疑难ABO血型标本的表型与相应等位基因检测在临床中的应用

目的探究疑难ABO血型标本的表型与相应等位基因检测在临床中的应用。方法本次研究选取2015年5月-2016年3月期间我院各科室送检的临床病人和献血者的45份血液样本。通过试管法检测45例患者及献血者的血清表型,同时采用sanger双碱基DNA分子测序的方法检测ABO等位基因。结果血清学检测的45例血液样本中,出现了A抗原减弱12例(Aw6例,A3 1例,Ael,5例);B型减弱6例(Bw);AB抗原减弱9例(AB表型);Cis AB:12例;B(A):6例;存在A101、A102、A311、Ae L02、Ax02、Ax13、Bl01,Bw,O01、O02、B(A)04、Cis AB01、Cis AB08等基因亚型。结论常规的血清学方法对疑难ABO血型,尤其是ABO血型的亚型鉴定存在一定的局限性,血型基因测序分析的方法可以较好地区分血清学定型模糊的结果。     

罕见Bel01亚型的血清学和基因分析

目的:探讨Bel01亚型的血清学特征和分子机制.方法:采用血型血清学方法分析该献血者ABO表型,磷酸盐耦联法检测糖基转移酶活性,PCR-SSP法进行ABO亚型基因分型,对第1～7外显子进行测序.结果:血清学试验检测疑为Bel,血清和红细胞上均无D-半乳糖基转移酶活性,ABO血型基因分型结果为BO2,基因测序结果确认为B...     

2例CisAB/B亚型的血清学和分子生物学研究

目的 结合ABO血型血清学结果,采用ABO基因测序技术鉴定CisAB血型.探讨CisAB/B亚型的血清学和基因型的关系.方法 对于送至青岛市中心血站ABO血型待定的献血者标本,采用经典试管法进行血清学分析.采用聚合酶链反应(PCR)直接测序的方法分析ABO基因第6,7外显子及侧翼序列、启动子和增强子序列.对于有突变的标...     

罕见Ael亚型的血清学和基因序列分析北大核心CSCD

目的:探讨A_(el)01亚型血清学和分子机制。方法:采用微柱凝胶法和试管法检测先证者ABO表型,多功能非放射性磷酸盐偶联法检测N-乙酰半乳糖胺基转移酶的反应活性,荧光PCR法进行ABO血型基因分型,Sanger一代测序法对第1~7外显子进行测序。结果:先证者血清学试验检测为A_(el),血清和红细胞上均无N-乙酰半乳糖胺基转移酶活性,ABO血型基因分型结果为AO2,基因测序结果确认为A_(el)01/O02,第1~7外显子测序结果为该样本在A101/O02的基础上发生了239G>A的突变,该突变为首次发现。结论:根据血型血清学结果推测,该突变导致了A抗原弱表达。基因分型预测ABO血型表型,基因测序是直接获得ABO亚型的证据,最终须结合ABO血清学方法来确定其ABO血型。     

CisAB_(01)-A_(102)血型分子遗传分析及其红细胞抗原表达

目的探讨ABO血型系统中Cis AB01/A102血型的分子机理及其红细胞A、B抗原的表达情况。方法应用血清学、ABO基因直接测序、流式细胞仪检测等方法确定献血者ABO血型。结果发现了1例比较少见的Cis AB01/A102亚型,该亚型是由于ABO基因第7外显子存在467CT、803GC突变,分别引起多肽链P156L、G268A替换。Cis AB01/A102血型红细胞表面A抗原荧光强度强度正常,而B抗原荧光强度则比正常B血型抗原强度略低。结论 ABO基因467CT、803GC突变是导致Cis AB01亚型的分子遗传基础,同时该亚型红细胞B抗原荧光强度与正常红细胞相比均有一定程度的减弱。     

一例多位点突变导致的罕见B(A)型的血清学及分子遗传学研究

目的探讨1例ABO血型血清学正、反定型不符的血样标本的分子遗传学基础。方法采用试管法对此例血样进行ABO血型正、反定型,应用直接测序及单倍型测序的方法确定其基因型。结果此例样本血型血清学结果显示,其正定型为AwB型,反定型为B型;直接测序及单倍型测序最终结果显示,其中一条等位基因为O01,另一条等位基因与A101标准序列相比,存在c.297A>G、c.657C>T、c.796C>A、c.803G>C及c.930G>A碱基突变。结论经基因测序证实,此例血清学定型困难的样本基因型为O01/B(A)new型,此突变类型的B(A)型既往未见报道。     

三例罕见ABO变异型Bw亚型的基因鉴定及序列分析

目的对3例ABO变异型Bw亚型进行基因鉴定及序列分析。方法采用常规血清学检测ABO血型, 并应用Sanger测序进行ABO基因鉴定。结果 3例ABO血型鉴定均符合Bw亚型, 基因分型分别为ABO*Bw.11/0.01.02、ABO*Bw.12/0.01.01、ABO*Bw.34/A1.02, 测序发现分别存在c.695T>C变异致多肽链Leu232Pro替换, c.278C>T变异致多肽链Pro93Leu替换, c.889G>A变异致多肽链Glu297Lys替换。结论本研究分别发现了Bw11、Bw12、Bw34亚型各一例。基因检测可作为血清学结果的补充确定ABO血型的亚型。     

ABO基因278C>T突变导致Bw12一例

目的 对1例ABO疑难血型样本进行血清型和基因型鉴定.方法 用血清学方法对标本进行ABO血清型检测,根据血清型结果,选取ABO基因亚型检测试剂盒,用聚合酶链反应-序列特异性引物法进行基因亚型鉴定,用直接测序法对ABO基因的第6、7外显子进行序列测定.结果 血清学结果显示,该样本的红细胞上具有高凝集强度的A抗原和中等凝集强度的B抗原,样本血浆中含有弱凝集强度的抗-B抗体,初步判定为ABw型;B亚型基因分型试剂的结果显示,该样本ABO基因为ABw12型;直接测序结果显示,该标本ABO基因第6外显子序列为278CT、297GA,第7外显子序列为467CT、526CG、657CT、703GA、796CA、803GC、930GA杂合,即在基因型A102/B101的基础上,该序列nt278位发生了C＞T杂合突变,经与血型抗原基因变异资料库的数据比对,确定突变的等位基因为Bw12,基因型为A102/Bw12.结论 中国人群中发现A102/Bw12基因型.     

一例ABO疑难血型基因分析

目的对一例血型血清学鉴定困难的患者进行相关基因分析,鉴定血型并分析引起血型鉴定困难的原因。方法采用微柱凝胶法和试管法进行血清学血型鉴定、抗球蛋白试验和抗体筛查,PCR扩增患者ABO基因第6、7外显子区及其侧翼序列并进行Sanger测序、克隆测序,寻找突变位点进行血型鉴定。结果患者血清学血型鉴定正反结果不符,其红细胞与单克隆抗A、B、H抗体反应均呈阴性(-);血清与A、B、O型红细胞均无凝集;患者直接及间接抗球蛋白试验均为阴性;血清抗体筛查为阴性。测序发现,患者ABO血型相关基因存在多个变异位点。其中第6外显子区存在c.261delG,第7外显子区存在c.467CCT、c.526CCG、c.657CT、c.703GGA、c.796CCA、c.803GG。以A101基因作为标准序列进行比较,对照Blood Group Antigen Gene Mutation Database进行ABO等位基因突变分析,判断患者血型为A102/B101。结论患者红细胞上抗原减弱是血型鉴定正反不符的主要原因,DNA基因测序第6、7外显子七个点突变导致了红细胞上抗原减弱。     

一例ABO血型Aw33亚型新等位基因的分子生物学鉴定

目的研究1例ABO血型A亚型的分子生物学机制。方法患者ABO血型正反定型采用卡式法和试管法分别进行鉴定。利用PCR序列特异性引物检测该患者所含ABO基因。PCR扩增该患者ABO基因1~7外显子的全部编码序列并进行测序分析,通过克隆测序进行ABO基因单倍型分析。结果患者红细胞与抗A呈现弱凝集,与抗B不凝集,其血清与Ac凝集1+,与Bc呈现4+凝集,血清学特性可定义为Aw亚型。ABO基因测序分析显示患者存在c.106G>T、c.188G>A、c.189C>T、c.220C>T、c.297A>G、c.467C>T、c.543G>C、c.646T>A、c.681G>A、c.771C>T、c.829G>A杂合变异和c.261delG缺失。结合克隆测序结果,推测患者ABO基因型为ABO*Aw.33.new/O.01.02;与ABO*A1.01相比存在c.467C>T和c.543G>C变异,与ABO*A1.02相比存在c.543G>C变异,该新等位基因序列已提交GenBank,序列号为MK302122。结论发现1例Aw33亚型新的等位基因,其GTA转移酶基因存在c.467C>T和c.543G>C变异。     

p表型个体的血清学特点和分子机制研究1例

目的分析1例p表型个体的血清学特征和分子机制。方法选取2021年5月在嘉兴市中心血站进行血型鉴定的1例p表型个体为研究对象。用血型血清学方法鉴定其ABO、RhD、P1PK血型和意外抗体。采用PCR-直接测序法(PCR-SBT)对编码P1和PK抗原的α1, 4-半乳糖基转移酶基因(A4GALT)的编码区进行测序分析。结果该个体的血型为A型、RhD阳性、P1PK系统为罕见的p表型, 血清中存在抗-PP1Pk。测序结果显示其A4GALT基因编码区存在c.343A>T纯合变异。结论 A4GALT基因c.343A>T纯合变异很可能导致了p表型个体。     

Bw11亚型家系表现ABO等位基因竞争现象的研究

目的分析携带ABO*BW.11等位基因的家系成员ABO血清学和分子生物学特征。方法应用血清学方法检测先证者及其家系成员共9人的ABO血型表型。采用PCR方法扩增ABO基因第6、7外显子并对扩增产物直接测序,同时克隆测序先证者及其父亲的标本。结果血清学检测初步判断先证者及其弟弟为AB亚型,先证者的父亲及其两女儿为B亚型。克隆测序发现先证者ABO等位基因第7外显子在B101的基础上第695位碱基发生T>C变异,表明为ABO*BW.11等位基因。先证者的父亲、弟弟及其两个女儿均携带该变异等位基因。A基因与BW.11以及BW.11与O基因同时遗传时竞争现象存在明显差异。结论ABO基因c.695T>C变异可能会导致Bw11亚型存在等位基因竞争现象。分子生物学方法结合血清学方法有助于精准鉴定ABO疑难血型。     

抗A1抗体的血清学检测及其临床意义分析

目的 分析A亚型(A弱)患者血清中存在抗A₁抗体的血型血清学检测结果及其临床意义。方法 采用微柱凝胶法(MGT)对患者血标本进行ABO及Rh血型鉴定和不规则抗体筛选,对ABO血型正反定型不相符或交叉配血不合的血标本,再采用试管盐水法(NS)进行正反定型及吸收放散试验,采用抗A₁、抗AB及抗H定型试剂检测患者红细胞上A₁及H抗原。确认正反定型不相符及交叉配血不合的原因后,采用NS、手工凝聚胺法(MPT)及间接抗人球蛋白试验(IAT)进行交叉配血试验。结果 患者血标本正反定型不相符或交叉配血不合,经血型血清学检测鉴定,14例患者ABO亚型为A₂型5例、 A₃型2例、 A₂B型7例,血清中存在不规则抗A₁抗体,ABO血型以外不规则抗体筛选及红细胞直接抗人球蛋白试验(DAT)为阴性。结论IgM型抗A₁抗体在血型血清学检测中可引起ABO血型正反定型不相符或交叉配血不合,筛选37℃及IAT有反应活性的抗A₁     

抗Mur抗体的血清学检测及其临床意义

目的 分析抗Mur抗体的血型血清学检测结果及其临床意义。方法 采用微柱凝胶法(MGT)对2例患者血标本进行ABO、 RhD血型鉴定及不规则抗体筛选,结果有疑问时再采用试管盐水法(NS)、直接抗人球蛋白试验(DAT)、间接抗人球蛋白试验(IAT)、吸收放散试验、抗体特异性鉴定及交叉配血试验进行检测鉴定。结果 患者1 ABO血型为A型,RhD阳性,DAT阴性。患者2ABO血型为B型,RhD阳性,DAT阴性。两例患者在采用NS、 MGT进行血型血清学检测中,交叉配血不合。经血型血清学检测鉴定为IgM+IgG型抗Mur抗体,抗体效价为1∶1～1∶4,凝集强度为2+～1+。结论 抗Mur抗体大多数为IgM型抗体,极少数为IgG型抗体,或IgM型+IgG型混合抗体,该抗体可引起正反定型不符或交叉配血不合,在37℃及IAT有反应时,可引起溶血性输血反应和新生儿溶血病的发生。     

临床检验ABO血型鉴定的质量控制策略探讨

目的 探讨临床检验ABO血型鉴定的质量控制策略.方法 以339份静脉采血样本为研究对象进行玻片法与试管法的血型鉴定,并对鉴定结果进行统计分析.结果 玻片法与试管法鉴定下的B血型最多,其次为A型与AB型,O型最少.两中方法的鉴定结果仅AB血型相一致,其他血型存在差异,但差异不显著(P＞0.05),无统计学意义.结论 临床检验ABO血型鉴定的质量控制关键在于需要综合考虑影响血型鉴定的各种影响因素.     

一个Bw亚型家系的血型分子机制及临床输血分析

目的 对1个Bw亚型血型家系的分子机制进行研究,并探讨该亚型的临床输血情况.方法 对1名ABO血型正反定型不符的无偿献血者及其家人的血型进行血清学鉴定,并应用聚合酶链反应-序列特异性引物法、ABO基因直接测序、TA克隆单倍型分析及相关软件对该突变引起的酶结构及功能变化进行分析等方法,同时对该献血者以往3次所献的血样的临床输血情况进行回顾.结果 在该家系中发现了3例较为罕见的Bw亚型.该亚型是由于ABO基因第7外显子存在721C/T杂合,导致R241W氨基酸改变所致.临床回顾提示3次输血均未发现明显异常.结论 ABO基因721C＞T突变是导致Bw亚型的分子遗传基础之一,该亚型在临床输血中的意义尚需进一步探讨.     

α-1,3- N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因新变异的家系研究

目的通过对一例ABO亚型家系血清学和基因序列分析,研究该家系中α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因新变异位点的特征。方法收集先证者及其3名家系成员血液标本,血清学方法进行ABO表型检测,荧光PCR进行ABO血型基因分型。通过对先证者ABO基因全编码区直接测序及第6、7外显子克隆测序方法进行基因序列及单体型分析。结果先证者血型为AxB亚型,ABO血型基因分型为A/B。克隆测序结果显示A新等位基因在ABO*A1.02序列基础上存在第7外显子c.797_798 insT变异。家系调查发现,先证者及其姐姐新变异均遗传自其父亲。c.797_798insT新变异序列已注册基因数据库(MK125137)。结论α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶基因第7外显子c.797_798insT新变异为可遗传变异,可导致A抗原表达减弱。     

B(A)02基因型B抗原多态性2例报告

男, 27岁, 尿毒症拟行肾移植。患者母亲, 49岁, 拟供肾者。本研究通过天津市第一中心医院伦理委员会审查(BL202302), 受试者均签署临床研究知情同意书于2022年4月21日纳入本研究。患者为B(A)型血型, 其父、母亲血型分别为O型与AB亚型伴抗B抗体, 经典试管法血型鉴定结果见表1。患者及其母亲不规则抗体筛查呈阴性。基于聚合酶链式反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer, PCR-SSP)人类红细胞ABO-cisAB与B(A)基因检测结果显示:患者为B(A)02/O型, 患者母亲为A/B(A)02型。患者及其母亲ABO基因PCR-SSP结果, 见表2。患者及其母亲ABO基因第1～7外显子Sanger测序结果显示:患者为ABO*BA.02/ABO*O.01.02[B(A)02/O02]杂合子, 其母亲为ABO*A1.02/ABO*BA.02[A102/B(A)02]杂合子, 第7外显子均发生700C>G变异(图1), 导致第234位脯氨酸替换为丙氨酸(Pro234Ala), 符合B(A)...     

一例ABO新等位基因B112的分子生物学研究及其家系分析

目的 研究1例新的ABO亚型B112的分子机制,并对其家系进行分析.方法 应用单克隆抗体检测先证者红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测先证者血清中的ABO抗体.采用聚合酶链反应(po1ymerase chain reaction,PCR)技术扩增先证者ABO基因的第5至7外显子序列,PCR产物经双酶切后直接测序分析第6和7外显子.同时采用基因组单链抽提技术分离先证者的两条单倍型,对分离的单倍型扩增后进行ABO基因测序分析.家系调查采集先证者父母的标本进行ABO血清学实验和ABO基因第6和7外显子测序分析.结果 先证者血清学表型符合B表型特性,直接测序分析显示第6和7外显子有261G/缺失、297A/G、526C/G、559C/T、657C/T、703G/A、796C/A、803G/C、930G/A杂合,推断基因型为BO.基因组单链抽提技术将先证者B和O基因分离后,测序得到两个等位基因为O01和B112.与B101相比,B112第559位C→T导致第187位精氨酸变成半胱氨酸.家系调查显示先证者B112基因从母亲遗传所得,母亲标本ABO血型血清学特性和测序分析结果与先证者完全一致.结论 发现1例559C＞T突变的ABO亚型新等位基因B112,其B抗原表达正常,提示α-1,3-半乳糖基转移酶第187位精氨酸变成半胱氨酸并不影响B转移酶的活性.     

ABO血型正反定型不一致样本的分子机制及其临床输血分析

目的 分析ABO血型正反定型不一致样本的分子机制,为临床ABO血型正反不符样本的鉴定和输血提供参考.方法 收集ABO血型正反不符的样本,选取其中血清学反应格局相似的样本6份,应用血清学方法、序列特异性引物-聚合酶链反应、ABO基因直接测序及TA克隆单体型分析等方法分析其分子机制,对其进行分类,并回顾性调查临床输血情况.结果 导致该6份样本ABO血型正反不符情况有3种:抗原减弱(2份)、抗体减弱(3份)、ABO亚型(1份).遵循同型或相容性输注原则进行输血均取得满意效果.结论 ABO血型存在异质性,血清学反应格局相同的样本可由多种机制引起.