蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的探讨蛋白酶激活受体1（PAR1）激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介索-8（IL-8）分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和／或凝血酶抑制剂水蛭索进行刺激，刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养，SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加，增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍，RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放．凝血酶在浓度1kU／L时就可引起IL-8释放量增加，10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰，为基础分泌量的7．5倍。水蛭索可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明，PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加，16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8，PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的 探讨蛋白酶激活受体1(PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果 经过16h的培养,SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加,增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍,RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放,凝血酶在浓度1kU/L时就可引起IL-8释放量增加,10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰,为基础分泌量的7.5倍。水蛭素可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明,PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加,16h达高峰。结论 PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导肺上皮细胞分泌IL-8

目的 探讨蛋白酶激活受体（PAR）-2激动剂对人上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内。并分别用不同浓度的PAR-2激动剂，反PAR-2激动剂进行刺激。刺激时间为2h、8h和16h。用ELISA方法检测上清液中IL-8的分泌水平。结果 经过16h的培养。PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性IL-8的释放增加，tc-LIGRLO引起的最大IL-8释放量达基础分泌量的6倍。反PAR-2激动剂对IL-8释放的影响较小。时间相关曲线表明。PAR-2激动剂的作用从2h开始，16h达高峰。结论 PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞IL-8的促分泌剂。其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用。     

纳米氧化锌对人呼吸道上皮细胞白细胞介素-8表达的影响

目的:探讨纳米氧化锌对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及肺泡上皮细胞(A549)内炎症相关因子白细胞介素-8(IL-8)表达的影响.方法:以BEAS-2B及A549细胞作为靶细胞,应用荧光定量PCR技术及ELISA法检测分析不同剂量纳米氧化锌(0、1、2和4μg/cm2)对细胞内IL-8 mRNA和蛋白表达的影响.结果:纳米氧化锌作用2、4 h,BEAS-2B细胞中IL-8 mRNA及蛋白的表达随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为31.985、54.648,P均＜0.001;蛋白:F分别为128.686、65.486,P均＜0.001);A549细胞中IL-8 mRNA及蛋白的表达亦随纳米氧化锌作用剂量的升高而升高(mRNA:F分别为37.652、9.173,P均＜0.01;蛋白:F分别为l27.299、76.354,P均＜0.001).结论:纳米氧化锌可提高人支气管和肺泡上皮细胞内IL-8 mRNA及蛋白的表达水平.     

AECOPD诱导痰液中白细胞介素一8及白细胞介素-16的检测

目的 探讨慢性阻塞性肺病急性发作期(AECOPD)诱导痰液中白细胞介素-8(IL-8)及白细胞介素-16(IL-16)的变化.方法 AECOPD诱导痰液中IL-8及IL-16水平的检测采用酶联免疫吸附法(ELISA),并与正常人进行对照.结果 AECOPD患者诱导痰液中IL-8及IL-16水平明显高于正常时照组的水平(P＜0.001),AECOPD患者诱导痰液中IL-8水平与FEVI呈负相关(r=-73,P＜0.05),IL-16水平也与FEV1呈负相关(r=-0.54,P＜0.05).结论 IL-8及IL-16均参与了AECOPD气管炎症发病过程,其中IL-8所起作用可能更重要.     

屋尘螨抗原对大鼠支气管上皮细胞白细胞介素6和白细胞介素8表达的影响

目的探讨屋尘螨（Derp1）抗原对大鼠原代支气管上皮细胞白细胞介素6（IL-6）和IL-8表达的影响。方法将大鼠原代支气管上皮细胞随机分为正常对照组和实验组。实验组再分为3个不同浓度组（1、5及10μg/mL）,待细胞生长至融合90%的单层平面时,分别加入不同浓度的Derp1抗原液。在4、8和24 h分别观察各组细胞的形态。采用酶联免疫法（ELISA）检测其细胞上清液IL-6和IL-8的浓度含量。结果正常对照组细胞表现为单层细胞平铺状态,实验组细胞形态及细胞间隙无明显变化,屋尘螨刺激4 h,IL-6和IL-8释放水平开始升高;刺激8 h,IL-6和IL-8继续升高,以5μg/mL组和10μg/mL组更为显著（P〈0.01）;刺激24 h,IL-6和IL-8进一步升高但与8 h组相比无统计学意义（P〉0.05）。结论 Derp1抗原刺激气道上皮细胞释放一系列炎症因子如IL-6和IL-8从而参与哮喘气道炎症反应。     

幽门螺杆菌诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)体外诱导胃上皮细胞表达分泌IL-8的状况.方法:逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测IL-8在Hp诱导的胃上皮细胞的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-8表达产物的量.结果:经Hp标准菌株CCUG17874刺激后,在胃上皮细胞株MKN 45、MKN 28、SGC 7901均检测到IL-8 mRNA;共同培养60 min 开始明显表达(P<0.05),120～180 min时表达最强(P<0.01).刺激24 h后, MKN 45分泌IL-8蛋白最高,为(1 480±360) pg/ml,SGC7901为(1 120±290) pg/ml, MKN 28最低,为(710±220) pg/ml,而未刺激对照组为(63±21 )、(52±16)和(30±18)pg/ml, 刺激组与各自未刺激对照组间有显著差异(P＜0.01),其相差倍数分别为23.5、 21.5、23.7倍,不同细胞株间的无统计学意义.结论:Hp能体外诱导胃上皮细胞株表达分泌IL-8,该作用可能与Hp感染后胃黏膜的炎症损伤机制有关.     

白细胞介素-1β和白细胞介素-8在实验性结肠炎发病中的作用及白细胞介素-1受体拮抗剂治疗作用的探讨

目的研究白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素8(IL-8)在结肠炎发病中的作用,观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)对结肠炎的疗效.方法用30 mg三硝基苯磺酸(TNBS)+0.25 ml体积分数为50%乙醇制成大鼠慢性实验性结肠炎模型,然后于不同时间点尾静脉注入7 mg/kg IL-1ra,进行实验性治疗,以静脉注入3mg氢化可的松琥珀酸钠作为治疗对照,同时观察治疗前后病变结肠组织学变化,测定结肠髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性改变,以原位杂交法观察结肠道组织IL-1β和IL-8 mRNA表达水平.结果模型组大鼠结肠组织均出现粘膜下充血、水肿、出血及炎症细胞浸润、粘膜溃疡和隐窝脓肿,以致炎后3 d为著,7 d后减轻,21 d基本恢复正常.模型组二次致炎后上述表现再次出现.整个炎症期均有IL-1β mRNA表达,而IL-8 mRNA表达出现于致炎后3 d.两种白细胞介素mRNA的表达部位均主要在粘膜固有层和粘膜下层的单核巨噬细胞,但在致炎后3 d内,IL-1β mRNA在肠上皮细胞也有表达.IL-1ra治疗后3组大鼠结肠炎症均明显减轻,伴随相应的MPO下降和SOD上升,两种白细胞介素mRNA的表达均未检出.结论IL-1β和IL-8参与了实验性结肠炎发病过程,IL-1ra对实验性结肠炎有预防性保护和治疗作用.     

慢性阻塞性肺疾病患者血清白细胞介素-8的测定及临床意义

目的:探讨白细胞介素-8(IL-8)和炎症细胞在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用.方法:收集46例急性加重期、40例缓解期COPD患者、20名健康吸烟者和20名健康不吸烟者的血清,并用放射免疫法测定血清中IL-8.结果:COPD急性加重期及缓解期患者血清IL-8水平明显高于健康对照组,COPD急性加重期又明显高于缓解期,差异有显著性(P＜0.01),健康对照组中吸烟者血清IL-8水平明显高于不吸烟者,差异有显著性(P＜0.01).结论:IL-8和中性粒细胞共同参与了COPD气道炎症反应并导致气流阻塞的形成.     

重型乙型肝炎患者血清白细胞介素-8和白细胞介素-10的检测及其临床意义

目的探讨血清白细胞介素-8(IL-8),白细胞介素-10(IL-10)在重型乙型肝炎患者中的变化及其临床意义。方法采用双单克隆抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测32例重型乙型肝炎患者血清IL-8,IL-10水平,并以30例正常人作对照。结果重型乙型肝炎患者血清IL-8水平。显著高于正常人P<0.001。IL-10低于正常人P<0.005。血清胆红素含量愈高和凝血酶原活动度愈低,血清IL-8水平愈高P<0.05而IL-10则愈低P<0.01。重型乙型肝炎合并细菌感染患者组,重叠肝炎病毒感染组血清IL-8水平明显升高P<0.05,而IL-10则明显降低P<0.01。死亡病例比生存者血清IL-8水平显著升高P<0.01,而IL-10则明显降低P<0.01。结论检测血清IL-8水平对评估重型乙型肝炎病情严重性和预后有一定的临床参考价值。     

递增浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞分泌IL-8水平变化

目的观察不同浓度肿瘤坏死因子攻击下肺泡上皮细胞(A549细胞)存活率和分泌IL-8水平变化。方法A549细胞分为对照组和实验组,分别采用不同浓度TNF-α攻击,培养24h后测定各组细胞存活率、上清IL-8水平。结果不同浓度TNF-α攻击均能明显抑制A549细胞生长,其中5000u·ml-1浓度组细胞存活率降为(90.1±1.1)%。TNF-α攻击浓度由100u·ml-1升至1000u·ml-1时,A549细胞分泌IL-8量由9.1±3.5pg·ml-1升至203.7±12.4pg·ml-1,TNF-α攻击浓度超过5000u·ml-1后IL-8分泌量开始下降。结论以100u·ml-1~1000u·ml-1之间浓度的TNF-α进行攻击,A549细胞IL-8分泌量与TNF-α浓度存在剂量-效应关系,反映了急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征状态下肺泡上皮细胞分泌炎性介质情况。     

Effect of puerarin on the release of interleukin-8 in co-culture of human bronchial epithelial cells and neutrophils

Objective:To investigate the effect of puerarin on interleukin(IL)-8 mRNA expression and the protein release in the co-culture of human bronchial epithelial(BEAS-2B) cells and human neutrophils.Methods:BEAS2B cells and neutrophills were cultured separately and co-cultured with puerarin(50,100,and 200μg/mL) for a predetermined time.Cytokines in culture supematant were evaluated by protein array and IL-8 quantified by enzymelinked immunosorbent assay(ELISA).IL-8 mRNA expression was evaluated by real-time quantitative polymerase chain reaction(real-time qPCR).Results:The co-culture of BEAS-2B cells and neutrophils exhibited synergistic effects on IL-8 mRNA expression in BEAS-2B cells,but not in neutrophils after 12 h incubation(P<0.01),as compared with that in BEAS-2B cells or neutrophils alone.IL-8 protein release in the culture supematant was obviously elevated when BEAS-2B cells were co-cultured with human neutrophils as compared with that in the supematant of BEAS-2B cells or neutrophils alone after incubated for 2,6,12,and 18 h(P<0.01).Treatment with puerarin could significantly down-regulate the expression of IL-8 mRNA in BEAS-2B cells and IL-8 release in the supernatant of the co-culture of BEAS-2B cells and neutrophils(P<0.01).Conclusion:Puerarin could exhibit anti-inflammatory activity by suppressing IL-8 production from the co-culture of human bronchial epithelial cells and neutrophils.     

支气管上皮细胞和嗜酸性粒细胞联合培养对IL-8释放的影响

目的:探讨支气管上皮细胞和嗜酸性粒细胞联合培养对细胞趋化因子白细胞介素(IL)-8分泌的影响。方法:人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞与人外周血嗜酸性粒细胞联合培养;应用流式细胞微珠实验(CBA)方法定量细胞培养上清液中细胞趋化因子IL-8的浓度;用RT-PCR方法分析经与嗜酸性粒细胞联合培养后BEAS-2B细胞中IL-8的基因表达。结果:与嗜酸性粒细胞联合培养后,BEAS-2B细胞中IL-8基因表达显著上调,细胞联合培养上清液中IL-8释放显著增加。结论:嗜酸性粒细胞与支气上皮细胞联合培养可活化支气管上皮细胞中IL-8基因表达和促进其蛋白质分泌。     

幽门螺杆菌诱导MKN 45细胞分泌IL-8及其与p38信号转导途径的关系

目的：探讨p38信号转导途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃上皮细胞株MKN45(来源于低分化腺癌)IL-8蛋白分泌中的作用。方法：以特异性p38有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)抑制剂SB203580与MKN45作用2h，Hp标准菌株CCUG17874与MKN45共同孵育24h，ELISA法检测IL-8表达产物的量。结果：Hp显著增加了IL-8在胃上皮细胞株MKN45的分泌，以细菌细胞数比为100时分泌量最高，作用24h时IL-8量达峰值；经终浓度为0．3、1、3、10μmol／L的SB203580作用后，Hp诱导的胃上皮细胞IL-8蛋白的分泌分别减少了28％、49％、60％、76％。结论：Hp诱导胃上皮细胞株MKN45分泌IL-8，MAPK抑制剂明显地抑制该分泌作用，提示该分泌作用可能依赖于p38信号转导途径。     

RSV感染对人支气管上皮细胞分泌IL-8和Eotaxin-1的影响

目的探讨呼吸道合胞病毒（RSV）感染对人支气管上皮细胞（NHBE）分泌白介素（IL）-8、嗜酸细胞趋化因子Eotaxin-1的影响。方法用Hep-2细胞扩增病毒,并进行毒力鉴定。建立并鉴定RSV感染NHBE的体外细胞模型。实验分RSV感染组和正常细胞对照组,感染组以不同滴度分为1000、500、100、50 TCID504个组,酶联免疫吸附（ELISA）法检测12、24、48和72h各组IL-8、Eotaxin-1水平。结果实时荧光定量RT-PCR法鉴定细胞模型建立成功。相同感染时间内（12、24、48和72h）,随着感染滴度增加（50、100、500、1000 TCID50）,各感染组IL-8分泌水平均呈上升趋势,与正常细胞对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0.05）。相同感染滴度内（50、100、500、1000 TCID50）,随着感染时间增加（24、48和72h）,各感染组IL-8分泌水平均呈上升趋势,与12h组比较均有统计学差异（P均〈0.05）;相同感染时间内（12、24、48和72h）,随着感染滴度增加（50、100、500、1000 TCID50）,各感染组Eotaxin-1分泌水平较正常细胞对照组差异无统计学意义。50、100、500 TCID50相同感染滴度内,随着感染时间增加（24、48和72h）,各感染组Eotaxin-1分泌水平较12h组差异无统计学意义。结论 RSV感染人支气管上皮细胞可显著上调IL-8分泌水平,进一步引起以中性粒细胞浸润为主的气道炎症,而早期的RSV感染对Eotaxin-1影响不大。