端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸(ASODN)下调端粒酶活性及其阻抑肝癌HepG2细胞周期的实验研究

目的探讨人类端粒酶催化亚单位(hTERT)基因关键区段的反义寡核苷酸(as-hTERT)对HepG2细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法通过PCR合成as-hTERT、正义-hTERT序列,体外作用于HepG2细胞,TRAP法检测正、反义核酸作用后的端粒酶活性变化,流式细胞术观察as-hTERT对肿瘤细胞的凋亡及细胞周期的影响。结果as-hTERT作用浓度为10μmol/L时,肝癌细胞内端粒酶活性明显减低,细胞生长受抑制,细胞凋亡率增至16.02±2.11%。结论应用针对as-hTERT的反义技术在体外可通过下调hTERT基因表达,明显降低肝癌细胞HepG2的端粒酶活性,并抑制肿瘤细胞的生长,hTERT可望成为肝癌基因治疗的新靶点。     

反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的：探讨互补于HBV X基因的翻译起始区（as-Xp)、ENⅡ（as-ENⅡ）区的反义寡核苷酸抑制HepG2.2.15细胞生长及抗病毒作用。方法：合成as-Xp、as-ENⅡ，体外作用于HBV DNA转染的HepG2.2.15利用，利用ELISA法检测反义核酸作用前后细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量，以HepG2.2.15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型，瘤内给予反义寡核苷酸100μg，连续给药5d，取瘤组织采用流式细胞仪（FCM）分析反义核酸诱导瘤细胞凋亡作用，并检测反义核酸作用裸鼠血清中病毒抗原表达情况。结果：as-Xp、as-ENⅡ作用72h的细胞凋亡峰值分别为24％和27．7％，对照为10．89％、7．92％；对荷瘤鼠体内HBsAg和HBeAg的抑制率分别为35％、34％和43％、49％，在体外分别为57％、52％和56％、56％。无关对照序列体内，外无明显的抑制瘤细胞生长和抗病毒作用。结论：as-Xp、as-ENⅡ体内应用可诱导瘤细胞凋亡，并可有效抑制体内，外HBV抗原表达。     

反义寡核苷酸对鼻咽癌细胞端粒酶活性的抑制

目的：检测针对端粒酶的反义寡核苷酸（AS－ODN）对鼻咽癌HNE－1细胞株端粒酶活性的影响。方法：用PCR－ELISA法检测细胞内端粒酶活性。结果：鼻咽癌细胞株HNE－1与5μmol/L，20μmol/L反义寡核苷酸共同孵育1d，对其端粒酶活性抑制率分别为32．9％，61．6％。而同浓度正义寡核苷酸（S－ODNA）对细胞端粒酶活性无抑制作用。结论：该反义寡核苷酸可抑制鼻咽癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特异性和浓度依赖性。     

针对HBV X基因区三个关键位点的反义寡核苷酸体内抑瘤研究

目的：研究HBV X基因区关键区段的反义寡核苷酸（asON)对人肝癌裸小鼠模型的抑瘤生长及体内抗HBV作用。方法：PCR法分别合成了互补于HBV X基因的翻译起始区Xp、DR2、ENⅡ区的反义寡核苷酸及无关对照序列，进行硫代化修饰，以HBV DNA转染的H G2.2.15细胞接种裸小鼠，24h内同部位一次性用药100μg，观察并比较3种反义硫代寡核苷酸的体内抑瘤作用。ELISA法检测反义核酸作用裸小鼠血清中HBsAg和HBeAg含量的变化。结果：3种药物作用裸小鼠组均表现为出瘤潜伏期延长，出瘤率明显低于未用药瘤细胞对照组（P＜0．05），且瘤体生长缓慢。互补于Xp、DR2、ENⅡ区的反义寡核苷酸一次性给药方式对荷瘤鼠HBsAg和HBeAg的表达无明显抑制作用；无关序列不影响荷瘤鼠瘤体生长及HBV抗原表达。结论：针对HBV X基因区关键部位的反义寡核苷酸可抑制荷瘤裸小鼠人肝癌的生长，为HBV相关肝细胞癌的基因治疗提供实验依据。     

TLR7配体Loxoribine抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的 探讨TLR7配体Loxoribine对乙型肝炎病毒的抑制作用。方法 采用MTT法观察Loxoribine药物对体外培养HepG2.2.15细胞的毒性作用,ELISA及荧光定量PCR法分析药物对细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg及HBV DNA含量的影响。结果 低浓度Loxoribine对体外培养的HepG2.2.15细胞生长有一定抑制作用,但随着药物浓度增高,对细胞生长并无明显毒性作用。Loxoribine可有效地抑制HepG2.2.15细胞HBV DNA的复制及HBsAg的分泌,并随着药物浓度的增加和作用时间的延长,对HBsAg抑制率增大,而对HBeAg的分泌无抑制作用。结论 Loxoribine在体外具有抗乙型肝炎病毒的作用。     

白细胞介素－32对 HepG22．15细胞 HBV表达的影响

目的：探讨白细胞介素－32（IL－32）对HepG22．15细胞HBV表达的影响。方法不同浓度的IL－32（0～0．8μg／mL）蛋白质加入HepG22．15细胞（插入HBV全基因组,持续表达）培养液共培养,48 h后收集培养上清液。用实时荧光定量PCR检测HBV DNA载量,用ELISA检测HBsAg、HBeAg表达水平。结果 IL－32抑制HepG22．15细胞HBV的复制,抑制HBsAg、HBeAg表达,且其抑制呈剂量依赖性增强。结论 IL－32可以抑制HepG22．15细胞HBV的表达,IL－32具有抗HBV的作用。     

抗HBV反义寡核苷酸的筛选

目的 筛选出对HBV有抑制作用的反义寡核苷酸(AS-ONs),为HBV的预防和治疗提供基础.方法 合成5条与HBV互补的反义寡核苷酸,转染HepG2.2.15细胞,运用荧光定量PCR和酶联免疫法测定反义寡核昔酸对细胞培养液中HBVDNA和HBsAg、HBeAg的抑制作用.结果 寡核苷酸序列Ⅰ(TAC CTC TYG T...     

髓样细胞分化蛋白抑制乙型肝炎病毒复制的机制研究

目的探讨髓样细胞分化蛋白（MyD88）对乙型肝炎病毒复制的抑制作用及其机制。方法以连接了MyD88全长序列的腺病毒为载体感染HepG2.215细胞,免疫荧光法确认Ad5-MyD88的感染效率后,以无关蛋白GFP作为对照,用ELISA、Real-time PCR、Northern blotting、Southern blotting分别检测上清中的HBsAg和HBeAg的含量及HBV RNA、DNA的表达观察MyD88对HBV复制抑制作用的影响。结果与GFP相比,感染了带有MyD88序列腺病毒的HepG2.215细胞上清中HBsAg、HBeAg含量、细胞内RNA及Core particle DNA的水平全面下降。结论 MyD88可降低HepG2.215细胞内HBV的复制水平;MyD88在抑制HBV复制过程中有着一定的作用。     

反义寡脱氧核苷酸对HBsAg、HBeAg表达的影响

目的 探讨硫代磷酸反义寡脱氧核苷酸对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg的影响。方法 应用ELISA方法检测培养Hep G22215细胞的HBsAg、HBeAg的表达。设计合成HBV5个硫代反义寡聚核苷酸（S-as ODN）靶序列，观察不同靶序列及联合使用对HBV基因复制和表达的影响。结果 本细胞株表达HBsAg、HBeAg的S／C．D均〉5，不同靶位点的S-as ODN对HBsAg、HBeAg表达都有显著的抑制作用及序列特异性．联合用药后对HBsAg和HBeAg的抑制效果有显著的提高。结论 S-as ODN对Hep G22215的HBsAg、HBeAg具有一定的抑制作用，表现为序列特异性、剂量相关性、联合协同性。     

臭氧溶液对HBV体外感染的HepG2细胞的抗病毒作用

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人肝癌HepG2细胞的实验模型,并研究臭氧溶液对感染了HBV后的HepG2细胞的抗病毒作用。方法:乙肝阳性血清与HepG2细胞共孵育建立体外感染模型,采用倒置相差显微镜检测细胞形态,MTT法检测细胞成活率,ELISA法检测HBsAg和HBeAg表达水平,HBV荧光定量PCR检测HBV DNA表达量。结果:体外感染了HBV DNA的HepG2细胞能持续稳定分泌HBsAg和HBeAg,并能产生HBV DNA,通过低浓度臭氧溶液作用后,细胞形态无明显差异,细胞成活率无明显影响(P>0.05),HBsAg和HBeAg均转阴(P<0.01),HBV DNA拷贝量亦明显降低(P<0.01)。结论:较低浓度臭氧溶液对感染了HBV的HepG2细胞有明显的抗病毒作用,对细胞并无损伤。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

大鼠脑出血灶周围星形胶质细胞内糖原含量的变化

目的：研究脑出血后局部超微结构的变化，探讨脑出血的病理生理过程，为临床治疗提供理论依据．方法：健康雄性SD大鼠4只，随机等分为实验组和对照组．实验组采用细菌胶原酶注射制作纹状体脑出血模型，对照组采用相同方法在相应部位注入等体积生理盐水，采用透射电镜观察脑出血后24h病变局部及其周围和对照组超微结构的变化和糖原的水平变化．结果：电镜观察到在脑出血动物出血灶周围区，不同类型的细胞内均可见到各种各样的超微结构改变．最为醒目的是在脑内血肿周围星形胶质细胞胞质和突起内有大量的糖原颗粒聚集，尤其在毛细血管周围的胶质细胞突起内非常明显；小胶质细胞和少突胶质细胞内均未发现明显糖原颗粒存在．在生理盐水对照组动物，相应部位的各种细胞的超微结构正常；而且神经元、各种胶质细胞和毛细血管内皮细胞内均无明显糖原颗粒聚集．结论：脑出血周围糖原含量增高，局部存在明显的糖代谢障碍．     

云南省2006年登革热监测分析

目的了解云南省登革热的疫情动态、人群抗体水平、媒介伊蚊种群（包括成幼虫孳生和密度变化）的动态变化、为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法各级医疗、卫生、检疫机构的医务人员对疑似、临床病例进行及时发现和诊断;在流行季节前随机抽取正常人群血清,-20℃保存,用ELISA方法进行血清学检测;在6～10月采用定时、定点调查法,对登革热的主要传播媒介白纹伊蚊、埃及伊蚊的种群、孳生环境、伊蚊幼虫指数和成蚊密度进行监测,每月1次。结果2006年云南省发生输入性登革热病例18例;健康人群登革热IgG抗体阳性率8．09％。伊蚊幼虫密度布雷图指数（BI）、容器指数（Cl）分别在14～98、4．7～73．68之间,白纹伊蚊成蚊密度在3．5～34只,人工小时之间。结论云南省输入性登革热疫情有不断上升的趋势;人群抗体水平登革热IgG抗体阳性率较高,提示当地人群中可能存在该病毒的既往感染或隐性感染;媒介伊蚊幼虫布雷图指数、容器指数和白纹伊蚊成蚊密度均较高。对登革热传播具有极高的危险性,应引起高度注意。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

黄芪在体内抗氧化作用的实验研究

目的:探讨黄芪水提物抗氧化、清除体内自由基的生物活性。方法:将昆明种小鼠随机分为对照组和黄芪低、中、高剂量组,每组10只。连续灌胃给药7天,采血后,迅速取出肝组织,制成匀浆。测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)含量。结果:黄芪可减少MDA含量,增强SOD活力。结论:黄芪可有效清除体内的氧自由基,具有减少氧化应激引起的器官损伤和延缓机体衰老的作用。     

Cohort Mortality Study in Three Ceramic Factories in Jingdezhen in China

To investigate the health impacts of crystalline silica mixed dust and other potential occupational hazards on workers in ceramic factories, a cohort study of 4851 workers registered in the employment records in 3 ceramic factories in Jingdezhen city of China between 1972 and 1974 was identified. The cohort mortality was traced throughout 2003 with an accumulation of 128970.2 person-years, revealed 1542 deaths. Standardized mortality ratios （SMRs） were calculated for the main causes of death by using Chinese national mortality rates as reference. The mortality from all causes in three ceramic factories was 12.0‰ and the cumulative mortality was 31.8%. Malignant neoplasm, cardiovascular diseases, respiratory diseases, infectious diseases were the first four illnesses that threaten workers’ life, and they accounted for 73.2% of all deaths. The results of this study showed that the standardized mortality ratio for all subjects was 1.02, which is very close to that expected on the basis of the China national mortality rates. Statistically significant mortality excesses for respiratory disease （SMR=1.36）, pneumoconiosis （SMR=37.34）, infectious disease （SMR=5.70） and pul- monary tuberculosis （SMR=3.88） were observed. The mortality of 2938 dust-exposed workers was higher than that of 1913 non dust-exposed workers. Except for pneumoconiosis, the mortality from lung cancer, non-malignant respiratory diseases and pulmonary tuberculosis in dust-exposed workers were significantly increased as compared with that in non-exposed workers, and the relative risks （RRs） were 1.86 （1.16–2.99）, 2.50 （1.84–3.40）, 1.81 （1.34–2.45）. The exposure-response relationships between cumulative dust exposure level and mortality from all causes, colorectal cancer, lung cancer, respiratory diseases, and pulmonary tuberculosis were also identified. The findings indicated that silica mixed dust in ceramic factories has harmful impact on the workers’ health and life span in ceramic factory.     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

2009年泉州市流感监测结果分析

目的了解泉州市2009年流感活动情况及其型别特征。结论通过流行病学和病原学监测,对泉州市流感流行情况进行分析。结果 2009年全市流感样病例占就诊人数的0.26%～2.34%;全年采集监测标本1392份,经RT-PCR法检测样本阳性率为22.34%;经MDCK细胞分离流感毒株134株,其中季节性H3N2和HINl型各占60.45%和11.19%,甲型H1N1流感占21.64%,B型占6.70%。结论 2009年泉州市流感春夏季以季节性H3N2亚型流感为优势毒株,秋冬季以甲型H1N1流感为流行株,需加强泉州市流感监测和流感病毒抗原变异研究。