c—fos基因在大鼠创伤性颅脑损伤中不同阶段表达水平与细胞凋亡关系的研究

目的探讨脑外伤后不同阶段的神经细胞凋亡与c—fos基因表达Fos蛋白的水平,探讨c—fos基因在颅脑创伤后凋亡的作用。方法以Feenev法制作大鼠颅脑外伤模型,分为实验组和假手术对照组,在处理后6、24、168小时处死动物,分别用免疫组化、TUNEL法测定脑组织Fos蛋白和神经细胞凋亡率。结果颅脑创伤后6小时及24小时大鼠脑外伤组损伤灶周围脑组织中,Fos蛋白较假手术组表达明显增高,其与神经细胞凋亡指数呈正相关;在慢性期168小时大鼠脑外伤组损伤灶周围脑组织中,Fos蛋白表达与神经细胞凋亡有所下降而仍高于假手术组。结论c—fos基因很可能参与了颅脑创伤后的细胞凋亡过程,阻断c—fos基因在颅脑创伤后的表达上调,可望能够抑制神经细胞凋亡。     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑创伤的实验研究

目的 探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSC)移植治疗脑创伤的疗效和机制.方法 采用Feeney DM方法将Sprague-Dawley大鼠制作脑创伤模型后随机分为自体BMSC移植治疗组和生理盐水对照组.用神经功能缺损评分(NSS)和Y型电迷宫测试大鼠神经功能,采用免疫组织化学方法 检测5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、nestin和Ⅷ因子,采用TUNEL法检测细胞凋亡.结果 与对照组相比,自体BMSC移植治疗组大鼠NSS评分降低、Y型电迷宫实验错误反应次数减少,脑组织水肿和坏死面积及瘢痕形成均减少,BrdU/GFAP荧光双标、BDNF、nestin阳性表达细胞数和微血管数均增多,细胞凋亡数减少(均P<0.05).结论 手术移植的自体BMSC可在脑损伤区存活、增殖、分化,促进神经营养因子分泌,减少细胞凋亡,参与损伤区新生血管生成和组织修复,从而促进神经功能恢复.     

孕酮调节创伤性脑损伤后炎症反应及预后的实验研究

目的探索孕酮在创伤性脑损伤(TBI)中是否能调节炎症反应及改善神经功能预后。方法将小鼠随机分为假手术组、孕酮治疗组和对照组。构建TBI模型后,孕酮治疗组给予孕酮治疗,对照组予以等量生理盐水。用mNSS评分检测小鼠神经功能,干湿重法检测脑组织含水量,蛋白印迹及免疫组化法检测脑组织中炎性因子及炎性细胞含量,流式细胞术检测脾脏中调节性T细胞(Treg)的数量。结果我们的实验研究发现孕酮治疗组小鼠mNSS评分在脑创伤后第3、5、7天时明显低于对照组(P0.05);孕酮治疗组脑组织含水量在伤后第1、3、5、7天较对照组相比明显减少(P0.05)。在伤后第1、3天时,与假手术组相比,孕酮治疗组和对照组炎性因子(IL-1β、TNF-α、NF-κB、IL-10)和炎性细胞(GFAP、Iba-1)含量显著增加(P0.05);与对照组相比,孕酮治疗组炎性因子和炎性细胞含量明显下降(P0.05),且脾脏内Treg数量显著增多(P0.05)。在伤后第3天,孕酮治疗组及假手术组脑损伤灶处CD3及MPO细胞数量无显著性差异,均明显低于对照组(P0.05)。结论孕酮治疗可以改善小鼠TBI后的神经功能预后,其机制可能与孕酮在脑创伤后的免疫炎症调节作用有关。     

高血糖在高草酸尿环境下促进肾草酸钙结石形成的机制研究

目的通过细胞及动物实验,探究高血糖促进草酸钙结石形成的机制。方法八周龄Wistar雄性大鼠(共40只)随机分为4组:阴性对照组、高草酸尿模型组,高血糖模型组,高血糖合并高草酸尿模型组;每组10只。采用q RT-PCR检测在含有不同浓度葡萄糖培养基下HK2细胞中OPN、MCP-1、Cbfa1、BMP-2 m RNA的表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测OPN与MCP-1在培养基中的浓度;钙盐染色检测各组大鼠肾组织中草酸钙结石晶体;细胞凋亡试验检测各组大鼠肾组织中肾小管上皮细胞凋亡。免疫组织化学染色法(IHC)检测OPN在各组大鼠肾组织中的表达;ELISA检测MCP-1在各组大鼠24小时尿液中的含量。结果高浓度葡萄糖环境中,HK-2细胞的OPN与MCP-1表达上调。高血糖合并高草酸尿模型组肾组织中有大量草酸钙沉积,大量肾小管上皮细胞凋亡,OPN表达显著增加,其尿液中MCP-1总量明显增加,与其他组相比有统计学差异(P0.05)。结论高血糖能促使肾小管上皮细胞炎症趋化因子OPN、MCP-1表达增加。在高草酸尿环境中,高血糖能促进肾小管上皮细胞凋亡及草酸钙结石形成。高血糖可能是通过炎症趋化因子加重局部炎症反应,促进肾小管上皮细胞凋亡及草酸钙结石形成。     

肠内免疫营养和生态营养对创伤后大鼠肠屏障功能的影响

目的研究肠内免疫营养和生态营养对创伤后机体肠道屏障功能的影响。方法将40只Wistar大鼠按随机数字表法均分为4组，即对照组、肠内普通营养组、肠内免疫营养组及肠内生态营养组。于胃造瘘术后早期分别给予普通饲料、肠内普通营养剂、肠内免疫营养剂和肠内生态营养剂，共7d，观察小肠黏膜形态和黏膜IgA^＋、CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋细胞数量。结果小肠绒毛高度、肠腺隐窝深度、黏膜厚度（除肠内普通营养组）以及绒毛表面积在肠内普通营养组、肠内免疫营养组和肠内生态营养组均优于对照组（P〈0．05），各肠内营养组之间的差异无统计学意义（P〉0．05）。小肠黏膜IgA^＋、CD3^＋、CD4^＋及CD8^＋细胞数对照组大鼠低于各肠内营养组（P〈0．05），而肠内普通营养组又低于肠内免疫营养组和肠内生态营养组（P〈0．05）。结论肠内免疫营养和生态营养能较好地改善创伤后大鼠的小肠机械屏障功能，促进小肠黏膜屏障功能的恢复，增强其肠道免疫功能。     

全反式维甲酸对抗肾小球基底膜肾炎小鼠模型肾脏损害的保护作用

目的探讨全反式维甲酸对肾毒性血清肾炎(NTSN)小鼠模型的作用及机制。 方法使用肾毒性血清(NTS)尾静脉注射构建NTSN模型，设置对照组、NTS组、NTS＋维甲酸组。NTS注射前5 d给予羊免疫球蛋白和完全弗氏佐剂腹腔注射预处理，预处理后24 h给予16 mg/kg全反式维甲酸或溶媒腹腔注射，NTS注射后7 d处死小鼠。ELISA法检测小鼠白蛋白尿/肌酐比值、小鼠BUN；肾组织石蜡切片HE染色，定量分析新月体肾炎、肾小球节段硬化的百分比；肾组织冰冻切片行CD8^＋、CD4^＋、CD68免疫荧光染色，并定量分析；QPCR方法分析肾皮质炎症细胞趋化因子如人单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、淋巴细胞趋化因子(LTN)的表达量。 结果维甲酸处理组显著减轻肾毒性血清肾炎小鼠模型的蛋白尿[NTS组和NTS＋维甲酸组尿微量白蛋白/肌酐比值(UACR)分别为：(4.52±0.36)×10^－3mg/g、(2.63±0.18)×10^－3mg/g；q＝18.45，P< 0.01]、肾功能[NTS组和NTS＋维甲酸组BUN分别为：(16.81±1.23)mmol/L、(13.33±0.62)mmol/L；q＝6.155，P<0.01]、减轻肾组织病变[NTS组和NTS＋维甲酸组含新月体的肾小球百分比分别为：[(36±1.58)%、(22.2±1.92)%；q＝21.46，P<0.01]。维甲酸处理组每低倍镜视野下CD8^＋淋巴细胞计数、CD4^＋淋巴细胞计数、每高倍镜视野下CD68阳性细胞面积较NTS组均明显减少，差异有统计学意义(q值分别为：9.545、8.610、11.08；P<0.01)；维甲酸可以显著抑制炎症细胞趋化因子(MCP-1、ICAM-1、LTN)的基因表达。 结论维甲酸通过抑制炎症细胞趋化因子的表达、减少炎症细胞的浸润，减轻NTSN小鼠模型的蛋白尿、新月体形成等肾损害。     

联合药物预处理对非协调性异种心脏移植物的影响

目的　观察联合应用环孢素A(CsA)和来氟米特 (Lef)预处理对豚鼠 大鼠非协调性异种心脏移植物的影响并探讨其作用机制。方法　移植大鼠分为 4组 :A组 (CVF ,n =10 ) ;B组(CVF CsA ,n =8) ;C组 (CVF Lef,n =5 ) ;D组 (CVF CsA Lef ,n =11) ;记录移植物存活时间 ,检测移植物病理组织学 ,用免疫组织化学检测移植物CD68、CD5 7表达情况 ,TUNEL法检测移植物细胞凋亡。结果　移植物的平均存活时间 :A组为 41h、B组为 68h、C组为 5 5h、D组为 82h。各组移植物病理表现均为急性血管性排斥反应 (AVR)改变。B、C、D组移植物炎症细胞浸润数减少 ,CD68和CD5 7表达下调 ,凋亡指数较低 ,半定量测定与A组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;D组凋亡指数最低而CD68和CD5 7表达最弱 ,与其他各组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　联合应用CsA和Lef预处理可明显延长非协调性异种移植物存活时间 ,减少炎症细胞浸润 ,抑制心肌细胞凋亡 ,减轻异种AVR损害。     

颅脑创伤后缺氧诱导因子-1α表达及其对细胞凋亡的调控作用

目的 探讨缺氧诱导因子－1α（HIF－1α）在颅脑创伤后的表达及其对细胞凋亡的调控作用。方法 制作液压冲击大鼠脑创伤模型30只，用免疫组织化学方法（SP法）测定脑损伤后3、12、24、48、72h脑细胞HIF－1α蛋白表达、末端脱氧核苷酸介导的X－dUTP制品末端标记法（TUNEL）测定细胞凋亡、并用免疫组织化学和TUNEL双重标记法研究脑细胞HIF－1α表达与细胞凋亡的相互关系。结果 对照组，有少量细胞轻度HIF－1α和TUNEL阳性表达，在脑挫伤区和伤灶周围水肿区均出现较多的细胞HIF－1α阳性表达，48h达高峰，受伤3h有少量散在TUNEL阳性细胞，48h达高峰；双重标记法得出，在挫伤区和周围水肿区，3h后有逐渐增多的HIF－1α阳性细胞，在HIF－1α阳性表达较多区域TUNEL阳性表达也增多（两者相关系数r＝0.62），个别细胞还有HIF－1α和TUNEL同时表达。结论 颅脑创伤后继发性脑组织缺血缺氧可引起细胞凋亡，HIF－1α对细胞凋亡有促进作用。     

腰椎间盘突出症和椎间盘源性疼痛的免疫病理学研究

目的通过对突出腰椎间盘组织中免疫因子的测定,进一步探讨腰椎间盘突出症与椎间盘源性疼痛在免疫病理学改变的异同点。方法收集标本:腰椎间盘突出症(A组)30例,椎间盘源性疼痛(B组)30例,确诊后两组均行腰椎后路减压植骨融合术,腰椎爆裂骨折(C组)10例,都行前路手术,共70例椎间盘髓核标本。对各组髓核组织进行组织学观察,通过免疫组化方法对髓核中CD25+T细胞和CD68阳性巨噬细胞进行检测及数据统计分析。结果病理学观察:C组髓核组织细胞形态一致,匀称分布,细胞质无明显退变,无明显炎症细胞浸润;其他两组均见髓核细胞空泡样变、形态不一致,胞质分布不均;A组髓核组织周围能见较多炎症细胞、局部见毛细血管增生;B组髓核细胞质退变明显,髓核组织周围能见少量炎症细胞,无明显毛细血管增生。免疫组化检测:CD68阳性率,B组(50%)A组(33.3%)C组(0%),各组间差异有统计学意义(P0.05)。A组中CD25+T细胞均表现在CD68阳性巨噬细胞相同位置,B组与C组为阴性。结论腰椎间盘突出症髓核周围有显著的自身免疫反应与炎症反应;椎间盘源性疼痛髓核周围有少量炎症细胞与较多巨噬细胞,但未见明显的毛细血管与T淋巴细胞增生,表明周围有炎症反应,但自身免疫反应没有腰椎间盘突出症典型。     

NF-κB在颅脑损伤后继发氧化应激及细胞凋亡之间的关系研究

目的：探讨NF-κB在颅脑损伤后继发氧化应激及细胞凋亡之间的关系及可能机制。方法成年健康雄性SD大鼠48只,随机分为对照组（n=6）和颅脑损伤组（n=42）。颅脑损伤组通过改良Feeney法建立颅脑损伤模型,根据伤后处死时间分为1、3、6、12及24小时、3和7天共7个亚组,每亚组各6只。每亚组随机取3只大鼠处死,取挫伤灶周围组织行脑组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）测定;剩余的3只大鼠采用免疫组织化学方法检测挫伤灶周围脑组织中NF-κB的表达情况,同时采用TUNEL法观察脑挫伤灶周围细胞凋亡情况。结果颅脑损伤后1小时可见NF-κB蛋白明显表达,3~12小时表达逐渐加强,并于24小时达到高峰,3~7天表达稍减弱,但仍为高表达状态;NF-κB蛋白表达与MDA、SOD及GSH相关（r=0.731, r=-0.702, r=-0.674,P值均〈0.05）,与细胞凋亡水平相关（r=0.720, P〈0.05）。结论颅脑损伤后NF-κB蛋白表达的变化规律参与了继发性脑损伤中氧化应激反应及细胞凋亡等病理过程,抑制氧化应激水平,控制细胞凋亡,减少或减轻继发性脑损伤。     

人工关节表面涂层研究现状

生物固定型人工关节假体表面涂层的研究成为目前人工关节领域研究的热点。随着组织工程学、材料学的发展,在人工关节表面用材、涂层类型及其处理方式等方面都有很多成果出现,本文就以上几个方面加以综述。     

声热处理灭酶试验

研究了声热处理钝化毛豆过氧化物酶.实验条件为:温度60～90℃、超声波频率25kHz、功率800 W.以在不同温度(60～100℃)下热处理过氧化物酶的活性作为对照,研究超声波协同热力灭酶的机理.响应面分析结果表明:在25 kHZ、800 W的超声波、83℃下处理1.52 min,过氧化物酶钝化效果最佳.目前的研究有助于声热作用作为新加工工艺逐渐取代传统热加工处理.     

Comment on EBPG guideline on dialysis strategies

Sir, In the EBPG guideline on dialysis strategies (Nephrol Dial Transplant2007; 22 [Suppl 2]: ii5–15) is stated on ii12: ‘Indeed,several randomized trials conducted in the last years have confirmed