三氧化二砷抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞生长及其机制的研究

背景与目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人乳腺癌MDA-MB-468细胞的生长抑制作用及其对syk表达的影响.材料与方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度As2O3作用MDA-MB-468细胞不同时间后,对细胞增殖的抑制作用;显微镜观察细胞的形态变化;As2O3作用细胞后用流式细胞术检测细胞周期及Syk蛋白表达变化;RT-PCR检测syk mRNA的表达变化.结果:As2O3可显著抑制MDA-MB-468细胞增殖,且抑制效应呈剂量和时间依赖性(P＜0.05);As2O3,可使细胞周期阻滞在S+G2/M期;候选抑癌基因syk在乳腺癌MDA-MB-468细胞中表达,经As2O3作用后,MDA-MB-468细胞syk mRNA和Syk蛋白表达水平明显升高(P＜0.05).结论:As2O3可能通过上调候选抑癌基因syk的表达,抑制MDA-MB-468细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用.     

As2O3对人膀胱癌细胞凋亡和MDR1表达及细胞周期的影响

目的：观察三氧化二砷(As2O3)对人膀胱癌细胞株BIU-87的凋亡诱导作用及对多药耐药基因(MDR1)蛋白表达、细胞周期的影响。方法：采用四氮唑蓝(MTT)法检测As2O3不同浓度、不同作用时间对BIU-87细胞的生长抑制率；流式细胞术(FCM)检测不同浓度As2O3作用72h后细胞中与凋亡有关蛋白Fas、bcl-2及MDR1蛋白表达、细胞周期变化。结果：As2O3可有效抑制BIU-87细胞的生长增殖，与浓度、时间相关，P＜0．05；Fas、bcl-2的表达分别与浓度增高呈正、负相关，P＜0．05，且二者随浓度增高呈负相关，P＜0．05；MDR1蛋白表达与对照组相比As2O3 1 μmol／L作用后升高，P＜0．05，2、5 μmol／L作用后降低，P＜0．05；随As2O3浓度升高，细胞周期被阻滞在G0／G1期。结论：As2O3可有效抑制人膀胱癌细胞的生长增殖，诱导细胞凋亡及阻滞细胞周期可能起了重要作用。     

砷剂诱导骨髓瘤细胞周期改变与SOCS-1基因去甲基化作用的研究

背景与目的:三氧化二砷(As2O3)在治疗多发性骨髓瘤中具有一定价值.有研究认为As2O3,的治疗作用可能与诱导细胞内抑癌基因去甲基化作用相关.本研究旨在探讨体外As2O3,诱导人骨髓瘤细胞周期改变与细胞内SOCS-1基因去甲基化之间可能存在的关系.方法:采用MTT法观察As2O3,对骨髓瘤细胞U266、RPM18226增殖情况的影响,流式细胞技术检测As2O3对骨髓瘤细胞周期的影响.甲基特异性PCR(MSP)法检测As2O3作用前后骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化状态的改变,实时PCR技术定量检测细胞用药前后SOCS-1基因mRNA的表达变化.结果:与对照组细胞相比,人骨髓瘤细胞U266、RPM18226在较大剂量As2O3(0.5umol/L、1.0 umol/L、2.0 umol/L)作用72 h后,细胞周期分布均发生G0/G1期阻滞,呈现G0/G1期细胞增加,S期细胞减少,细胞周期改变与As2O3,剂量呈正相关(P均<0.05),骨髓瘤细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱(As2O3 0.5 umol/L作用72 h后)或消失(As2O3 1.0 umol/L或2.0 umol/L作用72 h后),SOCS-1基因在mRNA水平上表达明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:As2O3具有剂量依赖的诱导骨髓瘤细胞周期改变的作用,该作用可能与As2O3诱导SOCS-1基因去甲基化和SOCS-1基因再表达相关,这可能为进一步阐释As2O3,治疗多发性骨髓瘤中的可能机制提供新的思路和方向.     

氧化砷对NB4和Jurkat细胞周期的影响

目的：研究氧化砷(As2O3)对白血病细胞系NB4、Jurkat细胞周期的影响及对细胞周期及凋亡相关蛋白的调节作用。方法：以MTT、基因组DNA电泳、蛋白／DNA双参数流式细胞术等方法研究As2O3对白血病细胞的作用及机制。结果：随着As2O3作用时间的延长，白血病细胞增殖明显受到抑制，DNA电泳出现“梯”状条带，流式细胞术检出亚G1峰，细胞周期阻滞于G1和G2／M期，部分细胞周期及凋亡相关的调控蛋白表达改变。结论：As2O3通过改变细胞周期及凋亡相关蛋白的表达而抑制白血病细胞增殖和诱导其凋亡。     

三氧化二砷对人AFP阳性胃癌细胞株FU97的作用及其机制

目的研究三氧化二砷（As2O3）抑制AFP阳性胃癌（alpha-fetoprotein-producing gastric carcinoma.APGC）细胞株FU97增殖、诱导凋亡及其机制。方法MTT法检测药物效应;DNA凝胶电泳和流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;化学发光法、实时荧光定量PCR及ELISA检测AFP、STAT3、VEGF表达变化。结果As2O3可明显抑制FU97细胞增殖,且呈时间和浓度依赖关系;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征性梯状条带;FCM检测在细胞周期G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞周期分析显示G2／M期阻滞;化学发光法、免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR以及ELISA结果证实As2O3可下调FU97细胞AFP、VEGF、STAT3基因的表达。结论As2O3可抑制FU97细胞的增殖、阻滞细胞周期进程诱导凋亡。同时通过下调AFP、VEGF、STAT3基因的表达阻止APGC的恶性进程。     

siRNA抑制survivin基因周期的影响表达对HeLa细胞

目的设计靶向survivin基因的干涉片段,构建真核表达载体pSUPER／survivin并转染宫颈癌HeLa细胞,探讨siRNA抑制survivin表达对联合1射线宫颈癌HeLa细胞周期的影响。方法化学合成干涉引物,退火获得survivin基因的干涉片段,连入pSUPER载体并测序。将测序正确的pSUPER／survivin载体转染HeLa细胞株,RT—PCR法和流式细胞术检测HeLa细胞中survivin基因的表达,流式细胞术检测转染联合＇射线照射后各组细胞的细胞周期数据。结果本实验成功的构建了pSUPER／survivin载体。转染pSUPER／survivin的HeLa细胞其survivin基因表达水平明显低于未转染的HeLa细胞及转染空载体pSUPER的HeLa细胞。1射线照射后,转染pSUPER／survivin的HeLa细胞发生了S期细胞比例下降,及G2／M期阻滞。结论成功的构建了pSUPER／survivin载体,siRNA干涉survivin可以作为提高放射敏感性的潜在分子靶点,通过减少S期细胞比例,促进肿瘤细胞凋亡,通过增加G2／M期阻滞增加放射线的杀伤。     

As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用

目的探讨As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞株的体外抑制作用。方法采用MTT法（四唑盐比色法）动态观察As2O3联合L-OHP对HepG2肝癌细胞的生长抑制作用,并采用两药相互作用系数（CDI）来评价两药相互作用的性质;应用流式细胞术（FCM）检测凋亡率和细胞周期分布。结果 As2O3与L-OHP联合应用,对HepG2肝癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡作用均较相应的单药增强。流式细胞直方图上可见明显的＂凋亡峰＂,且As2O3使肝癌细胞周期阻滞于G2/M期,L-OHP使细胞周期阻滞于S期和G2/M期,两药合用使细胞周期阻滞于S期和G2/M期。结论中低浓度As2O3与L-OHP联合作用具有显著的协同效益,其主要机制可能是As2O3联合L-OHP诱导肝癌细胞凋亡作用及增强细胞周期阻滞作用。     

PIAS3绿色荧光蛋白表达载体构建及其对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的：构建PIAS3绿色荧光蛋白真核表达载体,探讨外源性PIAS3对胶质瘤细胞U251周期和凋亡的影响。方法：利用RT-PCR扩增人全长PIAS3编码序列,并将其克隆到带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1中,得到重组质粒pEGFP-N1-PIAS3。应用脂质体法转染体外培养的人胶质瘤U251细胞株。荧光显微镜观察蛋白表达,用RT-PCR和Westernblot检测PIAS3的表达,Annexin V2FITC和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞增殖周期变化。结果：转染PIAS3基因的细胞株外源目的基因和蛋白表达增强,瞬时转染48 h后,光镜下可见部分细胞变圆,部分细胞脱落死亡;对照组和未转染组无明显变化。流式细胞仪分析显示,pEGFP-N1-PIAS3转染组凋亡细胞增多,细胞凋亡率显著高于未转染组和pEGFP-N1转染组,P=0.0073;U251细胞转染pEGFP-N1-PIAS3后细胞周期阻滞于S期,S期细胞比例增高,P=0.025,G2期细胞比例降低。结论：外源性PIAS3使U251阻滞在S期,诱导胶质瘤细胞凋亡。     

三氧化二砷对人肝癌细胞生长增殖的影响

目的观察三氧化二砷（As2O3）对人BEL7402肝癌细胞株的作用及其机制。方法采用MTF法检测As2O3对BEL7402细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定经不同浓度As2O3处理后的BEL7402细胞周期及增殖细胞核抗原（PCNA）变化,同时Annexin V—FITC／PI双染法检测细胞凋亡。结果三氧化二砷可显著抑制BEL7402细胞生长,且剂量-效应关系显著（r=0．9650,P〈0．01）,半数抑制浓度（IC50）为4．93μmol／L;BEL7402经As2O3处理后可发生凋亡。As2O3能显著下调PCNA蛋白表达（P〈0．01）,并使细胞周期阻滞在G2／M期。结论三氧化二砷可有效抑制人肝癌BEL7402细胞生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、下调PCNA表达及阻滞细胞周期有关。     

慢病毒介导的CIB1过表达对人脑胶质瘤细胞增殖和周期影响

目的 神经胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性肿瘤,其中恶性度最高的多形性胶质母细胞瘤现有的手术及放化疗等治疗方式对患者总体生存率无显著改善.本研究观察重组慢病毒中与肿瘤增殖、周期相关的钙整合素结合蛋白1(calcium-and integrin-binding protein 1,CIB1)基因,在人胶质瘤细胞系U251中的过表达情况及对其增殖和周期的影响.方法 PCR扩增CIB1目的片段,构建CIB1重组pLVX-IRES-CIB1-tdTomato慢病毒载体,将重组慢病毒表达载体感染293T包装细胞,进行病毒的包装并检测病毒滴度,筛选最佳病毒感染复数并感染U251胶质瘤细胞,荧光显微镜观察pLVX-IRES-CIB1-tdTomato慢病毒表达,CCK-8法检测CIB1过表达对人胶质瘤细胞增殖的影响,流式细胞仪检测CIB1过表达对细胞周期的影响.结果 成功构建慢病毒表达载体pLVX-CIB1-IRES-tdTomato,制备了重组CIB1慢病毒和空载体慢病毒,病毒滴度分别为2.9×107和2.8×107 ifu/mL;用最佳病毒感染复数100感染U251细胞.CCK-8检测显示,CIB1感染组与空载体对照组及空白组相比明显促进细胞增殖(P＜0.05),提示CIB1过表达对人脑胶质瘤细胞U251有生长促进效应.流式细胞检测显示,CIB1感染组U251细胞G2/M期细胞百分比明显增加,S期细胞比例下降.结论 CIB1过表达可以促进U251细胞增殖,并使细胞G2/M细胞比例上升.     

三氧化二砷对人卵巢癌耐药细胞株细胞增殖和转移能力的影响

背景与目的:卵巢恶性肿瘤细胞对顺铂的耐药性及早期发生转移严重影响着卵巢恶性肿瘤患者的化疗效果。本研究探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)对人卵巢癌耐药细胞株3AO/cDDP细胞增殖和转移能力的影响及其机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度As2O3对3AO/cDDP细胞的生长抑制率;采用流式细胞技术(FCM)检测As2O3对细胞凋亡率、细胞周期以及Fas、N-myc基因和nm23H1、MTA1基因表达的影响。所有结果均与对照组比较。采用透射电镜技术观察As2O3作用后3AO/cDDP细胞的形态变化。结果:As2O3明显抑制3AO/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。在一定浓度范围内,3AO/cDDP细胞凋亡率与As2O3的浓度和作用时间呈依赖关系,诱导凋亡的最适浓度是3μmol/L。低浓度As2O3作用下,3AO/cDDP细胞周期S期通过受阻,高浓度时诱导S期细胞凋亡;As2O3作用后,两种细胞株Fas和nm23H1基因的表达均上调,N-myc和MTA1基因的表达均下调,差异均有显著性(P>0.05);形态学观察可看到As2O3作用后3AO/cDDP形成典型的凋亡小体。结论:As2O3通过上调Fas、nm23H1和下调N-myc、MTA1基因的表达,有效地降低人卵巢癌耐药细胞株细胞的增殖和转移能力。     

TNF与U937细胞的bcl—2基因表达及细胞周期的关系

目的：探讨肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）与白血病Ｕ９３７细胞的ｂｃｌ－２基因表达和细胞周期的关系。方法：首先用ＴＮＦ处理Ｕ９３７细胞，提取小片段ＤＮＡ进行ＤＮＡ断裂分析，继而用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｓ－Ｐ免疫组化染色法检测Ｕ９３７细胞的ｂｃｌ－２基因表达变化，并通过流式细胞术分析ＴＮＦ对Ｕ９３７细胞的ＤＮＡ含量和细胞周期的影响。最后，用磷酸钙沉淀法将ｂｃｌ－２基因转染到Ｕ９３７细胞，经Ｇ４１８筛选稳定转染子，用不     

三氧化二砷诱导U266细胞p16基因重新表达

背景与目的:DNA甲基化调节基因表达,且与肿瘤发生相关,干扰抑癌基因甲基化可能成为防治肿瘤的新途径。细胞内砷代谢和DNA甲基化都需要S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体。本文拟探讨三氧化二砷(arsenictrioxide,As2O3)诱导因高甲基化失活的抑癌基因p16重新表达的可能性及其机制。方法:以p16基因高甲基化失活的人骨髓瘤细胞系U266为研究对象,经不同浓度As2O3处理后,采用限制性内切酶HpaⅡ及其同裂酶MspⅠ结合PCR技术,检测基因组DNA及p16基因甲基化状态;RT-PCR技术检测p16基因和DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferases,DNMTs)mRNA表达;Westernblot技术检测P16蛋白表达。结果:(1)U266细胞具有p16基因高甲基化并失表达的特点,即基因组DNA经MspⅠ酶切后电泳呈“涂抹”现象,而经HpaⅡ酶切后与未经酶切的DNA一样均呈单一条带;经MspⅠ酶切后的DNA不能经PCR扩增出p16基因产物,而HpaⅡ酶切后的DNA与未经酶切的DNA一样均能扩增出340bp的p16基因产物;RT-PCR法检测U266细胞无p16mRNA产物,Westernblot检测也未见P16蛋白带。(2)0.5～2.0μmol/LAs2O3处理后的U266细胞DNA经HpaⅡ酶切后电泳呈“涂抹”现象,也不再能扩增出p16基因产物。1.0μmol/L和2.0μmol/LAs2O3处理的U266细胞还扩增出p16基因mRNA产物;Westernblot也检测到P16蛋     

Reduced transduction efficiency of adenoviral vectors expressing human p53 gene by repeated transduction into glioma cells in vitro.

PURPOSE: Recombinant adenoviral vectors are widely used in clinical and experimental studies to treat malignant tumors. Recently, host immune responses have been proposed as a major limitation in using adenoviral vectors for repeated gene delivery. We demonstrate another limitation unrelated to host immunity. EXPERIMENTAL DESIGN: We repeatedly transduced an adenoviral vector expressing the human p53 gene (AxCIhp53) into U373MG, a p53-susceptible cell line, and established the AxCIhp53-resistant cell line U373R. Most U373R cells survived even after AxCIhp53 treatment due to reduced transduction efficiency. Expression levels of adenovirus receptors were estimated to investigate the cause of reduced transduction efficiency. The mutant vector was used to overcome the resistance. RESULTS: The transduction efficiency of an adenoviral vector possessing the reporter LacZ gene (AxCAZ2-F/wt) for U373R cells was 25.4-fold less than that for parent cells. The expression levels of integrins alpha(v)beta(3) and alpha(v)beta(5) were found to be decreased in U373R cells without affecting the expression levels of Coxsackievirus and adenovirus receptor. The mutant vector AxCAZ2-F/K20, with a linker and a stretch of 20 lysine residues at the COOH-terminal of the fiber protein, improved the transduction efficiency of U373R cells to 12.6-fold of that of AxCAZ2-F/wt. A mutant vector carrying the p53 gene, AxCAhp53-F/K20, dramatically induced apoptosis in U373R cells. CONCLUSIONS: Glioma cells expressing low levels of adenovirus receptors might survive and proliferate to recur after repeated adenoviral transduction, even if the adenoviral transduction is effective at first. Changing the tropism of vectors is a potent method to overcome resistance.     

三氧化二砷和曲古抑菌素A协同诱导HL-60细胞凋亡的作用及分子机制研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)和曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病细胞HL-60凋亡过程中的协同作用.方法 采用MTT法检测As2O3和(或)TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达.结果 As2O3和TSA联用较单独用药能明显抑制细胞,引起细胞周期阻滞和凋亡,Bax基因表达升高,Bcl-2基因表达降低,Bax/Bcl-2比值升高.结论 As2O3和TSA均能够引起HL-60凋亡,二者具有协同效应,其机制是引起细胞周期阻滞,且上调Bax与Bcl-2比值.     

三氧化二砷诱导Raji细胞凋亡与Survivin基因关系的研究

Objective:To investigate the apoptosis induction by arsenic trioxide (As2O3) in Raji cells and its correlation with cell cycle arrest and expression of the Survivin gene.Methods:After Raji cells were treated with As2O3 in different concentrations (1,2,4 and 8 μM),for 24,48 and 72 h,respectively,and cell proliferation was tested by MTT assay.Apoptosis was observed with electron microscope end DNA electrophoresis.The distribution of cell cycles and cell apoptosis were detected by flow cytometry.Expression of the Survivin gene was determined by real-time quantitative RT-PCR.Results:As2O3 (1-8 μM) inhibited Raji cells growth effectively in a dose- and time-dependent manner.As2O3 at 2-8μM could induce cell apoptosis and cell cycle arrest.However,As2O3 (1 μM) inhibited Raji proliferation only by cell cycle arrest,without any symptoms of cell apoptosis.At the same time,Survivin gene expression was down-regulated after the treatment.Conclusion:As2O3 could induce substantial proliferation inhibition,cell cycle arrest and apoptosis in Raji cell.Cell cycle arrest might be a reason why apoptosis occurs.As2O3 can markedly down-regulate expression of the Survivin gene in a dose- and timedependent manner.The down-regulated Survivin gene might be leading to cell apoptosis by As2O3.     

WWOX基因对人急性淋巴细胞性白血病细胞CCRF-CEM细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究WWOX基因对人急性淋巴细胞性白血病细胞CCRF-CEM细胞凋亡及细胞周期的影响及分子机制。方法:体外培养CCRF-CRM细胞系，将WWOX基因转染入CCRF-CEM细胞，建立高表达WWOX的CCRF-CEM细胞，流式细胞仪法测定CCRF-CEM细胞的细胞周期和凋亡，Western blot法测定WWOX基因、细胞周期和凋亡相关因子的蛋白表达，qRT-PCR法测定caspase-3的mRNA表达。结果:与对照组和空白质粒组相比，转染入WWOX的CCRF-CEM细胞的WWOX蛋白表达显著增加，G0/G1期的细胞比例显著增加，凋亡细胞比例显著增加；CCRF-CEM细胞中cyclin D1、cyclin E、CDK2的蛋白表达显著降低而Wnt-5α和JNK的蛋白表达显著增加，caspase-3的mRNA表达促进CCRF-CEM细胞的凋亡。结论:WWOX基因在急性淋巴细胞性白血病CCRF-CEM细胞中发挥抑癌基因作用，可以有效促进细胞凋亡并抑制细胞周期进程。