3/FVC、Cdy相对于烟雾暴露组均有改善(P<0.05)。与对照组比较,烟雾暴露组和辛伐他汀组m PAP明显升高(P<0.05)。辛伐他汀治疗后m PAP明显降低(P<0.05)。4三组右心和左心室、室间隔重量比〔RV/(LV+S)〕值差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,烟雾暴露组RV/(LV+S)增大(P<0.05);辛伐他汀组治疗后RV/(LV+S)降低(P<0.05)。5与对照组比较,烟雾暴露组及辛伐他汀组血浆及肺组织中5-HT较对照组明显升高(P<0.05)。肺泡灌洗液中5-HT水平无明显变化(P>0.05)。辛伐他汀组治疗后血浆及肺组织中5-HT降低(P<0.05),肺泡灌洗液中5-HT水平无明显变化(P>0.05)。65-HT在血浆中及肺组织中的表达与右心室肥厚指数(RVHI)呈正相关(r=0.702,0.543,P=0.000,0.002),与m PAP呈正相关(r=0.772,0.821,P=0.000)。结论 1大鼠香烟烟雾暴露16 w建立COPD模型成功。25-HT在COPD发生、发展过程中有明显的变化及联系,在COPD发生发展中起重要作用。辛伐他汀可能是治疗COPD有效的方法之一。     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对肺间质病变大鼠TGF-β1表达的影响

目的 观察重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR-Fc,益赛普)对博来霉索(BLM)-A5所致肺间质病变大鼠转化生长因子(TGF)-β1表达的影响.方法 SD雄性大鼠45只,随机分为对照组、模型组和rhTNFR-Fc治疗组(治疗组),每组15只.各组动物于第7、14、28天随机处死5只,取肺组织进行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,用免疫组织化学法检测肺组织TGF-β1的表达水平.结果 对照组未见明显胶原沉积、炎症及纤维化改变,治疗组各时期肺泡炎和肺纤维化程度均较模型组轻,差异有统计学意义(P<0.01).模型组各时期TGF-β1的表达较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组第7、14天TGF-β1的表达较对照组增加,差异有统计学意义(P<0.01),第28天稍高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05).治疗组第7天比模型组减低,差异有统计学意义(P<0.05),第14、28天比模型组减低差异有统计学意义(P<0.01).结论 rhTNFR-Fc能减轻BLM-A5诱导的大鼠肺泡炎和肺纤维化,可能与抑制肺组织TGF-β1表达有关.     

粒-巨噬细胞集落刺激因子及肺表面活性蛋白在肺泡蛋白沉积症患者肺内的表达

目的通过观察成人特发性肺泡蛋白沉积症(PAP)患者肺部粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及其受体蛋白以及肺泡表面活性蛋白的表达,探讨PAP的发病机制。方法用SP免疫组化技术检测6例PAP患者(PAP组)及6例对照者(对照组)肺组织肺泡巨噬细胞及Ⅱ型肺泡上皮细胞GM-CSF、GM-CSF/IL-3/IL-5共同β链受体(GM-CSFβcR)、肺表面活性蛋白(SP)-A和SP-D蛋白表达。结果(1)肺泡巨噬细胞2组表达GM-CSF蛋白均较弱,阳性细胞数少,组间比较差异无统计学意义(P=0.818);2组均表达GM-CSFβcR蛋白,对照组显著高于PAP组(P=0.002);2组均表达SP-A蛋白,且PAP组呈阳性反应,但阳性细胞数少,积分指数显著低于对照组(P=0.004);2组表达SP-D蛋白差异无统计学意义(P=0.24)。(2)Ⅱ型肺泡上皮细胞2组均表达SP-A和SP-D蛋白,组间比较差异无统计学意义(P=0.818,P=0.485);对照组少数表达GM-CSFβcR蛋白,PAP组无GM-CSFβcR蛋白表达;2组均无GM-CSF蛋白表达。结论肺泡巨噬细胞表达GM-CSFβcR蛋白减少可能与成人特发性PAP肺泡巨噬细胞功能障碍有关。     

滇白珠水提物对慢性阻塞性肺疾病大鼠转化生长因子-β1、白细胞介素-8的影响

目的利用滇白珠水提物对慢性阻塞性肺疾病(COPD)实验性大鼠进行干预,检测其转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-8的变化并对其机制进行探讨。方法健康SD雄性大鼠36只,随机分为正常对照组、模型组和用药组,每组12只。模型组大鼠用药后观察各组大鼠肺组织的病理改变,免疫组化法观察肺组织中TGF-β1的表达及酶联免疫试验观察肺泡灌洗液和血清中的TGF-β1、IL-8的表达情况。结果模型组TGF-β1的表达为(0.732±0.083),与正常对照组(0.168±0.018)比较差异显著(P<0.01);用药组支气管灌洗液中TGF-β1、IL-8的活性分别为(61.48±6.89)ng/ml,(148.69±21.47)ng/ml,与模型组比较差异显著。用药组血清中TGF-β1、IL-8的活性分别为(63.48±7.33)ng/ml,(0.69±0.09)ng/ml,与模型组比较差异显著(P<0.01)。结论滇白珠对COPD治疗有很好的指导意义。     

血管紧张素Ⅱ对哮喘大鼠气道重塑影响的研究

目的 观察哮喘大鼠肺组织局部肾素-血管紧张素系统(renin -angiotensin system,RAS)的活化,探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)特异性血管紧张素1受体拮抗剂Irbesartan对哮喘气道重塑的影响.方法 将30只Wistar大鼠按随机数字表法分成正常对照组(C组)、哮喘模型组(A组)和Irbesartan干预组(I组),以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并雾化吸入激发制备大鼠哮喘模型.观察各组大鼠肺功能变化情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)定量分析血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中AngⅡ水平;半定量分析气道壁厚度(Wat/Pbm,气道壁面积/基底膜周径)和气道平滑肌厚度(Wam/Pbm,平滑肌面积/基底膜周径);免疫组织化学方法观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在气道壁的表达,苦味酸天狼猩红染色-偏振光方法观察Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)在气道壁的表达,并对三者的表达水平进行半定量分析.结果 ①Ang水平:血清AngⅡ水平:I组大鼠较A组和C组显著升高(P<0.05),A组和C组间比较差异无显著性(P>0.05).BALF上清中AngⅡ水平:A组较C组显著升高(P<0.05),I组较A组显著升高(P<0.05).②肺功能:吸气阻力(Ri):A组大鼠显著高于C组(P<0.05),I组大鼠与A组、C组比较差异无显著性(P>0.05).呼气阻力(Re):A组大鼠显著高于C组和I组(P<0.05).肺顺应性(CL)A组大鼠较C组明显降低(P<0.05),I组较A组显著提高(P<0.05),但较C组仍有下降(P<0.05).③气道壁厚度:A组大鼠较C组显著增厚(P<0.05),I组较A组显著降低(P<0.05),但仍显著高于C组(P<0.05).气道平滑肌厚度:A组、I组与C组比较均有显著性差异(P<0.05),并且I组较A组显著降低(P<0.05).④TGF-β1表达:I组大鼠气道壁TGF-β1阳性表达:较A组显著降低(P<0.05),较C组仍有显著增加(P<0.05).⑤胶原表达:C组、A组和I组ColⅠ阳性表达:各组间比较差异无显著性(P>0.05).A组ColⅢ阳性表达显著高于I组和C组(P<0.05),I组气道壁ColⅢ表达较C组仍有显著增加(P<0.05).⑥相关性分析:哮喘组大鼠BALF上清中AngⅡ水平与气道壁表达的TGF-β1呈显著正相.结论 哮喘大鼠肺组织局部RAS活化,AngⅡ产生增多.局部增多的AngⅡ可能通过上调TGF-β1的表达,促进ASM增殖肥大和气道壁胶原沉积增加,从而在哮喘气道重塑中发挥重要作用.AngⅡ特异性血管紧张素1受体阻断剂Irbesartan可以减轻气道重塑的发生,并对肺功能有一定程度的改善.     

尼克酰胺促进大鼠脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化

目的探讨尼克酰胺(NA)对脂肪间充质干细胞向有功能的Ⅱ型肺泡上皮细胞分化的影响。方法取大鼠腹部脂肪组织分离培养获得脂肪间充质干细胞并进行鉴定。应用小气道上皮细胞专用培养基和大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞共培养大鼠脂肪间充质干细胞,未添加NA为对照组,添加NA为NA组;免疫荧光检测细胞中表面活性蛋白C的表达;透射电镜观察细胞超微结构;酶联免疫吸附试验检测单独培养的经诱导分化细胞上清液中表面活性蛋白C的含量。结果体外分离培养的大鼠脂肪间充质干细胞具有成脂及成骨能力,表达CD29和CD44,不表达CD31和CD34;经诱导分化共培养14 d后,细胞中有表面活性蛋白C的阳性表达,对照组表面活性蛋白C阳性细胞比例(12.65%)显著低于NA组(27.53%,P0.01);对照组上清液中表面活性蛋白C含量[(9.07±1.39)ng/ml]显著低于NA组[(21.56±3.80)ng/ml,P0.01];透射电镜观察细胞内可见板层小体。结论 NA可促进脂肪间充质干细胞向有活性的Ⅱ型肺泡上皮细胞分化。     

神经生长因子在慢性阻塞性肺疾病大鼠血、肺组织、支气管灌洗液中的表达

目的建立单纯香烟刺激诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型,并观察神经生长因子(NGF)在香烟刺激COPD大鼠、戒烟1个月COPD大鼠中血、肺组织、支气管灌洗液中的表达变化。方法24只雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、COPD组、戒烟1个月COPD组,采用6个月单纯香烟刺激建立COPD大鼠模型。通过观察肺组织病理变化、检测大鼠肺功能、对支气管肺泡灌洗液行分类计数评估COPD动物模型。并测定3组血、肺组织、支气管肺泡灌洗液中NGF蛋白、NGF mRNA表达。结果COPD组、戒烟1个月COPD组大鼠肺组织病理均显示肺气肿形成明显,相比正常对照组,肺顺应性和每分钟通气量均明显下降,气道阻力明显升高(均P<0.05)。COPD组、戒烟1个月COPD组支气管肺泡灌洗液的巨噬细胞总数显著多于正常对照组(P<0.05),但这两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。3组血中NGF表达差异无统计学意义(P>0.05),COPD组、戒烟个1月COPD组肺组织、支气管肺泡灌洗液中NGF蛋白、NGF mRNA表达较正常对照组明显升高(均P<0.05),但这两组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过6个月单纯香烟刺激成功建立COPD大鼠模型,并且戒烟1个月后,停止造模干预,COPD病变仍持续存在。NGF持续性参与COPD的发生发展,即使戒烟,NGF仍参与肺局部炎症反应。