十肽对变异链球菌生物膜生长和结构影响的实验研究

目的：评价人工合成抗菌肽（十肽）对口腔变异链球菌生物膜生长、结构及活性的影响能力。方法???人工合成十肽（氨基酸序列：KKVVFKVKFK-NH2）通过对细菌生物膜药物最低抑制生物膜形成浓度（MBIC）和药物最低清除已形成生物膜浓度（MBRC）2个指标的测定,研究和评估十肽对变异链球菌单菌生物膜的抑制和清除作用;在激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）下观察十肽作用下变异链球菌生物膜的形态、结构及活性变化。结果???当十肽浓度为62.5~125μg?mL-1时,能够抑制变异链球菌生物膜的形成;当十肽浓度为250~500μg?mL-1时,可破坏已形成24?h后的生物膜,CLSM下观察到十肽作用后生物膜结构残存,死菌增多,生物膜厚度明显降低。结论??新型人工合成抗菌肽（十肽）不仅可抑制主要致龋菌变异链球菌单菌生物膜的生长形成,而且可破坏已经形成24?h后的生物膜结构。     

不同龈下楔状缺损充填材料对牙龈卟啉单胞菌生物膜形成的影响

目的：探讨常用龈下楔状缺损充填材料对牙龈卟啉单胞菌（P.gingivalis）生物膜形成的影响。方法：在48颗离体前磨牙颊侧牙颈部制备同一规格V类洞,将其随机分为A、B、C 3组,每组16颗,分别采用通用纳米固体树脂、通用纳米流体树脂、玻璃离子充填、抛光后,使用Isomet 4000 精密切割机制成包含全部充填材料的试件（近远中径5 mm、龈径3 mm、颊舌向深度 2 mm）。将上述3组试件置于P.gingivalis菌液中培养24 h,采用结晶紫染色法观察P.gingivalis的黏附量,使用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscopy, CLSM）观察P.gingivalis生物膜的形成情况。采用SPSS 22.0 软件包对所得数据进行Kruskal-Wallis 秩和检验。结果：结晶紫染色实验显示,玻璃离子表面黏附P.gingivalis的量显著少于通用纳米固体树脂与通用纳米流体树脂（P<0.05）。CLSM扫描可见,3组间P.gingivalis生物膜内的活菌比例及生物膜厚度无显著差异（P>0.05）;玻璃离子表面P.gingivalis生物膜稀疏,呈小团块状,未聚集成片;通用纳米固体树脂组的P.gingivalis生物膜则呈大块片状,立体结构明显。结论：与通用纳米树脂材料相比,玻璃离子表面更不利于P.gingivalis生物膜的形成。对牙周健康而言,玻璃离子更适用于龈下楔状缺损的充填治疗。     

比较6种口腔材料对体外生物膜形成的影响

目的比较体外混合菌在不同充填材料表面形成早期生物膜的能力,探讨生物膜状态下不同充填材料细菌形成的差异。方法用6种不同修复材料按临床比例制成试件各3件,将各试件放入国际标准菌株牙龈卟啉单胞菌、具核梭杆菌、伴放线放线杆菌、粘性放线菌、血链球菌、变形链球菌混合培养24h,使之在试件表面形成生物膜。在激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)下观察生物膜厚度和平均荧光强度,比较不同充填材料表面生物膜细菌形成的差异。结果形成的生物膜平均厚度依次为聚羧酸锌水门汀>磷酸锌水门汀>玻璃离子体水门汀>复合树脂>银汞合金>富士Ⅱ型玻璃离子水门汀。组间比较发现:四种充填材料生物膜厚度无统计学的差异,富士Ⅱ型玻璃离子水门汀、银汞合金的生物膜厚度与两种垫底材料之间都有显著性差异,复合树脂、玻璃离子体水门汀、磷酸锌水门汀的生物膜厚度与聚羧酸锌水门汀有显著性差异。结论材料表面形成的不同生物膜厚度提示:富士Ⅱ型玻璃离子水门汀、银汞合金具有较强的抑制生物膜形成的能力。     

变形链球菌在三种直接修复用牙色材料抛光表面的早期黏附观察

目的 研究变形链球菌在直接修复用牙色材料表面的早期黏附情况,以期为临床工作提供参考.方法 选用3种直接修复用牙色材料,复合树脂(CR)、玻璃复合体(Giomer)和树脂改性玻璃离子(RMGIC),每种材料制备5个试样,试样(8 mm×8 mm×2 mm)经表面抛光和被覆人工唾液后,进行变形链球菌(Streptococcus mutans,Sm)黏附实验.2h后应用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)和荧光染色技术观察材料表面细菌黏附情况,并采用多独立样本非参数检验方法分别对死菌、活菌黏附面积百分比(Ad、Av)及二者比值(Ad/Av)进行统计学分析,检验水准为双侧α =0.05.结果 CLSM下可见所有材料表面均有细菌黏附,其中主要为活菌.3种材料间的Ad、Av差异均有统计学意义(P＜0.05).复合树脂、玻璃复合体Ad[M(Q)] [0.007％(0.037％)、0.011％(0.028％)]显著小于树脂改性玻璃离子[0.082％(0.082％)],P＜0.05;复合树脂、玻璃复合体Av[M(Q)][0.103％ (0.162％)、0.067％ (0.181％)]显著小于树脂改性玻璃离子[0.690％(0.482％)],P＜0.05.但玻璃复合体的Ad/Av[M(Q)] [0.250(0.188)]显著高于复合树脂[0.069(0.125)]和树脂改性玻璃离子[0.114(0.051)],P＜0.05.结论 变形链球菌在直接修复用牙色材料表面的早期黏附与材料种类密切相关.     

不同pH对变异链球菌体外生物膜形成的影响

目的：了解变异链球菌临床株体外生物膜形成规律以及不同pH对生物膜形成的影响。方法：采用微孔板培养,染色、分光光度测定法（A630）绘制体外不同pH条件下（pH=7.0～5.0）593号、18号菌株以及变异链球菌标准株（ATCC25175）的生物膜生长曲线。结果：体外变异链球菌各株在pH=5.0时均不能形成生物膜;pH=7.0时细菌生物膜形成表现为缓慢的非线性生长,12～24h生物膜开始成熟,24～36h出现一相对的生长停滞期;pH=5.0时对已形成12h的变链菌生物膜生长有明显的抑制作用,但经历12h的酸休克后各菌株的生物膜均能恢复生长。结论：变异链球菌在体外pH=7.0时于12～24h形成稳定的生物膜,该生物膜能抵抗一定程度的酸（pH=5.0）攻击,而浮游状态的细菌则不能。     

变异链球菌ldh—luc荧光报告株的生物学活性检测

目的 探讨本课题组前期所构建的变异链球菌（S.mutans）ldh-luc荧光报告株在浮游态及生物膜状态下的活性及代谢状态的有效性,为探讨抗菌剂对多菌种生物膜中S.mutans的作用提供研究基础。方法 采用生长曲线、扫描电子显微镜、活菌菌落计数等方法研究浮游态及生物膜状态下S.mutans ldh-luc荧光报告株的生长活性及代谢状态,并测定荧光报告株的荧光活性。结果 S.mutans ldh-luc荧光报告株和野生株生长趋势一致,生物膜内可培养活菌数无差别（4h：F=2.13,P 〉 0.05;12 h：F=1.45,P 〉 0.05;24 h：F=2.72,P 〉 0.05;48 h：F=1.85,P 〉 0.05）,SEM检测结果显示4、12和24 h生物膜形成能力无差异;S.mutans ldh-luc荧光报告株从对数生长早期到平台早期荧光表达稳定,荧光量能实时反映活菌数量。结论 S.mutans ldh-luc荧光报告株和野生株生长能力相似,具有稳定的荧光活性,荧光量能准确反映细菌活菌数量,提示可用S.mutans ldh-luc荧光报告株代替野生菌株进行相关实验研究,并可用于实时观测抗菌剂对其的作用。     

变形链球菌生物膜对抗菌剂敏感性的研究

目的用激光共聚焦扫描显微镜（CLSM）观察变形链球菌生物膜对抗菌剂的敏感性.方法在体外形成变形链球菌生物膜,用不同浓度青霉素分别作用于生物膜3 h.生物膜进行荧光染色,CLSM扫描观察.结果变形链球菌生物膜在青霉素浓度为2 500mg/L时作用3 h,未被完全杀死,随着药物浓度增加,生物膜对青霉素的抵抗力逐渐减弱.结论变形链球菌生物膜比浮游状态变形链球菌对青霉素具有更高的抵抗力,提示临床应该以新的思路来研究控制生物膜造成的感染.     

树脂浸润对人工龋表面硬度及变异链球菌生物膜形成的影响

目的研究树脂浸润技术对人工龋模型表面显微硬度（SMH）的影响及对变异链球菌生物膜的作用。 方法收集因正畸需要拔除的无龋坏前磨牙,制取釉质块共17个,其中5个用于研究树脂浸润治疗对人工龋模型SMH的影响,每个牙块分别于脱矿前（0 h）、脱矿24 h后、树脂浸润治疗后等不同时间点测量得到3组数据,自身前后对比。余下12个用于研究树脂浸润治疗对人工龋模型表面变异链球菌生物膜生长的影响,其中6个为空白对照组、6个为树脂浸润处理组,分别在4、24 h观测菌斑生物膜情况。以维氏表面微硬度仪检测人工龋模型SMH,以激光共聚焦扫描显微镜检测人工龋模型表面菌斑生物膜生物量、厚度、活菌百分比等。数据分别以配对t检验和独立样本t检验进行统计分析。 结果脱矿前釉质面SMH值为（316.07 ± 13.54）HV,脱矿24 h后为（22.44 ± 1.73）HV,树脂浸润治疗后为（139.45 ± 21.46）HV,两两比较差异有统计学意义（脱矿前-脱矿后t= 55.879,P<0.001;脱矿后-治疗后t=-14.400,P<0.001;脱矿前-治疗后t = 14.090,P<0.001）。变异链球菌生物膜检测中,4及24 h树脂浸润处理组生物量[（0.59 ± 0.24）、（9.53 ± 1.49）μm³/μm²]均低于空白对照组的生物量[（1.01 ± 0.30）、（15.47 ± 7.32）μm³/μm²],差异有统计学意义（t_{4 h}= 3.232,P_{4 h}= 0.005;t_{24 h}= 2.384,P_{24 h}= 0.042）;4及24 h树脂浸润处理组活菌百分比[（48.73 ± 8.54）%、（60.49 ± 5.33）%]均高于空白对照组的活菌百分比[（31.84 ± 7.30）%、（34.87 ± 10.72）%],差异有统计学意义（t_{4 h}=-4.508,P_{4 h}<0.001;t_{24 h}=-6.419,P_{24 h}<0.001）。树脂浸润处理组24 h生物膜厚度为（6.44 ± 1.51）μm,低于空白对照组的生物膜厚度（12.78 ± 7.17）μm,差异有统计学意义（t= 2.592,P= 0.030）。 结论树脂浸润治疗应用于早期人工龋模型上,能明显改善脱矿牙面的SMH,具有良好的机械性能;同时具有抑制变异链球菌生物膜形成的作用。     

变异链球菌luxS基因对牙菌斑生物膜形成的影响研究

目的敲除变异链球菌中的luxS基因,构建luxS突变株,测试变异链球菌失去luxS基因后形成牙菌斑生物膜的能力。方法把luxS基因敲除重组质粒转入变异链球菌UA159中,得到转化菌,在含有卡拉霉素的培养基中进行筛选,得到变异链球菌luxS基因突变株,并利用聚合酶链式反应（PCR）和哈氏弧菌发光实验对变异链球菌luxS突变株进行检测,通过扫描电镜,对不同时间段变异链球菌luxS突变株和变异链球菌UA159在BHIS培养液（含1%蔗糖的脑心浸液）和BHIG培养液（含1%葡萄糖的脑心浸液）中形成的生物膜进行比较。结果成功的构建了变异链球菌luxS突变株,在BHIS培养液中,变异链球菌luxS突变株形成生物膜的能力比变异链球菌UA159弱,而在BHIG培养液中,二者无显著差异。结论变异链球菌luxS基因对牙菌斑生物膜的形成有重要的影响,并且luxS基因对变异链球菌生物膜的调控是蔗糖依赖型的。     

唾液覆盖基托材料对变形链球菌gbpB基因表达的影响

目的：比较不同基托材料被唾液覆盖前后变形链球菌gbpB基因表达的差异。方法：将各组材料分为唾液覆盖组和未覆盖组,于体外厌氧环境下（95%N2,5%CO2,37℃,16h）在材料表面形成变形链球菌生物膜,收集生物膜菌体,提取总RNA,逆转录。实时荧光定量PCR方法检测各组样本gbpB基因的表达差异。结果：唾液未覆盖组中,热固性基托树脂表面gbpB表达最高（P〈0.05）,钴铬合金与瓷无显著性差异。唾液覆盖组中,各组试件表面gbpB表达均较唾液未覆盖组有所降低,材料之间无显著性差异（P〉0.05）。结论：不同材料表面gbpB表达量存在一定的差异,热固型基托树脂表面gbpB表达量最高,唾液可能对gbpB的表达产生一定的抑制作用。     

纯镁微弧氧化-HF-硅溶胶复合处理涂层细胞相容性研究

目的:对纯镁微弧氧化经HF-硅溶胶复合处理涂层进行成骨细胞生物相容性检测,评价纯镁表面微弧氧化经不同复合处理涂层后的细胞相容性。方法:实验分为3组,纯镁微弧氧化组为对照组(A组)、纯镁微弧氧化-硅溶胶复合处理组(B组)、纯镁微弧氧化-HF-硅溶胶复合处理组(C组)。将MC3T3-E1系成骨细胞接种在3组材料表面,分别通过扫描电镜、激光共聚焦、CCK-8、ALP对成骨细胞的生长、黏附、增殖以及活性进行检测。结果:扫描电镜和激光共聚焦显示B组和C组表面细胞的生长和黏附均优于A组,C组优于B组。CCK-8和ALP的检测结果显示3组材料表面细胞的增殖、活性为C组＞B组＞A组,3组的比较差异均具有统计学意义。结论:3组材料均具有良好的生物相容性,而纯镁微弧氧化-HF-硅溶胶复合处理后的生物相容性最佳。     

Factors affecting the shear bond strength of bonded composite inlays

PURPOSE: This article analyzes the influence of different pretreatments on the bond strength between inlays and the resin cement of three different composite inlay systems: Z-100, Targis, and Art Glass. MATERIALS AND METHODS: Four separate treatments of the composite-bonding agent interface were investigated: (1) untreated surface, (2) grinding, (3) sandblasting, and (4) sandblasting followed by silane treatment. Surface topography, roughness, and shear bond strength were evaluated using digital scanning electron microscopy, confocal laser scanning profilometry, and a Lloyd LRX equipped for shear bond testing, respectively. RESULTS: The bond strength is presented both with respect to composite surface pretreatment and with respect to different composite inlay systems. Independent of the composite inlay system, the sandblasted and silane-treated surface was found to give the highest bond strength values, followed by the sandblasted and ground surfaces. The untreated surface showed the lowest bond strength. For pretreated surfaces, Targis showed the highest (P < 0.05) bond strength values, followed by Art Glass and Z-100. This distribution, however, was reversed for the untreated interface, where Z-100 showed the highest bonding strength (P < 0.05). CONCLUSION: Surface pretreatment and roughness as well as the inlay material have an impact on the bond strength and the retention of composite inlays.     

可切削复合树脂材料磨损性能的研究

目的：研究可切削复合树脂材料与天然牙釉质磨损性能的匹配情况。方法在微摩擦磨损实验机上,模拟口腔力学和化学环境,以三种新型的可切削复合树脂材料( Upcera 复合树脂、Lava Ultimate、High-Class)为研究对象,天然牙釉质为对磨物。实验前,用激光共聚焦显微镜测试试件表面粗糙度Sa,实验后,激光共聚焦下观察可切削复合树脂试件的磨斑形貌、测量其磨斑面积及对磨物牙釉质的磨斑宽度,扫描电镜下观察试件磨斑的微观形貌。采用单因素方差分析进行统计学分析。结果牙釉质的磨斑面积和磨斑宽度大于其他三种可切削复合树脂材料(P<0.05)。结论与牙釉质相比,三种可切削复合树脂具有更佳的耐磨性及较低的对磨物磨损。     

激光共聚焦显微镜观测体内回植的GFP标记的3D打印组织工程颌骨

目的:激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protins,GFP)标记的3D打印组织工程颌骨回植后体内移植情况,为筛选组织工程颌骨并为其后续功能研究提供技术基础。方法:采用羊椎骨煅烧制备陶瓷化骨粉,结合聚乙烯醇制备组织工程颌骨支架,复合GFP慢病毒转染的羊骨髓间充质干细胞(Bone Marrow mesenchymal Stem Cells, BMSCs),回植羊颌骨缺损动物模型,使用激光共聚焦显微镜观察不同时间点其体内分布及存活情况。结果:GFP慢病毒转染的BMSCs,流式细胞仪检测转染率为95.4%,基因测序结果与GFP基因一致。回植后使用激光共聚焦显微镜三维立体成像技术观察到GFP标记的BMSCs在组织工程骨支架上存活3个月以上。结论:激光共聚焦显微镜三维重建技术可很好地观察GFP标记的3D打印组织工程颌骨支架上的细胞移植情况,为组织工程骨的动物实验研究提供了很好的观察方法。     

口腔移植材料与成骨细胞相容性的激光共聚焦显微镜观察

目的:观察不同处理的钛金属表面与成骨细胞的生物相容性.方法:利用共聚焦显微镜荧光信号通过物镜返回光电倍增管成像的原理,获取不透光的钛金属表面图像,对钛金属表面(打磨、喷砂、喷砂酸蚀表面)接种的成骨细胞骨架进行荧光标记,并用共聚焦显微镜获取荧光图像,观察细胞和钛金属表面的生物相容性,并且通过逐渐深入的多层扫描,探索细胞和移植材料结合的进一步信息.结果:喷砂表面适合成骨细胞的贴附和生长.结论: 钛金属与成骨细胞的结合情况主要与金属表面的物理形态有关.     

Imaging and non-contact profile analysis of Nd:YAG laser-irradiated teeth by scanning electron microscopy and confocal laser scanning microscopy

Two types of non-contact optical profilometers, one performing scanning electron microscopy (SEM) installed with a 3D analyzer and another performing confocal laser scanning microscopy (CLSM) were applied to evaluate imaging and surface profiles simultaneously on enamel and dentin after Nd:YAG laser irradiation. The results were correlated with a stylus profilometer. Surface roughness (Ra) was also measured. Laser was applied perpendicularly to vertical sections of human extracted caries-free molars. Analysis was done on the same spot of the same specimen by both SEM and CLSM for comparison. After irradiation, enamel produced a flake-like surface and dentin resulted in a melted globule surface. SEM and CLSM gave similar surface profiles and different image contrast. The Ra obtained by CLSM was larger than that by SEM. Both SEM and CLSM provided a non-contact evaluation of tooth structural change by laser irradiation through surface analysis in selected micro areas, which was not possible using the stylus profilometer.     

激光共聚焦显微镜观察不同光照模式对复合树脂充填体微渗漏的影响

目的:激光共聚焦显微镜下观察比较不同光固化模式下复合树脂固化后微渗漏的差别。方法:选取30个离体牙在颊面备4 mm×4 mm×2 mm窝洞,光固化树脂(3M Z350)分层固化充填,并随机分为A、B、C 3组,分别用弱光引导(A组)、间歇光照(B组)和高强度光照(C组)3种不同光照固化模式进行固化。标本充填完成后在37℃水浴条件下分别置于1 g/L罗丹明B荧光染料浸染,24 h后激光扫描共聚焦显微镜测量染液渗入深度,定量评价微渗漏程度,并对检测结果进行统计学分析。结果:A、B、C 3组微渗漏差异无统计学意义(P>0.05)。结论:弱光引导和间歇光照技术对复合树脂的边缘封闭性无明显影响。     

含氟涂料对光固化复合树脂腐蚀作用的探讨

目的评估不同含氟涂料对5种光固化复合树脂表面的腐蚀作用。方法选取5种光固化复合树脂[微填料复合树脂（Ar）、纳米混合复合树脂（Gr）、纳米复合树脂（Su）、复合体（GI）和聚硅氧烷复合树脂（Ad）]制成φP6mm×3mm试样各25个。表面磨平抛光后分别用4种含氟涂料（F、G、D、B）于37℃100％相对湿度下处理30min，单次蒸馏水作为对照。扫描电镜观察试样表面的形态改变，并行激光共聚焦显微镜分析。结果含氟涂料对4种复合树脂均产生腐蚀作用（Su除外），腐蚀程度由强到弱的顺序为F、G、D、B。试样腐蚀形式均为表面粗糙。含氟涂料F和G作用于Ad后其改变最明显。经激光共聚焦显微镜分析，含氟涂料处理后复合树脂表面参数数值均增大。Su表面参数改变不明显。结论含氟涂料对复合树脂有腐蚀作用，腐蚀程度与复合树脂的类型、含氟涂料的种类相关。     

加载氧化石墨烯纯钛的表面性状及其对细菌黏附和成骨细胞结构的影响

目的 研究纯钛表面加载氧化石墨烯的工艺表征及对金黄色葡萄球菌黏附和成骨细胞生物结构的影响。方法 采用电镀法分别将4种质量浓度（20、50、80、100 μg·mL ^-1）氧化石墨烯加载于纯钛表面,通过场发射扫描电子显微镜、显微拉曼光谱仪和接触角测试仪对其形貌、性状及亲水性能进行测试;以金黄色葡萄球菌和成骨细胞为模型,与改性后的纯钛共培养,利用场发射扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察细菌黏附和成骨细胞形态和结构的变化。结果 4种质量浓度的氧化石墨烯通过电镀法成功加载于纯钛表面,提高了纯钛表面的亲水性能,有利于金黄色葡萄球菌黏附和生长,并可改变成骨细胞形态和结构。结论 纯钛-氧化石墨烯复合材料无抗菌性能,但具有较好的生物相容性。     

加载氧化石墨烯纯钛的表面性状及其对细菌黏附和成骨细胞结构的影响

目的 研究纯钛表面加载氧化石墨烯的工艺表征及对金黄色葡萄球菌黏附和成骨细胞生物结构的影响。方法 采用电镀法分别将4种质量浓度（20、50、80、100 μg·mL ^-1）氧化石墨烯加载于纯钛表面,通过场发射扫描电子显微镜、显微拉曼光谱仪和接触角测试仪对其形貌、性状及亲水性能进行测试;以金黄色葡萄球菌和成骨细胞为模型,与改性后的纯钛共培养,利用场发射扫描电子显微镜和激光共聚焦显微镜观察细菌黏附和成骨细胞形态和结构的变化。结果 4种质量浓度的氧化石墨烯通过电镀法成功加载于纯钛表面,提高了纯钛表面的亲水性能,有利于金黄色葡萄球菌黏附和生长,并可改变成骨细胞形态和结构。结论 纯钛-氧化石墨烯复合材料无抗菌性能,但具有较好的生物相容性。