混合探针法评价白香丹胶囊对大鼠体内CYP450酶活性的影响

目的：建立同时测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物的方法,并采用Cocktail法研究白香丹胶囊对大鼠CYP450酶活性的影响。方法：选用茶碱（CYP1A2）、氯唑沙宗（CYP2E1）、甲苯磺丁脲（CYP2C6）、右美沙芬（CYP2D2）、奥美拉唑（CYP2D1）、咪达唑仑（CYP3A2）作为探针药物。大鼠随机分为对照组和给药组,给药组每天灌胃白香丹胶囊0.675 g·kg-1,对照组灌胃等量生理盐水,连续给药14 d。第15天均灌胃给予6个探针药物,于不同时间点眼眶取血,采用LC-MS/MS法测定各探针药物浓度,计算药动学参数并进行组间t检验。结果：与对照组相比,给药组茶碱（P<0.01）、氯唑沙宗（P<0.01）、甲苯磺丁脲（P<0.05）代谢显著加快;右美沙芬、奥美拉唑、咪达唑仑代谢无显著性差异。结论：白香丹胶囊对大鼠 CYP1A2有中强诱导作用,对CYP2E1、CYP2C6有弱诱导作用。     

Cocktail探针药物法评价胃炎灵颗粒对大鼠体内CYP450活性的影响

目的研究胃炎灵颗粒对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响。方法分别以右美沙芬(CYP2D6)、咪达唑仑(CYP3A4)、奥美拉唑(CYP2C19)、茶碱(CYP1A2)、氯唑沙宗(CYP2E1)和甲苯磺丁脲(CYP2C9)作为探针底物,大鼠6只,每日灌胃胃炎灵颗粒4 g/kg,采用LC-MS/MS测定给药前后大鼠体内6种探针药物的血药浓度。结果胃炎灵颗粒连续给药10 d后,与给药前相比,大鼠体内的右美沙芬(P <0. 01)、甲苯磺丁脲(P <0. 01)代谢减慢,氯唑沙宗(P <0. 01)代谢加快,奥美拉唑、咪达唑仑、茶碱的代谢无显著差异。结论胃炎灵颗粒在大鼠体内对CYP2D6酶产生中强抑制作用,对CYP2C9酶产生弱抑制作用,对CYP2E1酶产生轻微诱导作用,对CYP3A4、CYP2C19和CYP1A2基本没有影响。     

Cocktail探针药物法评价威麦宁胶囊对大鼠体内CYP450活性的影响

目的采用Cocktail探针药物法评价威麦宁胶囊对大鼠体内6种CYP450亚型酶活性的影响。方法分别选用甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶碱、咪达唑仑、奥美拉唑和右美沙芬作为CYP2C6、CYP2E1、CYP1A2、CYP3A2、CYP2D1和CYP2D2的探针底物。大鼠每日灌胃威麦宁胶囊1.6 g·kg-1,采用LC-MS/MS测定给药前后大鼠体内6种混合探针的血药浓度,计算药动学参数。结果威麦宁胶囊连续给药2周后,与给药前相比,奥美拉唑ρmax、AUC0-t、tmax及AUC0-∞显著升高(P<0.05);咪达唑仑ρmax、AUC0-t和AUC0-∞显著升高(P<0.01或P<0.05);右美沙芬ρmax、AUC0-t升高(P<0.05);甲苯磺丁脲t1/2、AUC0-∞和tmax显著升高(P<0.01或P<0.05),而CL/F显著降低(P<0.01),ρmax、AUC0-t无显著改变(P>0.05);氯唑沙宗ρmax升高(P<0.05),CL/F降低(P<0.05),AUC0-t升高但无显著差异(P>0.05);茶碱ρmax、AUC0-t升高但无显著差异(P>0.05)。表明奥美拉唑、咪达唑仑和右美沙芬代谢明显减慢(均P<0.05),茶碱、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗的代谢无显著差异;威麦宁胶囊对大鼠体内CYP2D1、CYP3A2、CYP2D2酶有抑制作用,对CYP1A2、CYP2C6、CYP2E1酶的活性无显著影响。结论当威麦宁胶囊与CYP2C19、CYP3A4、CYP2D6酶的底物药物合用时,需要调整给药剂量,避免因药物相互作用使体内血药浓度过高产生毒副作用。     

Cocktail 探针药物法评价辣椒素对大鼠CYP450亚型的影响

目的：采用cocktail 探针药物法研究辣椒素在体外对大鼠肝微粒体CYP 450四种亚型的影响。方法：分为试验组和对照组,试验组采用大鼠肝微粒体孵育体系、探针药物和系列浓度的辣椒素（对照组仅加入缓冲液）共同孵育20 min,反应终止后用HPLC方法检测代谢产物的生成量以代表酶的活性。采用Graphpad prism 5.0计算辣椒素对各亚型的IC50值。将辣椒素与大鼠肝微粒体分别预孵育0,5,10,15,20,30 min,计算不同预孵育时间下各亚型的相对活性百分比。结果：辣椒素对大鼠肝微粒体CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A2的IC50值分别为36.21,17.19,51.64,18.86μmol·L-1。预孵育没有增强辣椒素对CYP450的抑制作用。结论：辣椒素在体外对大鼠肝微粒CYP1A2、CYP2C11、CYP2E1和CYP3A2具有抑制作用,且未呈现出预孵育时间依赖性。     

别嘌呤醇对大鼠CYP450酶活性的影响

目的用Cocktail探针药物法研究别嘌呤醇对大鼠细胞色素P450（CYP450）同工酶的影响。方法将SD大鼠随机分为2组。别嘌呤醇组为实验组,生理盐水组为对照组,采用高效液相色谱-质谱联用技术测定连续给药14d后大鼠血浆中相应探针药物的浓度及其药动学参数。结果别嘌呤醇体内给药14d后,大鼠体内非那西丁的AUC（0-∞）（P〈0．01）、clnax（P〈0．05）和t1／2（P〈0．05）显著大于对照组,CL显著低于对照组（P〈0．01）;而甲苯磺丁脲、奥美拉唑和右美沙芬探针药物的药动学参数均无显著变化。结论别嘌呤醇抑制大鼠CYP1A2酶,对CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6酶的影响不显著。     

Cocktail法研究CYP450酶活性影响因素的探讨

细胞色素P450酶(cytochrome P450, CYP450)是药物代谢的重要酶系,研究CYP450对阐明药物代谢通路、相互作用、代谢多态性、指导临床合理用药等方面具有重要意义.混合探针底物法(Cocktail法)在研究CYP450亚型酶活性应用广泛,具有高效、准确、灵敏、高通量的特点.但CYP450亚型酶存在种属差异、性别差异、探针药物的特异性等方面的问题.查阅国内外相关文献,探讨Cocktail法研究CYP450酶活性的影响因素.     

Cocktail探针法测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP450亚酶活性的影响

目的利用Cocktail探针法,测定南沙参与藜芦配伍对大鼠CYP1A2、CYP3A4、CYP2C9和CYP2C19酶活性的影响,从药物相互作用角度探寻二者配伍增毒相反的体内证据。方法将24只雄性Wistar大鼠随机分组,南沙参组、藜芦组、合用组分别灌胃南沙参煎液(13.5g.kg-1)、藜芦煎液(0.81g.kg-1)、合煎液(14.31g.kg-1),空白组灌胃生理盐水,连续给药7天,于第8天尾静脉注射混合探针药物后于不同时间点采集血样;血样经处理后利用HPLC同时测定不同时间点各探针药物的血药浓度,通过WinNolin5.2软件计算各探针药物的药动学参数,并进行组间比较,进而反映亚酶活性在各组之间的差异。结果与空白对照相比,藜芦组可降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t),增加其Vz;南沙参组可降低咖啡因的AUC(0～∞),显著降低甲苯磺丁脲的AUC(0～t)、AUC(0～∞)并使其Vz,CL显著增加,对氨苯砜、奥美拉唑的各药动学参数无明显影响;与藜芦组相比,合用可增加氨苯砜的MRT(0～t),降低奥美拉唑的AUC(0～t),AUC(0～∞)并增加其CL;与南沙参组相比,合用可增加甲苯磺丁脲的AUC(0～t),降低其Vz,CL。结论与空白组相比,藜芦组对大鼠CYP2C9具有诱导作用,南沙参组对大鼠CYP1A2酶具有诱导作用,对CYP2C9酶具有显著诱导作用,对CYP3A4、CYP2C19无明显影响;与藜芦组相比,合用组对大鼠CYP3A4酶具有抑制作用,对CYP2C19酶具有诱导作用;与南沙参组相比,合用组对大鼠CYP2C19酶具有抑制作用。     

Cocktail探针药物法评价木犀草素对大鼠CYP450酶活性影响

目的:采用Cocktail探针药物法研究木犀草素体外对大鼠细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)亚型的影响.方法:建立并优化含有大鼠肝微粒体、探针药物、木犀草素或阳性抑制剂的体外孵育体系,分为空白对照组、木犀草素组、阳性对照组,孵育终止后使用HPLC方法检测各组别代谢产物的生成量,采用Grap...     

基于Cocktail探针药物法研究木犀草素在大鼠体内对CYP450酶活性影响

目的:应用Cocktail探针药物法评价木犀草素对大鼠体内CYP450酶亚型活性的影响。方法:首先将大鼠随机分为空白组和木犀草素组,2组分别灌胃羧甲基纤维素钠(2.0 mL·kg^-1)和木犀草素(30.0 mg·kg^-1)1 d,并于第7 d腹腔注射混合探针药物溶液(含10.0 mg·kg^-1的非那西汀和睾酮,2.5 mg·kg^-1的甲苯磺丁脲)。之后在不同时间点对大鼠进行眼眶取血,血浆样本经异丙醇沉淀后进入液质测定。UHPLC-MS/MS色谱部分采用ZORBAX SB-C₁₈(2.1 mm×30 mm, 3.5μm)色谱柱进行分离,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱;质谱部分使用电喷雾离子源(ESI),分别在正、负离子条件下采用MRM模式下进行监测,将所采集数据输入DAS软件计算药动学参数。另外,采用Western blot法观察木犀草素对CYP450蛋白表达的影响,对体内结果做进一步验证。结果:非那西汀、睾酮、甲苯磺丁脲分别在2.0～2 000.0、0.3～300.0...     

Cocktail探针药物法评价灯盏花素对大鼠CYP450体内代谢活性的影响

目的用Cocktail探针药物法研究灯盏花素对大鼠CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP2D6体内代谢活性的影响。方法将大鼠随机分为3组,空白对照组、低剂量组和高剂量组。低剂量组和高剂量组分别尾静脉给予灯盏花素粉针剂1.8,5.4 mg.kg-1.d-1,空白对照组给予生理盐水,共14 d。各组分别于第15 d注射Cocktail探针溶液,用HPLC检测各探针药物的血药浓度,用DAS2.0计算药代动力学参数,评价相应的CYP450亚型的体内代谢活性。结果高剂量组美托洛尔的AUC和t1/2显著高于空白对照组,CL显著低于空白对照组(P<0.05)。低剂量组美托洛尔虽然也有相同趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。各组咖啡因、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的主要药代动力学参数均无显著差异(P>0.05)。结论高剂量灯盏花素粉针剂可明显抑制大鼠CYP2D6的体内代谢活性,而对CYP1A2、CYP2E1和CYP2C9无显著性影响。     

LC-MS/MS同时测定5种探针底物代谢产物和快速评价细胞色素P450同工酶的活性

目的建立同时测定奥美拉唑（CYP2C19）、右美沙芬（CYP2D6）、睾酮（CYP3A4）、氯唑沙宗（CYP2E1）和甲苯磺丁脲（CYP2C9）5种探针底物代谢产物的Cocktail体外方法,快速评价药物对人肝微粒体细胞色素P450同工酶活性的影响。方法通过人肝微粒体与5种探针底物在还原系统NADPH的作用下,于37℃水浴条件下共同孵育,采用液质联用（LC-MS/MS）分析方法,测定探针底物的代谢产物生成量来评价各P450同工酶的活性。结果建立了同时测定5种P450同工酶活性的酶反应条件和LC-MS/MS分析方法,数据显示该方法具有良好的线性和分析灵敏度,以及具有良好的准确度、精密度、重现性,可用于药物间相互作用的体外快速评价。结论可用于体外快速评价药物对相应的CYP450亚型酶活性的影响,以预测潜在的药物相互作用。     

丹红注射液对大鼠肝微粒体5种CYP亚型酶活性的影响

摘要目的研究丹红注射液对5种细胞色素P450亚型酶活性的影响,为临床合理用药提供参考。方法采用大鼠体外肝微粒体孵育法,分别以非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗、睾酮为CYP1A2、CYP2C9、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的探针药物,在大鼠肝微粒体孵育体系中孵育,用高效液相色谱（HPLC）法测定相应的代谢产物,比较空白对照组和丹红注射液低、中、高剂量组之间探针药物代谢率的差异,评价丹红注射液对各亚型酶活性的影响。结果在体外肝微粒体孵育体系中,丹红注射液低剂量组中CYP1A2 和CYP2C9活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）;中和高剂量组中CYP1A2和CYP2C9活性与空白对照组相比降低,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）;丹红注射液低、中、高剂量组中CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4的活性与空白对照组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性的半数抑制浓度（IC50）和抑制常数（Ki）分别为0.54%和0.226%。结论丹红注射液对大鼠肝微粒体CYP1A2酶活性有抑制作用,且为混合型抑制;对CYP2C9有弱抑制作用;对CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4酶活性无明显影响。     

葛根素对细胞色素P450酶活性的影响

目的研究葛根素体外对细胞色素P450酶 1A2（CYP1A2）、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4活性的影响。方法 分别以咖啡因、甲苯磺丁脲、美芬妥因、美托洛尔和咪达唑仑为探针药, 利用高效液相色谱法测定探针药与相应代谢产物的浓度,采用重组酶研究葛根素对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4酶活性的影响。结果 在体外重组酶反应体系中,葛根素对CYP2C9、CYP2C19及CYP3A4酶活性无明显影响。但低浓度葛根素（0.1 mmol&#8226;L-1）使CYP1A2的活性降低（48±9）%（P＜0.05）,CYP2D6的活性降低 （61±8）%（P＜0.01）;高浓度（0.4 mmol&#8226;L-1） 使CYP1A2的活性降低（82±8）%（P＜0.01）,CYP2D6的活性降低（88±6）%（P＜0.01）。结论 葛根素（0.1 mmol&#8226;L-1）对CYP1A2和CYP2D6酶活性有较明显的体外抑制作用;且随着葛根素浓度的增高,对这两种酶活性的抑制作用也增强。为研究葛根素与其他药物的相互作用及作用机制等奠定了基础。     

Inhibition of Cytochrome P450 Enzymes by Drugs—Molecular Basis and Practical Applications

Drug-drug interactions are a major cause of hospitalization and deaths related to drug use. A large fraction of these is due to inhibition of enzymes involved in drug metabolism and transport, particularly cytochrome P450 (P450) enzymes. Understanding basic mechanisms of enzyme inhibition is important, particularly in terms of reversibility and the use of the appropriate parameters. In addition to drug-drug interactions, issues have involved interactions of drugs with foods and natural products related to P450 enzymes. Predicting drug-drug interactions is a major effort in drug development in the pharmaceutical industry and regulatory agencies. With appropriate in vitro experiments, it is possible to stratify clinical drug-drug interaction studies. A better understanding of drug interactions and training of physicians and pharmacists has developed. Finally, some P450s have been the targets of drugs in some cancers and other disease states.     

葛根素对5种细胞色素P450酶体外活性影响研究

目的 研究葛根素体外对细胞色素P450酶亚型 CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4等活性的影响。方法分别以咖啡因、甲苯磺丁脲、美芬妥因、美托洛尔和咪哒唑仑为探针药，采用高效液相色谱法测定探针药与相应代谢产物的浓度，采用重组酶研究葛根素对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4酶体外活性的影响。结果在体外重组酶反应体系中，葛根素对CYP2C9、CYP2C19及CYP3A4酶活性无明显影响。但低浓度(0.1 mmol·L 1)下可使CYP1A2活性降低 (48±9)%(P＜0.05)，使CYP2D6活性降低(61±8)%(P＜0.01)；高浓度(0.4 mmol·L 1)下使CYP1A2活性降低（82 ±8）%(P＜0.01)，使CYP2D6活性降低（88 ± 6）%(P＜ 0.01)。结论葛根素对CYP1A2和CYP2D6酶体外活性有较明显的抑制作用；随着葛根素浓度的增高，抑制作用也相应增强。     

木犀草素对大鼠CYP450酶活力和mRNA表达的影响

目的 研究木犀草素对大鼠细胞色素P450（CYP450）酶活力和mRNA表达的影响。方法 SD大鼠随机分为实验组和对照组,连续灌胃木犀草素或水14 d后,同时给予探针药非那西丁、安非他酮、氯唑沙宗和咪达唑仑,并用LC-MS测定给药后不同时间点的血药浓度,计算药动学参数并评估CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1和CYP3A1酶活力变化。此外,实时荧光定量PCR （RT-PCR）测定CYP450的mRNA表达水平。结果 实验组大鼠非那西丁、安非他酮、咪达唑仑的药动学参数与对照组相比具有显著性差异,推测木犀草素能诱导大鼠CYP1A2、CYP2B1和CYP3A1活力,而氯唑沙宗的药动学参数2组间没有显著性差异。RT-PCR实验发现,木犀草素能显著上调大鼠CYP1A2、CYP2B1和CYP3A1的mRNA水平,对CYP2E1没有影响。结论 木犀草素会上调CYP1A2、CYP2B1和CYP3A1酶活力及mRNA表达水平。