耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌耐药率及同源性分析

目的分析耐碳氢酶烯肺炎克雷伯菌的耐药基因及流行病学特征。方法收集2018年1-8月临床分离出的14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌,使用VITEK Compact微生物系统进行菌株鉴定和药敏试验,改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,PCR试验检测耐药基因,肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）分析菌株同源性。结果14株耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌对青霉素类、碳青霉烯类、氨曲南和头孢菌素类等抗菌药物表现出较高的耐药性。11株肺炎克雷伯菌的碳青霉烯酶表型阳性,PCR检测发现12株肺炎克雷伯菌KPC-2基因阳性,14株肺炎克雷伯菌根据ERIC-PCR结果分成3型,其中A型为主,集中在ICU病房和神经外科。结论耐碳氢酶烯类肺炎克雷伯菌表现为严重的多重耐药性,以产生KPC酶和A型为主。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究

目的:探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因及耐药特性.方法:对42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行药敏试验、改良Hodge试验,并采用聚合酶链反应(PCR)方法检测细菌肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因.结果:42株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌中,药敏试验结果显示耐药情况严重,仅对替加环素、阿米卡星、妥布霉素、复方新诺明较敏感.改良Hodge试验及KPC基因检测全部阳性,基因测序为KPC-2型.结论:KPC-2是引起肺炎克雷伯菌耐药的主要原因,应引起临床及实验室的关注.     

产KPC肺炎克雷伯菌检测方法构建与耐药机制

目的 探讨产肺炎克雷伯型碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌检测方法以及肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制、可能的治疗药物.方法 选取K-B法证实的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌36株纳入本研究,使用改良Hodge试验、Carba NP试验对菌株进行验证,随后采用PCR扩增、产物琼脂糖凝胶电泳实验,并对电泳阳性条带进行基因测序鉴定.结果 K-B法药敏试验显示36株耐碳氢烯类肺炎克雷伯菌,随后行Hodge验证,33株(91.7%)是产KPC肺炎克雷伯菌,对碳氢烯类耐药而对替加环素及米诺环素仍然敏感.对Hodge试验阳性33株再行Carba NP试验确证,其中27株(87.9%)阳性,6株(12.1%)阴性;对Hodge试验阳性33株行PCR扩增及电泳实验,共有27株出现目标条带(340 bp)提示阳性,与Carba NP试验结果相一致.对出现目标条带的27株肺炎克雷伯菌再进行KPC-2耐药基因PCR扩增产物测序,均为KPC-2型耐药基因.结论 K-B法药敏试验加随后改良Hodge试验验证对于筛查、发现KPC肺炎克雷伯菌具有较高的符合度,为发现KPC肺炎克雷伯菌有效筛查方法.K-B法药敏试验证实对KPC肺炎克雷伯菌,替加环素等可能是有效治疗的药物之一.Hodge试验检测的KPC肺炎克雷伯菌,存在12.1%(6/33)的假阳性率.Carba NP 试验及PCR扩增检测一致性好,具有确证产KPC肺炎克雷伯菌作用.随后的测序研究结果表明检测出的KPC肺炎克雷伯菌均为KPC-2,该型是引起肺炎克雷伯菌对碳青酶烯酶耐药的主要机制.     

携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药致肺炎克雷伯菌感染的暴发

目的了解临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae,Kpn）KPC型碳青霉烯酶基因blaKPC存在状况。方法在2008年11月至2009年7月间,从住院病人中分离出19株泛耐药肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测菌株产碳青霉烯酶情况,采用PCR及序列分析的方法分析blaKPC基因。结果19株泛耐药肺炎克雷伯菌改良Hodge试验结果均阳性、blaKPC基因阳性率为100．0％,序列分析确认均blaKPC-2亚型,其HZ001号菌株（原始编号HZ9871）blaKPC-2基因序列已登录GenBank,注册号为GU086225。结论临床分离的泛耐药肺炎克雷伯菌均携带blaKPC-2基因,产KPC-2型碳青霉烯酶应该是本组菌株对碳青霉烯类抗生素耐药主要原因。     

对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型分析

目的:分析对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌KPC基因型。方法:使用改良的Hodge实验(MHT)初筛产KPC的肺炎克雷伯菌,PCR和测序鉴定耐药肺炎克雷伯菌是否带有KPC基因,并通过GenBank的比对确定KPC基因型。用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对KPC阳性菌株进行同源性分析。结果:13株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌中有10株MHT结果为阳性,阳性率为76.92%,其中有2株细菌为KPC基因阳性,阳性率为15.38%,通过GenBank比对,此KPC基因为2型。PFGE结果显示这2株细菌来源于同一克隆。结论:分离出了携带有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因分布情况及其同源性探讨

目的：了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯杆菌（CR-KP）中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法：收集我院2016 年1月至2017年12月对厄他培南、亚胺培南或美罗培南药敏试验结果不敏感的CR-KP共34 株,根据CLSI M100S-27th文件的改良碳青霉烯灭活试验确证其是否为产酶菌株,通过PCR方法扩增5种碳青霉烯酶基因（bla KPC、bla IMP、bla OXA-48、bla VIM、bla NDM）,PCR扩增产物进行测序明确基因型;通过脉冲场凝胶电泳对肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果：34株肺炎克雷伯菌经改良碳青霉烯灭活试验确证均为产酶菌株,PCR检测显示均为KPC-2型酶。脉冲场凝胶电泳（PFGE）结果显示34株菌可分为5组,其中1、2、4组为主要流行菌株。结论：院内存在以KPC-2为主要耐药基因的CR-KP克隆株的流行,且主要以重症医学科耐药株流行,34株菌间存在不同程度的亲缘关系。     

耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌耐药基因及分子特征研究

目的：探讨临床分离的耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的耐药基因和分子流行病学情况。方法：收集2018年1月—2019年3月临床分离的耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）,采用VITEK-2 compact微生物鉴定仪进行菌种鉴定和药敏检测;改良Hodge和碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验对菌株进行碳青霉烯酶表型检测;PCR检测β内酰类胺类（碳青霉烯酶、ESBL、Amp C酶）和喹诺酮类（PMQR）共19种耐药基因;多位点序列分析（MLST）对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）进行分子分型及同源性分析。结果：共收集CRE 134株,其中肺炎克雷伯菌125株,阴沟肠杆菌4株,大肠埃希菌3株,普罗威登菌2株;改良Hodge试验示114株阳性,碳青霉烯酶灭活（m CIM）试验示125株阳性;所有检测菌株均携带碳青霉烯类耐药基因;125株肺炎克雷伯菌中有118株携带blaKPC-2基因,另有5株携带blaNDM基因（4株携带blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）和4株携带blaIMP-4基因,4株阴沟肠杆菌中3株携带blaNDM基因（2株携blaNDM-1、1株携带blaNDM-5）,1株...     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药机制及分子流行病学研究

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药情况及耐药基因,为临床治疗提供依据。方法 收集并鉴定临床分离非重复CRKP 27株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪鉴定和药敏试验,碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测A类丝氨酸碳青霉烯酶和B类金属β内酰胺酶,聚合酶链反应（PCR）法和基因测序技术检测常见的耐药基因。使用肠杆菌科基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析。结果 27株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、头孢菌素类、喹诺酮类等抗生素的耐药率均>96%。碳青霉烯酶抑制剂增强试验显示,26株A类丝氨酸碳青霉烯酶阳性,1株B类金属β内酰胺酶阳性。PCR和基因测序结果显示,26株CRKP携带KPC-2基因,1株携带NDM-1基因。ERIC-PCR将27株CRKP分为8型,以Ⅰ型和Ⅱ型为主。结论 分离的CRKP对临床常用抗生素表现出高水平耐药,其耐药机制主要是该类细菌产KPC-2型碳青霉烯酶。     

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的价值

目的评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）技术在临床实验室中快速鉴定耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的价值。方法收集2019年10月至2020年3月绍兴文理学院附属医院感染患者分离的肺炎克雷伯菌140株。采用VITEK2-Compact全自动微生物鉴定仪进行鉴定,其中33株（23.57%）为耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,主要分离自痰液11例（33.33%）和尿液8例（24.24%）,且内科分离菌株数多于外科。通过微量肉汤稀释法进行敏感度测定;利用PCR技术检测耐药基因;多位点序列分型（MLST）技术对其进行分型;由MALDI-TOFMS进行蛋白图谱分析。结果所有菌株对碳青霉烯类和头孢菌素类抗生素的耐药率均为100.00%,有60.61%的菌株确定为多重耐药菌株;除24株（72.73%）携带blaKPC外,未发现其他碳青霉烯酶编码基因,共有27株（81.82%）为ST11,且所有菌株在11109-Da处均无特征峰。结论由于型别不同,MALDI-TOFMS无法直接区分产KPC的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,但为探索MALDI-TOFMS更多的研究价值奠定基础。     

ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌检出及分子流行病学研究

目的探讨产新德里金属-β-内酰胺酶1(NDM-1)肺炎克雷伯菌检出的分子流行病学意义。方法实验菌株为从临床标本中分离到的1株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌。采用VITEK-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及药敏试验,PCR及测序方法检测NDM-1等碳青霉烯酶基因的表达,并对菌株进行质粒转移接合试验及多位点序列分型(MLST)。经检索Pub Med收集其他地区产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST数据,采用e BURST V3软件及Tree drawing软件进行分析。结果该菌株对包括碳青霉烯类在内的多种抗生素均高度耐药,携带NDM-1基因,MLST为ST571含有该基因的质粒通过接合方式成功转移到受体菌。共收集源自28个国家的238株产NDM-1肺炎克雷伯菌的MLST信息,包含41个ST型,CC258(clone complex)为主要流行株。结论我国首次检出ST571型产NDM-1肺炎克雷伯菌,耐药基因可能通过质粒进行传播。产NDM-1肺炎克雷伯菌的分子分型呈多样化,以CC258流行最广,本实验菌株与该克隆复合体菌株的亲缘关系甚远。     

广东省东莞市56株高毒力肺炎克雷伯菌感染分布及分子流行病学研究

目的 研究高毒力肺炎克雷伯菌( hypervirulent Klebsiella pneumoniae, HvKP ) 临床感染分布及菌株间的同源性,分析其分子流行病学特征,为预防和控制高毒力肺炎克雷伯菌的克隆传播提供实验依据。方法 收集东莞市人民医院临床分离非重复的56 株HvKP,应用PCR扩增技术检测其荚膜血清型并测序,运用多位点序列分型(MLST)和肠杆菌科基因间一致重复序列PCR(ERIC—PCR)进行同源性分析,了解其分子流行病学特征。结果 56株HvKP标本来源以呼吸道标本为主,为22株（39.3%）;其次为血液14株（25.0%）;肝脓肿引流液9株（16.1%）,尿液5株（8.9%）,其他标本6株（10.7%）。科室主要分布ICU、普外三区、神经外科二区、综合科;荚膜血清型以Kl、K2、K57型为主,K1、K57型各占25.0%(14/56),K2型略高,占 26.8%(15/56);不同标本类型中,K1在血液标本占比最高,为35.7%（5/14）;K2、K57型主要见于呼吸道标本。ERIC-PCR产物分为22个型别：Ⅰ型10株、Ⅱ 型9株、Ⅲ型7株、Ⅳ型5株、Ⅴ型4株、Ⅵ~Ⅶ各2株、Ⅷ~Ⅸ各2株,其余13个型别各1株;多位点序列分析MLST显示16 种 ST 型,主要以ST23、ST86、 ST218这3种型别为主,其中ST23 全部是 K1型（100.0%） HvKP;不同科室的不同患者高毒力肺炎克雷伯菌进行同源性分析发现,Ⅰ/ST23 K1型居多,其中ICU主要流行Ⅳ/ST23 K1型和Ⅶ/ST11 K54型;普外三区主要流行Ⅰ/ST23 K1型和Ⅱ/ST218 K57型;呼吸科主要流行Ⅰ/ST23 K1型,MLST与ERIC-PCR分析结果有所差别。结论 东莞市HvKP以Ⅰ/ST23 K1型 和以痰液、血液和肝脓肿引流液标本来源为主,应对高毒力肺炎克雷伯菌进行分子流行病学调查,以有效预防和控制HvKP传播。     

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药基因检测与分子流行病学研究

目的 对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药基因的携带情况与分子流行病学特征进行分析,为研究细菌耐药提供参考依据.方法 收集2016年2月至2017年2月临床分离到的37株CRKP菌株,采用微量肉汤稀释法检测菌株药物敏感性;改良霍奇实验及亚胺培南-EDTA协同法检测碳青霉烯酶表型;PCR检测KPC-2、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因,进行测序及网上比对确定基因型;采用多位点序列分型(MLST)对菌株进行遗传相关性研究,MEGA软件构建进化树、eBURST软件分析亲缘关系.结果 37株菌株对常用抗菌药物耐药性均在90％以上.所有菌株均检测到KPC-2基因,3株同时携带NDM-1基因,其余基因均为阴性.MLST分型为ST11有25株,ST524 2株,ST789 4株,ST35、ST29、ST1066及ST244各1株,另外有1个新的ST型(2株)已被PubMlst数据库确认收录并命名为ST2792.ST11型组及非ST11型组在年龄、性别、感染途径、抗菌药物使用情况等方面差异无统计学意义(P＜0.05).结论 携带KPC-2基因是导致细菌对碳青霉烯类抗菌药物耐药的主要原因,ST11型是最流行的克隆型.     

产KPC酶肺炎克雷伯菌的感染分布特点及中西医药物结合对其的抑制效果

目的探讨产KPC酶肺炎克雷伯菌的临床感染分布特点及中西医结合的干预效果。方法收集临床多个科室标本,共筛查出产KPC酶肺炎克雷伯菌株523株,分析其临床分布情况及病区分布情况。将配置好的头孢三嗪、鱼腥草注射液、穿琥宁注射液分别单独或与西药配伍加入适当浓度的产KPC酶肺炎克雷伯菌落中,经动态比浊法测定内毒素含量。结果在临床分离出的523例产KPC酶肺炎克雷伯菌株中,来自于呼吸道标本所占的比率最高,其次为中段尿液、脓液及伤口分泌物、血液。在各标本中产ESBLs阳性率最高的为呼吸道标本,其次为脓液及伤口分泌物、血液、中段尿液。产KPC酶肺炎克雷伯菌的临床病区分布情况:呼吸科所占比率最高,其次为ICU、感染科、泌尿外科。产ESBLs情况也存在明显差异,ICU所占百分比最高,其次为肿瘤科、呼吸科、感染科。鱼腥草组、穿琥宁组及与西药配伍组内毒素产生的量均明显低于西药组(P0.01)。结论产KPC酶肺炎克雷伯菌的临床分布有一定特点,中药抗菌药物配伍西药对产KPC酶肺炎克雷伯菌内毒素的释放有明显的抑制作用。     

肺炎克雷伯菌介导致碳青霉烯类耐药的基因检测研究

目的：分析碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌的耐药性及耐药基因型。方法分离碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌14株,分别采用E-test实验、改良的Hodge试验、脉冲场琼脂糖凝胶电泳分型及多位点序列分型测定其耐药性、耐药基因型及主要流行序列型。结果14株碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对常用碳青霉烯类抗生素亚胺培南和美罗培南呈中高度耐药,最低抑菌浓度（MIC）分别为8～64 mg/L、16～128 mg/L;对常见头孢类抗生素头孢哌酮、头孢西丁、头孢他啶和头孢吡肟均呈高度耐药,MIC 32～256 mg/L;对喹诺酮类药物环丙沙星呈中度耐药,MIC 3～32 mg/L;对氨基糖苷类抗生素阿米卡星不稳定,MIC〈0.12～256 mg/L。本组碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型检测均为阳性,基因型属KPC-2;脉冲电泳分型显示A克隆2株、B克隆9株、C克隆3株,多位点序列分型显示ST119株、ST154株、ST4391株,分型结果基本一致。结论碳青霉烯类耐药型肺炎克雷伯菌对部分其他种类的抗生素亦有较强耐药性,KPC-2型碳青霉烯酶是本院肺炎克雷伯菌产生青霉烯类耐药性的主要原因,主要流行克隆型和序列型分别为B型、ST11型。     

泛耐药肺炎克雷伯菌毒力和耐药性分析

目的明确2株不同来源泛耐药肺炎克雷伯菌耐药基因、毒力因子及同源性。方法 2株泛耐药菌均于2019年1月从2位绍兴市人民医院住院患者的尿液中分离得到,采用微量肉汤稀释法对菌株进行最低抑菌浓度(MIC)检测,EDTA和PBA协同试验筛查碳青霉烯酶表型。通过三代测序平台进行基因组测序并对耐药基因和毒力因子筛选,对测序结果进行拼接、组装以及注释等。多位点序列分型(MLST)技术对菌株进行基因分型。结果除了替加环素和多黏菌素,2株菌对包括碳青霉烯类在内的大部分抗菌药物均耐药,EDTA和PBA协同试验提示可能携带碳青霉烯酶。2株菌均携带有1个染色体及2个质粒,染色体基因相差1 192 bp,质粒基因数量完全相同。检测到SHV-28、DHA-18、NMC、SPM、AIM等β内酰胺类耐药基因,AcrA-AcrB-TolC等外排系统及OmpK35和OmpK36外膜蛋白缺失,毒力因子包括铁摄取系统、菌毛、荚膜、内毒素、二元调控系统等。MLST分型均为ST15。结论β内酰胺类耐药基因合并外膜蛋白丢失是细菌对碳青霉烯类耐药的主要原因,首次在本地区肺炎克雷伯菌中检测到NMC、SPM、AIMβ内酰胺类耐药基因。院...     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MLST 联合SCCmec 基因分型与耐药性分析

目的 了解滨州医学院附属医院MRSA 菌株多位点序列分型（MLST）联合SCCmec 基因型分布 和各种基因型的耐药特征。方法 采用聚合酶链反应（PCR）对MRSA 菌株进行MLST 联合SCCmec 基因分型； 采用WalkWAY96PLUS PC33 药敏板检测MRSA 抗菌药物敏感性。结果 SCCmec 基因分型结果以Ⅲ型为 主（63/67 株，占94.03%），MLST 分型共检测出6 种基因型：ST 88、ST 121、ST 221、ST 82、ST 239 及ST 399， 其中以ST 239（61/67，91.04%）为主，耐药性分析显示SCCmec Ⅲ型MRSA 菌株表现为多重耐药。结论 ST239-MRSA-SCCmec Ⅲ型菌株为鲁北地区MRSA 主要流行菌株，该型菌株对多种抗生素呈多重耐药； MLST 联合SCCmec 基因分型方法是MRSA 遗传背景研究简便快速的方法。     

侵袭性肺炎链球菌148株血清型、耐药性及分子分型研究

目的 研究临床分离的侵袭性肺炎链球菌血清型分布、耐药性及分子流行病学特点,为抗生素的应用和免疫预防提供参考依据.方法 收集2005年1月至2008年8月全国15个地区148株来自血液、脑脊液等侵袭性感染部位的肺炎链球菌.采用琼脂稀释法测定青霉素等抗生素对148株肺炎链球菌的最低抑菌浓度(MIC);采用简易棋盘式肺炎链球菌分型系统和荚膜肿胀实验进行血清分型;多位点序列分型(MIST)技术对53株19群菌株进行基因分型,了解其与国际流行株的关系.结果 血清分型共检出20个血清型/群,主要集中在19A、19F、3、23F、5、6、14和9血清型/群,共计105株,占70.9%,以19A(22.3%,33/148)、19F(16.9%,25/148)最常见,其次为3群(7.4%,11/148)和23F(6.8%,10/148).7价疫苗(PCV7)在2岁以下儿童中的覆盖率为33.3%(12/36).PCV7相关血清型肺炎链球菌对阿莫西林/克拉维酸、红霉素等耐药率均明显高于非疫苗相关血清型菌株(P<0.05).53株19群肺炎链球菌MIST分析共检出9种序列型(ST),其中以ST320(28/53,52.8%)和ST271(12/53,22.6%)为主.结论 我国侵袭性肺炎链球菌血清分型以19A、19F、3和23F血清型为主.侵袭性肺炎链球菌耐药情况严重.