三氧化二砷与传统及新型药物协同抑制皮肤T细胞淋巴瘤细胞系增殖

  目的  探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As₂O₃）与传统药物地塞米松（Dexamethasone,DXM）、依托泊苷（Etoposide,VP-16）、甲氨蝶呤（Methotrexate,MTX）和新型药物硼替佐米（Bortezomib,BTZ）、组蛋白去乙酰化酶抑制剂-辛二酰苯胺异羟肟酸（suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA）联合对人皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）细胞系Hut-78、Hut-102细胞的增殖抑制作用。  方法  不同浓度的As₂O₃单药或与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合作用于Hut-78、Hut-102细胞48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,应用联合指数分析两药是否具有协同效应。  结果  As₂O₃、DXM、VP-16、MTX、BTZ、SAHA单药对Hut-78、Hut-102细胞的增殖均具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性,培养48h的半数抑制浓度分别为5 μmol/L、500 μg/L、2.5 μg/L、1 μg/L、10 μmol/L、2.5 μmol/L。As₂O₃与DXM/VP-16/MTX/BTZ/SAHA联合时具有协同效应,抗肿瘤作用更为显著。  结论  As₂O₃单药及其与DXM/VP-16/MTX/ BTZ/SAHA联合在体外可有效抑制CTCL细胞增殖。As₂O₃是一种很有前景的治疗CTCL的药物,As₂O₃与DXM/VP-16/MTX/BTZ/ SAHA等传统或新型药物联合可为CTCL临床的治疗提供实验依据。      

维生素C联合三氧化二砷对膀胱癌T-24细胞株的作用

 目的 探讨维生素C联合三氧化二砷（As2O3）对膀胱癌T-24细胞的影响及其机制。方法 体外培养T-24细胞,分为6组,对照组不做处理,实验组分别加入不同浓度的As₂O₃ （0.4、4、40 μg/ml）组,维生素C（400 μg/ml）组、维生素C（400 μg/ml）+ As₂O₃ （0.4 μg/ml）组（联合组）,采用细胞增殖曲线检测T-24细胞生长差异情况,用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率变化,RT-PCR、Western blot技术检测分析caspase-3、survivin mRNA及蛋白的表达情况。结果 联合组、维生素C（400 μg/ml）组、As₂O₃ （4 μg/ml）组及As₂O₃ （40 μg/ml）组均对膀胱癌T-24细胞增殖有显著抑制作用;联合组将细胞阻止在G₀/G₁期,且凋亡率显著高于其他五组（P<0.05）;RT-PCR及Western blot结果显示,维生素C（400 μg/ml）组、联合组的caspase-3 mRNA和蛋白表达升高,survivin mRNA和蛋白表达降低。结论 维生素C联合As₂O₃ 可抑制膀胱癌T-24细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与上调caspase-3 mRNA、蛋白,下调survivin mRNA、蛋白表达有关。     

Ras和磷酸化ERK信号通路参与三氧化二砷逆转耐药作用机制的研究

  目的   体外实验研究三氧化二砷(As₂O₃)对人胃癌阿霉素耐药细胞株(SGC7901/ADM)的逆转耐药机制。   方法   MTT法检测磷酸化ERK(p-ERK)激动剂G-CSF作用前后As₂O₃的逆转耐药倍数; 免疫细胞化学法测定As₂O₃及G-CSF作用前后SGC7901/ADM细胞内Ras和p-ERK的变化; 流式细胞仪测定G-CSF和As₂O₃干预后SGC7901/ADM的细胞周期和凋亡率。   结果   SGC7901/ADM对ADM耐药, As₂O₃可逆转耐药, 其中0.5μmol/L As₂O₃作用48 h后逆转耐药倍数约为6.29。G-CSF干预后, 逆转耐药倍数降至4.72;SGC7901/ADM中Ras表达高于亲本细胞株SGC7901/S, 而p-ERK无明显差异, As₂O₃可下调Ras及p-ERK的表达。G-CSF干预后, As₂O₃下调Ras及p-ERK表达的能力较干预前显著降低。0.1μmol/L和0.5μmol/L As₂O₃组的G₀~G₁期细胞比例和凋亡率均显著高于各个对照组; G-CSF干预后同一剂量的As₂O₃组G₀~G₁期细胞及凋亡率较干预前均显著降低。   结论   As₂O₃可逆转人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM对ADM的耐药作用, 其机制与下调Ras/p-ERK信号传导通路中Ras、磷酸化ERK的表达有关。      

三氧化二砷联合环腺苷酸拟似物诱导骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：近年来随着新型药物和免疫疗法的成功应用，多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者的缓解率、缓解深度和无病生存率较以往显著提高，然而仍有相当一部分MM患者属于复发/难治性病例。我们的前期研究发现，环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）拟似物和三氧化二砷（arsenic trioxide，As₂O₃）可以抑制MM细胞增殖并诱导其凋亡，成为MM治疗的新途径。该研究进一步探究As₂O₃单独和联合环腺苷酸拟似物8-对氯苯硫基环腺苷酸［8-(4-chlorophenylthio) adenosine 3’, 5’-cyclic monophosphate，8-CPT-cAMP］对MM细胞的影响及可能作用机制。方法：以不同浓度As₂O₃和8-CPT-cAMP单独和联合处理MM细胞系U266细胞，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测其增殖，应用药物联合指数（combination index，CI）分析两药是否存在协同效应，同时采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率，进一步利用蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果：U266细胞经As₂O₃和8-CPT-cAMP单独或联合处理72和120 h后，联合用药组细胞增殖抑制率分别为（18.01±0.13）%和（28.01±0.14）%，明显高于单独用药组［As₂O₃组为（11.35±0.01）%和（16.01±0.14）%，8-CPTcAMP组为（12.26±0.30）%和（15.43±0.23）%，P均<0.05］；但两药联合处理U266细胞的CI值均大于1。联合用药组72和120 h后U266细胞凋亡率分别达到（22.26±0.13）%和（31.03±0.14）%，显著高于单药组［As₂O₃组为（10.06±0.01）%和（12.35±0.14）%，8-CPT-cAMP组为（13.26±0.30）%和（18.76±0.23）%，P均<0.05］。同时联合用药组U266细胞内caspase-3蛋白剪切活化和Bcl-2表达下降。结论：As₂O₃联合8-CPT-cAMP对MM细胞凋亡诱导效应强于单药，但无协同效应。     

三氧化二砷联合热疗对大鼠肝脏移植瘤模型凋亡相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)联合热疗对大鼠肝脏移植瘤细胞的凋亡、热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)、p53和增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。方法 建立大鼠肝脏移植瘤模型,分别对荷瘤大鼠给予生理盐水、As₂O₃、热疗及As₂O₃联合热疗,观察肿瘤生长情况,用免疫组化法检测肿瘤细胞凋亡及肿瘤组织中HSP70、p53及PCNA的表达。结果 As₂O₃ 联合热疗的抗肿瘤作用最明显,坏死及凋亡细胞数量增加。对照组HSP70、p53及PCNA阳性细胞表达率分别为30.12%±3.60%,27.64%±4.90%和74.23%±6.35%,三氧化二砷联合热疗组HSP70、p53及PCNA阳性细胞表达率分别为87.4%1±5.70%,90.06%±6.42%和22.10%±6.17%。与对照组(仅给予As₂O₃或热疗处理)比较,经As₂O₃联合热疗处理后,HSP70、p53表达显著升高(P=0.000＜ 0.05),PCNA表达则显著降低(P=0.000 ＜0.05)。结论 As₂O₃与热疗联合应用治疗大鼠肝癌有明显的协同作用;As₂O₃联合热疗通过诱导HSP70及p53的表达和降低PCNA的表达抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡。     

三氧化二砷对人食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用

目的探讨三氧化二砷(As₂O₃)对食管癌离体肿瘤细胞EC-1的放射增敏作用,并探讨其机制。方法利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,观察As₂O₃对食管癌细胞株EC-1的放射增敏作用。流式细胞法观察As₂O₃对细胞周期分布及细胞凋亡的影响。结果As₂O₃对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应,3 μmol/L As₂O₃作用48 h的放射增敏比为1.285。药物作用后G₂／M期细胞比例增加,G₀/G₁期和S期细胞比例减少;细胞凋亡指数增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论As2O3对食管癌细胞株EC-1有明显的放射增敏效应。放射增敏的机制可能与As₂O₃抑制EC-1细胞的修复能力、使细胞周期阻滞在G₂／M期、G₀/G₁期和S期细胞减少以及凋亡增加有关。     

TRPV5 TRPV6对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响

  目的  观察TRPV5和TRPV6蛋白表达水平对结肠癌SW480细胞内Ca2+水平及细胞增殖、凋亡、迁移等生物学行为的影响。  方法  给予TRPV5、TRPV6通道激动剂1-25（OH）₂D₃及抑制剂CuCl₂作用结肠癌SW480细胞后,采用免疫组织化学法、Western blot及实时荧光定量PCR技术检测TRPV5、TRPV6蛋白及TRPV5、TRPV6 mRNA表达的变化。使用高速离子成像系统观察结肠癌SW480细胞内Ca2+水平的变化;通过MTT法、TUNEL法及划痕修复法观察结肠癌SW480细胞增殖凋亡及迁移的变化。  结果  1-25（OH）₂D₃明显上调结肠癌SW480细胞TRPV5、TRPV6 mRNA及蛋白表达水平,使结肠癌SW480细胞内Ca2+水平增加,促进结肠癌SW480细胞增殖、迁移及抑制其凋亡（P＜0.05）。CuCl₂明显下调结肠癌SW480细胞中TRPV5、TRPV6蛋白及mRNA表达,使结肠癌SW480细胞内Ca2+水平降低（P＜0.05）,抑制结肠癌SW480细胞的增殖、迁移及促进细胞的凋亡（P＜0.05）。  结论  结肠癌SW480细胞中TRPV5和TRPV6蛋白表达水平的变化,能通过调控细胞内Ca2+水平影响细胞的增殖、迁移和凋亡等生物学行为。      

抑制ERK和Akt激酶对曲古柳菌素诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响

  目的  探讨抑制胞外信号调节激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）和蛋白激酶B（Akt）对曲古柳菌素（TSA）诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响。  方法  常规培养OVCAR-3卵巢癌细胞株,分为对照、TSA、TSA+PD98059和TSA+Y294002四组,其中TSA组为TSA 2.5 μM处理24 h,TSA+PD98059组和TSA+Y294002组采用5 μM PD98059或Y294002预处理1 h后,2.5 μM TSA处理24 h。MTT法分析各组细胞生存情况,Western blot法检测P53及细胞色素C蛋白的表达,分光光度法检测Caspase-9,Caspase-8和Caspase-3活性。  结果  MTT分析结果显示,与对照组比较,TSA处理后显著降低OVCAR-3细胞的存活率（P < 0.05）;与TSA单独处理比较,采用5 μM PD98059或Y294002预处理可以进一步降低OVCAR-3细胞的存活率（P < 0.05）。Western bot分析结果显示TSA处理可以显著增加OVCAR-3细胞中P53及细胞色素C蛋白的表达,增加OVCAR-3细胞Caspase-9,Caspase-8和Caspase-3活性;对比TSA单独处理,TSA和Y294002联合应用可以增加OVCAR-3细胞中P53及细胞色素C蛋白的表达,提高Caspase-9,Caspase-8和Caspase-3的活性（P < 0.05）,而TSA和PD98059联合应用无这种效果。  结论  TSA可以诱导卵巢癌OVCAR-3细胞凋亡,其机制可能与上调P53及细胞色素C蛋白表达,激活Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3和线粒体凋亡途径有关。抑制Akt可以通过以上机制进一步促进TSA诱导的细胞凋亡。      

MLN4924促进人肺腺癌细胞株A549凋亡的机制研究

  目的  观察MLN4924对人肺腺癌A549细胞增殖、凋亡的影响,探讨MLN4924促进凋亡的作用机制。  方法  不同浓度的MLN4924作用细胞不同时间后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、NF-κB p65及CDT1相对表达量。  结果  MLN4924能够明显抑制A549细胞的增殖,并且具有浓度和时间依赖性。流式细胞仪检测结果显示药物作用后,细胞被阻滞在S期。Western blot结果显示药物作用后细胞内Caspase-3、CDT1蛋白的表达量增加,而NF-κB p65的表达量减少。  结论  MLN4924能够明显抑制A549细胞增殖、促进细胞凋亡,其相关机制为MLN4924可阻滞细胞于S期,增加Caspase-3蛋白表达,抑制NF-κB通路的激活。      

抗MUC1单克隆抗体C595对人卵巢癌0VCAR-3细胞增殖和凋亡的研究

  目的  探讨抗MUCI单克隆抗体C595在体外抑制高表达MUC1的人卵巢癌OVCAR-3细胞增殖并诱导其凋亡的作用。  方法  免疫荧光标记法和流式细胞术检测单克隆抗体C595标记的MUC1在OVCAR-3细胞表面的表达; MTT法、克隆形成试验检测处理后细胞生长抑制情况, TUNEL法检测细胞凋亡, EIISA检测细胞内细胞色素C和Caspase-3活性的变化。  结果  单克隆抗体C595对人卵巢癌OVCAR-3细胞具有明显的增殖抑制作用, 且呈剂量-时间依赖性, TUNEL结果表明C595(IC₅₀)可以诱导细胞凋亡。ELLSA检测显示治疗后的细胞凋亡与释放细胞色素C和Caspase-3浓度的上升相关。  结论  单克隆抗体C595可以在体外抑制人卵巢癌OvCAR-3细胞增殖并诱导其凋亡, 其机制可能与上调Caspase-3蛋白活性有关。      

Phenylarsine oxide (PAO) more intensely induces apoptosis in acute promyelocytic leukemia and As2O3-resistant APL cell lines than As2O3 by activating the mitochondrial pathway

We studied the cytotoxic effect of an organic arsenical compound, phenylarsine oxide (PAO) on an acute promyelocytic leukemia (APL) cell line (NB4) and an As₂O₃-resistant NB4 subline (NB4/As). Cell growth was inhibited by 50% (IC₅₀) upon 2-day treatment with As₂O₃ or PAO at 0.54 and 0.06 μM, respectively in NB4 cells (P = 0.025), and 2.80 and 0.08 μM, respectively in NB4/As (P = 0.030). 0.1 μM PAO increased the proportion of hypodiploid cells (50.3%) by a greater degree than the same dose of As₂O₃ (3.8%) in NB4 cells. In NB4 cells, 0.1 μM PAO reduced the mitochondrial transmembrane potential (20.5% in a PI^negative-Rhodamine123^low fraction) by a greater degree than 1 μM As₂O₃ (7.1%). Western blotting showed that 0.1 μM PAO downregulated the expression of both Bcl-2 and Bcl-X_L proteins, whereas I μM As₂O₃ downregulated only Bcl-2 expression. These results suggest that the cytotoxic effect of PAO on an APL cell line and As₂O₃-resistant subline is significantly higher than that of As₂O₃. PAO-induced apoptosis seems to be related to the activation of the mitochondrial pathway and downregulation of both Bcl-2 and Bcl-X_L. PAO is a considerable agent for relapsed/refractory APL and for purging APL cells following stem cell transplantation.     

芹菜素诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G2/M期阻滞

  目的  探讨芹菜素（apigenin）对乳腺癌T47D细胞系凋亡及细胞周期的影响。  方法  常规培养T47D细胞, 用四甲基偶氮唑盐法（MTT法）检测芹菜素对乳腺癌T47D细胞系细胞增殖的影响。荧光染色法观察凋亡细胞的形态变化。流式细胞仪检测细胞凋亡率及周期分布。Western blot检测不同浓度（0、10、20、40、80 μM）芹菜素对凋亡及周期相关蛋白表达的影响。  结果  随着芹菜素浓度的增加, 芹菜素对T47D细胞的增殖抑制作用明显增强（P < 0.05）; 凋亡荧光染色及流式细胞仪显示, 芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞凋亡, 随着其浓度的增高, 各组凋亡率分别为（2.41±0.072）%、（10.87±0.028）%、（18.02±0.056）%、（37.05± 0.092）%和（78.38±0.082）%, 与对照组相比, 差异有统计学意义（P < 0.05）; 流式周期分析显示, 芹菜素能够使T47D细胞系G₂/M期阻滞, 随着芹菜素浓度的增高, 不同浓度组细胞G₂/M期所占的比例逐渐增加, 差异有统计学意义（P < 0.05）; Western blot显示p53、p21、Bax和p-Cdc2的含量及Caspase-3, PARP剪切明显增加, 而Bcl-2、CyclinB1及Cdc2的含量却显著减少。  结论  芹菜素能够诱导乳腺癌T47D细胞系p53依赖性凋亡及G₂/M期阻滞, 从而明显抑制其增殖。      

Arsenic trioxide therapy in acute promyelocytic leukemia and beyond: from bench to bedside

Arsenic trioxide (As₂O₃) has a long history of use in medicine. However, it was almost forgotten in Western medicine in the recent centuries. Prompted by reports from China about successful treatment of acute promyelocytic leukemia (APL) with As₂O₃, there was again increasing interest in this drug in the 1990s. This review summarizes the considerable knowledge about the mechanisms of action of As₂O₃ that was gained during the last 5 - 10 years. It is focused in particular on the effects of As₂O₃ in non-APL cells. Since As₂O₃ seems to induce apoptosis and inhibits growth in a large variety of cellular targets, it might become an alternative or adjunct drug to conventional chemotherapy. As₂O₃ can even be effective in cells resistant to conventional cytostatic agents. Insight into the cellular mechanisms, in particular the impact of the redox state on sensitivity towards As₂O₃ opens the possibility to enhance As₂O₃ effects by appropriate combination therapies.     

PI3K特异性抑制剂LY294002对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株逆转作用的研究

  目的  研究磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002对卵巢癌紫杉醇耐药细胞株（A2780/Taxol）多药耐药逆转的影响。  方法  将PI3K特异性抑制剂LY294002处理卵巢癌紫杉醇耐药细胞24 h后, 用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测细胞的增殖速度、对紫杉醇敏感性的分析; 采用流式细胞技术检测细胞周期和凋亡。应用Western blot检测细胞中P-glycoprotein（P-gp）、Akt和p-Akt蛋白的表达情况。  结果  用LY294002处理A2780/Taxol细胞后细胞增殖速度变慢、对紫杉醇的半数抑制浓度（IC₅₀）降低。实验组和对照组细胞的凋亡率分别是（2.64±0.90）%和（10.98±1.16）%（P < 0.05）。LY294002处理后的G₀/G₁期细胞增加, S期明显减少, 差异有统计学意义（P < 0.05）。LY294002处理后的细胞与对照组相比P-gp和p-Akt的蛋白表达降低。  结论  LY294002能够有效的逆转卵巢癌紫杉醇耐药细胞A2780/Taxol产生的多药耐药。      

硼替佐米联合氟达拉滨对淋巴瘤细胞系HUT-78的体外杀伤效应

  目的   探讨硼替佐米（Bortezomib,PS-341,BTZ）联合氟达拉滨（Fludarabine,FLU）不同给药顺序对于T细胞淋巴瘤细胞HUT-78增殖和凋亡的影响。   方法   MTT法测定BTZ、FLU单药作用于HUT-78细胞系的IC₅₀。流式细胞术检测BTZ、FLU单药对HUT-78细胞周期分布的影响,以及两者不同顺序给药时细胞凋亡的情况。Western blot检测不同给药顺序作用于HUT-78细胞后cleaved caspase-3的表达情况。   结果   BTZ、FLU单药作用于HUT-78细胞24 h的IC₅₀分别是（53.84±9.31）nmol/L和（2.54±0.33）mmol/L。细胞周期分析显示BTZ主要使细胞停滞在S期,而FLU主要使细胞停滞在G₀~G₁期;而在细胞凋亡方面BTZ→FLU组促使细胞凋亡的作用与同时给药及FLU→BTZ组相比最为显著（P < 0.01）。同样,Western blot结果显示BTZ→FLU组cleaved caspase-3表达水平最高（P < 0.01）。   结论   BTZ与FLU联合使用可有效抑制HUT-78细胞的生长,先用BTZ再用FLU的给药顺序的促凋亡作用最强,该用药顺序可为临床用药所借鉴。      

三氧化二砷对非急性早幼粒细胞白血病和实体瘤的实验研究进展

在急性早幼粒细胞白血病(APL)中,三氧化二砷(As₂O₃)有效诱导了APL细胞的凋亡,如果能避免早期死亡,多数患者可达到完全缓解和治愈。近几年,人们也研究了它对非APL白血病和多种实体瘤治疗的可能性。同时,越来越多的研究发现,它在体外或体内也抑制非APL白血病和几种实体瘤如肝癌、食管癌和胃癌等细胞的增殖。人们对非APL白血病和实体瘤中As₂O₃诱导细胞凋亡的机制也进行了研究。并且为取得更满意的疗效和减轻As₂O₃的细胞毒等副作用,人们对新型As₂O₃靶向制剂的研发也进行了探索。本文就上述有关研究进展进行综述。